第3章高效液相色谱分析
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第17章HPLC法17.1 内容提要17.1.1 基本概念高效液相色谱法──在经典液相色谱法的基础上,引入了气相色谱(GC)的理论,在技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器,使之发展成为高分离速率、高分离效率、高检测灵敏度的高效液相色谱法,易称为现代液相色谱法。
高效液相色谱仪──采用了高压输液泵、高效固定相和高灵敏度检测器等装置的液相色谱仪称为高效液相色谱仪。
梯度洗脱──用两种(或多种)不同极性的溶剂,在分离过程中按一定程序连续的改变流动相的浓度、配比和极性,使样品中各组分能在最佳的分配比下出峰的操作技术。
也称为梯度淋洗。
低压梯度──又称外梯度,特点是先混合后加压。
它是采用在常压下预先按一定的程序将溶剂混合后再用泵输入色谱柱系统,易称为泵前混合。
高压梯度──又称内梯度,特点是先加压后混合。
它有两台高压输液泵、梯度程序器(或计算机及接口板控制)、混合器等部件组成。
两台泵分别将两种极性不同的溶剂输入混合器,经充分混合后进入色谱柱系统,是一种泵后高压混合形式。
柱外效应──由色谱柱以外的因素引起的色谱峰形扩展的效应。
柱外因素常指从进样口到检测器之间,除色谱柱以外的所有死时间,如进样器、连接管、检测器等的死体积,都会导致色谱峰形加宽、柱效下降。
液固吸附色谱法──以固体吸附剂为固定相,吸附剂表面的活性中心具有吸附能力,样品分子被流动相带入柱内,它将与流动相溶剂分子在吸附剂表面发生竞争吸附性。
K值大的强极性组分易被吸附,K值小的弱极性组分难被吸附,样品组分因此被分离。
液液分配色谱法──根据物质在两种互不相溶(或部分互溶)的液体中溶解度的不同,有不同的分配,从而实现分离的方法。
分配系数较大的组分保留值也较大。
正相分配色谱法──流动相极性低而固定相极性高的称为正相分配色谱法。
反相分配色谱法──流动相极性高而固定相极性低的称为反相分配色谱法。
化学键合相──利用化学反应将有机分子键合到载体表面上,形成均一、牢固的单分子薄层而形成的各种性能的固定相。
仪器分析考试题及答案第一部分:仪器分析练题及答案第2章气相色谱分析一.选择题1.在气相色谱分析中,用于定性分析的参数是()A保留值B峰面积C分离度D半峰宽2.在气相色谱分析中,用于定量分析的参数是()A保留时间B保留体积C半峰宽D峰面积3.使用热导池检测器时,应选用下列哪种气体作载气,其效果最好?()A H2B HeC ArD N24.热导池检测器是一种()A浓度型检测器B质量型检测器C只对含碳、氢的有机化合物有响应的检测器D只对含硫、磷化合物有响应的检测器5.使用氢火焰离子化检测器,选用下列哪种气体作载气最合适?()A H2B HeC ArD N26、色谱法分离混合物的可能性决定于试样混合物在固定相中()的差别。
A.沸点差,B.温度差,C.吸光度,D.分配系数。
7、选择固定液时,一般根据()原则。
A.沸点高低,B.熔点高低,C.相似相溶,D.化学稳定性。
8、相对保留值是指某组分2与某组分1的()。
A.调整保留值之比,B.死时间之比,C.保留时间之比,D.保留体积之比。
9、气相色谱定量阐发时()请求进样量特别正确。
A.内标法;B.外标法;C.面积归一法。
10、理论塔板数反映了()。
A.分离度;B.分配系数;C.保留值;D.柱的效能。
11、下列气相色谱仪的检测器中,属于质量型检测器的是()A.热导池和氢焰离子化检测器;B.火焰光度和氢焰离子化检测器;C.热导池和电子捕获检测器;D.火焰光度和电子捕获检测器。
12、在气-液色谱中,为了改动色谱柱的选择性,主要可进行以下哪种(些)操纵?()A.改动固定相的品种B.改动载气的品种和流速C.改变色谱柱的柱温D.(A)、(B)和(C)13、进行色谱分析时,进样时间过长会导致半峰宽()。
A.没有变化,B.变宽,C.变窄,D.不成线性14、在气液色谱中,色谱柱的使用上限温度取决于()A.样品中沸点最高组分的沸点,B.样品中各组分沸点的平均值。
C.固定液的沸点。
D.固定液的最高利用温度15、分配系数与下列哪些因素有关()A.与温度有关;B.与柱压有关;C.与气、液相体积有关;D.与组分、固定液的热力学性质有关。
第3章高效液相色谱法一、判断题1、高效液相色谱适用于大分子,热不稳定及生物试样的分析。
()2、高效液相色谱中通常采用调节分离温度和流动相流速来改善分离效果。
( )3、高效液相色谱中通用型检测器是荧光检测器。
( )4、液相色谱中常采用改变流动相的种类和配比的方法来提高柱的选择性。
( )5、在液相色谱中,速率方程中的涡流扩散项可以忽略不计。
( )二、选择题1、液相色谱的H-u曲线( )A、与气相色谱的H-u曲线一样,存在着H minB、H随流动相的流速增加而逐渐增加C、H随流动相的流速增加而下降D、H受u影响很小2、提高液相色谱分离效率的主要途径或措施是( )A、增加柱长,保持低温B、采用相对分子量较大的流动相,减少分子扩散C、采用相对低流速,有利于两相间的质传递D、采用细粒度键合固定相3、高效液相色谱仪与气相色谱仪比较,前者没有A、贮液器B、高压泵C、程序升温D、梯度淋洗装置4、在液相色谱中,最普遍使用的检测器是A、紫外光度检测器:B、荧光检测器C、差示折光检测器D、电导检测器5、有下列四种液相色谱类型,样品峰全部在溶剂峰之前流出的是( )A、液-液色谱法B、液-固色谱法C、离子排斥色谱法D、空间排阻色谱法6、液相色谱中,影响色谱峰展宽的主要因素是( )A、纵向扩散B、涡流扩散C、传质阻力D、柱前展宽7、对于能迅速溶于水的试样,宜选用的液相色谱是A、正相液液色谱B、反相液液色谱C、液固吸附色谱D、空间排阻色谱8、对溶于水或非水溶剂,分子大小有差别的试样,宜选用的液相色谱是A、液液色谱B、液固色谱C、空间排阻色谱D、离子交换色谱9、对于能溶于酸性或碱性水溶液的试样,宜选用的液相色谱是A、液液色谱B、液固色谱C、空间排阻色谱D、离子交换色谱10、在气相色谱法中可以忽略,而在高效液相色谱中则必须加以考虑的速率方程中的项是A、流动相传质项B、涡流扩散相C、固定相传质项D、分子扩散相。
第二章气相色谱法1.简要说明气相色谱分析的基本原理借在两相间分配原理而使混合物中各组分分离。
气相色谱就是根据组分与固定相与流动相的亲和力不同而实现分离。
组分在固定相与流动相之间不断进行溶解、挥发(气液色谱),或吸附、解吸过程而相互分离,然后进入检测器进行检测。
2.气相色谱仪的基本设备包括哪几部分?各有什么作用?气路系统.进样系统、分离系统、温控系统以及检测和记录系统.气相色谱仪具有一个让载气连续运行管路密闭的气路系统.进样系统包括进样装置和气化室.其作用是将液体或固体试样,在进入色谱柱前瞬间气化,然后快速定量地转入到色谱柱中.19.有哪些常用的色谱定量方法?试比较它们的优缺点和使用范围?(1).外标法:外标法是色谱定量分析中较简易的方法.该法是将欲测组份的纯物质配制成不同浓度的标准溶液。
使浓度与待测组份相近。
然后取固定量的上述溶液进行色谱分析.得到标准样品的对应色谱图,以峰高或峰面积为纵坐标,以浓度为横坐标作峰高或峰面积对浓度的标准曲线.该曲线为一通过原点的直线.分析样品时,在上述完全相同的色谱条件下,取制作标准曲线时同样量的试样分析、测得该试样的响应讯号后.由标谁曲线即可查出其百分含量.此法的优点是操作简单,因而适用于工厂控制分析和自动分析;但结果的准确度取决于进样量的重现性和操作条件的稳定性.(2).内标法:当只需测定试样中某几个组份.或试样中所有组份不可能全部出峰时,可采用内标法.具体做法是:准确称取样品,加入一定量某种纯物质作为内标物,然后进行色谱分析.根据被测物和内标物在色谱图上相应的峰面积(或峰高)]和相对校正因子.求出某组分的含量.内标法是通过测量内标物与欲测组份的峰面积的相对值来进行计算的,因而可以在—定程度上消除操作条件等的变化所引起的误差.内标法的要求是:内标物必须是待测试样中不存在的;内标峰应与试样峰分开,并尽量接近欲分析的组份.内标法的缺点是在试样中增加了一个内标物,常常会对分离造成一定的困难。
高效液相色谱测定法
高效液相色谱测定法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是一种常用的分离和定量技术,可
以用于分离和测定复杂的混合物。
它基于物质在流动相(溶剂)和固定相(色谱柱上的填料)之间的相互作用的差异,利用流动相的流动将待测样品分离成不同的组分。
通过分析组分的保留时间和色谱峰的峰面积或峰高,可以定量不同组分的含量或浓度。
高效液相色谱测定法具有分离效率高、分析速度快、灵敏度高、重复性好等优点,因此在许多分析领域得到广泛应用。
它可以应用于生物医药、环境监测、食品安全等多个领域,用于分析和监测有机化合物、无机化合物、药物、天然产物、食品成分等。
高效液相色谱测定法的基本步骤包括:样品预处理、制备流动相、样品进样、流动相流动、色谱柱分离、检测器检测、结果处理等。
根据样品的性质和分析要求,可以选择不同的检测器,如紫外检测器(UV)、荧光检测器、质谱检测器等。
需要注意的是,高效液相色谱测定法在操作过程中需要注意样品制备和仪器条件的优化,以提高分离效果和分析结果的准确性。
此外,也需要注意流动相成分的选择、色谱柱的使用寿命等因素对分离效果的影响。
第3章高效液相色谱法
一、判断题(对的打√, 错的打×)
1、高效液相色谱适用于大分子,热不稳定及生物试样的分析。
(√)
2、液相色谱指的是流动相是液体,固定相也是液体的色谱。
( ×)
3、高效液相色谱中通用型检测器是荧光检测器。
( ×)
4、液相色谱中常采用改变流动相的种类和配比的方法来提高柱的选择性。
( √)
5、在液相色谱中,速率方程中的涡流扩散项可以忽略不计。
(×)
二、选择题
1、液相色谱适宜的分析对象是(B)
A、低沸点小分子有机化合物
B、高沸点大分子有机化合物
C、所有有机化合物
D、所有化合物
2、高效液相色谱实现高效、快速分离与分析的重要原因是( D )
A、采用了高压输液泵和微粒固定相
B、采用了梯度淋洗和恒温系统
C、采用了微粒固定相和和恒温系统
D、采用了高压输液泵和梯度淋洗
3、高压、高效、高速是现代液相色谱的特点,采用高压主要是由于(C)
A、可加快流速,缩短分析时间
B、高压可使分离效率显著提高
C、采用了细粒度固定相所致
D、采用了填充毛细管柱
4、液相色谱的H-u曲线( B)
A、与气相色谱的H-u曲线一样,存在着H min
B、H随流动相的流速增加而逐渐增加
C、H随流动相的流速增加而下降
D、H受u影响很小
5、在液相色谱分离过程中,范氏方程的哪一项对柱效能的影响可以忽略不计(C)
A、涡流扩散项
B、流动相中的传质阻力
C、分子扩散项
D、固定相传质阻力项
6、在液相色谱中,在以下条件中,提高柱效最有效的途径是(A)
A、减小填料粒度
B、适当升高柱温
C、降低流动相的流速
D、增加柱长
7、提高液相色谱分离效率的主要途径或措施是( D )
A、增加柱长,保持低温
B、采用相对分子量较大的流动相,减少分子扩散
C、采用相对低流速,有利于两相间的质传递
D、采用细粒度键合固定相
8、高效液相色谱仪与气相色谱仪比较,前者没有( C )
A、贮液器
B、高压泵
C、程序升温
D、梯度淋洗装置
9、高效液相色谱中的下列检测器中,属于通用型检测器的是( A )
A、紫外光度检测器
B、荧光检测器
C、差示折光检测器
D、电导检测器
10、对于反相色谱,流动相的极性与固定相的极性之间关系是(A)
A、流动相极性大
B、流动相极性小
C、两者相同
D、以上都不是
11、高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了( D )
A、恒温箱
B、进样装置
C、程序升温
D、梯度淋洗装置
12、对各种氨基酸的分析,最有效和方法是( B )
A、气相色谱
B、高效液相色谱
C、气固色谱
D、紫外吸收光谱
13、如果样品的相对分子量在200~2000之间,一般可考虑的色谱分离方法是(C)
A、气相色谱法
B、空间排阻色谱法
C、液相色谱法
D、以上都不是
14、在高效液相色谱分析中,提高色谱柱柱效率的最有效途径是(A)
A、减小载体颗粒
B、适当升高柱温
C、降低流动相的速度
D、降低流动相的粘度
15、对于正相色谱,流动相的极性与固定相的极性之间关系是(B)
A、流动相极性大
B、流动相极性小
C、两者相同
D、以上都不是
16、如果试样中各组分无法全部出峰或只要测定试样中某几个组分,那么应采用下列哪种方法为宜?(C)
A、归一化法
B、外标法
C、内标法
D、标准工作曲线法
三、简答题
1、列表比较气相色谱和高效液相色谱的特点。
第三章高效液相色谱分析参考答案
一、判断题
1、√
2、×
3、×
4、√
5、×
二、选择题
1、B
2、D
3、C
4、B
5、C
6、A
7、D
8、C
9、A 10、A 11、D12、B13、C14、A15、B16、C
三、简答题
略。