3_5_二硝基水杨酸_DNS_比色法测定马铃薯还原糖含量的研究

3，5-二硝基水杨酸比色法测量还原糖含量一．实验目的1、掌握用制作标准曲线的方法来测量还原糖的含量.2、学会使用721精密型分光光度计。

3、熟练容量瓶、移液管等简单仪器的使用方法。

二．原理1、还原糖是指含有醛基或者酮基的糖类，单糖都是还原糖，多糖中有乳糖和麦芽糖等是还原糖，而淀粉和蔗糖是非还原糖。

DNS即3，5-二硝基水杨酸中含有的硝基使其有较强的氧化性，与醛基在加热的条件下发生氧化还原反应，生成红色物质3-氨基-5硝基水杨酸。

反应方程式如下：2、不同浓度的还原糖液与DNS反应时，生成的3-氨基-5硝基水杨酸的浓度不同，导致反应后液体颜色深浅不同。

在分光光度计下测量标准梯度浓度的葡萄糖溶液与DNS反应后液体的OD540（波长为540nm条件下样液的光密度值），做出OD540——还原糖含量标准曲线，对于未知样品的测量，只需将OD540带入图像，找到相应的还原糖含量值即可。

3、本实验总糖的测量步骤中，因为样品（面粉）主要由淀粉构成不能与DNS直接反应，所以需要用酸水解法将淀粉降解为单糖进行测量。

淀粉由单糖缩合产生，在降解过程中会引入水分子，所以计算总糖的质量时，应除去水的质量。

M葡萄糖=180，M水=18，由于淀粉的=0.9倍。

碳链极长，忽略链末端本身含有的一个水分子，则淀粉的质量为还原糖质量的180−18180三．试剂（配制方法）提前配制试剂DNS（3,5-二硝基水杨酸试剂）：6.3g 3,5-二硝基水杨酸和262ml 2mol/L NaOH加到热酒石酸钾钠的热溶液中（182g酒石酸钾钠溶液溶于500蒸馏水中），再加5g重结晶酚和5g亚硫酸氢钠于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000ml，储存于棕色瓶中。

碘化钾—碘试剂：称取5g碘10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

酚酞试剂：0.1g酚酞溶于250ml 85%的乙醇中，棕色瓶储存。

6mol/L HCl 溶液10% NaOH 溶液面粉样品0.5mg/mL葡萄糖溶液：精确称取105℃烘至恒重的葡萄糖0.5g，用水定容到1000ml。

甘蔗糖业2008年第5期 Sugarcane and Canesugar 2008年10月3,5 - 二硝基水杨酸（DNS）法测定甘蔗茎节总糖和还原糖含量*王俊刚张树珍杨本鹏陈萍吴转娣胡军喻（中国热带农业科学院热带生物技术研究所，海口571101）摘要对DNS法测定甘蔗茎秆总糖和还原糖的影响因素进行了比较研究。

确定了最佳检测条件:检测波长510nm，显色剂用量0.8mL，显色时间7min，显色液放置时间20min以上，能够获得好的检测结果。

关键词甘蔗茎节；DNS；还原糖；总糖；测定0前言还原糖的测定对于甘蔗茎秆的综合利用研究具有十分重要的意义。

有关总糖和还原糖含量的测定有多种方法，如旋光法[1]、气相色谱法[2]、液相色谱法[2]、分光光度法[3－5]等。

旋光法测量准确性较差；气相色谱法和液相色谱法测量过程较复杂；3,5-二硝基水杨酸法（DNS）具有准确性高、重现性好、特别适用于大批量样品的测定等特点而被广泛采用；在植物糖的测定中，仍未见到有同时用DNS法测定总糖和还原糖的报道。

然而DNS 法过程中的诸多因素如吸收光谱、显色剂用量、显色时间等均对测定结果的准确性有直接影响，为了能准确的测定甘蔗总糖和还原糖含量，我们对用3,5-二硝基水杨酸比色法测定甘蔗茎节总糖和还原糖含量的反应条件进行一系列的试验，试图摸索出最佳的试验条件以保证试验的最佳精确度，以期获得可靠的数据为甘蔗品质育种的实践提供参考。

1 材料与方法 1.1 试验材料中国热带农业科学院试验田取生长11个月拔地拉果蔗1.1.1 样品还原糖的制备拔地拉果蔗从生长点依次向下数取23节，榨汁，放4℃备用。

1.1.2样品总糖的制备分别取0.2mL的甘蔗汁加6mo1/mL HCl 0.4mL，沸水浴30min[6]。

取出溶液1～2滴于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全，若水解完全则不呈现黄色。

冷却后加入1滴10％酚酞指示剂，用6mol/mL NaOH溶液中和到微红色，定容至2mL后备用。

第12卷第3期2004年9月纤维素科学与技术Journal of Cellulose Science and TechnologyVol.12 No.3Sept. 2004文章编号：1004-8405(2004)03-0017-043,5-二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究齐香君，苟金霞，韩戌珺，闫博（陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西咸阳 712081）摘要：据相关资料报道，在碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸被还原糖还原生成的氨基化合物在540 nm波长下具有最大吸收，在此条件下该方法可测糖的适合浓度为3~4 mg/mL。

而对其吸收光谱的测定研究发现，生成的氨基化合物在483 nm处有最大吸收，在该波长下测糖范围是0.1~1.0 mg/mL，并且测量的相对误差为2.2%。

关键词：3,5-二硝基水杨酸；还原糖；最大吸收波长；测量范围中图分类号：Q53 文献标识码：A众所周知，还原糖测定在我们生产细菌纤维素的发酵过程中具有十分重要的意义。

由于3,5-二硝基水杨酸比色法（DNS法）具有准确性高、重现性好、尤其适用于大批量样品的测定等特点，而广泛地被用来测定发酵液中的残余糖量，从而得出细菌在繁殖和合成纤维素的过程中的耗糖量。

据相关资料报道[1,2]，在碱性溶液中3,5-二硝基水杨酸被还原糖还原生成的氨基化合物在540 nm波长下具有最大吸收，在沸水浴中显色时间2 min，在此条件下该方法可测糖的适合浓度为3~4 mg/mL。

而我们对其生成的氨基化合物的吸收光谱进行了研究，发现其λmax 不是540 nm，因此本文对3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的方法进行探讨与研究。

1 原理与方法1.1 原理在氢氧化钠和丙三醇的的存在下，还原糖能将3,5-二硝基水杨酸中的硝基还原成氨基，生成氨基化合物。

此化合物在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈橘红色，在一定波长下具有最大吸收，并且吸光度与还原糖含量有线性关系。

1.2 适用范围及特点此法适用于各类食品中的还原糖的测定，具有准确度高、重现性好、操作简便、快速等优点，尤其适用于大批量样品的测定。

实验九总糖和还原糖的测定（二）之马矢奏春创作──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理, 学习用比色法测定还原糖的方法.二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下, 3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物.在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色, 在540nm波长处有最年夜吸收, 在一定的浓度范围内, 还原糖的量与光吸收值呈线性关系, 利用比色法可测定样品中的含糖量.黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg, 加少量蒸馏水溶解后, 以蒸馏水定容至100ml, 即含葡萄糖为1.0mg/ml.（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取 6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中）, 再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中, 搅拌溶解, 冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中.（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘, 10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中.（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中.（5）0.1% 酚酞指示剂.（6）6 mol/L HCl溶液2、资料小麦淀粉或玉米淀粉.3、器材分光光度计, 天平, 水浴锅, 电炉, 试管若干等.四、把持方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管, 按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水.管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸溶液(ml)葡萄糖含量(mg)0将各管溶液混合均匀, 在沸水中加热5 min, 取出后立即用冷水冷却到室温, 再向每管加入21.5 ml蒸馏水, 摇匀.λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标, 光吸收值为纵坐标, 绘制标准曲线.2、样品中还原糖的提取准确称取小麦（淀）粉, 放在100ml烧杯中, 先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状, 然后加入40ml蒸馏水, 混匀, 于50℃恒温水浴中保温20min, 不时搅拌, 使还原糖浸出混.过滤, 将滤液全部收集在50ml的容量瓶中, 用蒸馏水定容至刻度, 即为还原糖提取液.3、样品总糖的水解及提取准确称取小麦(淀)粉, 放在锥形瓶中, 加入6mol/L HCl 10ml, 蒸馏水15ml, 在沸水浴中加热, 取出1～2滴置于白瓷板上, 加1滴I-KI溶液检查水解是否完全.如已水解完全, 则不出现蓝色.水解毕, 冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂, 以6N NaOH 溶液中和至溶液呈微红色, 并定容到100ml, 过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中, 定容至刻度, 混匀, 即为稀释1000倍的总糖水解液, 用于总糖测定.4、样品中含糖量的测定试剂空白还原糖总糖样品溶液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸(ml)将各管溶液混合均匀, 在沸水中加热5 min, 取出后立即用冷水冷却到室温, 再向每管加入21.5 ml蒸馏水, 摇匀.λ=540nm处测定吸光度样品溶液中还原糖和总糖测定后, 取样品的光吸收值在标准曲线上查出相应的糖量.五、结果处置按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度, mg/ml；V──还原糖或总糖提取液的总体积, ml；m──样品重量, g；1000──mg换算成g的系数.思考题1. 比色时为什么要设计空白管？2. 比力费林试剂比色法与3,5-二硝基水杨酸比色法测定可溶性淀粉中还原糖和总糖的结果, 这两种方法各有何优点？。

实验五 3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的含量一：目的了解3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的原理 掌握总糖定量测定的操作方法 二：原理还原糖是指含自由醛基或酮基的单糖（如葡萄糖）和某些具有还原性的双糖（如麦芽糖）。

它们在碱性条件下，可变成非常活泼的烯二醇。

遇氧化剂时，具有还原能力，烯二醇本身则被氧化成糖酸及其他产物。

黄色的3,5-二硝基水杨酸（DNS ）试剂与还原糖在碱性条件下共热后，自身被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，反应液里棕红色的深浅与还原糖的含量成正比，在波长为540nm 处测定溶液的吸光度，查对标准曲线并计算，便可求得样品中还原糖的含量。

对于非还原性的双糖（如蔗糖）以及还原性很小的多糖（如淀粉），应先用酸水解法将它们彻底水解成单糖。

再借助于测定还原糖的方法，可推算出总糖的含量。

由于多糖水解时，在每个单糖残基上加了一分子水，因而在计算时，须扣除加入的水量，当样品里多糖含量远大于单糖含量时，则比色测定所得总糖含量应乘以COOHOHNO 2O 2N 还原糖COOHOHO 2N NH 23,5-二硝基水杨酸（黄色）3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色）C C H O OH OH C H C H 2OH OH( )n ( )n C H C OH OHC H H 2OH OH糖酸折算系数（1-18018= 0.9），即得比较接近实际的样品中总糖含量。

三：实验材料及设备 1、材料：面粉2、仪器：分光光度计 电子天平 沸水浴3、器材：刻度试管： 25mL ×8 容 量 瓶： 100mL ×2 锥 形 瓶： 100mL ×1移 液 管： 1mL ×2 2mL ×2 10mL ×2 烧 杯： 250mL ×1 50mL ×1 滴 管： 2 洗 耳 球： 2 滤 纸： 11cm 坐 标 纸漏斗、洗瓶、白瓷板、试管架、移液管架、试管夹、玻棒：各1 四：试剂的配制1、葡萄糖标准液（1mg/mL ）预先将分析纯葡萄糖置80℃烘箱内约12小时。

3,5-二硝基水杨酸比色法----标准曲线的制作1.实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖10257 RP麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

2.实验材料、主要仪器和试剂2.1实验材料主要用到这些实验材料：红曲黄色素发酵液、钠虑膜浓缩后红曲黄色素液、旋转蒸发后红曲黄色素液。

2.2主要仪器本实验用到的实验仪器有：1)具塞玻璃刻度比色管：25mL×19；2)烧杯：100mL×4；3)三角瓶：100mL×1；4)容量瓶：100mL×3，50mL×3；5)刻度吸管：1mL×4；2mL×3；10mL×1；6)沸水浴；7)冰浴；8)扭力天平；9)UV—2802SH型紫外可见分光光度计尤尼柯（上海）仪器有限公司；2.3实验试剂1)1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

2)3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g DNS和262mL 2M NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

3．实验步骤制作葡萄糖标准曲线取7支25mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。

dns测定还原糖含量原理宝子！今天咱来唠唠DNS测定还原糖含量的原理呀。

你知道吗，还原糖可是一群很有趣的小家伙呢。

像葡萄糖、果糖这些都属于还原糖。

那DNS是啥呢？DNS就是3,5 - 二硝基水杨酸啦。

这个DNS可厉害了，它就像是一个超级侦探，专门去探寻还原糖的秘密。

当我们把含有还原糖的样品和DNS试剂放在一起的时候，就像是一场奇妙的聚会开始了。

还原糖这个小调皮，它有一些特殊的化学性质哦。

它能够把DNS试剂中的硝基还原成氨基。

这一还原呀，整个化学环境就发生了大变化。

原本的DNS试剂是有颜色的，但是经过还原糖这么一折腾，颜色就变得更深啦。

你可以想象成还原糖给DNS试剂化了个浓妆呢。

而且呀，这个颜色变化的程度和还原糖的含量是有关系的。

如果还原糖的含量多，那它能还原的DNS就多，颜色就变得更深；要是还原糖少呢，颜色变化就相对小一些。

这就像是一场比赛，还原糖的数量就决定了它在这场和DNS的反应比赛中能把DNS改变多少。

我们就可以根据最后溶液呈现出来的颜色深浅，来判断还原糖到底有多少啦。

咱再往细里说说哈。

这个反应其实是在一定的条件下进行的。

比如说温度啦，pH 值啦，这些都像是比赛的规则一样。

要是温度不合适，就像比赛的场地环境不好，那这个反应可能就不能好好进行了。

同样的，如果pH值不对，那还原糖和DNS之间的“互动”也会受到影响。

在实验室里呀，我们会先制作一个标准曲线。

这就好比是给这场颜色和还原糖含量的关系建立一个参照系。

我们会用已知浓度的还原糖溶液和DNS试剂反应，然后测量它们反应后的颜色对应的吸光度。

把这些已知浓度和对应的吸光度数据画成一条曲线。

然后呢，当我们要测量未知样品中的还原糖含量的时候，就把这个样品和DNS反应，测量它的吸光度。

再根据之前做好的标准曲线，就能找到这个吸光度对应的还原糖浓度啦。

是不是很神奇呢？这整个过程就像是一场有趣的化学游戏。

还原糖和DNS试剂在特定的环境下玩耍，然后给我们留下了颜色这个线索，我们通过这个线索就能找到还原糖含量这个小秘密啦。

3,5二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究一、本文概述本文主要研究了3,5-二硝基水杨酸（DNS）比色法在测定溶液中还原糖的应用。

还原糖是一类具有还原性的单糖和低聚糖，如葡萄糖、果糖和麦芽糖等，它们在许多生物化学反应中发挥着重要作用。

因此，准确测定溶液中的还原糖含量对于理解生物过程、食品工业、医药研究等领域具有重要意义。

DNS比色法是一种常用的还原糖测定方法，其原理是利用DNS试剂与还原糖在碱性条件下发生氧化还原反应，生成一种在煮沸条件下呈棕红色的化合物，其颜色深浅与还原糖含量成正比。

通过比色法测定这种化合物的吸光度，就可以间接计算出溶液中还原糖的含量。

本文将详细介绍DNS比色法的实验步骤，包括试剂的配制、实验条件的优化、以及实际样品的分析等。

还将探讨影响测定结果的各种因素，如温度、pH值、反应时间等，以提高测定的准确性和可靠性。

本文还将对DNS比色法与其他常用还原糖测定方法进行比较，以评估其在实际应用中的优缺点。

通过本文的研究，旨在为相关领域的研究人员和技术人员提供一种准确、简便的还原糖测定方法，为深入研究还原糖的生物化学性质和应用提供有力支持。

二、3,5二硝基水杨酸比色法基本原理3,5-二硝基水杨酸（3,5-dinitrosalicylic acid，DNS）比色法是一种常用的测定溶液中还原糖含量的方法。

该方法基于还原糖与DNS试剂在碱性条件下发生氧化还原反应的原理。

在反应过程中，还原糖将DNS试剂中的硝基还原为氨基，生成了一种深红色的化合物，这种化合物的颜色深浅与还原糖的含量成正比。

DNS比色法的反应过程可以分为两个阶段。

在碱性环境下，DNS 试剂与还原糖发生缩合反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸。

然后，该中间产物进一步与还原糖反应，生成一种深红色的氨基化合物。

这种颜色变化可以通过比色法进行定量测定，从而确定溶液中还原糖的浓度。

DNS比色法具有操作简便、灵敏度高、重现性好等优点，因此在食品、农业、生物等领域得到了广泛应用。

植物组织中还原糖含量的测定应用化学1101 A20110001程志永植物组织中还原糖含量的测定程志永（东北农业大学理学院应用化学系，哈尔滨，150000）摘要：本实验以葡萄糖为标准，以3,5- 二硝基水杨酸(DNS)作显色剂，用分光光度法测定黄瓜中还原糖的含量。

在碱性条件下，3，5–二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的3–氨基–5–硝基水杨酸，该物质在540nm波长处有最大吸收。

在一定浓度范围内，还原糖的量与棕红色物质的光吸收值成正比例关系，利用比色法可定量测定样品中的含糖量。

关键词：还原糖；分光光度法；3,5-二硝基水杨酸中图分类号：Q5-33文献标志码：A引言DNS 比色法的原理是：3,5-二硝基水杨酸在碱性溶液中被还原糖还原成氨基化合物，在沸水浴中显色时间5min，波长在540nm下有最大吸收峰。

试验过程中的诸多因素如吸收光谱、显色剂用量、显色时间等均对测定结果的准确性有直接影响。

因此，我们对用3,5-二硝基水杨酸比色法测定马铃薯块茎还原糖含量的反应条件进行了一系列的试验，试图摸索最佳的试验条件以保证试验的精确度，以期获得可靠的数据为黄瓜品质育种的实践提供参考。

1 材料与方法1.1 实验材料1.1.1 供试药剂3,5-二硝基水杨酸；蒸馏水；葡萄糖溶液。

1.1.2 供试植物材料黄瓜0.96g1.2 实验方法1.2.1 葡萄糖标准曲线的制作称取0.0502g葡萄糖，定容至500ml；吸取葡萄糖标准液0、0.20、0.30、0.40、0.60、0.80mL，分别置于10mL试管中，编号1、2、3、4、5、6，各加蒸馏水使体积为1.0mL，再加苯酚试液0.51mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸2.5 mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热约15min，取出后冷却至室温。

以一号试管为对照组。

用721分光光度计，1cm比色皿，在490nm 处测定吸光度，绘制葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。

1.2.2 样品中还原糖含量的测定1.2.2.1还原糖的提取准确称取样品0.5g，用少量蒸馏水研磨成匀浆，然后加入蒸馏水定容至50mL，摇匀，置于50℃恒温水浴中保温10min，使还原糖浸出，移入离心管，4000r/min下离心10min，取上清液。

实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。

2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g 3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。

还原糖和总糖含量的测定（3，5 一二硝基水杨酸比色法）还原糖和总糖含量的测定（3，5一二硝基水杨酸比色法）还原糖和总糖含量的测定（3，5一二硝基水杨酸比色法）作者：佚名文章来源：生物化学实验技术点击数：2132更新时间：2021-5-1311:29:24一、目的植物体内的还原成糖，主要就是葡萄糖、果糖和麦芽糖。

它们在植物体内的原产，不仅充分反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也就是呼吸作用的基质。

还原成糖还能够构成其他物质例如有机酸等。

此外，水果蔬菜中糖量的多少，也就是始终如一其品质的关键指标。

还原成糖在有机体的新陈代谢中起至着关键的促进作用，其他碳水化合物，例如淀粉蔗糖等，经水解也分解成还原成糖。

通过本实验，掌控还原成糖定量测定的基本原理，练比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的采用方法。

二、原理各种单糖和麦芽糖就是还原成糖，蔗糖和淀粉不为还原成糖。

利用溶解度相同，可以植物样品中的单糖、双糖和多糖分别抽取出，再用酸水解法并使没还原性的双糖和多糖全盘水解班莱班县还原性的单糖。

在碱性条件下，还原糖与3，5一二硝基水杨酸共热，3，5一二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原成糖则被水解成糖酸及其他产物。

一定范围内，还原成糖的量与棕红色物质颜色厚薄的程度成一定的比例关系，540nm波长下测量棕红色物质的消光值，收信标准曲线并排序，便可以分别谋出来样品中还原成糖和总糖的含量。

三、仪器、试剂和材料1.仪器（1）刻度试管：25mlx11（2）离心管或玻璃圆柱形x2（3）烧杯：1oomlx1（4）三角瓶：100m1x1（5）容量瓶：100mlx3（6）刻度液体：1mlx1，2m1x4,10mlx1（7）恒温水浴（8）沸水浴（9）离心机（过滤法不用此设备）（10）电子顶载天平（11）分光光度计2.试剂（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯葡萄糖（预先在80℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml的容量瓶中，以馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。

不同品种马铃薯淀粉和还原糖含量的测定张祥乐，蒋战强甘肃农业大学，兰州（730070）摘要：本试验测定了26个马铃薯品种（系）的淀粉、还原糖含量，结果表明了甘3好淀粉含量最高达26.06%，及适宜也做淀粉加工原料；AC转甘2还原糖含量最低，为0.057%，适宜于加工于油炸薯片。

关键词：马铃薯，淀粉，还原糖。

1前言马铃薯是一种产量高，深受群众喜欢的粮菜兼作作物，随着市场经济的发展，马铃薯无论是作为一种工业原料还是食品加工原料都有其重要的利用价值，它对商品价值也随消费方式和营养品质的改善呈现不断增长的趋势。

因此，对马铃薯品种的要求，也随着市场经济的发展和人民生活的多种需求方式，向早熟、高产、优质和适合多种加工方式专用品种发展。

随着市场的日趋繁荣，马铃薯应用范围也越来越广泛，对其品质的要求也越严格，其中大多是对淀粉、还原糖有特别的要求。

淀粉是光合作用制造的最稳定的天然大分子物质之一，按其结构不同可大致分为直链淀粉和支链淀粉，淀粉不仅是人类的食物来源之一，同时也是重要的工业原料，马铃薯淀粉的含量高低，是衡量马铃薯品质好坏的主要标准之一[6]。

加工食品油炸的专用马铃薯品种要求成品马铃薯块中还原糖的含量不能过高，因过高的还原糖会与游离的氨基反应是马铃薯的颜色变得焦黄甚至发褐。

这样会严重影响油炸马铃薯的商品价值[1]。

若作为蔬菜品种食用，还原糖过高会使菜的质地变柔口感不爽，冷贮也会导致块茎中的还原糖含量的大幅度提高，加工品质下降。

此外，还发现还原糖含量高的马铃薯易受病原菌的侵染引起软腐病[2]。

因此，还原糖的测定对检测马铃薯品质和育种工作都是一个不可缺少的重要指标。

研究马铃薯品种资源中各个材料的品质状况，挖掘利用优质资源，成为当今我国马铃薯育种工作中期待解决的问题。

本文对不同马铃薯品种（系）的淀粉、还原糖含量进行了详细的研究，以期为马铃薯育种工作者选择优质材料及生产上选用加工提供理论依据[3-5]。

2.材料与方法2.1试验材料参试材料共26份，包括大西洋、ac转甘2、大西洋m、浅眼面包、3-33、2-28、浅芽面包、Novally、3-44、杂2、陇薯3号、九号甘2、甘2白、甘农1号、夏百弟、大西洋2号、杂1实生、1-20、大西洋×甘1、2-296、甘3号、甘农2号、卡那贝克、D 6、ac转大西洋、克新。

实验九总糖和还原糖的测定（二）之欧侯瑞魂创作──3,5－二硝基水杨酸法一、目的要求：掌握还原糖和总糖的测定原理,学习用比色法测定还原糖的方法.二、实验原理:在NaOH和丙三醇存在下,3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物.在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色,在540nm波长处有最年夜吸收,在一定的浓度范围内,还原糖的量与光吸收值呈线性关系,利用比色法可测定样品中的含糖量.黄色桔红色三、试剂和器材1、试剂（1）1 mg/ml葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg,加少量蒸馏水溶解后,以蒸馏水定容至100ml,即含葡萄糖为1.0mg/ml.（2）3,5—二硝基水杨酸试剂：称取 6.3 g 3,5—二硝基水杨酸并量取262 ml 2mol/L NaOH加到酒石酸钾纳的热溶液中（182 g 酒石酸钾纳溶于500 ml水中）,再加5 g结晶酚和5 g亚硫酸氢钠溶于其中,搅拌溶解,冷却后定容到1000 ml贮于棕色瓶中.（3）碘－碘化钾溶液：称取5g碘,10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中.（4）6N NaOH：称取120g NaOH溶于500ml蒸馏水中.（5）0.1% 酚酞指示剂.（6）6 mol/L HCl溶液2、资料小麦淀粉或玉米淀粉.3、器材分光光度计,天平,水浴锅,电炉,试管若干等.四、把持方法1、葡萄糖标准曲线制作取8支15mm×180mm试管,按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水.管号试剂0 1 2 3 4 5 6 7 8葡萄糖标准液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸溶液(ml)葡萄糖含量(mg)0将各管溶液混合均匀,在沸水中加热5 min,取出后立即用冷水冷却到室温,再向每管加入21.5 ml蒸馏水,摇匀.λ=540nm处测定吸光度以葡萄糖含量（mg）为横坐标,光吸收值为纵坐标,绘制标准曲线.2、样品中还原糖的提取准确称取小麦（淀）粉,放在100ml烧杯中,先以少量蒸馏水(约2 ml)调成糊状,然后加入40ml蒸馏水,混匀,于50℃恒温水浴中保温20min,不时搅拌,使还原糖浸出混.过滤,将滤液全部收集在50ml的容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,即为还原糖提取液.3、样品总糖的水解及提取准确称取小麦(淀)粉,放在锥形瓶中,加入6mol/L HCl 10ml,蒸馏水15ml,在沸水浴中加热,取出1～2滴置于白瓷板上,加1滴I-KI溶液检查水解是否完全.如已水解完全,则不出现蓝色.水解毕,冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂,以6N NaOH溶液中和至溶液呈微红色,并定容到100ml,过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中,定容至刻度,混匀,即为稀释1000倍的总糖水解液,用于总糖测定.4、样品中含糖量的测定试剂空白还原糖总糖样品溶液(ml)0蒸馏水(ml)水杨酸(ml)将各管溶液混合均匀,在沸水中加热5 min,取出后立即用冷水冷却到室温,再向每管加入21.5 ml蒸馏水,摇匀.λ=540nm处测定吸光度样品溶液中还原糖和总糖测定后,取样品的光吸收值在标准曲线上查出相应的糖量.五、结果处置按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度,mg/ml；V──还原糖或总糖提取液的总体积,ml；m──样品重量,g；1000──mg换算成g的系数.思考题1. 比色时为什么要设计空白管？2. 比力费林试剂比色法与3,5-二硝基水杨酸比色法测定可溶性淀粉中还原糖和总糖的结果,这两种方法各有何优点？。

3,5-二硝基水杨酸比色法测定还原糖含量的研究一、目的掌握测定还原糖和总糖的基本原理，学会比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。

二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有游离醛基或酮基的糖。

单糖都是还原糖，二糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

根据糖溶解度的不同，可以分别提取植物样品中的单糖、二糖和多糖。

对于不具有还原性的二糖和多糖，可采用酸水解法将其降解为可还原的单糖，然后分别测定样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量为基准)。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密ph 试纸。

2. 主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20ml×11（2）大离心管：50ml×2（3）烧杯：100ml×1（4）三角瓶：100ml×1（5）容量瓶：100ml×3（6）刻度吸管：1ml×1；2ml×2；10ml×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3. 试剂（1）1mg/ml 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100ml 容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。

（2）3,5-二硝基水杨酸（dns）试剂将6.3gdns 和262ml 2m naoh 溶液，加到500ml含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中备用。

还原糖含量测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）一、实验原理还原糖的测定是各种糖类化合物定量测定的基本方法。

在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸（DNS)共热后3,5-二硝基水杨酸(DNS)被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质)，还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。

在一定范围内，还原糖的浓度与3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质)颜色深浅的程度呈正比，利用可见分光光度计，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光值，查对标准曲线可求出样品中还原糖的含量。

二、实验试剂3, 5-二硝基水杨酸试剂( DNS)：将6.3g DNS和262mL 2mol/L的NaOH溶液加到500mL含有182g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸氢钠，搅拌溶解，冷却后定容至1000ml。

溶液为黄色，贮于棕色瓶中。

1mg/mL 葡萄糖标准溶液：准确称取80℃烘至恒重的分析纯无水葡萄糖1g，置于烧杯中，加少量水溶解后再加5mL浓盐酸(防止微生物生长)，以蒸馏水定容至1000ml,混匀，4℃冰箱中保存备用。

碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100mL蒸馏水中。

酚酞指示剂：称取1g酚酞，溶于250mL70%乙醇中。

6mol/L HCI溶液：取250mL浓HCI,用蒸馏水稀释到500mL。

6mol/L NaOH溶液：称取240g NaOH, 溶于1000mL蒸馏水中。

三、实验方法1．制作葡萄糖标准曲线取6支试管编号，按照表3-1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂。

将各管混匀，用0号管调零点，在540nm波长处测1-5管吸光度。

以葡萄糖毫克数为横坐标，A540为纵坐标，绘制标准曲线。

2．样品中还原糖的测定（食用面粉为例）准确称取2.00g食用面粉，放入100mL烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状，然后加入50-60mL蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，使还原糖浸出。

3,5-二硝基水杨酸比色法----标准曲线的制作1.实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖10257 RP麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。

还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。

由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。

2.实验材料、主要仪器和试剂2.1实验材料主要用到这些实验材料：红曲黄色素发酵液、钠虑膜浓缩后红曲黄色素液、旋转蒸发后红曲黄色素液。

2.2主要仪器本实验用到的实验仪器有：1)具塞玻璃刻度比色管：25mL×19；2)烧杯：100mL×4；3)三角瓶：100mL×1；4)容量瓶：100mL×3，50mL×3；5)刻度吸管：1mL×4；2mL×3；10mL×1；6)沸水浴；7)冰浴；8)扭力天平；9)UV—2802SH型紫外可见分光光度计尤尼柯（上海）仪器有限公司；2.3实验试剂1)1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。

2)3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g DNS和262mL 2M NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。

3．实验步骤制作葡萄糖标准曲线取7支25mL具塞刻度试管编号，按表1分别加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液、蒸馏水和3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。