两种紫外-可见分光光度法测定黄芪中总皂苷含量的比较研究

黄芪甲苷含量测定几种常用方法的比较黄芪甲苷为黄芪的主要活性成分之一。

能抗炎降压、镇痛镇静和促进再生肝DNA水平。

现代药理研究表明，黄芪甲苷具有改善白细胞变形能力、改善心肌收缩及舒张功能、促进胰岛素分泌和清除自由基等药理作用。

近年来，对黄芪甲苷的含量测定方法的研究很多。

本人就几种常用方法作一比较。

1高效液相色谱法(I-R_C法)HPLC法因其分离度好、灵敏性高，适用范围广等优点，已广泛用于黄芪甲苷的含量测定、稳定性、药理和临床研究中。

1．1 HPLC—uv法黄芪甲苷属于四环三萜类皂苷，紫外末端吸收f max200．8 nm)。

紫外检测灵敏度低，干扰因素多，目前HPLC法是最常用的检测器是紫外检测器。

苏瑞强Ⅲ等采用HPLC法测定黄芪甲苷的含量，色谱柱为YWG—C18柱0．9 mm x250 mm，5 m)，流动相为乙腈一水(1：2．3)，检测波长为203nm，结果线性范围为0．86—5．27 I,L g／mL，加样回收率为97．52％，RSD为3．10％。

1．2 HPLC一示差折光检测法由于黄芪甲苷在紫外区仅有微弱的末端吸收，溶剂噪音对结果有较大的影响，且其前处理繁杂。

池玉梅等四应用HPLC示差折光检测法测定黄芪精12I服液中黄芪甲苷的含量，色谱柱为Hypersi|ODS 2(4．6ram X 200ram，5 I,Lm)，流动相为甲醇一水(67：33)，结果黄芪甲苷线性范围是1-5 g／ml，回收率为98．1％，RSD为2．02％。

该法简单方便，重现性好，灵敏度高，结果准确、可靠。

1．3 RP—HPLC法路玫等[3j采用RP—HPLC法测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量。

色谱柱为Nova—PakC18柱0．9ram xl5Omm，4la,m)，流动相为乙腈一水一磷酸(1：2：O．1)，检测波长为203nm，柱温为40％。

实验中将样品蒸干，采用水饱和的正丁醇溶解，用氨试液洗涤后蒸干，残渣用甲醇溶解。

结果加样回收率为94．7％，RSD为2．6％。

第39卷第12期2020年12月分析测试学报FENXI CESHI XUEBAO( Journal of Instrumental Analysis)Vol. 39 No. 12 1487-1493d o i: 10.3969/j.issn.1004 -4957. 2020.12. 008黄芪药材提取纯化过程中黄芪皂苷IV含量变化及相关成分分析陈超，吴惠勤*，黄晓兰，黄芳，刘梦云(广东省科学院广东省测试分析研究所（中国广州分析测试中心）广东省中药质量安全工程技术研究中心，广东广州510070)摘要：该文建立了准确测定黄芪药材中游离黄芪皂苷W含量的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC- MS/MS)法，并研究了2015年版《中国药典》黄芪项下黄芪皂苷W(黄芪甲苷)含量测定前处理操作对黄芪皂苷W含量的影响。

分别比较索氏提取后、正丁醇萃取后和氨试液除杂后黄芪皂苷W的含量变化，并利用具有超高分辨率的傅里叶变换离子回旋共振质谱仪（FT- ICR- MS)分析其成分的差异性。

结果表明，在优化条件下，黄芪药材中黄芪皂苷汉在0.387 0-24. 75 mg/L范围内呈良好的线性关系，相关系数（）为0.999 8,检出限（LOD)为1.0mg/kg，定量下限（LOQ)为3.0mg/k g，力口标回收率为94.5%~105%，相对标准偏差（RSD，™ =6)为1.4%。

研究发现甲醇直接提取的黄芪皂苷I相对含量最高，正丁醇萃取后的氨试液除杂过程会导致黄芪皂苷I及其他黄芪皂苷W同系物水解，黄芪皂苷I的相对含量显著降低，而黄芪皂苷W的含量显著升高；并发现黄芪药材中存在目前尚未报道的黄芪皂苷n异构体，将其命名为新黄芪皂苷n。

关键词：黄芪；游离黄芪皂苷含量变化；新黄芪皂苷n;超高效液相色谱-串联质谱中图分类号：O657.7; R284 文献标识码：A文章编号：1004 -4957(2020)12 -1487 -07Analysis of Content Variation of Astra/aloside W and Related ChemicalComponents During the Extraction and Purification of Astragali RadixC H E N C h a o，W U H u i-q in*，H U A N G X ia o-la n，H U A N G F a n g，L IU M eng-yun(Guangdong Engineering and Technology Research Center for Quality and Safety of Traditional Chinese Medicine，GuangdongInstitute of Analysis(China National Analytical Center Guangzhou)，Guangdong Academy ofSciences，Guangzhou510070，China)A b s t r a c t:A valida ted a n a lytic a l m ethod was developed fo r the d e term in ation o f free astragaloside Win A stra g a li R a dix by u ltra-h ig h perform ance liq u id chrom atography- tandem mass spectrom etry(U P-LC - MS/M S).E ffects o f each step o f pretreatm ent w ere studied on the de term in ation o W in Chinese pharm acopoeia(2015) (C h P).F u rth e rm o re，im pacts o f n-b u ta n o l e xtractio n and am­m onia im p u rity rem oval on the de term in ation and content va ria tio n o f astragaloside W were in te d.The differences o f com ponents caused by pretreatm ent were analyzed by F o u rie r trac lo tro n resonance mass s pectrom etry(F T- IC R- M S).R esults showed that there was a good lin e a rre la tio n sh ip o f the proposed m ethod fo r astragaloside W in the range o f0.387 0 -24. 75 ma co rre la tio n c o e ffic ie n t r)o f0.999 8.The lim it o f detection(L O D)and lim it o f q u a n tita tio n(L O Q)were 1.0 m g/k g and 3.0 mg/k g，re sp e ctive ly.The recoveries at three spiked levels ranged from94. 5% to 105%，w ith a re la tive standard d e v ia tio n(R S D，^ = 6)o f1.4% .The re la tive content o fastragaloside I was the highest when A stra g a li R a d ix was d ire c tly extracted w ith m etha no l.p u rity rem oval process w ith am m onia after n-b u ta n o l extractio n le d to the hom ologues tu galoside W by h y d ro ly s is，w h ic h s ig n ific a n tly increased the content o f astragaloside W.M o re o ve r，itwas fou nd th a t there exists a new isom er o f astragaloside n，nam ed as neoastragaloside n in A straga­l i R a d ix.Key words：A stra g a li R a d ix；free astragaloside W;content ch a n g e;neoastragaloside n ;u ltra-收稿日期：2020-06 -22;修回日期：2020-07 -14*通讯作者：吴惠勤，研究员，研究方向：质谱分析应用，E-mail:138****9756@139.o m1488分析测试学报第39卷h ig h perform ance liq u id chrom atography- tandem mass spectrom etry黄苗为見科植物蒙古黄 Y AVragaZiw(F is c h. )Bge.var.(Bge. )H siao 或膜荚黄苗也^§"〇^«應7716「£1疆；6«_15化8<：；11.)886.的干燥根[1]。

黄芪中黄芪甲苷含量测定研究进展摘要：黄芪是一种常见的中草药材，具有滋补养生、增强免疫力、抗疲劳等多种功效。

黄芪甲苷作为黄芪中的一种主要有效成分，对其含量的测定一直是研究的热点。

本文将对黄芪中黄芪甲苷含量测定的研究进展进行综述，以期为黄芪的质量控制和药用价值的评价提供参考。

一、引言黄芪，又名黄芪、土黄芪，为豆科植物黄芪的根。

黄芪在我国的使用历史非常悠久，被誉为“草中之皇”，在中医药中具有益气健脾、祛痰利水、固表止血等功效。

现代研究表明，黄芪还具有增强免疫力、抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤等多种生物活性，因此在食品、保健品、药品等领域有广泛的应用价值。

1. HPLC法HPLC（High Performance Liquid Chromatography）是目前测定黄芪甲苷含量常用的方法之一，其操作简便、分离效果好、重现性高。

常用的色谱柱有C18、C8、C4等，流动相常用乙腈-水、甲醇-水等。

检测波长一般为203nm。

HPLC法在分离和测定黄芪甲苷方面取得了一定的成果，但也存在一定的局限性，例如在样品的制备和前处理过程中易引起黄芪甲苷的流失，影响测定结果的准确性。

2. LC-MS法LC-MS（Liquid Chromatography-Mass Spectrometry）是一种高灵敏度、高分辨率的分析方法，可对复杂样品进行快速、准确的分析。

LC-MS法结合了液相色谱和质谱分析的特点，可以直接测定样品中的黄芪甲苷含量，并能对其结构进行进一步的鉴定。

由于其分析灵敏度高、选择性好，因此在黄芪甲苷含量测定中得到了广泛的应用。

LC-MS法的仪器设备和操作技术要求较高，且成本较高，限制了其在一般实验室的应用。

3. UV法UV（Ultraviolet）法是通过样品对紫外光的吸收程度来测定样品中目标成分的含量。

黄芪甲苷在紫外光下有特定的吸收峰，可以通过检测其吸光度来测定其含量。

UV法操作简便、成本低，但其检测灵敏度不高，对样品的前处理要求较高，且容易受杂质的干扰。

紫外分光光度法测定黄芪总皂苷口腔黏附缓释片中总皂苷的含量蔡君【摘要】目的:测定黄芪总皂苷口腔黏附缓释片中总皂苷的含量以建立质控方法.方法:采用香草醛一硫酸比色法测定总皂苷的含量.结果:以黄芪甲苷为对照品作校正曲线,在51 -510mg·1-1范围线性关系良好.加样回收率为99.00％,RSD为2.68％.测得3批黄芪总皂苷口腔黏附缓释片中总皂苷含量分别为82.07 mg·g-1、81.69 mg·g-1和81.50 mg·g-1.结论:该方法简便、准确、灵敏、重复性好,可作为黄芪总皂苷口腔黏附缓释片中总皂苷的质控方法.【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》【年(卷),期】2012(018)007【总页数】2页(P786,790)【关键词】黄芪总皂苷口腔黏附缓释片;总皂苷;分光光度法;含量测定【作者】蔡君【作者单位】广州中医药大学第一附属医院,广州 510400【正文语种】中文【中图分类】R285.5黄芪是1味重要的中药，具有益卫固表、利水清肿、托毒生肌、补中益气等功效，民间常用于治疗自汗、盗汗、血痹、浮肿、痛疽不溃或溃久不敛、内伤带虚、脾虚泄泻及一切气衰血虚之症［1］。

黄芪总皂苷为黄芪的主要活性成分之一。

研究表明，黄芪总皂苷有良好的黏膜保护作用［2］。

我们利用羟丙基甲基纤维素(HPMC)和丙稀酸树脂E100作为黏附材料和骨架材料，将黄芪总皂苷制成口腔黏附缓释片，为保证质量我们对制剂工艺进行考核，并建立了简便、快捷、准确的紫外分光光度法，以测定黄芪总皂苷口腔黏附缓释片中总皂苷的含量。

1 材料与仪器1.1 材料与试剂黄芪总皂苷购自南京泽朗医药科技有限公司，黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号 110781—200613)，浓硫酸、香草醛、无水乙醇、甲醇均为分析纯。

1.2 仪器TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，AE200型电子分析天平(瑞士梅特勒公司)，电热恒温水温箱(上海跃进医疗器械厂)。