2021 Vol.40 No.4•100- Serial No.350China BrewingResearch Report不同固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响周绍琴王乐乐C ,吴映梅周 艳袁丹丹9(1.贵州医科大学食品科学学院，贵州贵阳550025;2.贵州医科大学环境污染与疾病监控教育部重点实验室，贵州贵阳550025;3.贵州省农产品质量安全监督检验测试中心，贵州贵阳550004)摘要:通过测定不同固态培养基培养蛹虫草子实体的生长情况,虫草素、虫草酸、虫草多糖含量，1,1-二苯基-2-三硝基苯腓(DPPH )及2,2，--双-3-!-6-磺酸(ABTS )能力，研究 蛹虫草子实体品质的影响。
结果表明， 体 蛹虫草子实体的活性物质与抗氧化活性差异显著(P V0.05),其中小米+麦+ 蛹虫草子实体的生长情况较佳，出芽时间最快，为12 d ,子实体最长，为(6.50±0.15) cm ,鲜质量最重，为(8.58±0.07) g ,其虫草素和虫草酸含量最高，分别为(6.53±0.06) mgg 和(7.66±0.21) mgg ； 7仁米培养基培养蛹虫草子实体虫草多糖含量最高，为(59.07±1.89) mgg ,7仁米+麦 +培养基抗氧化活性最强,DPPH和ABTS 自由基清除率分别为(66.84±0.77)%、(68.28±0.26)% =关键词:蛹虫草;虫草素;虫草酸;虫草多糖;抗氧化活性中图分类号：Q815文章编号-0254-5071 (2021)04-0100-05doi:10.11882j.issn.0254-5071.2021.04.019引文格式:周绍琴，王乐乐,吴映梅，等.不同固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响［J ］.中国酿造,2021,40(4):100-104.Effect of different solid media on the quality ofCordyceps militaris fixiit bodyZHOU Shaoqin 1-2, WANG Lele 3, WU Yingmei 1-2, ZHOU Yan 1-2**, YUAN Dandan 1收稿日期：2020-10-22修回日期：2020-12-28基金项目：黔科合基础［201911254号；贵州省2019年大学生创新创业训练计划项目(20195200896)；贵州省2019年大学生创新创业项目(20195200940);贵州医科大学2020年乡村经济振兴项目(062190207)作者简介:周绍琴(1990-),，讲师，硕士，研究 生物与发酵。
提高蛹虫草质量和产量的综合生产技术研究摘要:目前市场上生产的蛹虫草产品没有统一的质量标准,影响市场对蛹虫草产品的消费,研究结果表明,蛹虫草菌种Hz1孢子复壮的菌株培养的子实体干重高于菌种B1､Bz1､H1孢子复壮的菌株培养的子实体干重,其液体培养基最优组合为葡萄糖20 g/L､蛋白胨8 g/L､KH2PO4 1.0 g/L､MgSO4 500 mg/L｡生产富硒蛹虫草培养基的最优主料为富硒大米45 g､培养液55 mL,在培养温度为22 ℃､空气相对湿度70%时蛹虫草子实体生长最好｡综合而言,子实体培养最优条件为日间温度22 ℃､夜间温度15 ℃､空气相对湿度70%､光照度200 lx,并结合先用日光灯照射､待子实体长至1~2 cm时使用蓝紫灯照射处理的产量最高｡检测结果显示,蛹虫草子实体的有效成分含量分别为硒52.03 mg/kg､蛋白质27.74%､腺苷0.05%､多糖2.50%､虫草素2.61%､氨基酸26.92%,尤其是所含的虫草素具有工业提取价值｡关键词:蛹虫草;质量;产量;技术参数;优化;生产技术Integrated Production Technology for Improving the Quality and Yield of Cordyceps militarisAbstract: There has not been any uniform quality standards for production of Cordyceps militaris(L.Fr) Link in market, which affect the consummation of goods. The study results showed that fruit body dry weight of Hz1 spore rejuvenation strain was higher than that of B1, Bz1, H1 spore rejuvenation strains. The optimal liquid medium contained glucose 20 g/L, peptone 8 g/L, KH2PO4 1.0 g/L, MgSO4 500 mg/L. The best main substrate in medium for production of selenium enriched C. militaris was selenium enriched corn 45 g + medium 55 mL. The fastest mycelium growth rate could be obtained under 22 ℃, and 70% humidity. Optimal conditions for fruiting body cultivation to get the highest yield was 22 ℃ at daytime and 15 ℃ at night, humidity 70%, illuminance 200 lx combined with fluorescent light firstly and then blue-violet rays when length of fruiting body was 1~2 cm. The content of selenium, protein, adenosine, polysaccharide, cordycepin and amino acids in fruiting body was 52.03 mg/kg, 27.74%, 0.05%, 2.50%, 2.61% and 26.92%, respectively, among which extraction of cordycepin was with industrial value.Key words: Cordyceps militaris (L.Fr) Link; quality; yield; technical parameters; optimization; production technology蛹虫草[Cordyceps militaris (L.Fr) Link]又称为北冬虫夏草,属真菌界的子囊菌门(Ascomycota)肉座菌目(Hypocreales)麦角菌科(Clavicipitaceae)虫草属[Cordyceps(Fr.)Link] 真菌,与冬虫夏草[C. sinensis (Berk.) Sacc.]为同属异种真菌[1],是虫草属的模式种;在我国的吉林､四川､河北､湖南､湖北､山西等省均有生长,美国､加拿大､意大利､日本､德国､俄罗斯等国也有分布,但在自然界的分布与产量远比冬虫夏草稀少｡蛹虫草药性作用温和,长期以来就是既可药用又可食用的高级滋补品,并且一年四季皆可服用,对老､少､病､弱､虚者皆宜,无任何副作用[2],市场潜力巨大｡但由于野生蛹虫草数量极少,不能满足市场的需求,即使价格昂贵也供不应求,所以人们采用科学方法对其进行了人工培植[3-6],也取得了成功｡但人工培养的蛹虫草尤其是富硒蛹虫草,其药用成分的含量高低不一,这对蛹虫草的药性发挥､滋补功效稳定性､市场信誉产生了不良影响,反映出生产企业不仅没有形成蛹虫草人工生产质量化标准,而且无统一规范化的生产工艺流程[7-10]｡针对蛹虫草生产工艺流程中影响产品质量和产量的主要问题,我们开展了系统研究,初步建立了蛹虫草高产优质工业化生产技术流程,现将结果报告如下｡1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌种参试的蛹虫草菌种有4个,分别是B1(购于中国科学院微生物研究所),H1(购于华中农业大学微生物研究所),Bz1(购于湖北民族学院微生物实验室),Hz1(购于恩施职业技术学院微生物实验室)｡菌种回来后都进行了孢子复壮[11],成为各自的系列菌种｡天然冬虫夏草子实体购自当地的同仁堂药店｡1.1.2 培养基及培养主料原料基础培养基为PDA培养基(不含琼脂),试验原料有葡萄糖､KH2PO4､MgSO4､Na2SeO3(以上为化学纯)和维生素B1(VB1,医用)､天然硒浓缩水(生物资源保护与利用湖北省重点实验室配制);生长培养的主料原料为从当地市场购买的恩施出产的含硒2.7 mg/kg的大米(恩施清水桥米)以及马铃薯､燕麦､荞麦､稻谷,此外还有珍珠岩｡1.1.3 仪器参试的仪器为生物资源保护与利用湖北省重点实验室原已置备的LRH-ZSO恒温培养箱､DX-Ⅱ磁力搅拌器､BT25S电子天平､80-2离心机､PHS-25 pH计､LC-10 ATupplus液相色谱仪､示差析光检测器､紫外检测器､YXQSG46280手提式压力蒸汽灭菌器､IOP-Ⅲ无菌操作台､格力KFR-SN5空调､WS2020A2温湿度仪､烘箱､GXMQ系列灭菌器､CO2探测仪､安捷伦HP1100氨基酸自动分析仪､鼓风机､接种仪器､移液枪､改装电动穿孔装置､改装注水枪､酒精灯等,以及三角瓶､广口玻璃瓶､聚乙烯封口塑料薄膜､耐高温橡皮筋等耗材｡1.2 方法1.2.1 碳源对培养基优化的试验设计基础培养基(液体)PDA配制:取200 g马铃薯去皮切成薄片,加水1 000 mL煮沸30 min,用纱布过滤,取上清液,加入葡萄糖20 g､蛋白胨10 g､KH2PO4 1 g､MgSO4 500 mg､维生素B1微量[12]｡将基础培养基(液体)PDA中的20 g葡萄糖成分分别换成20 g麦芽糖､15 g蔗糖､20 g可溶性淀粉,配制成3种新碳源液体培养基,加上基础培养基(液体)PDA,一共是4种碳源液体培养基｡取500 mL三角瓶若干个,每个三角瓶分别装入250 mL 的4种碳源液体培养基,用封口膜封口灭菌,分别接种蛹虫草B1､Bz1､H1､Hz1 4个菌种,接种量都为25 mL,各菌种不同碳源培养基的处理都接5瓶,在22 ℃､磁力搅拌器转速120~180 r/min､避光培养条件下培养72 h,观察各菌种在不同碳源培养基里的生长情况｡72 h后过滤菌丝体,用去离子水洗涤5次,置烘箱中60 ℃烘到恒重,冷却后测定各菌种菌丝体干重[3]｡1.2.2 氮源对培养基优化的试验设计将基础培养基(液体)PDA中的10 g蛋白胨成分分别换成5 g酵母粉､50 g麦麸､30 g尿素､20 g黄豆粉,配制成4种新氮源液体培养基,加上基础培养基(液体)PDA,一共是5种氮源液体培养基｡同样用500 mL三角瓶分别装入250 mL 的5种氮源液体培养基,封口膜封口灭菌后分别接种蛹虫草B1､Bz1､H1､Hz1 4个菌种,接种量也是25 mL,各菌种不同氮源培养基的处理都接5瓶,在22 ℃､磁力搅拌器转速120~180 r/min､避光培养条件下培养72 h,观察各菌种在不同氮源培养基里的生长情况｡培养结束后过滤菌丝体,用去离子水洗涤5次,置烘箱中60 ℃烘到恒重,冷却后测定各菌种菌丝体干重[3]｡1.2.3 液体培养基优化L9(34)正交试验设计以基础培养基中的葡萄糖､蛋白胨､KH2PO4､MgSO4作为4个因素,各因素均取3个水平,其他成分不变,设计了一个L9(34)正交试验[13],蛹虫草菌种为Hz1,详情见表1｡试验接种量为25 mL,在磁力搅拌器转速120~180 r/min､22 ℃条件下培养72 h,观察Hz1菌丝生长情况,测定菌丝体干重,方式同上｡1.2.4 最优培养主料比较试验菌种生长培养基分别有大米培养基､燕麦培养基､荞麦培养基､萌发稻谷培养基､萌发荞麦培养基､珍珠岩+米粉混合物培养基,各生长培养基主料的用量都为45 g,只是珍珠岩+米粉混合物培养基中的珍珠岩用量分别有3个,具体见表2｡所有生长培养基都分别加入1.2.3得到的最佳液体培养液组合45､55､65 mL;使用的蛹虫草菌种为Hz1,接种量25 mL,自然光照,温度22 ℃,培养50 d后测定所得子实体的干重[14]｡1.2.5 蛹虫草孢子复壮培养用灭菌手术解剖刀分别在蛹虫草B1､Bz1､H1､Hz1 4个菌种成熟的孢子部位划一切口,取灭菌短镊子轻轻地碰击数次,用装有培养基的培养皿(平皿)接住,使蛹虫草孢子接种于培养皿内的培养基中,移至恒温培养箱中22 ℃复壮[15]培养24 h,观察其菌落特征｡随后将以上一级菌种接种到最优液体培养基中培养72 h,培养条件为22 ℃､,磁力搅拌器转速120~180 r/min｡将二级菌种接种到最优人工栽培培养基中,每组平行50瓶,记录转色时间､子实体形态､子实体干重｡1.2.6 培养基灌装程序中灭菌控制设计及接种器具比较提前1 d将生产所需数量的广口玻璃瓶(800 mL)进行二次清洗,分装排列整齐｡由制种室提供液体培养基所需的配料量,由灌装室进行配料操作,每批生产3 024瓶｡灭菌流程为灭菌温度100 ℃､灭菌方式有高压灭菌(30､45 min)和间歇灭菌(30 min+30 min);灭菌完成后进行蛹虫草接种｡接种室在紫外灭菌1 h后再等待5 min才能进入接种室;接种前工作人员要用75%的乙醇喷洒工作服,用脱脂棉蘸取75%的乙醇擦拭双手,并检测所有待装瓶,观察有无破痕､薄膜有无脱落等状况[16,17],及时处理分装并标记､记录｡随后用移液枪､改装后的接种器分别进行接种,接种量10%,接种速率有10瓶/min､20瓶/min;菌种选用Hz1,观察记录菌丝､子实体生长状态,最后统计Hz1菌种子实体的系统污染率｡1.2.7 温度､空气相对湿度对蛹虫草4个菌种子实体培养管理参数研究设计对温度､空气相对湿度､蛹虫草菌种进行单因素试验[18],温度设置15､18､20､22､24 ℃ 5个水平;空气相对湿度设置60%､65%､70%､75%､80% 5个水平;4个蛹虫草菌种为B1､Bz1､H1､Hz1｡从单因素试验结果中各筛选出2个最优的水平进行3因素的L4(23)正交试验(表3),以筛选最适合蛹虫草子实体生长的培养条件[19]｡1.2.8 温度､空气相对湿度､光照度影响蛹虫草Hz1菌种的子实体产量正交设计选取白天温度､夜间温度､空气相对湿度､光照度4个因素,设置3水平的L9(34)正交试验,因素与水平组合情况见表4,以筛选最适合蛹虫草子实体生长的培养条件｡1.2.9 不同光源对蛹虫草Hz1菌种子实体生长及产量的影响选取350瓶接种了蛹虫草Hz1菌种的装瓶,分别进行不同光源的处理: ①日光灯单独照射;②红灯单独照射;③蓝紫灯单独照射;④先用红灯照射,待子实体长至1~2 cm时使用蓝紫灯照射;⑤先用蓝紫灯照射,待子实体长至1~2 cm时使用红灯照射;⑥先用日光灯照射,待子实体长至1~2 cm时使用蓝紫灯照射;⑦先用日光灯照射,待子实体长至1~2 cm时使用红灯照射｡每处理50瓶,处理后分别进行子实体生长描述,并测定子实体干重[20]｡1.2.10 蛹虫草Hz1菌种和天然冬虫夏草子实体成分检测蛹虫草Hz1菌种和天然冬虫夏草子实体的硒含量及矿质营养元素含量采用原子吸收法检测[9];氨基酸种类和含量采用安捷伦HP1100氨基酸自动分析仪测定[11];腺苷含量采用ATP 法检测[5];多糖含量采用硫酸苯酚法检测[21]｡虫草素含量采用高效液相色谱仪､示差折光检测器与紫外检测器串联的方法测定[5]｡2 结果与分析2.1 蛹虫草各菌种在不同碳源优化培养基里的菌丝体生长情况蛹虫草各菌种在不同碳源优化培养基里的菌丝体生长情况见表5｡从表5可见,B1菌种生长最适的碳源为20 g/L葡萄糖,Bz1菌种生长最适的碳源为15 g/L 蔗糖,H1菌种生长最适的碳源为20 g/L葡萄糖,Hz1菌种生长最适的碳源为20 g/L 葡萄糖｡4个菌种中,Hz1菌种的最高菌丝生长量最大,依次比Bz1､B1､H1最高菌丝生长量高出了4.5%､20.9%､32.0%｡2.2 蛹虫草各菌种在不同氮源优化培养基里的菌丝体生长情况蛹虫草各菌种在不同氮源优化培养基里的菌丝体生长情况见表6｡从表6可见,B1､Bz1､H1､Hz1菌种生长最适的氮源均为10 g/L蛋白胨｡4个菌种中Hz1菌种的菌丝生长量最大,依次比Bz1､B1､H1菌种的最高菌丝生长量高出了 6.1%､22.5%､30.8%｡2.3 蛹虫草菌种Hz1液体培养基优化L9(34)正交设计试验结果蛹虫草菌种Hz1液体培养基优化L9(34)正交试验结果见表7｡从表7可见,在4个试验因素中,影响菌丝量高低的顺序为:A>B>D>C;最优组合为A2B1C2D2｡即葡萄糖20 g/L,蛋白胨8 g/L,KH2PO4 1.0 g/L,MgSO4 500 mg/L｡2.4 蛹虫草菌种Hz1子实体培养基最优主料与培养液比较6个生长培养基主料对蛹虫草菌种Hz1子实体产量的影响结果见图1｡从图1可见,生长培养基主料为大米45 g､培养液为55 mL时,蛹虫草子实体产量最高,达到了5.32 g/瓶,并表现出培养液偏少时其减产不明显､但培养液偏多时减产显著的现象,稳产性算是最好的;生长培养基主料为燕麦45 g､培养液为55 mL时,蛹虫草子实体产量为5.26 g/瓶,但培养液减少､增多都严重减产,稳产性差;生长培养基主料为荞麦45 g､培养液为65 mL时,蛹虫草子实体产量并列最高,达到5.32 g/瓶,但随着培养液减少出现大幅度减产;生长培养基主料为萌发荞麦45 g､培养液为45 mL时,蛹虫草子实体产量为2.50 g/瓶,产量太低,无应用价值;生长培养基主料为萌发稻谷45 g､培养液为55 mL时,蛹虫草子实体产量为4.00 g/瓶,也无应用价值;生长培养基主料为珍珠岩+米粉混合物45g､培养液为45mL时,蛹虫草子实体产量仅为1.02 g/瓶,在6个生长培养基主料中产量最低｡2.5 4个蛹虫草菌种孢子复壮培养结果蛹虫草4个菌种B1､Bz1､H1､Hz1成熟的孢子复壮培养结果见表8｡从表8可见,用Hz1菌种孢子复壮培养得到的子实体不仅外形好看,而且每瓶产量比Bz1､B1､H1菌种孢子复壮培养得到的子实体产量依次高3.2%､23.8%､94.0%｡反映出Hz1是4个蛹虫草菌种子实体产量表现最好的菌种｡2.6 Hz1菌种培养基灌装程序中灭菌效果蛹虫草Hz1菌种培养基灌装程序中灭菌控制比较结果见表9｡从表9可见,100 ℃灭菌30 min后冷却､然后再用100 ℃灭菌30 min的间歇灭菌方式效果最好,系统污染率仅为0.08%;其次是100 ℃灭菌45 min的高压灭菌方式,系统污染率为0.10%;而100 ℃灭菌30 min的高压灭菌方式系统污染率最高,达到了0.20%｡2.7 不同接种器具对Hz1蛹虫草菌丝和子实体生长的影响移液枪､改装后的接种器对Hz1菌种子实体生长的影响结果见表10｡从表10可见,改装的接种器接种后,Hz1菌种的菌丝生长分布均匀,子实体形态美观,整体品质较好;而移液枪接种后Hz1菌种的菌丝生长分布不均匀,子实体形态不一致,整体品质较差｡改装的接种器接种速度可达20瓶/min,比常规接种速度提高1倍,而且不增加系统污染率｡2.8 温度､空气相对湿度对4个菌种子实体生长的影响温度对4个菌种子实体干重均值的影响结果见图2｡从图2可见,培养温度在22 ℃时,4个菌种子实体干重的均值最大｡空气相对湿度对4个菌种子实体干重均值的影响结果见图3｡从图3可见,空气相对湿度在70%时,4个菌种子实体干重的均值最大｡在4个菌种子实体干重方面,Hz1菌种子实体的干重最重,为 4.88 g/瓶;Bz1菌种子实体的干重次之,为4.50 g/瓶;B1菌种子实体的干重为3.42 g/瓶;H1菌种子实体的干重为3.32 g/瓶｡适合蛹虫草子实体生长的L4(23)正交试验培养结果见表11｡从表11可见,影响蛹虫草子实体产量高低的因素排序为C>A>B,最佳组合为A2B2C2,即温度为22 ℃､空气相对湿度为70%､菌种选取Hz1时,子实体平均干重最重｡2.9 温度､空气相对湿度､光照度影响Hz1菌种的子实体产量L9(34)正交设计试验结果蛹虫草菌种Hz1的子实体培养条件L9(34)正交试验结果见表12｡从表12可见,影响蛹虫草子实体产量高低的因素排序为为A>D>C>B,最佳组合为A3B1C3D2,即蛹虫草Hz1菌种子实体最优培养条件为白天温度22 ℃､夜间温度15 ℃､空气相对湿度70%､光照度200 lx｡2.10 不同光源处理对蛹虫草Hz1菌种子实体生长的影响不同光源对Hz1菌种子实体产量的影响结果表明,处理⑥(先用日光灯照射,待子实体长至1~2 cm时使用蓝紫灯照射)的蛹虫草子实体产量为 5.30 g/瓶;处理⑦(先用日光灯照射,待子实体长至1~2 cm时使用红灯照射)的蛹虫草子实体产量为5.28 g/瓶;处理⑤(先用蓝紫灯照射,待子实体长至1~2 cm时使用红灯照射)的蛹虫草子实体产量为5.22 g/瓶;处理④(先用红灯照射,待子实体长至1~2 cm时使用蓝紫灯照射)的蛹虫草子实体产量为5.04 g/瓶;而处理③(蓝紫灯单独照射)的蛹虫草子实体产量为4.76 g/瓶;处理②(红灯单独照射)的蛹虫草子实体产量为4.48 g/瓶;处理①(日光灯单独照射)的蛹虫草子实体产量仅为3.26 g/瓶｡说明先用日光灯照射,待子实体长至1~2 cm时使用蓝紫灯照射处理的子实体产量最高,效果最好｡2.11 蛹虫草Hz1菌种和冬虫夏草子实体的氨基酸含量比较结果蛹虫草Hz1菌种和天然冬虫夏草子实体在氨基酸含量方面的测定结果见表13｡从表13可见,在人体必需氨基酸(赖氨酸､色氨酸､苯丙氨酸､蛋氨酸､苏氨酸､异亮氨酸､亮氨酸､缬氨酸)含量[22,23]方面,蛹虫草Hz1菌种除赖氨酸､色氨酸含量分别比天然冬虫夏草的低18.2%､3.3%之外,苯丙氨酸､异亮氨酸､蛋氨酸､苏氨酸､缬氨酸､亮氨酸的含量依次比天然冬虫夏草的提高129.5%､120.9%､73.3%､43.8%､38.4%､11.1%｡在人体半必需氨基酸(精氨酸､组氨酸)含量方面,蛹虫草Hz1子实体的精氨酸､组氨酸含量分别比天然冬虫夏草的低28.7%､20.0%｡不过在总氨基酸含量[22]方面,蛹虫草的总氨基酸含量比天然冬虫夏草的总氨基酸含量高24.8%,说明蛹虫草的营养成分不亚于天然冬虫夏草的｡2.12 蛹虫草Hz1菌种和冬虫夏草子实体的矿质营养元素比较结果蛹虫草Hz1菌种和天然冬虫夏草子实体在矿质营养元素含量方面的测定结果见表14｡从表14可见,蛹虫草微量元素含量与天然冬虫夏草相比,Se含量提高了868.9%,Mn含量提高了53.3%;但Ni含量降低了70.4%,Cu含量降低了59.1%,Zn 含量降低了65.8%,Fe含量降低了61.2%｡蛹虫草大量元素含量与天然冬虫夏草相比,K含量提高了414.7%,但Ca含量降低了60.3%｡检测结果显示,本研究培养的蛹虫草属于富硒类型,这对于功能性食品的开发具有重要价值[24,25];并且Cu是重金属,Cu含量降低有利于人体健康[26];而Ni是对健康有益的微量元素[27],Ni偏低,说明将其进一步提高到天然冬虫夏草含量的水平还需要做许多工作｡2.13 蛹虫草Hz1菌种其他成分含量蛹虫草Hz1菌种子实体其他成分含量测定结果为蛋白质27.74%､多糖2.50%､腺苷0.05%､虫草素2.61%,｡而天然冬虫夏草的虫草素含量为0.01%,远远低于本研究培养的蛹虫草Hz1菌种子实体的虫草素含量｡3 小结与讨论试验对蛹虫草生产工艺流程中影响产品质量和产量的主要问题进行了探讨,初步建立了蛹虫草高产优质工业化生产技术流程｡结果显示,蛹虫草菌种Hz1孢子复壮的菌株培养的子实体干重高于菌种B1､Bz1､H1孢子复壮的菌株培养的子实体干重,液体培养基最优组合为葡萄糖20 g/L､蛋白胨8 g/L､KH2PO4 1.0 g/L､MgSO4 500 mg/L｡生产富硒蛹虫草培养基的最优主料为富硒大米45 g､培养液55 mL;在菌种培养环境为最适温度22 ℃､空气相对湿度70%时,蛹虫草菌种Hz1的子实体平均干重最大｡综合而言,子实体培养最优条件为日间温度22 ℃､夜间温度15 ℃､空气相对湿度70%､光照度200 lx,并结合先用日光灯照射､待子实体长至1~2 cm时使用蓝紫灯照射处理的产量最高｡检测结果显示,用本研究技术生产出来的蛹虫草子实体的有效营养成分含量分别为硒52.03 mg/kg､蛋白质27.74%､氨基酸26.92%､腺苷0.05%､多糖2.50%､虫草素2.61%｡这些参数对优化蛹虫草生产工艺和建立产品质量检测体系具有重要参考价值｡而且主要有效成分和营养成分要高于天然冬虫夏草,尤其是所含的虫草素具有工业提取价值[28],证明应用本研究技术生产出来的蛹虫草产量高､质量好,具有推广应用价值｡但在蛹虫草的腺苷､赖氨酸､色氨酸､精氨酸､组氨酸以及Ni含量上有待进一步研究提高｡参考文献:[1] 韦会平,肖波,胡开治.蛹虫草药用价值考[J].中药材,2004,27(3):215-217.[2] 柴建萍,白兴荣,谢道燕.蛹虫草主要有效成分及其药理功效[J].云南农业科学,2003(4):22-23.[3] 谢雪钦.蛹虫草液体产孢条件优化及其侵染过程的初步研究[D].福州:福建农林大学,2007.[4] 李颜,史薇娜,唐庆九,等.比色法测定冬虫夏草和蛹虫草中多糖和甘露醇的含量[J].食用菌学报,2007,14(3):53-57.[5] 黄兰芳,郭方遒,梁逸曾,等.HPLC-ESI-MS测定冬虫夏草和蚕蛹虫草中腺苷和虫草素含量[J].中国中药杂志,2004,29(8):762-764.[6] 姚国洪,刘喜屏,刘广红,等.蛹虫草菌丝生长研究[J].微生物学杂志,2003,23(1):61-62.[7] 张显科,王玉柱,刘文霞.蛹虫草与冬虫夏草化学成分比较[J].辽宁大学学报(自然科学版),1996,23(4):79-82.[8] 宋金俤,刘超.蛹虫草产业化栽培瓶颈及其对策[J].中国食用菌,2009,28(1):62-64.[9] 张弛.富硒虫草中硒的赋存形态及分布特点[J].食品科学,2009, 30(23):193-195.[10] 贲松彬,黄子琪,王莹,等.蛹虫草富硒条件优化及硒对其中主要活性成分的影响[J].食品科学,2009,30(17):266-269.[11] 郑婷婷,李多伟,王英娟,等.蛹虫草液体培养条件优化及有效成分含量分析[J].菌物研究,2004,2(4):22.[12] 朱宏图.人工培育蛹虫草的研究[J].中药通报,1987,12(12): 21.[13] 柴建萍,白兴荣,谢道燕.蛹虫草菌深层发酵培养基正交实验[J].云南农业科技,2004(3):26.[14] 朱雅红,桂仲争.蛹虫草液体菌种通气发酵培养及其营养成分分析[J].食品与生物技术学报,2009,28(5):699-704.[15] 张显科,刘文霞.不同培养料栽培蛹虫草试验研究[J].中国食用菌,1997,16(2):21.[16] 冉翠香,王莉,许智宏.人工培育蛹虫草子实体原基的诱发形成[J].中国食用菌,2001,20(4):9-10.[17] 汪宇,于荣敏,佟志清,等.蛹虫草液体培养条件的优化及生长动力学考察[J].中国野生植物资源,2003,22(4):56.[18] 王志高,温鲁,袁小转,等.加硒对蛹虫草主要活性成分含量的影响[J]. 安徽农业科学,2007,35(29):9293-9294.[19] 李信,许雷,裴鑫德.蛹虫草(Cordyceps militaris)菌丝体液体培养基的优化和发酵条件的研究[J]. 核农学报,1998,12(1):35-40.[20] 潘新法. 蛹虫草子实体的人工培育及超氧化物歧化酶的活性测定[J]. 食用菌学报,1995,2(3):25-28.[21] 车振明,王燕,周黎黎.人工蛹虫草子实体多糖分离最佳工艺研究[J].食品研究与开发,2004,25(5):78-79.[22] 刘建华,孙月,卜宁.人工培育蛹虫草与野生蛹虫草氨基酸成分测试分析[J].中国食用菌,1999,18(3):18-19[23] 孙悦迎,张旭东.冬虫夏草与蛹虫草特性分析[J].中医药学报,2002,30(2):43-44.[24] 于田田,钱和.生物富硒对蛹虫草菌丝体化学成分的影响[J]. 食品科技,2006(1):133-135.[25] 铁梅,杨淑琴,娄虹,等.硒对蛹虫草生长发育的影响[J]. 辽宁大学学报(自然科学版),2005,32(1):25-27.[26] 周枝凤,梁逸曾,胡芸,等.均匀设计在蚕蛹虫草和冬虫夏草活性成分分析中的应用[J].分析测试学报,2004,23(2):35-37.[27] 何淑丽,赵凤阁.十年来蛹草的成分及药理研究概述[J].长春中医学院学报,1997,13(6):64-65.[28] 王英娟,李多伟,王义潮,等.蛹虫草中虫草素､虫草多糖综合提取工艺研究[J]. 西北植物学报,2005,25(9):1863-1867.。
