LpPLA2人血浆脂蛋白相关磷脂酶A2定量检测试剂盒ppt课件

脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）适用范围：该产品用于体外定量测定人血清或血浆中脂蛋白相关磷脂酶A2的浓度。

1.1 产品规格1.2 组成成分1.2.1 试剂组成试剂1：磷酸盐缓冲液（pH=6.5）50mmol/L 试剂2：磷酸盐缓冲液（pH=8.0）50mmol/L 包被鼠抗人Lp-PLA2单克隆抗体的胶乳悬浊液<0.5%1.2.2校准品的组成校准品为液体，校准品组成是在磷酸盐缓冲液中加入含一定浓度的脂蛋白相关磷脂酶A2纯品。

1个水平校准品目标浓度为800ng/mL，浓度有批特异性，具体定值详见瓶签。

1.2.3质控品的组成两水平液体质控品，在磷酸盐缓冲液中加入脂蛋白相关磷脂酶A2纯品。

靶值范围分别为：（90～200） ng/mL、（200～500）ng/mL。

2.1 外观试剂R1为无色至淡黄色澄清液体；试剂R2为乳白色悬浊液；校准品为无色至淡黄色澄清液体；质控品为无色至淡黄色澄清液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3 空白吸光度试剂空白吸光度应在0.2～2.0之间。

2.4 空白限试剂空白限应不大于10ng/mL。

2.5 分析灵敏度测定分析灵敏度：浓度为160ng/mL时，吸光度变化应≥0.01。

2.6 线性测试血清样本，试剂线性在(0，800] ng/mL范围内，线性相关系数（r）应不小于0.99；测定结果在(0，200] ng/mL时绝对偏差不超过±20ng/mL；在（200，800] ng/mL范围内的相对偏差不超过±10%。

2.7 重复性试剂盒测试项目重复性CV≤10%。

2.8 批间差不同批号之间测定结果的相对极差应≤15%。

2.9 准确度回收实验：回收率在90%～110%。

2.10质控品赋值有效性测定值在质控靶值范围内。

2.11校准品溯源性依据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，校准品溯源至脂蛋白相关磷脂酶A2纯品（来源：Sigma；纯度≥95%）。

人磷脂酶A2(PL-A2)酶联免疫分析试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供体外研究使用!预期应用ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中磷脂酶A2(PL-A2)含量。

实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗PL-A2抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗PL-A2抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。

TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的PL-A2呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制1. 酶联板：一块（96孔）2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1,000 ng/ml，请先稀释至100 ng/ml，再做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)，分别稀释成100ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。

如配制50 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml 的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。

3. 样品稀释液：1×20ml。

4. 检测稀释液A：1×10ml。

5. 检测稀释液B：1×10ml。

6. 检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。

如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。

脂蛋白相关磷脂酶A2脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase2,Lp-PLA2)，亦称血小板活化因子乙酰水解酶（PAF-AH），由PLA2G7基因编码的441个氨基酸组成，分子量约为45 kDa。

Lp-PLA2经成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，并受炎性介质的调节，具有促炎症和促动脉粥样硬化的作用。

近年来越来越多的证据表明其具有促进动脉粥样硬化(AS)的作用，是AS中的一种新的炎性反应标志物。

Lp-PLA2在血液中的浓度可动态地反映动脉粥样斑块的炎症程度，浓度越高风险越大。

此外，检测血中Lp-PLA2水平可以用来识别冠心病的高危个体，根据Mayo Medical Laboratories的研究，当血液中Lp-PLA2浓度高于235ng/mL，提示心肌梗死、冠心病和缺血性脑卒中等心血管疾病的发生的风险。

Lp-PLA2为反映动脉粥样硬化斑块破裂及血栓形成事件的独立风险因子，与其具有高度一致性及精确性，是急性动脉粥样硬化血栓复发事件高风险患者的准确风险评估标志物。

人Lp-PLA2单克隆抗体科赛格最新推出一批高质量的抗人Lp-PLA2单克隆抗体，其中4株抗体能够用于高灵敏度的双抗夹心法免疫检测。

利用我公司化学发光检测平台对自产抗体对进行表征，显示其检测范围广，灵敏度高。

检测范围约为0.13-1000ng/mL，最低检出限可达0.13ng/mL。

将所推荐的抗体对经过大量的正常血清样本、贫血样本和炎症病理样本测试，临床检测结果显示符合率高。

性质参数靶标种属人类宿主Balb/c小鼠融合细胞Sp2/0免疫原人脂蛋白相关磷脂酶A2纯化方式Protein G亲和纯化保存缓冲液磷酸盐缓冲液（pH7.4）应用范围化学发光法，胶乳增强免疫比浊法等货号CSB-DA113BmN①, CSB-DA113BmN③, CSB-DA113BmN④, CSB-DA113BmN⑤.校准曲线所有的单克隆抗体分别用作捕获抗体和标记抗体，然后组合成不同抗体对，用于双抗夹心法免疫检测。

脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）测定试剂盒（速率法）适用范围：该产品用于体外定量测定人血清或血浆中脂蛋白相关磷脂酶A2的浓度。

1.1 产品规格1.2 组成成分1.2.1 试剂组成试剂1：磷酸盐缓冲液（pH=7.6）50mmol/L乙二胺四乙酸（EDTA）2mmol/L试剂2a：缓冲液pH2.7 100mmol/L试剂2b：1-肉豆蔻酰-2-（4-硝基苯基琥珀酰基)-sn-丙三基-3-磷酸胆碱50mmol/L1.2.2校准品的组成校准品为液体，校准品组成是在磷酸盐缓冲液中加入含一定浓度的脂蛋白相关磷脂酶A2纯品。

1个水平校准品目标浓度为900U/L，浓度有批特异性，具体定值详见瓶签。

1.2.3质控品的组成两水平液体质控品，在牛血清(20g/L)中加入脂蛋白相关磷脂酶A2纯品。

靶值范围分别为：（200～600） U/L、（600～1200）U/L。

2.1 外观试剂 1 为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂 2a 为无色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；试剂 2b为无色至淡黄色液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；校准品：无色至淡黄色澄清液体；质控品：无色至淡黄色澄清液体。

2.2 净含量液体试剂的净含量不得低于标示体积。

2.3 试剂空白2.3.1试剂空白吸光度试剂空白吸光度应≤1.000；2.3.2试剂空白吸光度变化率空白吸光度变化率（ΔA/min）应≤0.01。

2.4 分析灵敏度测定分析灵敏度：浓度为800U/L时，吸光度变化应≥0.01。

2.5 试剂测定线性测试血清样本，测试血清样本，试剂线性在[50，1600]U/L范围内，线性相关系数（r）应不小于0.990；测定结果在[50，500]U/L时绝对偏差不超过±75U/L；在（500，1600]U/L范围内的相对偏差不超过±15%。

2.6 重复性试剂盒测试项目重复性 CV≤10%。

2.7 批间差不同批号之间测定结果的相对极差应≤15%。

人脂酶A2（PL-A2）ELISA试剂盒分析检测说明书本试剂盒仅供研究使用。

检测范围：48T 25 ng/L -800 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本脂酶A2（PL-A2）含量。

实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人脂酶A2（PL-A2）水平。

用纯化的人脂酶A2（PL-A2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入脂酶A2（PL-A2），再与HRP标记的脂酶A2（PL-A2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的脂酶A2（PL-A2）呈正相关。

用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人脂酶A2（PL-A2）浓度。

试剂盒组成1 20倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液3ml×1瓶2 酶标试剂3ml×1瓶 8 标准品（1600ng/L）0.5ml×1瓶3 酶标包被板12孔×4条9 标准品稀释液1.5ml×1瓶4 样品稀释液3ml×1瓶 10 说明书1份5 显色剂A液3ml×1瓶 11 封板膜2张6 显色剂B液3ml×1/瓶12 密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。

若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

800 ng/L 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液400 ng/L 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液200 ng/L l 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液100 ng/L 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液50 ng/L 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。