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动物乳腺生物反应器的原理及进展摘要：动物乳腺生物反应器技术是转基因技术的应用，于上世纪80年代提出，其目的是利用动物乳腺产生目的蛋白。
利用该技术生产的蛋白具有低成本，高活性，易提取纯化的优点。
虽然该技术尚处于发展时期，但具有广阔的应用前景和巨大地商业潜力，是许多公司大力发展的对象。
关键词：动物乳腺生物反应器、原理、进展、优点动物乳腺生物反应器（mammary gland reactor）是指利用动物乳腺特异性启动子调控元件指导外源基因在乳腺中特异性表达，并能从转基因动物乳汁中获取重组蛋白的一种生物反应器。
1生物反应器(bioreactor) 经历了3 个发展阶段：细菌基因工程、细胞基因工程、转基因动物生物反应器。
细菌基因工程产物往往不具备生物活性,必须经过糖基化、羟基化等一系列修饰加工后, 才能成为有效的药物,而细胞基因工程又因为哺乳动物细胞的培养条件要求相当苛刻,成本太高,限制了规模生产。
动物生物反应器具有产品质量高,容易提纯的特点，弥补了其它各类基因表达系统的缺陷。
它是在转基因技术体系基础上发展起来的。
7自从上世纪80年代出现以来，已经取得了许多突破，现己成为生物技术研究的热点。
并向商业化阶段转变，显示了广阔的应用前景。
并且利用转基因动物乳腺生物反应器生产饮用奶，以期望获得既能满足蛋白质需要，又能增加抵抗力的品质全面的奶，为人类服务。
21、动物乳腺生物反应器的原理乳腺生物反应器的原理是应用重组DNA 技术和转基因技术，将目的基因转移到尚处于原核阶段的动物胚胎中，经胚胎移植得到转基因乳腺表达的个体。
1 外源基因在乳腺特异性表达需要乳蛋白基因的一个启动子和调控区，即需要一个引导泌乳期乳蛋白基因表达的序列，这样才能将外源基因置于乳腺特异性调节序列控制之下，使其在乳腺中表达再通过回收奶获得具有生物活性的目的蛋白。
它是一个专门化的分泌腺体，可以生产出具完全生物活性的药用重组蛋白质，其纯化简单，生产投资及成本相对较少，而且对环境不具污染性，也被称为“分子农场”。
复制缺陷型人TPO重组腺病毒的构建与鉴定刘林;罗成基;粟永平【期刊名称】《第三军医大学学报》【年(卷),期】1999(21)5【摘要】目的：构建并鉴定携带人ＴＰＯ基因的复制缺陷型重组腺病毒。
方法：将含全部编码序列的人ＴＰＯｃＤＮＡ克隆于腺病毒载体穿梭质粒ｐＣＡ３的ＣＭＶ启动子下游，然后与含有腺病毒基因组的质粒ｐＢ－ＨＧ１０共转染２９３细胞，经同源重组产生人ＴＰＯ重组腺病毒（ＡｄＣＭＶＴＰＯ）；体外转染Ａ５４９细胞并检测其表达活性。
结果：扩增后获得的病毒滴度达４．５×１０９ｐｆｕ／ｍｌ，经体外转染Ａ５４９细胞检测到ＴＰＯ的表达。
结论：所构建的重组腺病毒能有效介导人ＴＰＯ基因的转移，可望用于造血功能重建的基因治疗研究。
【总页数】4页(P314-317)【关键词】血小板生成素;腺病毒载体;基因治疗;造血功能【作者】刘林;罗成基;粟永平【作者单位】第三军医大学附属新桥医院血液内科;第三军医大学预防医学系防原医学教研室【正文语种】中文【中图分类】R394;R551【相关文献】1.复制缺陷型人IL-2重组腺病毒的制备与鉴定 [J], 章卫平;曹雪涛;滨田洋文2.人IL-2复制缺陷型重组腺病毒的构建和鉴定 [J], 孙运祥;任丽君;郭玉嵩;田长富3.人白细胞介素21基因重组复制缺陷型腺病毒的制备与鉴定 [J], 王芹;李进;赵欣然;宋力;刘强;岳井银;樊飞跃4.表达大熊猫源犬瘟热病毒H蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定 [J], 陈廷炜;孟宪踊;王铁成;高玉伟;冯娜;夏咸柱5.表达大熊猫源犬瘟热病毒H蛋白复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定 [J], 陈廷炜;孟宪踊;王铁成;高玉伟;冯娜;夏咸柱因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人β-酪蛋白GAS基序荧光素酶报告基因载体的构建与鉴定员月明;李弘剑【摘要】构建人β-酪蛋白GAS基序荧光素酶报告基因表达载体.合成3个连续重复的人β-酪蛋白启动子中干扰素γ活化序列(gamma-activated sequence,GAS)并特其克隆至pGL3-Promoter荧光素酶报告基因载体.测序鉴定构建的载体,然后将其转染人人胚肺成纤维细胞(human embryonic lung fibroblasts,HELF)中检测荧光素酶的表达活性.测序结果表明,3×GAS序列正确；双报告基因系纯检测荧光素酶活性表明,构建的报告基因具有启动子活性.成功构建的人β-酪蛋白GAS基序荧光素酶报告基因表达载体,为进一步研究干扰素γ诱导的JAK-STAT信号通路提供了必要的试验材料.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2011(000)010【总页数】4页(P126-129)【关键词】β-酪蛋白;GAS基序;荧光素酶;报告基因【作者】员月明;李弘剑【作者单位】暨南大学生命科学与技术学院,广州510632;暨南大学生命科学与技术学院,广州510632【正文语种】中文β-酪蛋白启动子是目前研究较多的一种乳蛋白启动子，具有较强的启动外源基因表达的能力[1] 。
在不同的激素和细胞因子作用下，β-酪蛋白启动子能招募多种转录因子[2] ，即有许多转录因子结合的基序。
例如，GAS(gamma-activated sequence)基序是信号传导及转录激活因子(Signal transducers and activators of transcription，STAT)的结合位点。
GAS是干扰素γ通过JAK-STAT信号传导通路激活目标基因表达的重要启动子[3] 。
为了深入研究干扰素γ诱导的JAK-STAT信号传导通路，本研究拟构建人的β-酪蛋白GAS基序荧光素酶报告基因表达载体，并通过细胞内荧光素酶活性的检测，以期证明所构建的报告基因载体的有效性。
荷斯坦奶牛IFN-α基因的克隆表达和抗病毒活性分析汪明;史喜菊;夏春【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2004(040)001【摘要】本研究通过PCR从荷斯坦奶牛基因组DNA中克隆了IFN-α(BoIFN-α)基因,PCR产物双酶切后与载体PQE30连接,构建重组质粒PQE30/BoIFN-α,进行测序和诱导表达.测序结果表明,荷斯坦奶牛IFN-α基因全长为498个核苷酸,含一个ORF,编码166个氨基酸的成熟蛋白, 与所报道的BoIFN-αA亚型只存在一个点变异.表达产物经SDS-PAGE和 Western blot分析,表达出20KD的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的22%,表达产物以包涵体形式存在,约占沉淀蛋白的32%.包涵体提取物经尿素变性、透析复性后初步纯化,重组牛IFN-α(rBoIFN-α)初提物在牛肾细胞(MDBK)/水泡性口炎病毒(VSV)和鸡胚成纤维细胞(CEF)/VSV细胞系上的活性分别为和1.0～2.3×106 U/mg和1.3～2.6×105 U/mg,对传染性牛鼻气管炎病毒(IBRV)感染有一定的抑制作用,抗病毒活性为7.8×105 U/mg.结果显示大肠杆菌可以高效表达具有生物学活性的rBoIFN-α.【总页数】5页(P13-17)【作者】汪明;史喜菊;夏春【作者单位】中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100094;中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100094;中国农业大学动物医学院,北京,海淀,100094【正文语种】中文【中图分类】Q786【相关文献】1.MDCK 细胞 ISG15基因的克隆表达及抗病毒活性分析 [J], 刘爱玲;潘杰;庞运倩;于可响;马秀丽;宋敏训2.荷斯坦奶牛干扰素tau基因的克隆表达及生物活性分析 [J], 张灿3.牦牛IFN-α基因的克隆表达及抗病毒活性研究 [J], 蔡进忠;史喜菊;李少勇;韩雪;汪明4.惠阳胡须鸡IFN-α基因的克隆表达和重组蛋白的抗病毒活性圆二色性分析 [J], 韩春来;汪明;张灿;周建民;史喜菊5.鸡源IFN-λ3的克隆表达及抗病毒活性分析 [J], 宋彦莹;王鹏;戴玉;刘聪;刘雨;王方昆因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
中国农业科学2008,41(8):2431-2435Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.08.030 中国荷斯坦牛红毛基因变异及其编码蛋白结构预测李秋玲1，李建斌1，张争锋2，王洪梅1，高运东1，侯明海1，仲跻峰1（1山东省农业科学院奶牛研究中心，济南250100；2山东省计算中心，济南250014）摘要：【目的】通过对中国荷斯坦牛MC1R基因的核苷酸序列分析和蛋白结构预测，探讨中国荷斯坦牛红白花毛色形成的分子机制。
【方法】采用PCR-RFLP技术对MC1R基因进行分型，利用生物信息学方法对其蛋白结构特征进行模拟分析。
【结果】检测出与毛色表型相关的三种基因型，EE基因型在中国荷斯坦黑白花牛中占优势，ee基因型在中国荷斯坦红白花牛中占优势。
蛋白预测结果显示，ee基因型个体的缺失突变使蛋白质翻译提前终止，引发二级结构改变，导致中国荷斯坦牛红白花个体的出现。
【结论】E等位基因主要与黑色毛色形成有关，e 等位基因主要与红色毛色形成有关。
关键词：牛；红毛；MC1R；蛋白结构Study on Red Coat Color Gene and Prediction of ProteinStructure in Chinese HolsteinLI Qiu-ling1, LI Jian-bin1, ZHANG Zheng-feng2, WANG Hong-mei1, GAO Yun-dong1, HOU Ming-hai1,ZHONG Ji-feng1(1Dairy Cattle Research Centre, Shandong Academy of Agricultural Science, Jinan 250100; 2Shandong Computer Science Center,Jinan 250014)Abstract:【Objective】The objective of this study was to study the nucleotide sequence of MC1R gene, predict its protein structure in Chinese Holstein, and investigate the molecular mechanism of red coat color. 【Method】The PCR-RFLP method was used to genotype the individuals. The bioinformatics and biotechnology software was used to predict the secondary structure of MC1R. 【Result】The result showed that EE genotype was the dominant genotype in Chinese Holstein Black and White herd while ee in Chinese Holstein Red and White herd. Secondary structure was changed that the deletion mutation caused the earlier terminating of translation, which led the form of red coat color.【Conclusion】The allele E was mainly related to black coat color while e to red.Key words: Bovine; Red coat color; MC1R; Protein structure收稿日期：2007-06-18；接受日期：2007-09-14基金项目：国家“863”计划项目（2006AA1021D9、2007AA10Z169）、山东省农业科学院科研创新基金项目（2006YCX028）、山东省农业科学院青年科研基金项目（2006YQN038）作者简介：李秋玲（1979-），女，吉林敦化人，硕士，研究方向为动物遗传育种。
牛乳素真核表达载体的构建作者：张瑜马凤龙刘焕珍乔彦良赵玉军来源：《湖北农业科学》2008年第05期摘要：以牛乳素为目的基因，构建含有组氨酸标签、人生长激素信号肽的真核表达载体，为利用牛乳素在活体动物及培养细胞中的表达提供基因材料。
用人工合成hGH-Lacf B的序列与T载体连接，用Xho I和BamH I酶切后与相应酶切处理的pVAX1连接，取阳性克隆质粒，用EcoR I和Xho I酶切回收含hGH的pVAX1载体，再与经过PCR扩增的his-Lacf B连接，酶切鉴定及测序。
DNA序列分析表明，携带hGH、6×his和目的基因Lacf B已成功连接到真核表达载体pVAX1中。
关键词：牛乳素；组氨酸标签；人生长激素信号肽；真核表达中图分类号：Q513+.2；Q782；Q503 文献标识码：A 文章编号：0439-8114(2008)05-0501-02Construction of the Eukaryotic Expression Vector Carrying Lactoferricin BZHANG Yu1，2，MA Feng-long2，LIU Huan-zhen2，QIAO Yan-liang2，ZHAO Yu-jun1(1.College of Animal Science and Veterinary Medicine，Shenyang Agricultural University，Shenyang 110161，China；2.Shandong Sinder Technology Limited Company，Qingdao 266061，Shandong，China)Abstract：To provide the eukaryotic expression vector carrying 6x histidine-tag and human growth hormone in expremental animal and cell culture，according to the published nucleotide sequence of the lactofericin B and human growth hormone，synthesis sequence was ligated with pMT-18 vector. The product was digested with Xho I and BamH I，and then cloned into the plasmid pVAX1.The recombinant plasmid was digested with EcoR I and Xho I，got the pVAX-hGH，and ligating with the gene encoding for his-lacfB and amplified using PCR technique. The eukaryotic expression vector carrying hGH、6x histidine-tag and lactofericin B had been established and verified by partial DNA sequence analysis.Key words：lactoferricin B；histidine tag；human growth hormone；eukaryotic expression乳铁蛋白(Lactoferrin，Lf)是一种分子量为70~80kD的糖蛋白，广泛存在于乳汁、唾液、泪液等外分泌液或血浆、中性粒细胞中[1]。
