正交设计法优选维药老鼠瓜生物碱提取工艺的研究
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药效学结合正交试验优选蛇归止痒方的提取工艺目的:优化蛇归止痒方提取工艺。
方法:以小鼠止痒药效实验相关结果为指标筛选蛇归止痒方的提取工艺路线(包括醇提、水提等4种工艺),再以收膏率及阿魏酸、芍药苷、苦参碱、氧化苦参碱含量等组成的综合评分为考察指标,采用L9(34)正交试验筛选乙醇体积分数、加醇量倍数、提取时间(次数)等提取工艺的最优参数,并进行工艺验证试验。
结果:筛选的提取工艺路线为全方采用60%乙醇回流提取;最优工艺中各参数具体为提取2次,第1次加8倍乙醇提取2 h,第2次加8倍乙醇提取1 h。
验证试验结果显示,3次试验阿魏酸、芍药苷、苦参碱、氧化苦参碱的平均含量分别为0.71、22.13、1.92、9.88 mg/g (RSD=2.96%、2.03%、2.55%、1.23%,n=3),平均收膏率为19.22%(RSD=0.96%,n=3)。
结论:优选的提取工艺稳定、可行。
ABSTRACT OBJECTIVE:To optimize the extraction technology of Shegui zhiyang formula. METHODS:The extraction technology route (4 technologies such as ethanol extraction,water extraction,etc.)of Shegui zhiyang formula in mice was screened by using related indexes of antipruritic efficacy test. Using comprehensive score of extract yield,the contents of ferulic acid,paeoniflorin,matrine and oxymatrine as indexes,L9(34)orthogonal test was used to screen optimal parameters of extraction technology as volume fraction of ethanol,ethanol fold,extraction time (times). Validation test was conducted. RESULTS:Screened extraction technology route was medicinal materials were reflux extracted with 60% ethanol. The optimal technology included extracting for 2 times,lasting for 2 h with 8-fold ethanol at first time,lasting for 1 h with 8-fold ethanol at second time. The results of validation tests showed that average contents of ferulic acid,paeoniflorin,matrine and oxymatrine were 0.71,22.13,1.92,9.88 mg/g (RSD=2.96%,2.03%,2.55%,1.23%,n=3). Average extract yield was 19.22% (RSD=0.96%,n=3). CONCLUSIONS:The optimized extraction process is stable and feasible.KEYWORDS Shegui zhiyang formula;Extraction technology;Orthogonal test;Optimization;Antipruritic efficacy test;Mice中醫认为中老年性皮肤瘙痒症多为血虚肝旺以致生风生燥、肌肤失养而成[1]。
正交试验优选益母草生物碱的提取工艺研究作者:王婧怡高洁来源:《中国当代医药》2016年第27期[摘要]目的优化益母草生物碱的最佳提取工艺,为其进一步开发提供理论基础。
方法采用L9(34)正交实验法,以生物碱总量为判断标准,考察冷浸提取法中酸浓度、乙醇浓度、浸提时间、浸提次数对生物碱总量的影响。
结果益母草总生物碱的最佳提取工艺为70%乙醇提取2次,每次40 min,0.10 mol/L的盐酸溶解。
结论本研究所建立的最佳提取工艺简便、经济、可行。
[关键词]正交试验;益母草;生物碱;提取工艺[中图分类号] R944.9 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2016)09(c)-0004-03Study on extraction technology of Motherwort alkaloids by orthogonal testWANG Jing-yi1 GAO Jie21.Mesothecium,Luoyang City Institute for Food and Drug Control in Henan Province,Luoyang 471000,China;2.Department of Pharmacy,Zhengzhou Railway Vocational and Technical College,Zhengzhou 450000,China[Abastract]Objective To select the optimum extraction technology of Motherwortalkaloids.Methods L9(34) orthogonal test was used.The total alkaloids was dectected as the criterion to investigate the effect of acid concentration,ethanol concentration,extraction time and extraction times on total alkaloids in cold-dipping extraction.Results The optimum extraction technology was 70% ethanol concentration,extracted two times,40 minutes each time,dissolved with 0.10 mol/L Hydrochloric acid.Conclusion The optimum method is Simple,economical and feasible.[Key words]Orthogonal test;Motherwort;Alkaloids;Extraction technology益母草原名茺蔚,为唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的地上部分,始载于《神农本草经》,具有活血祛瘀、舒肝调经、利尿退肿的功效[1]。
结合现代药理学研究结果,本实验采用正交实验的方法,选用桔梗、橄榄、金银花、余甘子、薄荷为主要原料,采用传统的水提法进行提取,提取液经浓缩、真空干燥至水分小于5%,测定干燥粉中绿原酸、总皂苷的含量,根据含量优选提取工艺。
1 材料与仪器1.1 仪器设备1260 Agilent高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)、752紫外分光光度计(上海佑科仪器仪表有限公司)、AUW120D 电子分析天平(岛津企业管理有限公司)、ZT-50L旋转蒸发器(上海增森仪器科技有限公司)、循环水真空泵(巩义市予华仪器有限公司)、DZF-6010真空干燥箱(巩义市予华仪器有限责任公司)1.2 原料及对照品桔梗(安国市健仁药材有限公司)、橄榄(安国市健仁药材有限公司)、金银花(安国市健仁药材有限公司)、余甘子(安国市健仁药材有限公司)、薄荷(安国市健仁药材有限公司)、绿原酸标准品(中国食品药品检定研究院)、人参皂苷Re标准品(中国食品药品检定研究院)。
2 方法与结果2.1 绿原酸的检测取本品粉末约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇50 min,称定重量,超声处理30 min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量或续滤液5 ml,置25 ml棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即得,为供试品溶液;另取对照品适量,用50%的甲醇制成含绿原酸40 μg/ml的对照品溶液;分别取10 μl的供试品及对照品溶液注入液相色谱测定绿原酸的含量。
2.2 总皂苷的检测取本品粉末约1.0 g,置100 ml容量瓶中,加少量水超声30 min,加水定容至刻度,摇匀,静置,取上层清液作为柱层析液。
柱层析:取层析柱(直径1 ml),填高度为3 cm的大孔树脂,再填充1 cm的中性氧化铝,先用25 ml 70%的乙醇洗柱,弃去洗脱液,用25 ml的水洗柱,弃去洗脱液,加入1.0 ml柱层析液,再用25 ml水洗柱,弃去洗脱液,再用25 ml 70%的乙醇洗脱,收集洗脱液,蒸干。
白英是我国药典中的药材,药用历史悠久,可以用于小儿肝热、感冒和结核发热等的治疗[1],疗效显著,现代研究已证明白英具有一定的抗癌防癌[2]、镇痛抗炎和抗病毒[3]等作用。
白英含有多种化学成分,主要有甾体生物碱类、甾体皂苷类、黄酮类及有机酸类等化合物[3]。
甾体生物碱类化合物是一类广泛存在于植物或少数动物中的含有氮元素的有机化合物,具有诸多药效作用,如平喘镇咳、抗炎消菌[4]、抗病毒、抗癫痫、保护肝脏、抗心律失常[5]、抗肿瘤[6-8]等作用,为人类疾病治疗做出一定的贡献。
我国近年来加大了对白英总生物碱的研究,为生物碱相关药品和保健品的研发投入了大量资金,同时市场对生物碱类药物的需求也不断增加,生物碱的研究方向逐渐成为焦点。
本课题采用正交实验对提取总生物碱工艺进行优化,方法简单高效,对白英总生物碱的提取研究有一定的借鉴意义。
1材料与方法1.1材料和仪器白英,北京市同仁堂有限责任公司;士的宁标准品,德思特,DS0026,HPLC≥98%;pH 4.0缓冲液,自制,试剂均为分析纯。
Cary 100scan 型紫外-可见分光光度计;RE-201型旋转蒸发仪;SZCL-3B 数显智能控温磁力搅拌器;HLD-20002型电子天平。
1.2方法将白英全草洗净、切碎,于烘箱中烘干约2h ,再用粉碎机粉碎,过40目筛,得到白英粗粉,装入烧杯,放入冰箱备用。
1.2.1对照品溶液的制备称取4.5mg 士的宁标准品加入到100mL 容量瓶中,再加入二氯甲烷溶液直至刻度线,摇匀。
1.2.2供试品溶液的制备在25mL 容量瓶中加入0.5g 白英粉末和3mL 氨水。
0.5h 后,再加入25mL 无水乙醇,提取3.5h ,再用循环水式真空泵抽滤,将所得滤液蒸发浓缩,最后用二氯甲烷萃取,取二氯甲烷层,转移到容量瓶中,用二氯甲烷定容。
1.2.3最大吸收波长的测定向分液漏斗里加入2mL 士的宁溶液、2mL 样品溶液,再依次加入2mL 溴甲酚绿溶液、4mL pH 值为4.0的缓冲液、5mL 二氯甲烷,配制完成后静置20min ,分离取出二氯甲烷层溶液。
维药老鼠瓜茎叶生物碱类成分研究
目的:对维药老鼠瓜茎叶中的化学成分进行初步研究,提取分离老鼠瓜茎叶的生物碱类成分,测定老鼠瓜不同部位水苏碱的含量。
方法:结合化学成分系统预试和专项预试方法,初步确定了老鼠瓜茎叶的化学成分;用70%乙醇提取老鼠瓜茎叶的生物碱类成分,结合薄层色谱、柱色谱以及光谱分析分离并鉴定生物碱单体化合物;采用高效液相色谱法(HPLC)测定老鼠瓜地上不同部位水苏碱的含量。
结果:维药老鼠瓜茎叶中含有生物碱、黄酮、糖类、氨基酸、皂苷、挥发油、酚性成分、鞣质、有机酸、甾体类等成分。
并从老鼠瓜茎叶中共分离出3个生物碱类单体化合物,经鉴定确定为水苏碱(Stachydrine,compound-1)、刺山柑碱(Capparispine,compound-2)、Cadabicine 26-O-β-D-glucoside hydrochloride(compound-3)。
采用HPLC法测定维药老鼠瓜地上不同部位水苏碱的含量。
水苏碱在
2.99~20.94μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9997),回归方程为
Y=1.3311X-0.1128,平均回收率为96.1%,RSD=1.53%。
结论:本文基本确定了老鼠瓜茎叶化学成分的种类,有助于进一步研究老鼠瓜药理活性的物质基础,并为其生药学鉴定提供依据。
提供了一条得到活性化合物水苏碱的途径,并对老鼠瓜不同部位的水苏碱含量进行测定,为进一步开展老鼠瓜的质量控制研究奠定了基础,为老鼠瓜的多种药理活性研究开发拓展了新的思路,有利于其药用资源的充分利用,必将产生重要的社会意义和广泛的经济价值。
瓜馥木总生物碱提取、分离、纯化过程的研究的开
题报告
1. 研究背景
瓜馥木是一种常见的草本植物,被广泛用于中药方剂和保健品中,
具有抗炎、抗菌、抗氧化等多种生物活性成分。
其中生物碱是瓜馥木的
主要有效成分之一,因其具有广谱的生物活性而备受关注。
目前,瓜馥
木生物碱的提取、分离和纯化工艺仍存在一定的困难,因此有必要对其
提取、分离、纯化过程进行深入研究,为进一步开发和利用瓜馥木提供
技术支持。
2. 研究内容
2.1 瓜馥木中生物碱的提取方法研究:比较不同提取方法对生物碱提取效果的影响,包括常规提取法、超声波提取法、微波提取法等方法,
选择最适合的提取方法。
2.2 瓜馥木中生物碱的分离方法研究:通过硅胶柱层析、高效液相色谱层析等方法,对瓜馥木中的生物碱进行分离纯化,获得单一的生物碱
成分。
2.3 瓜馥木中生物碱的结构鉴定:通过红外光谱、核磁共振等手段,对纯化后的生物碱进行鉴定,确定其结构和化学性质。
3. 研究意义
通过开展本研究,可以有效提高瓜馥木生物碱的提取、分离和纯化
效率,进一步扩大瓜馥木的应用范围和开发潜力。
同时,结合生物碱的
结构鉴定结果,可以深入理解瓜馥木生物碱的化学性质和生物活性成分,为源头探究和药效分析提供有力的途径和手段。