神经细胞培养讲义

精品文档神经细胞原代培养的胚胎或新生动物的脑组织取下某一局部区域，分离细胞，培养在从动物（大鼠或小鼠等）培养容器后不再移植，常称为原代神经细胞培养。

一、培养前准备1. 器械和器皿器械：外科剪、镊子、虹膜剪等、小剪刀、细镊子和虹膜小刀等℃烘干，各种金属器械如解剖器械，使用后及时刷洗干净，60用酒精棉球擦拭后晾干，或经以防生锈。

由于湿热消毒对手术器械容易可用70－小时以上消毒。

80％酒精浸泡1 器皿：1) 2) 3)玻璃瓶及相应的胶塞或胶木螺旋盖，用于分装血清、多聚赖氨酸、解剖液、各种盐溶液和培养液等。

5)培养瓶、盖玻片次，盐酸浸泡可用0.2N10分钟，用蒸馏水洗2培养用的盖玻片必须不含铅、不发霉，分钟，10分钟，再用双蒸水洗2次，每次1010每次分钟，然后移入丙酮或乙醇浸泡烘干待消毒。

凡组织学用过的旧盖玻片一般不用。

6)7)移液管、吸管、烧杯、离心管和培养皿。

8)。

孔）、、、塑料培养板（35mm9)塑料培养皿（）62496精品文档．精品文档辅助工具：放置试管、吸管和玻璃瓶等的架子。

2. 培养基和培养用液的配制多7-1400001) 培养基质：有多聚赖氨酸、牛皮胶原和鼠尾胶原。

本室目前常用分子量为0.1mg/ml，浓度为。

聚赖氨酸（Poly-L-lysineNaCl主要以无机盐和葡萄糖配制而成。

各种平衡盐溶液主要的不同点在于2) 平衡盐溶液：的浓度、离子浓度及缓冲系统的不同，可根据实际需要选用适当的平衡盐溶液。

培养液：目前已有现成的干粉出售，按说明书进行配制即可。

神经细胞培养需高糖，培3)无血清培养液。

养液应含有或加葡萄糖至6g/L。

目前培养海马神经元可选用B27℃564) 血清：有胎牛血清、小牛血清和马血清等。

分装成小瓶，4℃保存备用（分装前需。

灭活30分钟）胰蛋白酶溶液：用于分离细胞。

先用少量灭菌三蒸水将胰蛋白酶粉末溶成糊状，然后补5) 冻℃过夜，待完全溶解后用滤器过滤灭菌，并分装成1-2ml水至2.5%浓度，振荡摇匀，4。

第24讲通过神经系统的调节一、考纲要求：1.人体神经调节的结构基础和调节过程(Ⅱ)。

2.神经冲动的产生、传导和传递(Ⅱ)。

3.人脑的高级功能(I)。

二、教学目标：1.能说出神经元的结构和功能，反射与反射弧功能。

2.理解神经冲动的产生、传到和传递过程。

3.概述神经系统的分级调节和人脑的高级功能素养培养目标：1．生命观念：通过分析反射弧各部分结构的破坏对功能的影响，建立结构与功能相统一的观点。

2．科学思维：通过判断反射弧中的传入神经和传出神经及分析膜电位的变化曲线，培养科学思维的习惯。

3．科学探究：通过实验“膜电位的测量”及“反射弧中兴奋传导特点的实验探究”，提升实验设计及对实验结果分析的能力。

三、教学重、难点：1.教学重点：人体神经调节的结构基础和调解过程2.教学难点：神经冲动的产生、传导和传递四、课时安排：3课时五、教学过程：考点一反射和反射弧（一）知识梳理：（学生自主看书填空、课堂学生间交流反馈纠正）1．神经元的结构与功能(1)填出下图中所示结构名称(2)比较树突和轴突2.反射与反射弧3．反射弧中相关结构对反射弧功能的影响（二）基础训练（课前完成，课上提问）：讲义P185（三）拓展（教师精讲）如图是反射弧的结构模式图。

a、b分别是放置在传出神经和骨骼肌上的电极，用于刺激神经和骨骼肌；c 是放置在传出神经上的电位计，用于记录神经兴奋电位；d为神经与肌细胞接头部位，是一种突触。

(1)用a刺激神经，产生的兴奋传到骨骼肌引起的收缩不属于(填“属于”或“不属于”)反射。

(2)用b刺激骨骼肌，不能(填“能”或“不能”)在c处记录到电位。

(3)正常时，用a刺激神经会引起骨骼肌收缩；传出部分的某一处(骨骼肌或传出神经或d)受损时，用a刺激神经，骨骼肌不再收缩。

根据本题条件，完成下列判断实验：①如果用a刺激神经，在c处不能记录电位，表明传出神经受损。

②如果用b刺激骨骼肌，骨骼肌不收缩，表明骨骼肌受损。

③如果用a刺激神经，在c处记录到电位，骨骼肌不收缩；用b刺激骨骼肌，骨骼肌收缩，表明d受损。

植物组织培养一、实验目的1、掌握植物细胞无菌培养技术。

2、了解不同激素对细胞的不同诱导作用。

二、实验原理植物组织培养是20世纪60年代以来植物细胞生物学中发展起来的一项生物技术。

它是借用无菌操作方法，培养植物的离体器官，组织或细胞，使其在人工合成的培养基上，通过细胞的分裂、增殖、分化、发育，最终长成完整的再生植株。

植物组织培养技术的研究，不仅具有重大的理论意义，而且在生产实践中也已显示了广阔的应用前景。

组织分化与形态建成问题，快速繁殖与去除病毒，花药培养与单倍体育种，幼胚培养与试管受精，抗体突变体的筛选于体细胞无体系变异，悬浮细胞培养与次生物质生产以及超低温种质保存等方面的深入研究与实际应用，都必须借助植物组织培养技术的基本程序和方法，深刻理解植物细胞的全能性。

三、实验用品1、材料半夏无菌苗。

2、仪器卧式灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养箱或培养室。

3、用具镊子、刀、牛皮纸、marker笔、棉线。

4、器皿试剂瓶(50、100、1000ml)、三角瓶(100ml)、刻度吸管(0.5、1、5、10ml)、培养皿(直径9～11cm)。

5、药品与试剂1).药品(见下表)2).70％酒精四、实验方法1、培养基的配制配制培养基前先要配制母液。

母液分大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四类。

(各类成分浓度、用量详见下表)。

表1 MS培养基母液配制(单位：mg)1).大量元素母液(10倍液)分别称取10倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约800ml热的(60～80℃)蒸馏水中。

一种成分完全溶解后再加入下一种，最后加水定容至1000ml后装入试剂瓶中，冰箱内贮存备用。

2).微量元素母液(100倍液)分别称取100倍用量的微量无机盐，依次溶解于800ml重蒸水中，加水定容至1000ml。

3).铁盐母液(100倍液)称取100倍用量的Na2-EDTA(乙二胺四乙酸钠)和FeSO4·7H2O溶于800ml重蒸水中，最后定容到1000ml。

王金发《细胞生物学》网络课件讲义全集课程学习：1.细胞概述>>目录1. 细胞概述1.1 细胞的发现及细胞学说的创立1.1.1 细胞的发现1.1.2 细胞学说(cell theory)的创立1.1.3 细胞学理论对细胞学发展的推动作用1.1.4 细胞生物学发展简史1.2 细胞的基本功能和特性1.2.1 细胞的基本功能1.2.2 细胞结构上的相似性1.2.3 细胞的形态1.2.4 细胞的大小及体积的恒定1.2.5 细胞及细胞器的计量单位1.3 细胞的分子基础1.3.1 水是细胞中最主要的物质1.3.2 无机盐1.3.3 小分子有机小分子1.3.4 生物分子的功能分类1.3.5 细胞结构体系的组装1.4 细胞的类型和结构体系1.4.1 原核细胞1.4.2 真核细胞的两种主要类型:动物细胞和植物细胞1.4.3 真核细胞的结构体系1.4.4 真核细胞与原核细胞的比较1.5 病毒--非细胞的生命体1.5.1 病毒是比细胞更小的生命体1.5.2 病毒的生活史1.6 细胞生命的进化1.6.1 细胞生命的起源与进化1.6.2 真核细胞的起源1.6.3 从单细胞向多细胞进化1.7 我国细胞生物学的发展战略1.7.1 细胞生物学的主要研究内容和发展方向1.7.2 我国细胞生物学发展战略学习指导课程学习：1.细胞概述>> 1.1.1 细胞的发现1. 细胞概述所有的生物都是由细胞(cell)构成的。

除了病毒、类病毒等是非细胞的生命体以外，其它生命有机体的结构和功能单位都是细胞。

细菌、酵母等微生物是以单细胞的形式存在，而高等动、植物则是由多细胞构成的，如人大约有3 ×1013个细胞，这些细胞组成不同的组织和器官。

研究细胞及其生物学功能的科学称为细胞生物学(cell biology)。

1.1 细胞的发现及细胞学说的创立第一个发现细胞的是英国学者胡克(Rorbert Hooke)，相隔170多年后，德国植物学家施来登(Mathias Schleiden)和动物学家施旺(Theodor Schwann)创立了细胞学说。

第3节神经冲动的产生和传导知识点梳理及巩固课标内容要求核心素养对接1.阐明神经细胞膜内外在静息状态具有电位差，受到外界刺激后形成动作电位，并沿神经纤维传导。

2．阐明神经冲动在突触处的传递通常通过化学方式完成。

1.科学思维——通过分析电位产生的机理及相关曲线的解读，养成科学思维的习惯。

2．科学探究——通过反射弧中兴奋传导和传递特点的分析，提升实验设计及对实验结果分析的能力。

3．社会责任——关注滥用兴奋剂和吸食毒品的危害，能够向他人宣传这些危害，拒绝毒品。

一、兴奋在神经纤维上的传导1．神经表面电位差的实验神经表面电位差的实验示意图(1)静息时，电表没有测出电位差，说明静息时神经表面各处电位相等。

(2)而在图示位置的左侧给予刺激时，电表发生2次偏转，这说明刺激后会引起a、b间两次出现电位差。

(3)实验说明在神经系统中，兴奋是以电信号(又叫神经冲动)的形式沿着神经纤维传导的。

2．兴奋传导形式兴奋是以电信号的形式沿着神经纤维传导的，也叫神经冲动。

3．兴奋传导的机制和过程(1)静息电位表现为内负外正，是由K ＋外流形成的。

(2)动作电位表现为内正外负，是由Na ＋内流形成的。

(3)兴奋部位与未兴奋部位之间存在电位差，形成了局部电流。

(4)局部电流刺激相近的未兴奋部位发生同样的电位变化，兴奋向前传导，原兴奋部位又恢复为静息电位。

二、兴奋在神经元之间的传递1．突触小体和突触(1)突触小体：神经元的轴突末鞘经过多次分枝，最后每个小枝末端膨大，呈杯状或球状。

(2)突触：突触由突触前膜、突触间隙与突触后膜组成。

2．传递过程兴奋到达突触前膜所在的神经元的轴突末梢→突触小泡向突触前膜移动并融合释放神经递质→神经递质通过突触间隙扩散到突触后膜的受体附近→神经递质与突触后膜上的受体结合→突触后膜上的离子通道发生变化，引发电位变化→神经递质被降解或回收。

3．传递特点(1)特点：单向传递。

(2)原因⎩⎨⎧①神经递质只存在于突触前膜的突触小泡中。

1.2.1 微生物的基本培养技术微生物：难以用___________观察的微小生物的统称。

包括以下类群：病毒（无细胞结构生物）：SARS 病毒、新冠病毒等____________病毒；T 2噬菌体等____________病毒。

细菌（原核生物）：蓝细菌、大肠杆菌、乳酸菌等；放线菌：衣氏放线菌等。

真菌（真核生物）：酵母菌、毛霉等；原生生物：草履虫、变形虫等。

防止____________，获得纯净的微生物培养物是研究和应用微生物的前提，也是酵工程的重要基础。

实验室培养微生物的条件：①要为人们需要的微生物提供合适的____________和____________条件；②要确保____________无法混入，并将____________分离出来。

一、培养基的配置 1.培养基的概念和类型（1）概念：人们按照微生物对____________的不同需求，配制出供其____________的营养基质，即培养基。

（2）培养基的作用：用以____________、____________、____________、____________微生物或____________其代谢物。

（3）培养基的类型2.培养基的配制（1）基本成分：水、碳源、氮源、无机盐。

①碳源：a.无机碳源：CO2、CO32-、HCO3-→____________微生物；b.有机碳源：葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等→____________微生物。

②氮源：a.无机氮源：NH4＋、NO3-、NH3等。

b.有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、____________、氨基酸等。

注意：含C、H、O、N的有机物是____________微生物的碳源、氮源、能源。

如____________等。

（2）特殊需求：某些微生物对______、特殊营养物质以及_______的需求。

特殊营养物质：____________、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。

（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）①培养乳酸杆菌时，需要在培养基中添加____________；②培养霉菌时，需要将培养基调至____________；③培养细菌时，需要将培养基调至____________或____________；④培养厌氧微生物时，需要提供____________的条件。

神经细胞培养体外神经细胞的培养已成为神经生物学研究中十分有用的技术手段。

神经细胞培养的主要优点是:(1)分散培养的神经细胞在体外生长成熟后,能保持结构和功能上的某些特点, 而且长期培养能形成髓鞘和建立突触联系,这就提供了体内生长过程在体外重现的机会。

(2)能在较长时间内直接观察活细胞的生长、分化、形态和功能变化,便于使用各种不同的技术方法如相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、同位素标记、原位杂交、免疫组化和电生理等手段进行研究。

(3)易于施行物理（如缺血、缺氧）、化学和生物因子（如神经营养因子）等实验条件, 观察条件变更对神经细胞的直接或间接作用。

(4)便于从细胞和分子水平探讨某些神经疾病的发病机制，药物或各种因素对胚胎或新生动物神经细胞在生长、发育和分化等各方面的影响。

我们实验室从80年代始开展了神经细胞的体外培养工作，取得了一些经验，现将培养细胞分类及方法简要介绍如下:一.鸡胚背根神经节组织块培养主要用于神经生长因子（NGF）等神经营养因子的生物活性测定。

在差倒置显微镜下观察以神经突起的生长长度和密度为指标半定量评估NGF的活性。

1．材料和方法（1）选正常受精的鸡蛋，置于37℃生化培养箱内孵化，每日翻动鸡蛋一次。

（2）取孵化8-12 d 的鸡蛋, 用70% 酒精消毒蛋壳，从气室端敲开蛋壳，用消毒镊剥除气室部蛋壳。

（3）用弯镊钩住鸡胚颈部，无菌条件下取出鸡胚置小平皿内，除去头部后，腹侧向上置灭菌毛玻璃片上,用眼科弯镊子打开胸腹腔，除去内脏器官。

（4）在解剖显微镜下，小心除去腹膜，暴露脊柱及其两侧，在椎间孔旁可见到沿脊柱两侧排列的背根节（图1），用一对5号微解剖镊小心取出。

（5）置背根节于解剖溶液内，用微解剖镊去除附带组织，接种于涂有鼠尾胶的玻璃或塑料培养瓶中，在DMEM无血清培养液中培养。

2．结果鸡胚背根神经节在含神经生长因子(NGF, 2.5S，20ng/ml)的无血清培养液中培养24 h,神经节长出密集的神经突起。