动物学论文：四倍体胚胎 ES细胞 电融合 囊胚注射

嵌合体的制备嵌合体偶尔在妊娠期间可自然产生，但大部分是人工制作的。

目前，制作嵌合体的方法有两种，即聚合法（包括早期胚胎聚合法和卵裂球聚合法）和囊胚内细胞团（inner cell mass，ICM）注入法，可根据实验目的和实验条件进行选择。

（一）囊胚注入法囊胚注入法指，当动物胚胎发育到囊胚，即分化为两种明显不同的组织：内细胞团和滋养层细胞时，将目的细胞或细胞团注入囊胚腔，使之与内细胞团结合并发育，最终得到嵌合体个体的方法。

注射的细胞可以是卵裂球、内细胞团细胞、EC细胞、ES细胞、EG细胞，甚至是已经分化了的细胞。

此外，也有人将某一囊胚的ICM完全用另一囊胚的ICM代替，这种方法称之为囊胚重组，曾被成功地用来进行种间怀孕，制备的嵌合体为胎儿的周围组织来自另外一种动物。

这种方法可广泛应用于研究基因型已知的ICM的发育能力和具有不同基因型的滋养层细胞之间在个体发育中的相互关系。

此法最早由Gardner于1968年提出，经过多方改良，成功率较高，适用范围较广，可用于种内或种间嵌合，供体和受体的发育阶段可同步，也可以不同步，它还适用于不能去透明带的动物，如兔等。

该法是将几个ES细胞（一般5～15个）注入囊胚腔中。

但囊胚注射法需要购买昂贵的仪器（显微操作仪等），而且技术难度较大，需要一定的时间才能掌握，不利于一般的推广。

该方法适用于研究细胞的发育潜能和胚胎的调整能力；注射细胞可获得较高的嵌合体效率，有可能对每个细胞的命运做较为详细的分析；适用于胚胎稀少的，经济价值高的动物嵌合体的制作；这种方法的突出作用是为应用ESC制作嵌合体奠定了基础。

（二）聚合法1.聚合法的分类用聚合法制作嵌合体，操作简便，不需要特殊的仪器设备，是一种常用的嵌合体制作方法，尤其是在没有试验条件利用囊胚注入法来制作嵌合胚和嵌合体动物的情况下，更是一种有效的方法，利于掌握和推广。

根据聚合对象的不同，可分为以下3种。

（1）胚胎聚合法：该方法指的是将发育到一定时期（一般为8-细胞至桑椹胚）的胚胎去掉透明带后，将两个或两个以上的胚胎聚合，形成一个胚胎后体外培养至囊胚，再移植入受体动物体子宫内，最终获得嵌合体个体的方法。

动物胚胎工程的研究进展及在畜牧业中的应用摘要：动物胚胎工程是用人工方法对动物卵母细胞或胚胎进行改造的技术。

胚胎工程技术研究的目的，是对哺乳动物的胚胎在体外进行人为控制操作，让其继续发育，进而获得优良或珍稀动物个体，并应用这类技术进行基础研究和应用开发性研究。

近年来动物胚胎程技术发展迅速，并逐步在畜牧业中推广运用，显示出良好的应用前景。

关键词：胚胎工程；进展；胚胎移植；动物克隆；胚胎干细胞动物胚胎工程是用人工方法对动物卵母细胞或胚胎进行改造的技术，包含胚胎移植、排卵控制、胚胎冷冻保存、体外受精与显微受精、胚胎分割、胚胎性别鉴定、胚胎冷冻保存、动物克隆和转基因动物等内容[1]。

目前，胚胎工程已在遗传学、医学、发育生物学、动物育种学上得到广泛应用。

将动物胚胎工程技术应用于畜牧业生产，取得了巨大的经济效益与社会效益。

一、动物胚胎工程技术的研究进展1、胚胎移植胚胎移植是胚胎工程的一项极其重要的基本技术，采用任何新技术所产生的胚胎，都必须通过胚胎移植才能得到后代。

科学家首先成功移植了兔胚胎，随后小鼠、大鼠及多种哺乳动物的胚胎移植试验相继获得了成功。

胚胎移植技术已被证实是奶牛繁育的一次重大变革，极大提高了优秀母牛的利用率，有利于产生更多优秀后备母牛和更多优质种公牛。

在现场条件下，奶牛的鲜胚移植妊娠率已达到60%～85%，冻胚移植妊娠率达50%～70%。

胚胎移植已在我国高技术研究和有关学科的基础研究中得到广泛的应用[2]。

2 、排卵控制排卵控制涉及排卵时间控制和排卵数量控制。

控制排卵时间的目的是得到特定发育阶段的卵母细胞，如做微注射转基因使用的原核胚。

排卵数量的控制又称为超数排卵[3]，是为了获得更多的卵子。

目前在控制排卵中常用的激素有FSH、LH、PMSG、HCG和PGF2a及类似物。

在正常情况下，哺乳动物一次排卵数极其有限。

经超数排卵处理，排卵数则可增加数倍至10余倍。

因此，在生产上或科学试验中，通过超数排卵处理可获得大量胚胎[4]。

第2章细胞工程全卷满分100分考试用时75分钟一、选择题(本题共15小题,每小题2分,共30分。

每小题只有一个选项符合题目要求。

)1.猕猴桃是重要的栽培果树,毛花猕猴桃果实大,维生素C含量高;软枣猕猴桃耐寒,由于猕猴桃很难采用杂交的方法育种,某科研小组采用植物体细胞杂交技术培育出了具有两个品种优良性状的新品种,下列相关叙述,错误的是( )A.利用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁,获得具有活力的原生质体B.杂交过程中的关键环节是原生质体的融合,可用灭活的病毒诱导C.杂种细胞再生出细胞壁后,经脱分化和再分化过程可获得新品种D.该新品种发生的变异属于可遗传变异,其染色体组数是两种猕猴桃染色体组数之和2.花椰菜(2n=18)种植时容易遭受病菌侵害形成病斑,紫罗兰(2n=14)具有一定的抗病性。

科研人员利用植物体细胞杂交技术培育具有抗病性状的花椰菜新品种如图1所示。

通过蛋白质电泳技术分析了亲本及待测植株中某些特异性蛋白,结果如图2所示。

下列有关叙述错误的是( )A.图1培育杂种植株所用的技术体现了植物细胞全能性和细胞膜流动性原理B.图1中过程①在无菌水中进行,利用了酶的专一性,过程②可以用电融合法、高Ca2+—高pH融合法等C.图2中属于杂种植株的是4和5,1可能是花椰菜D.病菌悬浮液均匀喷施于杂种植株叶片上,一段时间后,测定病斑面积占叶片总面积的百分比,可筛选抗病性强的杂种植株3.野生红豆杉是一种濒危植物,其产生的次生代谢物紫杉醇具有高抗癌活性,现在已被广泛用于乳腺癌等癌症的治疗。

传统生产紫杉醇的方法是从红豆杉的树皮和树叶中提取,现在可以利用植物细胞工程在反应器中培养红豆杉愈伤组织以大量生产紫杉醇,同时还可以通过组织培养获得红豆杉植株。

下列叙述正确的是( )A.紫杉醇是红豆杉生长和生存所必需的代谢物B.利用愈伤组织细胞获得紫杉醇的过程所用培养基为固体培养基C.获得愈伤组织的过程为脱分化,该过程与细胞中基因的选择性表达有关D.利用植物细胞工程获得紫杉醇和红豆杉植株的过程均体现了植物细胞的全能性4.小鼠的某种上皮细胞与某种淋巴细胞体外培养时,上皮细胞呈现扁平不规则多角形,且贴附在培养瓶内壁上,而淋巴细胞则常常悬浮在培养液中。

动物遗传学论文（8篇无删减范文）-医学遗传学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——动物遗传学不仅是生物学领域中最基本的科学之一，还是畜牧兽医专业基础课程的理论来源。

动物遗传学主要研究各种动物，如：家畜、昆虫、鱼类、鸟类等。

本文整理了8篇动物遗传学论文范文，以供参考。

动物遗传学论文（8篇无删减范文）之第一篇：基于动物遗传学的育种与繁殖研究摘要：近年来动物遗传育种与繁殖技术已经取得了一定的进展与突破。

首先总结了动物育种发展的创新点,之后以生物信息学的发展为例对动物遗传育种与繁殖技术的发展成果进行了总结,如良种繁育基因组数据库、动物功能组的研究、对于动物生长发育的有效调节、基因组学的运用,展望了其在未来的发展前景。

关键词：动物遗传学,动物系列,生物信息学近年来畜牧业的重要性得到了人们的重新审视,其对于食品食物质量以及人们的身体健康状况的影响愈发突显,相应地,人们对于畜牧动物品种提出了更高的要求。

结合当前生物技术的发展,动物育种得到了一定的发展,尤其是计算机与网络技术的推广与普及更让生命科学与信息科学实现了更为紧密的关联。

1 动物遗传育种与繁殖的创新点动物食品需求量与生物品种改良之间有密切关联,同时随着人们生活水平的提高与饮食结构的变化,动物产品的质量也会直接关系到经济发展与人们的生活质量。

就总产量的对比情况来看,我国的肉类与禽蛋类均为世界首位,乳制品的产量则为世界第三位,均居于世界前列,但是在畜牧产品的人均占有量上仍然与发达国家有一定的差距,动物性食品来源仍然较为匮乏,无法满足于人们日益增长的需求,而积极进行品种与繁殖技术的创新可以有效地提高畜产品的质量。

发展动物品种,对于生物领域新兴技术的检验来说极为有利,分子标记辅助选择、全基因组选择与人工授精、冷冻胚胎、干细胞技术、基因组编辑等一系列新技术都在一定程度上提高了动物育种与繁殖的效率,让该领域形成了一套完整可持续的产业体系,而包括基因组最佳纯属无偏估测与超声波、无线射频自动化技术的问世也在相应地提高了生产效率,进一步提高畜牧业的经济效益。

细胞融合的应用细胞融合技术已在农业、工业、医药等领域取得了开创性的研究成果，应用领域不断扩大。

该技术不仅为核质关系、基因定位、基因调控、遗传互补、细胞免疫、疾病发生、膜蛋白动力学等理论领域的研究提供了有力的手段，而且被广泛应用于免疫学、遗传学、发育生物学，在实际应用中特别是在单克隆抗体、抗肿瘤疫苗及动植物远缘杂交育种和微生物菌种选育，绘制基因图谱等方面具有十分重要的意义。

随着细胞融合技术的不断改进和完善，动物、植物及微生物细胞融合技术无论在基础理论研究还是在实际应用中产生的影响将日益显著。

人们很早就注意到了在自然条件下发生的细胞融合现象，首先在病料组织中发现了由细胞融合产生的多核细胞，紧接着发现在脊椎动物和无脊椎动物的正常细胞中也可发生细胞融合，随后在体外组织培养中也发现了离体细胞的融合现象。

自从发现活病毒可在体内介导癌细胞融合后，人们又实现了利用灭活病毒促进动物异种细胞融合，从而打破了细胞融合的种属屏障，推动细胞融合技术跃上新的台阶。

原生质体的大量制备较为困难，限制了植物细胞融合技术的发展，因此植物细胞融合的起步较动物细胞融合要迟10年左右。

直到用酶法大量制备有活力的原生质体获得成功后，才使植物原生质体的融合工作迅速发展起来。

由于病毒诱导细胞融合存在着病毒制备困难、操作复杂、灭活病毒的效价差异大等原因，人们又找到了比病毒简便、快速和高效且比病毒更易制备和控制，活性稳定，使用方便的化学物质PEG作为病毒的替代物诱导细胞融合，但在PEG诱导细胞融合的有效的浓度范围内(50%～55%)对细胞毒性很大，因此人们又找到了新的方法来替代PEG，这些新方法有电脉冲诱导细胞融合技术和激光融合技术以及空间融合技术等。

纵观细胞融合技术的发展历史，该技术的不断改进首先表现在融合剂上，从致癌活病毒到灭活病毒再到化学物质，其次体现在新方法上，再者体现在融合对象的不断扩展上。

现在新的细胞融合方法一般采用将化学法和物理法结合起来进行，如将磁、超声、机械等和激光、电相结合，同时添加化学剂以便进一步提高融合率，细胞融合的方法和手段始终朝操作方便、简单，便于量化研究，同时融合率又能得到不断提高的方向发展动物细胞融合技术动物细胞融合是从细胞水平来改变动物细胞的遗传性，用于生产单克隆抗体、疫苗等特定的生物制品，改良培育动物新品种，缩短动物的育种过程。

胚胎工程一、选择题(本大题共25小题，每小题2分，共50分。

在每小题给出的四个选项中，只有一个选项符合题目要求。

)1．美国和日本的两个研究小组分别宣布，其研究人员成功地将人体皮肤细胞改造成了几乎可以和胚胎干细胞相媲美的多功能干细胞——“iPS细胞”，人类"iPS细胞”可以形成神经元等人体多种组织细胞。

以下有关“iPS细胞”的说法正确的是A．“iPS细胞”分化为人体多种组织细胞的过程体现了细胞的全能性B．“iPS细胞”有细胞周期，它分化形成的神经细胞没有细胞周期C．“iPS细胞”既可分化形成神经元，也可用于制造心肌细胞，说明“iPS细胞”在分裂时很容易发生突变D．“iPS细胞”只能分化成人体多种组织细胞，是因为它具有人体部分细胞的遗传物质2．中科院动物所和福州大熊猫研究中心合作，将大熊猫的细胞核植入去核后的兔子卵细胞中，克隆出世界上第一批大熊猫胚胎，这表明我国的大熊猫人工繁殖研究再次走在世界前列。

下列有关克隆大熊猫胚胎的叙述中，错误的是A．在形成早期胚胎的过程中，依次经历了卵裂、囊胚、原肠胚等几个阶段B．兔子卵细胞质的作用只是激发大熊猫细胞核的全能性C．克隆出的早期胚胎中，各细胞核具有相同的遗传信息D．在形成早期胚胎的过程中，细胞进行有丝分裂3．在受精卵中，来自精子和卵细胞且数量相同的是A．线粒体B．DNA分子C．染色体D．RNA分子4．既可进行胚胎性别鉴定，又能进行胚胎移植的最佳示意图是5．胚胎干细胞的功能特性不包括A．具有发育的全能性B分化程度比造血干细胞高C．冷冻保存可以进行遗传改造I)．可以进行增殖6．下列有关“试管婴儿”的叙述正确的是．①体外受精②体内受精③主要在体外发育④主要在体内发育⑤运用基因工程技术⑥运用胚胎工程技术A．①③⑥B．②③⑥C①④⑥D．①④⑤7．防止多精入卵的屏障是①顶体反应②透明带反应③卵黄膜封闭作用④原有核膜破裂形成新的核膜A．①③B．②④C．③④D．②③8．哺乳动物受精是在什么结构中完成的A．卵巢B．子宫C胎盘D．输卵管9．精子获能常用的化学物质可能是下列哪一种A．氯化钙溶液B．肝脏提取液C．肝素溶液D．氨基酸营养液10．胚胎工程的核心技术是A．胚胎分割与融合B．人工授精和胚胎移植C．胚胎性别鉴定D．胚胎冷冻保存技术11．下列最能表现细胞全能性的细胞是A．桑椹胚期细胞B．囊胚期细胞C．外胚层细胞D．滋养层细胞12．不同物种动物的精子与卵细胞一般不能自然受精，这与精子和卵细胞膜上的下列哪种物质密切相关A．糖类B．磷脂C．糖蛋白D．载体13．下列说法不正确的是A．在体外受精前，要对精子进行获能处理B．排卵是指卵泡从卵巢中排出进入输卵管C．在胚胎移植中，冲卵是指将供体母牛子宫内的胚胎冲洗出来D．对囊胚进行分割时，内细胞团需均等分割，这种方法属无性繁殖14.．下列现代生物技术成果的获得必须通过胚胎移植的是A．转基因抗虫棉B．重组酵母乙肝疫苗C．单克隆抗体D．试管婴儿15．人血清白蛋白(HSA)在临床上的需求量很大，通常从人血中提取。

（3）面临的问题：存在导致肿瘤发生的风险 （4）应用展望：干细胞将在再生医学、药物安全性与有效性检测等
领域发挥大作用。
5.诱导多能干细胞（iPS细胞） （1）胚胎干细胞的局限性： 胚胎干细胞必须从_胚__胎__中获取 ，涉及_伦_理__问__题__,因而限制了在医学上的应用。
（2）诱导多能干细胞概念： 通过体外诱导小鼠成纤维细胞，获得了类似胚胎干细胞的一种细胞，称为诱导
细胞株 从原代培养细胞群中筛选出进行传代培养的细胞，能传到40-50代，其遗传物质
没有发生变化。
细胞系 传到40-50代后有部分细胞遗传物质发生了变化，具有癌细胞的特点，失去
接触抑制，可能在培养条件下无限制的传代下去。
区别： 细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制， 容易传代培养。
三、干细胞培养及其应用
动物细胞培养
动物细胞 动物细胞融合技术与单克隆抗体
工程
动物细胞核移植技术
克隆动物
一、动物细胞培养
1.动物细胞培养概念：指从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适 宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。2.动物细胞培
养的原理：细胞增殖（有丝分裂）。3.动物细胞培养的地位：动物细胞工程的基础。
上皮细胞
肌细胞
神经细胞
4.干细胞的应用 （1）应用原理：有着自我更新能力及分化潜能的干细胞，与组织、 器官的发育、再生和修复等密切相关。 （2）应用实例： 造血干细胞：治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的 造血系统、免疫系统功能障碍等疾病
神经干细胞：治疗神经组织损伤和神经系统退行性疾病（如帕 金森病、阿尔茨海默病等）
多能干细胞，简称iPS细胞。
诱导方法：①将特定基因或特定蛋白导入细胞（成纤维细胞以及已分化的T细胞、 B细胞均可）；

动物医学进展,2007,28(5):53257Progress in Veterinary Medicine哺乳动物异种体细胞核移植技术的应用及影响因素3张　锐,陶　勇,章孝荣3(安徽农业大学动物科技学院,安徽合肥230036) 摘　要:哺乳动物异种体细胞核移植技术是在同种细胞核移植技术基础上发展起来的动物生殖技术,其在濒危动物保护、人类胚胎干细胞及生物基础学科研究等方面已展现出美好的前景。

目前,该技术处于发展阶段,还存在很多值得研究的问题。

文章介绍了动物异种体细胞核移植技术在国内外的研究现状,分析了影响异种体细胞核移植技术发展的因素,并对该技术的发展前景进行了展望。

关键词:异种核移植;体细胞;克隆胚胎中图分类号:S814.8文献标识码:A文章编号:100725038(2007)0520053205 异种体细胞核移植(interspecies somatic cell nuclear t ransfer,ISCN T)是指体细胞核移植构建克隆胚所用的供体细胞和受体卵母细胞来源不同物种,即将某一物种动物的体细胞核通过显微操作移植到另一物种动物的去核卵母细胞中构建成异种核质复合体,并使之发育的过程。

迄今已有几种动物通过异种体细胞核移植获得,如亚洲野牛(Bos gaurus)[1]、欧洲盘羊(Ovis orient alis m usi mon) [2]、非洲野猫(Felis sil vest ris l ybica)等[3],这些异种克隆动物的出生在一定程度上证实了异种体细胞核移植技术的可行性。

异种体细胞核移植技术在珍稀濒危动物保护上展现出美好的前景[4]。

异种体细胞核移植技术能采用正常的体细胞借助易得到的卵母细胞生产胚胎干细胞,通过诱导干细胞分化得到治疗疾病需要的细胞组织[5];异种核移植技术突破了物种之间的“生殖隔离”限制,涉及物种之间在分子、细胞和生理水平上的相互作用,对细胞分化、核质互作、物种进化等基础理论的研究而言,其提供了重要的研究材料和研究手段。

名词解释（47个）1.胚胎工程（Embryos engineering）：是生物工程的一个分支，是动物生物工程的主干。

它是以胚胎移植为基础，通过人工操作胚胎，定向改变动物性状，使之为人类造福的一系列生物技术总称。

2.原始生殖细胞：是产生雄性和雌性生殖细胞的早期细胞,起源于原肠期胚胎的上胚层，细胞较大、呈碱性磷酸酶阳性。

3.精子发生：精子在曲细精管经多次分裂，产生特殊细胞，最终成为精子的过程。

4.精子顶体反应：指精子头部前端与卵子透明带接触以后，通过配体受体相互作用，顶体脂膜和顶体外膜的融合，顶体内小泡囊泡化，顶体内膜暴露，释放顶体酶熔蚀放射冠和透明带的过程。

5.卵子发生：由卵原细胞分化为成熟卵子的过程叫做卵子发生。

它包括三个时期：增殖期、生长期和成熟期。

6.受精：受精是两性配子相互融合，形成一个新的细胞——合子的过程。

它标志着胚胎发育的开始。

7.合子：（zygote）：有性生殖生物的雌雄配子结合后形成的新的细胞统称为合子。

高等生物卵式生殖所形成的合子又称为受精卵。

8.桑椹胚（Morula）：是指一个受精卵经过多次分裂，形成由32个左右细胞组成的细胞团。

其属于动物胚胎发育的早期阶段，里面的细胞还是全能细胞。

9.囊胚（blastula）：指的是内部产生囊胚液、囊胚腔的胚胎，囊胚中所有细胞都没有开始分化，这个阶段之后胚胎开始出现分化。

10.内细胞团（Inner cell mass，ICM）：是大多数真兽类哺乳动物在胚胎发生中的一个早期阶段，又称胚细胞（embryoblast）。

是一团位于初期胚胎中的一个细胞团块，也是最后将会发育成为胎儿的部位。

11.透明带反应：精、卵结合后，透明带的结构发生变化，阻止了其它精子穿越透明带，保证了正常的单精受精。

12.卵黄膜反应：当第一个精子进入卵黄膜之后,会引起卵黄膜的紧缩、增厚,阻止其他精子进入卵内与卵子结合受精13.生殖激素：直接作用于生殖活动，以调节生殖过程为主要生理功能的激素。

《细胞工程》
细胞融合技术
【摘要】细胞工程是四大生物工程中的一种,其中细胞融合技术则是细胞工程的关键技术。 人们对细胞融合机理和融合方法的了解越来越多,在实践应用中的范围也越来越广。细胞融 合技术作为细胞工程的一项核心基础技术已在农业、 医药、 环保等领域得到了迅速发展和应 用。 该技术的不断发展和改进， 一方面表现在融合剂上,另一方面则体现在新用法上,并且也 体现在融合对象的不断扩展上。 现在新的细胞融合技术方法正在尝试着将各种物理和化学手 段综合应用,使细胞融合的方法、手段向操作更为简便,易于量化研究,同时又能够使融合率 向不断提高的方向发展。本文对细胞 （包括植物细胞、动物细胞、微生物细胞）融合的机理、 方法以及细胞融合技术的应用进行了简单的综述。 【关键词】细胞融合 方法 应用
1
《细胞工程》
重大的实践意义，正得到科学界的日益重视。 经过长期反复研究和实践，细胞融合技术逐步发展和完善起来，已成为生物 工程的基础技术之一。特别是近 20 年来，从理论和实践两个方面，有力地推动 了生物科学各领域的发展。细胞融合方法得到了不断的更新，融合率也得到逐步 的提高。 2 细胞融合的方法 2.1 生物法 自从研究者发现活的仙台病毒可以在体内介导癌细胞融合后,人们又实现了 用灭活的病毒促使动物异种细胞融合, 从而跨越了细胞融合种属屏障,推动了细 胞融合技术跃上了新台阶。解决病毒制备的困难、操作复杂和灭活病毒效价的差 异等问题是用病毒诱导细胞融合一种新的研究方向。 2.2 化学法 2.2.1 盐类融合法。 此法是应用较早的诱导原生质体的融合方法。盐类的融合剂对原生质体的破 坏很小。今后的研究应提高其融合率, 使其对液泡化高的的原生质体能够诱发融 合。 2.2.2 聚乙二醇融合法( PEG 法)。 加拿大籍华人高国楠 (1974) 用聚乙二醇 (PEG) 试剂为融合剂诱导大豆与大 麦、玉米与大豆、哈加野豌豆与豌豆的融合。此法比病毒更容易制备和控制,活 性也较稳定,用 PE 试剂作为病毒的替代物诱导细胞的融合。在 PEG 试剂诱导细 胞融合的有效浓度范围内( 50% ~ 55%) 对细胞的毒性应该进一步减小。 2.3 物理法 2.3.1 激光融合技术。 1987 和 1989 年德国的海德堡理化研究所采用了准分子激光器让油菜原生 质体融合,从开始光照到完成融合仅需要几秒钟。该法可选择在任意两个细胞进 行融合,易于实现特异性的细胞融合,作用于细胞的应力小,定时定位性较强,损伤 小,参数也易于控制,操作方便,并可利用监控器清晰的观察整个细胞融合过程,实 验重复性液好,无菌无毒性,但是它只能逐一的处理细胞。 2.3.2 离子束细胞融合技术。

Ｔａｑ(ＴａＫａＲａ 公司)ꎮ
１ ２ 方法
１ ２ １ ＥＳＣｓ 的 培 养: 培 养 基 Ｍ１５Ｌ 由 Ｋｎｏｃｋｏｕｔ
ＤＭＥＭ、１５％ ＦＢＳ、ＧｌｕｔａＭＡＸ ＴＭ 、ＭＥＭ ＮＥＡＡ、青链霉
素、β￣巯基乙醇、ＬＩＦ(１ ０００ Ｕ / ｍＬ) 配制而成ꎮ
发育可以最终得到完全由二倍体 ＥＳＣｓ 发育而来的
仅能嵌合到胎儿组织的发育潜能不同ꎬ四倍体 ＥＳＣｓ
ｅｄ ｍｅｄｉｕｍꎬ ＣＭ) :用 ＴＳ 培养基培养 Ｘ￣射线处理的
Ｅ１３ ５) 和第 １６ ５ 天( Ｅ１６ ５) 小鼠的胎盘、胎膜等胚
２０ ｍｉｎꎬ０ ４５ μｍ 滤器过滤ꎬ 即为 ＭＥＦ￣ＣＭꎮ ＴＴＳＣｓ
ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓꎬＴＳＣｓ) 与二倍体 ＴＳＣｓ 相比ꎬ其发育潜能有
ｖｉｖｏ. Ｒｅｓｕｌｔｓ ＴＴＳＣｓ ｔｈａｔ ｃａｎ ｄｅｖｅｌｏｐ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｂｅ ｐａｓｓａｇｅｄ ｗｅｒｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ. Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ｇｅｎｅｓ ｗａｓ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ＴＴＳＣｓ ｄｉｐｌｏｉｄ ＴＳＣｓ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ. Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｐａｓｓａｂｌｅ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ
司)ꎻ血清(Ｈｙｃｌｏｎｅ 公司)ꎻ成纤维细胞生长因子 ４(ｆｉ￣
ｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ ４ꎬＦＧＦ４)(Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ 公司)ꎻ肝素
(ｈｅｐａｒｉｎ)、Ｍ２ 培养基( Ｓｉｇｍａ￣Ａｌｄｒｉｃｈ 公司)ꎻＹ２７６３２
(ＭＣＥ 公司)ꎻＫＳＯＭ 培养基( Ｍｅｒｃｋ 公司)ꎻＴＢ Ｇｒｅｅｎ
ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｃｏｕｎｔｉｎｇ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｎｕｍｂｅｒ. ＲＴ￣ｑＰＣＲꎬ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ

鸡胚卵内注射技术研究进展2021年第5期鸡胚卵内注射技术研究进展李元昊，庞舒琪，王鹏程，姜立山，陈立思，魏紫，胡庭俊*，于美玲*（广西大学动物科学技术学院，广西南宁530005）摘要：卵内注射已不局限于接种疫苗，许多新型的注射制剂被研究报道。

新型的注射制剂因能够提高鸡的免疫力、营养物质吸收能力和生长性能而备受关注。

文章以不同注射物质着手，介绍近5年卵内注射外源物质，如疫苗、维生素、氨基酸、矿物质、益生菌、益生元和合生元的研究与研究成果，探讨鸡胚卵内注射技术的发展前景，为卵内注射研究者提供参考。

关键词：卵内注射；注射制剂；功能分析中图分类号：S814文献标识码：A文章编号：1672-9692（2021）05-0075-06Research progress on in ovo injection in poultryLi Yuanhao,Pang Shuqi,Wang Pengcheng,Jiang Lishan,Chen Lisi,Wei Zi,Hu Tingjun*,Yu Meiling*(College of Animal Science and Technology,Guangxi University,Guangxi Nanning530005)Abstract:In ovo injection is not limited to vaccination.Many new injection preparations have been studied and reported, and the new injection preparations have attracted much attention because of their ability to improve the immunity,nutrient absorption capacity and growth performance of chickens.The article starts with different injection materials,introduces the research and research results of in ovo injection of exogenous substances,such as vaccines,vitamins,amino acids,minerals, probiotics,prebiotics and synbiotics in the past five years,and discusses the technology of in ovo injection of chicken embryos.The development prospects provide references for researchers of in ovo injection.Key words:In ovo injection;Injection preparation;Functional analysis卵内注射技术最初是肉鸡场接种马立克氏病毒疫苗的一种疫苗接种技术[1]。

干细胞研发与运用胚胎干细胞(ES细胞)是一种高度未分化细胞。

它具有发育的全能性，能分化出成体动物的所有组织和器官，包括生殖细胞。

研究和利用ES细胞是当前生物工程领域的核心问题之一。

成体干细胞主要有造血干细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪干细胞和神经干细胞。

用于移植的细胞多数来源于外周血、骨髓和脐带血，也有部分来源于骨骼肌和脂肪组织。

虽然胚胎干细胞代表了最原始的全能干细胞，在组织工程和细胞治疗中具有广阔的应用前景，但是它有分化调控机制的复杂性和来源途径的伦理学争议;成体干细胞在成体组织中己经保留了发育过程中出现的完整干细胞谱，为干细胞发育机制研究提供了较为理想的模型，但成体干细胞的分化发育潜能己受到限制。

随着干细胞研究的逐步深入，涌现出一些有别于传统干细胞的新型干细胞，下面就新型干细胞的研究进展做一综述。

1新型干细胞1.1诱导多能干细胞(iPS)2006年日本京都大学Ya-manaka等［1］率先报道了iPS细胞的研究。

他把Oct3/4，Sox2、c-Myc和Klf4这4种转录因子基因克隆入病毒载体，然后引入小鼠成纤维细胞，发现可诱导其发生转化，产生的iPS细胞在形态、基因和蛋白表达、表观遗传修饰状态、细胞倍增能力、类胚体和畸形瘤生成能力、分化能力等方面都与胚胎干细胞相似［2］。

2007年体细胞转变成“iPS细胞”的成果发表。

Hanna等［3］用来自患病小鼠尾巴的皮肤细胞产生了iPS细胞，然后用健康的基因取代了涉及镰刀形红细胞贫血症的基因，研究人员将它们输给供体小鼠，这些细胞在小鼠身上开始产生健康的血细胞，这些小鼠的疾病症状因此有了改善。

将实验鼠皮肤细胞改造成iPS细胞，然后成功使其分化成心肌细胞、血管平滑肌细胞及造血细胞［4］。

2009年，中国科学家利用iPS 细胞克隆出活体实验鼠，首次证明iPS细胞与胚胎干细胞一样具有全能性［5］。

因干细胞技术和体细胞核移植技术不同，iPS技术不使用胚胎细胞或卵细胞，因此没有伦理学的问题。

ES其实是胚胎干细胞！胚胎干细胞（embryonic stem cell，ESCs，简称ES或EK细胞。

）胚胎干细胞是早期胚胎（原肠胚期之前）或原始性腺种分离出来的一类细胞，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。

无论在体外还是体内环境，ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。

胚胎干细胞研究在美国一直是一个颇具争议的领域，支持者认为这项研究有助于根治很多疑难杂症，是一种挽救生命的慈善行为，是科学进步的表现。

而反对者则认为，进行胚胎干细胞研究就必须破坏胚胎，而胚胎是人尚未成形时在子宫的生命形式。

形态学特征ES细胞具有与早期胚胎细胞相似的形态结构，细胞核大，有一个或几个核仁，胞核中多为常染色质，胞质胞浆少，结构简单。

体外培养时，细胞排列紧密，呈集落状生长。

用碱性磷酸酶染色，ES细胞呈棕红色，而周围的成纤维细胞呈淡黄色。

细胞克隆和周围存在明显界限，形成的克隆细胞彼此界限不清，细胞表面有折光较强的脂状小滴。

细胞克隆形态多样，多数呈岛状或巢状。

小鼠ES细胞的直径7 μm～18 μm，猪、牛、羊ES细胞的颜色较深，直径12 μm～18 μm。

胚胎干细胞ES细胞的全能性指ES细胞在解除分化抑制的条件下能参与包括生殖腺在内的各种组织的发育潜力，即ES细胞具有发育成完整动物体的能力，可以为细胞的遗传操作和细胞分化研究提供丰富的试验材料。

ES细胞发育全能性的标志是ES细胞表面表达时相专一性胚胎抗原（Stage specific embryonicant，SSEA），而且可以检查到OTC4基因的表达，这两种蛋白是发育全能性的标志。

ES细胞中AKP及端粒酶活性较高，可用于ES细胞分化与否的鉴定。

ES细胞的多能性是指ES细胞具有发育成多种组织的能力，参与部分组织的形成。

将E S细胞培养在不含分化抑制物的培养基上，可以形成类胚体。

将ES细胞在特定培养基进行培养，可以定向分化成特定组织，如ES细胞在含有白血病抑制因子（LIF）和维生素A酸（RA）的培养基上，可以分化形成全壁内胚层，将ES细胞与胚胎细胞共培养或将ES细胞注入囊胚腔中，ES细胞就会参与多种组织的发育。

细胞工程（cell engineering）技术广义的细胞工程（cell engineering）指所有应用于生物学和医学的、以细胞为操作对象的技术手段，其中也包括细胞培养。

一般地说，细胞工程主要指应用各种手段对细胞不同结构层次(整体、细胞器、核、基因等)进行改造，如进行细胞融合、核移植、基因转移等，以获得具有特定生物学特性的细胞。

一．细胞融合技术在细胞自然生长情况下，或在其他人为添加因素存在下，使同种细胞之间或不同种类细胞之间相互融合的过程，即为细胞融合（cell fusi on）。

通过细胞融合，可将来源于不同细胞核的染色体结合到同一个核内，结果形成一个合核体的杂种细胞。

细胞在生长过程中，可能发生自发的融合，但几率很低。

在实际工作中常采用各种促融合手段，包括病毒类融合剂如仙台病毒、化学融合剂如聚乙二醇（PEG）及电激融合法等。

在进行细胞融合反应和适当时间的培养后，需要通过一定方法对两种亲本细胞融合产生的具有增殖能力的杂种细胞进行筛选。

筛选方法主要包括药物抗性筛选、营养缺陷筛选和温度敏感性筛选等。

细胞融合最典型的应用是单克隆抗体技术。

细胞融合技术的发展和骨髓瘤细胞株的建成促成了B细胞杂交瘤技术的建立和单克隆抗体技术的成功。

1975年Koehler和Milstein将用绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞和体外培养能长期繁殖的小鼠骨髓瘤细胞融合，获得了具有两种亲本细胞特性的杂交细胞，即既能在培养条件下长期生长增殖，又能分泌特异的抗绵羊红细胞的抗体的B淋巴细胞杂交瘤。

对这种融合细胞进行克隆化以后，即可获得来自同一细胞克隆的抗体，这种抗体具有高度的均一性，称为单克隆抗体。

二．核移植技术细胞核移植（nuclear transfer）是指将一个双倍体的细胞核（可来自胚胎细胞或体细胞）移植到去核的成熟卵母细胞或受精卵中。

重组的卵细胞可以植入母体，并能发育为与供核细胞基因型相同的后代，因此又称为动物克隆技术。

1997年诞生的克隆羊“多利”就是体细胞核移植技术的产物。

转基因技术在鸡的抗病育种中的研究应用进展来，禽病是困扰养禽业发展的关键问题之一。

目前我国禽病就有80余种，其中传染病占75％左右，每年造成的经是2003年末东南亚地区暴发的由H5N1亚型禽流感病毒引起的高致病性禽流感，导致上亿只禽类死亡或被扑杀，且况。

目前尽管免疫接种、扑杀、药物治疗等传统的禽病防治方法已取得了不错的效果，但并非对所有疾病有效或完方法从遗传素质上提高鸡对病原的抗性，进行抗病育种，是禽病防治的有效途径之一。

育种遗传的选择途径遗传的选择途径很多，但一般可分为两大类，一类是直接选择方法，包括：①观察种畜禽；②攻击种畜禽；③攻击④攻击克隆。

另一类是间接选择方法，包括：①疫苗接种；②体外试验；③遗传标记；④通过分子遗传学方法寻找转基因技术的方法分类及在鸡抗病育种中的应用术属于分子遗传学中一种极具潜力的抗病育种途径，它是指将已知的外源基因移人动物细胞并整合到基因组中，从。

自Palmiter等于1982年首次成功获得转基因“超级小鼠”后，转基因技术先后在牛、羊、猪、兔、鸡等动物上点是能够实现基因的种间转移，因此不同来源的基因具有增强抗某种特定疾病的能力，用于动物的抗病育种可提高种进程。

随着胚胎学、分子生物学等学科的飞速发展，如今这项技术在增强动物抗病性方面显示出了诱人的应用前基因方法及其抗病育种效果抗性基因转移的方法主要有：显微注射法、反转录病毒载体法、精子载体法、胚胎干细胞法；原生殖细胞介导法显微注射法：显微注射法操作方法是将外源DNA直接注入到动物的卵中，此方法在哺乳动物及鱼类的研究中已精卵结构和胚胎发育过程比较特殊，利用此法对其受精卵进行遗传操作具有相当大的难度，使得该方法早期在鸡的约。

后来经过许多学者对这方面技术的不断研究，最终取得了一些重大的突破，如Perry等(1988)、Naito等(19后建立和完善了鸡受精卵体外发育的培养系统，使鸡胚的显微注射及其发育成为可能；Jemie等(1993)将带有目的精卵胚胎中，体外培养12h后发现有50％的存活，且胚胎含有质粒DNA。

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将经筛选的外源基因定点整合 的ES细胞注射到囊胚内
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4.基因敲除小鼠的建系
♂嵌合体 ♀野生型
杂合子
杂合子
1/4纯合子
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由于常规的ES细胞注入到2倍体囊胚获得ES细胞遗传背景 的子代需要经过嵌合体阶段，使得研究成本昂贵，研发周 期长。近年来发展的四倍体补偿技术可以绕过嵌合体小鼠 阶段，直接获得ES细胞遗传背景的小鼠。
mRNA
Protein
2. 编码RNA：DNA
rRNA & tRNA
3. 调控序列
基因组（Genome）：储存有生物体内全部遗传信息的全 套染色体，称之为基因组。
外源基因（Foreign gene or Transgene）：外来的、非 自身基因成分。
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• 基因型： 生物所具有的基因成分，叫基因型（Genotype)
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第一节 第二节 第三节 第四节 第五节
概述 转基因动物技术的发展概况 遗传工程动物的制备方法 遗传工程动物的建系和保种 遗传工程动物的应用
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第一节 概 述
概念
基因（Gene）：位于染色体上具有遗传效应的DNA片断。
三类：
1. 编码蛋白质：DNA
遗传工程动物的建系和保种
一、遗传工程小鼠的建系过程中的交配方式
遗传工程小鼠建系的目的是使外源基因能够稳定地遗传给 后代。
转基因小鼠导入的外源基因可以在半合子状态表达，但表 达的程度因整合位点的不同有所差异。