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工业药物分析03第4,5节 药物定量分析与分析方法验证PPT幻灯片

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药物分析课件第4章药物定量分析与分析方法验证

药物分析课件第4章药物定量分析与分析方法验证
○ A．做空白试验 B．做对照实验 ○ C．做回收试验 D．增加平行测定次数 ○ E．选用多种测定方法
[B型题]
HPLC。
按分离方法分为：PC；TLC；柱色谱；GC；
（一）HPLC法
1. 对HPLC仪器一般要求 色谱柱、流动相按品种项下要求。
色谱柱的理论板数：n = 5.54(tR /Wh/2)2
2. 系统性试验 于1.5

分离度：R = 2（tR1 – tR2)/(W1 + W2); 要大
拖尾因子：T = W /2d 应在0.9 ～
1. 原料药 可用已知纯度对照品或样品进行测定；或与已建准 确
度的另一方法测定的结果进行比较。 2. 制剂 要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入 原
料对照品的方法作回收率试验，然后计算RSD。 具体做法：测定高、中、低三个浓度，n=3, 共9个数据来评价
回收率的RSD＜2%；用UV和HPLC发时，一般
三．含量测定 常用的方法对照品比较
法:Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) ×Cr
Ch.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。
二．荧光分析仪 有二个单
色光器—激发单色光器与
发射单色光
器；且激发光源、样品池和检测器成直 角。
三、色谱分析法
按分离原理分为：吸附；分配；离子交换；排阻色 谱
方法分类
2. 用硫酸水解后测定法 例如：硬脂酸镁的含量测定
Mg(C17H35COO)2 + H2SO4
H2SO4 + 2NaOH
MgSO4 + 2C17H35COOH Na2SO4 + 2H2O
（三）经氧化还原后测定法
COOH
I
I

药物分析药物定量分析与分析方法验证 ppt课件

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单质溴还原为溴负离子。
测定含碘药物时，分解产生的碘化氢可被氧
气进一步氧化，其燃烧产物主要为单质碘，
并 含 有 少 量 的 五 价 碘 （ HIO3 ） 与 一 价 碘
吸
（HI）。当使用AgNO3滴定法测定含量时，
收 液 的
用H2O-NaOH溶液-SO2饱和溶液作为吸收液， 上述不同价态的碘均转变为负一价的碘
H2O2与水的混合液作为吸收液，燃烧产物经
吸收转变为H2SO4，加入盐酸溶液并煮沸除
去剩余的过氧化氢后，加入BaCl2，使硫酸生
吸
成BaSO4，以重量法测定含量。
收 液
含磷药物（有机膦酸类）的燃烧产物为P2O5，
的 以水为吸收液，加入少量硝酸溶液并经煮沸
选 择
使焦磷酸（H4P2O7）和偏磷酸[(HPO3)n]转 化为磷酸后，采用钼蓝比色法测定含量。
f. 砷盐的检查：有机结合的砷经与无水Na2CO3或 Ca(OH)2 、 Mg(NO3)2 共 热 （ <700℃ ） 转 化 为 无机砷酸盐后，依法检查。本法主要用于高分子 化合物（如：右旋糖酐铁）或植物提取物（如： 大豆油）中砷盐的检查，亦应用与少数有机药物 （如吡罗昔康、布美他尼等）.
② 氧瓶燃烧法：
1. 湿法破坏
适用于含氮有机合成药物分析的前处理，在生物制 品分析中用于氮（包括蛋白质）、磷、硫柳汞及氯 化钠测定法的前处理； 亦可用于生物样品中金属元素测定时生物基质的去除。 主要分解剂：硫酸 辅助分解剂：硝酸、高氯酸、过氧化氢。 湿法破坏可分为：硫酸-硝酸法、硫酸-高氯酸法、 硫酸-硫酸盐法、硝酸-高锰酸钾法。
选 （ NaI ） ； 若 使 用 间 接 碘 量 法 测 定 时 ， 用
择
H2O-NaOH溶液为吸收液，此时吸收液中的

4药物定量分析与分析方法验证解析精品PPT课件

4药物定量分析与分析方法验证解析精品PPT课件
反应摩尔比为1∶6
T cM 0.02 416.34 1.388mg / ml
n
6
98：140. 氧瓶燃烧法中的装置有 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 磨口软质玻璃锥形瓶 C. 铂丝 D. 铁丝 E. 铝丝
96：133（99x：138）．选择氧瓶燃烧 法所必备的实验物品 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 铂丝 C. 普通滤纸 D. 氢气 E. 无灰滤纸
Fe (SCN) 2+ （淡棕红色）
测定方法 取本品约0.1g，精密称定，加 乙醇5ml溶解后，加20%氢氧化钠溶液5ml， 加热回流15min，放冷至室温，加水20ml 与硝酸5ml，精密加硝酸银滴定液 (0.1mol/L) 30ml，再加邻苯二甲酸二丁酯 5ml，密塞，强力振摇后，加硫酸铁铵指 示液2ml，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴 定，并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于 6.216mg的C4H7Cl3O·1/2H2O。
OH SO3Na
磺溴酞钠
实验诊断用药 （肝功能）
（二）含卤素有机药物的分析
C X 适当的处理 X
直接回流后测定法 碱性或酸性还原后测定法 氧瓶燃烧分解后测定法
1. 直接回流后测定法 本法是将含卤素有机药物溶于适当
溶剂（如乙醇）中，加入氢氧化钠溶 液（或一定量过量的硝酸银滴定液） 后，加热回流使其水解，将有机结合 的卤素转变为无机的卤素离子，然后 采用银量法（Volhard法）测定。
本法特点是简便、快速、破坏 完全，尤其适用于微量样品的分析
（ 2） 仪器与材料
①仪器装置 燃烧瓶为500、1000或
2000ml无色、磨口、厚壁、 硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空 心，底部熔封铂丝一根， 下端呈螺旋状或网状

药物定量分析与分析方法验证 ppt课件

药物定量分析与分析方法验证 ppt课件

必要时通过HPLC-DAD或LC-MS确证色谱峰的单纯性和同一性 对于结构未知的代谢产物的测定，可采用LC-LC-NMR进行结 构的初步推测后，考察其干扰情况。
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3. 伍用药物的干扰 进行 TDM 时，还要考虑患者可能同时服用药物 ( 通
常为数有限)的干扰。
比较待测药物及可能同时服用药物的模拟生物样品的检
RCOOCH3 RCOOSiMe3
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2）手性分离：
+（R）-E R-SA （R）E-（R）SA （R）E-（S）SA 光活性试剂 非对映异构体
S-SA
手性药物
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3）HPLC:如庆大霉素C组分检查
a.柱前衍生
b.柱后衍生，需一个额外的泵
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第三节 定量分析方法验证·

3·唾液： 优点：样品易得，采集无痛，无危险。 缺点：一般唾液中药浓与血药浓度不吻合，易变
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4.组织：用于药物体内动力学研究 步骤：取样，匀浆，去蛋白 5.头发：主要用于体内微量元素的测定。 枕部取样，洗净，消化或者高温灰化后测定
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二 体内样品的贮藏与处理 1.冷藏或冷冻 2.去活性：快速冷冻；微波照射；加入酶活性阻断剂或者 抗氧剂；高温煮沸。
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分析方法有: ①色谱法:HPLC,HPCE,GC ②光谱法:比色法、紫外-可见分光光度法、荧光分光光度 法、原子吸收分光光度法 ③免疫分析法:放射免疫法RIA、酶免疫法EIA、化学发光酶 免疫、荧光免疫分析 ④联用技术:GC-MS、LC-MS、LC-NMR
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药物定量分析与分析方法验证PPT课件

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（二）干法破坏
适用于含卤素、硫、磷等有机药物 分析的前处理，亦用于某些药物中硒
和砷盐的检查。
高温炽灼法 氧瓶燃烧法
1.高温炽灼法 将含待测元素（卤素、磷、砷 盐)的有机药物经高温灼烧灰化， 使有机结构分解而待测元素转化为 无机元素或可溶性无机盐。 常加入无水碳酸钠、硝酸镁、 氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化
2. 氧瓶燃烧法 oxygen flask combustion method 适用于含卤素或硫、磷等元素 的有机药物的鉴别、限量检查或含 量测定 亦可用于药物中杂质硒的检查
原理 将有机药物放入充满氧气的密闭燃 烧瓶中充分燃烧，有机结构彻底分解 为二氧化碳和水，待测元素转化为氧 化物（或无氧酸），被吸收于适当的 吸收液中，然后根据欲测物质的性质， 采用适宜的方法进行分析
A. H2O2溶液 B. H2O2—NaOH溶液
C. NaOH溶液 D．硫酸肼饱和液 E. NaOH—硫酸肼饱和液
例4. 氧瓶燃烧法可用于
A. 含卤素有机药物的含量测定 B. 醚类药物的含量测定
C. 检查甾体激素类药物中的氟
D. 检查甾体激素类药物中的硒 E. 芳酸类药物的含量测定
本章要求


掌握凯氏定氮法及氧瓶燃烧法的原理 及所加试剂、操作要点 熟悉各种定量分析样品的前处理方法 的适用范围
难以分解的药物 辅助氧化剂 30% 过氧化氢和高氯酸
不能在高温时加入，应待消解 液放冷后加入，并再次加热继续消 解
3.应用范围：含有氨基或酰胺结构的 药物含量
偶氮或肼结构的含氮药物，在消解过 程易生成氮气而损失，在消解前加入锌粉 还原 杂环中的氮不易断键而难以消解，可 用氢碘酸或红磷还原为氢化杂环后在消解 含氮量超过10%的样品，在消解液中加 入少量多碳化合物，如蔗糖、淀粉等还原 剂，以利于氮转变为氨。

第四章药物定量分析与分析方法验证pptPowerPoi

第四章药物定量分析与分析方法验证pptPowerPoi

例 泛影酸的测定 ChP (2000)
取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶 液30ml与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷 凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗 涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋 酸5ml与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液 (0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L) 相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
本法适用于含卤素有机药物结构中 卤素原子结合不牢固的药物（如卤原 子和脂肪碳原子相连者）。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
例:三氯叔丁醇的测定 ChP（2000）
原理 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热 回流水解，氯元素全部转变成氯化钠，然 后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸 化，再加入定量过量的硝酸银滴定液，使 Cl-生成AgCl沉淀，过量的硝酸银，以Fe3+ 为指示剂，用硫氰酸铵液回滴定。
本法不能用于含氮杂环药物的破坏。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
2. 硝酸-硫酸法
本法适用于大多数有机物质的破坏， 破坏得到的无机金属离子均为高价态。
本法不能用于含碱土金属有机药物的 破坏。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
3. 硫酸-硫酸盐法
本法是往样品中加入浓硫酸作氧化剂， 加入硫酸盐提高硫酸的沸点，增强硫酸的 氧化破坏能力，且防止硫酸的分解损失。
第四章药物定量分析与分析方法验证 pptPowerPoi
原理： Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4
△ MgSO4 + 2 C17 H35COOH
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2. 中间精密度 同一实验室，不同时 间由不同分析人员用不同设备所得结果 的精密度。考察随机变动因素的影响。 变动因素为不同日期、不同分析人员、 不同设备。
3. 重现性 不同实验室，不同分析人 员测定结果的精密度。当分析方法将被 法定标准采用时，应进行重现性试验。 如建立药典分析方法时通过协同检验得 出重现性结果，协同检验的过程、重现 性结果均应记载在起草说明中。
RMP10% 0 A
数据要求 规定的范围内，至少 用9次测定结果评价，如制备三个不同 浓度样品各测三次。
1. 含量测定方法的准确度
原料药可用已知纯度的对照品或样 品进行测定，或用本法所得结果与已 建立准确度的另一方法测定的结果进 行比较。
制剂可用含己知量被测物的各组 分混合物进行测定，即采用在空白辅 料中加入原料药对照品的方法。
(二)容量分析法的计算问题
1． 滴定度
2． 滴定度（T）的计算
3． 百分含量计算
（1） 直接滴定法
含量%=
V× TW´
×100% =
V×T ×WF
×100%
（2）回滴定法（剩余滴定法 ）
三、色谱分析法 (一) HPLC法：要求RSD<2％，回收 率98％～102％之间。
线性范围：用精制品配制一系列 标准溶液，浓度点n应为5～7，用浓 度c对峰高h或被测物的响应值之比进 行回归处理，建立回归方程，r应大 于0.999，截距应趋于零。
一、 准确度（accuracy） 准确度是指用该方法测定的结果与
真实值或参考值接近的程度，用百分回 收率表示。
测定回收率R（recovery）的具体 方法可采用“回收试验法”和“加样回 收试验法”。
回收试验 空白+已知量A的对照品 （或标准品）测定，测定值为M
R M 100% A
加样回收试验 已准确测定药物含量P 的真实样品+已知量A的对照品（或标 准品）测定，测定值为M
质进行测定。如果不能得到杂质或降 解产物，可用本法测定结果与另一成 熟的方法进行比较。
二、精密度（precision）
精密度是指在规定条件下，同一 个均匀样品，经多次取样测定所得结 果之间的接近程度。用偏差（d）、标 准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)（变 异系数，CV）表示。
偏差（d）：测量值与平均值之差
一、方法选择
原料药 -侧重方法准确性
中药材及其成方制剂 -侧重方法专属性和灵敏度
化学药物制剂
二、常用方法及含量计算
一、容量分析法 用原料药精制品(含量>99.5％)或
对照品考察方法的精密度，相对标准 差一般应不大于0.2％；进行回收率试 验。回收率一般在99.7～100.3％之间。
(一)容量分析法的特点
三)需验证的分析项目
1. 鉴别试验； 2. 杂质定量或限度检查； 3. 原料或制剂中有效成分含量测定； 4. 制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的测
定； 5. 溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测
试方法。
四)验证内容
验证内容有：准确度、精密度 （重复性、中间精密度和重现性）、 专属性、检测限、定量限、线性、范 围和耐用性。
dxi x
标准（偏）差（SD或S）
S
xi x2
n1
相对标准（偏）差（RSD），也称 变异系数（CV）
RSDS10% 0 x
1. 重复性 在相同条件下，由同一个 分析人员测定所得结果的精密度；在规 定的范围内，至少用9次测定结果评价， 如制备三个不同浓度样品各测三次或把 被测物浓度当作100%，至少测6次进行 评价。
六、 线性 在设计的范围内，测试结果与试样
中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 数据要求：应列出回归方程、相关
系数和线性图。
七、范围 指达到一定精密度、准确度和线性
的条件下，测试方法适用的高低限浓度 或量的区间。
八、 耐用性 指测定条件稍有变动时，结果不受
影响的承受程度，为常规检验提供依据。 是衡量实验室和工作人员之间在正常情 况下实验结果重现性的尺度。

专属性：要考查辅料、有关物质或降 解产物对主药的色谱峰是否有干扰，如有 干扰应设法排除。
第五节 药品质量标准分析方 法验证
一)目的
证明所采用的分析方法适合于相应 的检测要求，方法验证过程和结果均应 记载在药品标准起草和修订说明中。
二)用途 （一）药品质量标准起草时，分析方法 需经验证。
（二）药物合成方法变更、制剂的组分 变更、原分析方法进行修订时，分析方 法需经验证。
1．非仪器分析目视法 用已知浓度的被测物，试验出能
被可靠地检测出的最低浓度或量。
2．信噪比法 用于能显示基线噪音的分析方法
（仪器分析方法），是把已知低浓度 试样测出的信号与空白样品测出的信 号进行比较，算出能被可靠地检测出 的最低浓度或量。一般以信噪比 （S/N）3∶1或2∶1时的相应浓度或 注入仪器的量确定检测限。
九、应用
3．数据要求 应附测试图谱，说明测试过程和检
测限结果。
五、定量限（1imit of quantitation， LOQ）
指样品中被测物能被定量测定的最 低量，结果应具有一定准确度和精密度。 常用%、ppm、ppb表示。
常用信噪比法确定定量限，一般 以信噪比（S/N）为10∶1时相应的浓 度或注入仪器的量进行确定，也可用 仪器所测空白背景响应标准差（SD） 的10倍为估计值，再经试验确定。
三、专属性（specificity） 指有其他成分（杂质、降解物、
辅料等）可能存在情况下采用的方法 能准确测定出被测物的特性，能反映 该方法在有共存物时对供试物准确而 专属的测定能力。是指该法用于复杂 样品分析时相互干扰程度的度量。
四、 检测限（limit of detection， LOD）
检测限系指试样中被测物能被 检测出的最低量。是限度试验参数， 无需定量测定。常用%、ppm、 ppb表示。
如不能得到制剂的全部组分，可向 制剂中加入已知量的被测物进行测定， 或与另一个已建立准确度的方法比较 结果。
中药分析的准确度一般用加样回 收试验衡量。中药回收率一般要求在 95～105%范围内，有些方法操作步骤 繁多时，可要求在90～110%范围内。 RSD一般在3%以内。
2．杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂中加入已知量杂