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血清葡萄糖的测定(GOD-POD法)ppt课件

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葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)

葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)

试剂(C): Glu 标准(5mmol/L)
1ml
2× 1ml
பைடு நூலகம்-20℃
试剂(D): ddH2O
1ml
2ml
RT
使用说明书
1份
操作步骤(仅供参考)：
1、 样本处理： ①血清、血浆、脑脊液 样本：从待测样本 中分理出的血清 或血浆丌应有溶 血，直接检测， 如超过线性范围(25mmol/L)，用生理盐水稀释后检测。 ②细胞样本： a、取适量的细胞(一般推荐>106 以上)，离心，弃上清，留取沉淀。 b、用 PBS 或生理盐水清洗 1~2 次，离心，弃上清，留取沉淀。 c、加入 200~300μl 的 PBS 或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率 300W，每 次 3~5s，间隔 30s，重复 3~5 次。亦可手动匀浆，制备好的匀浆液丌可离心，待用。 d、③组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或 PBS(ml)=1：9 的比例， 加入生理盐水或 PBS，冰浴条件下手动或机械匀浆。离心，取上清待用。
北京雷根生物技术有限公司
2、 普通分光光度计(2ml 比色杯)Glu 测定操作: ①按下表依次加入试剂：
ddH2O(μl) Glu 标准(5mmol/L)(μl) 待测样本(μl) GOD-POD 工作液(ml)
空白管 20
2.0
标准管 20 2.0
待测管
20 2.0
注意事项：
1、 上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。 2、 本法可直接用于检测脑脊液中的葡萄糖含量，但丌能直接检测尿液中的葡萄糖含量，
北京雷根生物技术有限公司
因为未经处理的尿液中含有还原性物质，影响过氧化物酶反应。 3、 待测样本如丌能及时测定，应置于 2~8℃保存，3 天内稳定。 4、 本法线性范围可达 25mmol/L，如果样本葡萄糖浓度过高，结果可能呈假性降低。应

血清葡萄糖浓度的测定

血清葡萄糖浓度的测定

尿糖(-)
正常
空腹血糖 (mmol/L)
≤6.1
服糖2h后血 糖(mmol/L)
＜7.8
糖尿病性糖耐量
空腹血糖损害 糖耐量减退
≥7.0
6.1-7.0 ＜7.0
＞11.1
＜7.8 7.8-11.1
mmol/L
实验器材和试剂
• 实验器材
试管、微量可调式移液器、721E分光光度计、水浴锅
• 试剂
1. 血清 2. 试剂1(R1): 磷酸盐缓冲液、4-氨基安替比林、苯酚 3. 试剂2(R2): GOD、POD 4. 工作试剂：试剂1和试剂2按照10:1混合 5. 葡萄糖标准溶液(5.55 mmol/L)
2. 葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)
葡萄糖氧化酶GOD (glucose oxidase) 将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧 化氢。过氧化物酶POD (peroxidase)将过氧化氢分解为水和氧，并将无色的4氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物(Trinder反应)，其红色深 浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比。
妊娠糖尿病GDM (Gestational diabetes mellitus)
一般在妊娠后期(孕期的第28周左右)发生，占妊娠妇女的2-3%。
发病与妊娠期进食过多以及胎盘分泌的激素抵抗胰岛素的作用有 关。大部分病人分娩后可恢复正常。
口服葡萄糖耐量试验OGTT (Oral glucose tolerance test)
1. 己糖激酶法 (Hexokinase, HK)
葡萄糖 + ATห้องสมุดไป่ตู้ 葡萄糖-6-磷酸 + NADP+
HK
葡萄糖-6-磷酸 + ADP 6-磷酸葡萄糖酸内酯 + NADPH

用GOD法测定血清中葡萄糖浓PPT.

用GOD法测定血清中葡萄糖浓PPT.
③ 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白 血滤液，然后再进行测定。
临床意义：
生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张
病理性高血糖：
①糖尿病
②内分泌腺功能障碍
③颅内压增高
④脱水引起高血糖
生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动
病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源性，
肝源性和胰岛素瘤等。
❖调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮 质激素和肾上腺素。
酶酚混合试剂 3.00 谓的酒香不怕巷子深的说法，在当今的市场经济条件下遇到了严峻的挑战。
4、 游泳前应做好充分的准备活动，使全身各个器官、系统得到活动。 3.4.4通过证明人核实信息
3.00
3.00
充分混匀，37℃ 水浴中保温20min；
冷却至室温后，505nm处比色
比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度值。
二是我国的汽车销售企业很少关注客户回头率这个问题。
(ml)
(ml)
(ml)
小提示97：工资要公平，有竞争力。
血清样品 3、教师总结
（3）大声呼救，请求别人救助。
–
0.03
–
“我们已将工作提供给一个技能非常优秀的应聘者，你是二人选。”
葡萄糖标准液 0.03 – – 1、夏天，天气炎热，各种病菌繁殖最快，这时候人如果吃了被细菌污染的食物，就会得痢疾、霍乱、伤寒等病。这种中毒叫细菌性食
（2）计算
依据朗伯-比尔定律： A=KLC
血清葡萄糖= 测定管吸光度 × 标准液浓度 （mmol/L） 标准管吸光度 参考值： 空腹血清葡萄糖浓度:3.89～6.11mmol／L
注意事项：
① 本法用血量甚微，操作中应直接加标本至试剂 中，再吸试剂反复冲洗试管。

血清葡萄糖的测定(GOD-POD法)ppt课件

血清葡萄糖的测定(GOD-POD法)ppt课件

620Βιβλιοθήκη 0/4/7实验操作试剂 血清/μL 葡萄糖标准液/μL 蒸馏水/μL 酶酚混合试剂/μL
空白管 -
0.02 3.00
标准管 -
0.02 -
3.00
测定管 0.02 3.00
混匀，置于37°C水浴中，保温25min，在波长510nm处比色，以空白管 调零，读取标准管和测定管的吸光度。
血清葡萄糖的含量=
血清葡萄糖是用以过氧化物酶的偶联酶反应定量法测定的。 葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，同时释放过氧 化氢。过氧化物酶（POD）催化过氧化氢氧化色素原（如4-氨基安替比 林和苯酚），并使色素原氧化成色素，即Trinder反应。红色醌类化合物 的生成量与葡萄糖的含量成正比。
葡萄糖
4
GOD
5
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实验试剂
12mmol苯甲酸钠溶液 称取苯甲酸钠1.6g，于800ml蒸馏水中加温助溶，冷却后加蒸馏水定容 至1L。 葡萄糖标准储存液（100mmol/L） 称取已干燥至恒重的无水葡萄糖1.082g，溶入约70ml 12mmol/L苯甲酸 钠溶液中定容至100ml。2h以后方可使用。 葡萄糖标准工作液（5mmol/L） 吸取葡萄糖标准储存液5.00ml，置入100ml容量瓶中，用12mmol/L，苯 甲酸钠溶液稀释至刻度，混匀。
血清葡萄糖的测定（ GOD-POD法）
血清测定是临床生物化学检验中的常规检测项目之一。
实验分为以下部分
? 实验目的 ? 实验原理 ? 实验试剂 ? 实验操作 ? 数据分析 ? 注意事项 ? 临床意义
2
2020/4/7
实验目的
掌握酶法血清葡萄糖浓度的原理 掌握血糖变化的临床意义
3

实验5血液葡萄糖的测定 ppt课件

实验5血液葡萄糖的测定 ppt课件

葡萄糖＋Cu2+
葡萄糖酸＋Cu2O 磷钼酸
2020/12/27
钼蓝 Cu2+
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操作步骤
• （1）用钨酸法制备1：10全血无蛋白滤液
水 全血 2/3N硫酸 10%钨酸钠
1.4 ml
0.2 ml 0.2 ml（随加随摇） 0.2 ml（随加随摇）
按顺序加入离心管，混匀。静置5min,2500rpm 离心10min 。
6）关机：实验完毕，，将比色皿取出洗净，放在滤纸上凉干。 关闭仪器。
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注意事项
1）为了防止光电管疲劳。不测定时必须将比色皿暗箱盖 打开，使光路切断，以延长光电管使用寿命。 2）比色皿的使用方法： ①拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要 碰比色皿的透光面，以免沾污。 ②测定有色溶液吸光度时，一定要用有色溶液洗比色皿 内壁几次，以免改变有色溶液的浓度。另外，在测定一 系列溶液的吸光度时，通常都按由稀到浓的顺序测定， 以减小测量误差。
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• （2）取3支血糖管操作
空白管 低浓度标准管 测定管
无蛋白血滤液
－
－
1.0
蒸馏水
2.0
1.0
1.0
标准葡萄糖应
－
1.0
－
用液
碱性铜试剂
2.0
2.0
2.0
混匀，沸水浴中煮8分钟，用流动自来水冷却3分钟（勿摇动血糖管）
磷钼酸试剂
2.0
2.0
2.0
混匀后放置2分钟
1:4磷钼酸溶
（3）可作为定性鉴定的参数；
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光度法的计算
(1) 计算法（标准品法测定未知样品含量）

葡萄糖耐量的试验ppt课件

葡萄糖耐量的试验ppt课件

血清葡萄糖浓度测定方法 1、GOD-POD法：以过氧化物酶作指示酶的
偶联酶反应定量法。葡萄糖氧化酶（GOD） 利用氧将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，同时释放 过氧化氢。过氧化物酶（POD）催化过氧化 氢氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚）， 并使色素原氧化成色素，即Trinder反应。红 色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
试验，用于检查人体胰岛素B细胞功能和机体 对糖的调节能力。正常人进食后血糖都会暂时 性升高，30~60分钟后可升到最高峰，但一般 不超过8.9mmol/L，2小时左右又会回到空腹 水平。这种现象称为耐糖现象。若内分泌失调 或神经系统功能紊乱，则调节功能失常，食入 大量糖后血糖浓度可急剧上升，短时间不能恢 复到原值，称为耐糖失常现象。所以观察耐糖 现象可以了解调节血糖的各种机能是否健全。
测定血清中血糖浓度方法： 取三支试管，按表操作
项目 血清 测定管
（0.1.2.3.4）
标准管 —
空白管 —
100
葡萄糖标准应用液
蒸馏水 邻甲苯胺试剂

—
— 5.00
100
— 5.00
—
100 5.00
混匀，置沸水浴中煮沸15分钟，取出冷却后用分 光光度计在波长630nm处，以空白调零，读取标 准管和测定管的吸光度。
血糖测定方法归纳

血糖的测定方法按测定原理可分为无机化学方法、 有机化学方法和生物化学方法三类。此外，还有固 相酶法、电化学法及质谱法等。常用的是分光光度 法和酶学方法。分光光度法中常见的是邻甲苯胺法， 是利用葡萄糖在加热的有机酸溶液中与某些芳香族 胺类，可生成有色衍生物这一原理建立的。酶学方 法有葡萄糖氧化酶法、己糖激酶法和葡萄糖脱氢酶 法等。(己糖激酶法)原理是用已糖激酶催化葡萄糖同 ATP反应，产生葡萄糖－6－磷酸及ADP，葡萄糖－ 6－磷酸在葡萄糖－6－磷酸脱氧酶存在时，同 NADP＋作用．产生NADPH及6—磷酸葡萄糖酸内 酯，NADPH在340nm有吸收峰。

血清葡萄糖(GLU)测定—GOD-POD(精)

血清葡萄糖(GLU)测定—GOD-POD(精)

正常参考范围:3.9~6.1mmol/L
注意事项
-葡萄糖有ɑ型和ß型之分，在溶液中可互相转 变。新配制的葡萄糖标准液须放置2小时以上 （最好过夜），使两者在溶液中达到平衡。
COD-POD 法初始反应特异性高，而指示反 应特异性较差，干扰往往发生在指示反应。血 液中的一些还原性物质，如维生素C、谷胱甘 肽及左旋多巴可与色原性氧受体竞争H2O2， 使结果出现偏差。
临床意义
血糖浓度受神经系统和激素的调节而保持相对稳定，当这些调节失去原有的 相对平衡时，则出现高血糖和低血糖。
高血糖： 1.生理性高血糖：见于饭后1~2h；注射葡萄糖后；情绪紧张时分泌肾上腺
素增加或注射肾上腺素后等。 2.病理性高血糖： ①内分泌功能障碍：如糖尿病等 ②颅内压增加刺激血糖中枢而使血糖升高，如颅外伤，颅内出血等。 ③严重脱水：引起血液浓缩而导致血糖升高，如呕吐、腹泻、高热等。 血糖降低.： 1.生理性的低血糖：有饥饿、剧烈运动等。 2.病理性的低血糖： 胰岛素分泌过多：如胰岛β细胞增生或肿瘤。 对抗胰岛素的激素分泌不足：如垂体前叶、肾上腺皮质和甲状腺功能减退等。 血糖来源减少：如长期营养不良，严重的肝病等。
血清葡萄糖（ＧＬＵ）测定—GOD-POD法
实验目的：
⒈掌握GOD-POD法测定血糖的原理及注意事 项。
⒉熟练进行实验操作并能够正确使用加样枪 ⒊了解血糖测定的主要临床意义。
实验原理：
ＧＯＤ催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过 氧化氢，过氧化氢被偶联的ＰＯＤ催化释放出 初生态氧，后者将色原性氧受体４-氨基安替 比林偶联的酚氧化，并与4-氨基安替比林结合 生成红色醌类化合物。

操作步骤：
1、配制酶工作液：
2、按下表操作：

实验一 血清葡萄糖的测定(精美课件)

实验一 血清葡萄糖的测定(精美课件)
3.当静脉空腹血糖＜7.0mmol／L，并且OGTT 2小时血糖介于7.8～11.1mmol／L之间， 说明人体对葡萄糖的调节能力轻度下降，可以诊断糖耐量减低。
4.当静脉空腹血糖介于6.1～7.0mmol／L之间，且OGTT 2小时血糖≤7.8mmol／L，说明 人体对进食葡萄糖后的血糖调节能力尚好，但对空腹血糖调节能力轻度减退，可以诊断空腹
希夫氏碱 分子重排 蓝绿色化合物
（三）酶法
1.己糖激酶法（HK）
2.葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法）
3.实验原理
葡萄糖氧化酶法（GOD-POD法） 葡萄糖氧化酶（GOD）将葡萄糖氧化为葡萄糖酸酶，同时释放过氧化氢。
葡萄糖+O2+H2O
GOD
葡萄糖酸+2H2O2
过氧化氢酶（POD）催化过氧化氢氧化色素原（如4-氨基安替比林和 苯酚），并使色素原氧化成红色醌类化合物，即Trinder反应。 2H2O2+4-氨基安替比林+苯酚 POD 红色醌类化合物
②如空腹血糖大于6.1mmol/L，低于7.0mmol/L，可根据病情需要做葡
萄糖耐量试验或餐后2h血糖测定，以进一步了解病人糖耐量状况，明
确诊断。
案例分析
2.某患者女，55岁，身高158cm，体重68kg，用血糖仪数次自行测空 腹末稍全血血糖大于6.8mmol/L。近日感易疲乏，口渴，夜尿增多，并 出现胸闷、气短、视物不清、肢体麻木等症状。本次检查标本符合空腹 采血要求，测得其空腹血糖为。请问该患者是否可诊断为糖尿病？还需 做哪些检查？
4.实验器材和试剂
（二）试剂 1. 苯甲酸钠溶液（12mmol/L） 2. 酶酚混合试剂 酶试剂+酚溶液 1:1 3. 葡萄糖标准工作液（5mmol/L） 4、葡萄糖测定试剂盒：酶酚混合试剂（已配制）、葡萄糖标准液应用 液、蒸馏水。
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生理性低血糖： 见于饥饿和剧烈运动时
病理性低血糖： 特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性，肝源性和胰岛素瘤 等。
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2020/4/7
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POD 红色醌类化合物
2020/4/7
实验试剂
器材
5ml移液管，50或100ul微量可调式移液管,721E型分光光度计，1比色皿， 37度恒温水 浴锅。
试剂
0.1磷酸盐缓冲液（Ph=7.0） 称取无水磷酸二氢钾5.3g，溶于蒸馏水800ml中，调节pH=7.0,定容至1L 酶试剂 取过氧化物酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮化钠100mg，溶入磷酸 盐缓冲液80ml中，调节pH值至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置于4度 保存，可稳定存在3个月。 酚溶液 称取重蒸馏酚100mg，溶入蒸馏水100ml中，用棕色瓶储存。 酶-酚混合试剂 将酶试剂及酚溶液等量混合，4度可放一个月。
血清葡萄糖是用以过氧化物酶的偶联酶反应定量法测定的。 葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，同时释放过氧 化氢。过氧化物酶（POD）催化过氧化氢氧化色素原（如4-氨基安替比 林和苯酚），并使色素原氧化成色素，即Trinder反应。红色醌类化合物 的生成量与葡萄糖的含量成正比。
葡萄糖
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GOD
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实验试剂
12mmol苯甲酸钠溶液 称取苯甲酸钠1.6g，于800ml蒸馏水中加温助溶，冷却后加蒸馏水定容 至1L。 葡萄糖标准储存液（100mmol/L） 称取已干燥至恒重的无水葡萄糖1.082g，溶入约70ml 12mmol/L苯甲酸 钠溶液中定容至100ml。2h以后方可使用。 葡萄糖标准工作液（5mmol/L） 吸取葡萄糖标准储存液5.00ml，置入100ml容量瓶中，用12mmol/L，苯 甲酸钠溶液稀释至刻度，混匀。
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实验操作
试剂 血清/μL 葡萄糖标准液/μL 蒸馏水/μL 酶酚混合试剂/μL
空白管 -
0.02 3.00
标准管 -
0.02 -
3.00
测定管 0.02 3.00
混匀，置于37°C水浴中，保温25min，在波长510nm处比色，以空白管 调零，读取标准管和测定管的吸光度。
血清葡萄糖的含量=
血清葡萄糖的测定（ GOD-POD法）
血清测定是临床生物化学检验中的常规检测项目之一。
实验分为以下部分
? 实验目的 ? 实验原理 ? 实验试剂 ? 实验操作 ? 数据分析 ? 注意事项 ? 临床意义
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实验目的
掌握酶法血清葡萄糖浓度的原理 掌握血糖变化的临床意义
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实验原理
3. 严重黄疸，溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液， 然后在进行测定。
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临床意义
生理性高血糖： 可见于摄入高糖食物后，或紧张情绪肾上腺素分泌增加时。
病理学高血糖： 1.糖尿病:病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患 者。2.内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进， 引起各种对抗胰岛素的激素分泌过多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖，现 已归入特异性糖尿病中。 3.颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤，颅内出血，脑 膜炎等，引起血糖增高。 4.脱水引起的高血糖：如呕吐，腹泻和高热等也可使血 糖轻度增高mol/L
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注意事项
1. 葡萄糖氧化酶法可直接用于测定脑脊液葡萄糖含量，但 不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰 性物质浓度过高，可干扰氧化酶反应，造成结果假性偏 低。
2. 因红细胞的酵解将导致测定结果偏低，建议测定样品以 草酸钾 -氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。