酶底物法测定水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌综合试卷解析及答案

地震等自然灾害过后水体会被大量微生物所污染,特别是被粪便污染。

如水体中含有肠道病原菌株,人饮用后会暴发严重疾病。

粪大肠菌群是一类能使乳糖发酵、产酸产气的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌,是水体受人畜粪便污染的最直接指标。

对于粪大肠菌群检测的方法主要为滤膜法和多管发酵法,但试验过程较为繁琐,因此亟需一种快速简便的检测方法。

酶底物法也可用来判断水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏菌,操作方便,检测时间短,无需确认试验。

但该方法尚未正式列入国家标准,因此,该文通过与多管发酵法相比较,对酶底物法进行验证分析。

1材料与方法1.1试验材料仪器及试剂:乳糖蛋白胨;EC 肉汤;灭菌锅;科立得TM (Colilert R )试剂(美国爱德士生物科技股份有限公司);酒精灯;100mL 无菌取样瓶(里面装有1.5%硫代硫酸钠去除水样中的余氯);3mm 接种环;无菌培养定量盘(97孔);封口机(带97孔定量盘橡胶托垫);97孔阳性标准比色盘;培养箱。

1.2试验方法1.2.1多管发酵法。

参考《生活饮用水标准检验方法(GB/T5750.12-2006)》和《水和废水监测分析方法(第四版)》,将水样分别接种到发酵管中,发酵管中盛有乳糖蛋白胨,在(37±0.5)℃条件下培养(24±2)h ,如果试管产酸或产气,说明试验呈阳性(初发酵试验),将呈阳性结果的发酵管轻微振荡,用灭菌棒或3mm 接种环将培养物转接至EC 培养液中,在(44.5±0.5)℃水浴下培养(24±2)h ,如果发酵管产气即可确认呈阳性(复发酵试验)。

1.2.2酶底物法。

将科立得TM (Colilert R )试剂加入100mL 装有水样的取样瓶中,待试剂完全溶解后,倒入无菌培养定量盘(97孔)中,对其进行封装,然后置于(44.5±1)℃恒温培养箱中培养24h 。

取出后与97孔阳性标准比色盘进行比较,如果为阳性反应,则黄色孔颜色较标准比色盘深,如果有疑虑,可将可疑阳性的试管继续培养4h ,然后观察,之后出现的颜色反应无效。

摘 要 ：目的 通过 比较酶底物法与多管发酵法测定水 中总大肠菌群 的一致性 ，判定在某 实验 室条件下 能否用酶底 物法 替代 多管发酵法测定水 中总大肠菌群 。方 法 利用加 标实 验检测 方法 ，比较 酶底物 法和多 管发 酵法检测 结果 的一致 性 。结果 酶底 物法 与多 管发 酵法 用 于水 中大 肠 菌 群检 测 结果 具 有 一致 性 ，差 异无 统计 学 意义 （ｔ：０．８９，Ｐ＞ ０．０５）。结论 酶底物法具有快速简便 的特 点 ，可以作 为评价水质微生物污染的标准方法 。 关键 词 ：酶底 物法 ；总大肠 菌群 ；方 法确认 中图分类号 ：Ｒ１２３．１ 文献标识码 ：Ｂ 文章编 号 ：１００３—６２４５ （２０１５）０５—０５０９—０２
ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｈａｓ ｎｏ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆ ｉｃａｎｔ（ｔ＝０．８９，Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｔｅｃｈ—
ｎｉｑｕｅ ｉｓ ａ ｒａｐｉｄ ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ ｉｔ ｃａｎ ｂｅ ｕｓｅｄ ａｓ ａ ｓｔａｎｄａｒｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｗａｔｅｒ ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓａｆｅｔｙ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｅｎｚｙｍｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ；Ｔ ｏ ｔａｌ ｃｏｌｉ ｆｏｒｍ ｂａｃｔｅｒｉａ；Ｍｅｔｈｏｄ ｃｏｎｆｉｒ ｍ ａｔｉｏｎ
酶底 物 法 （ｅｎｚｙｍｅ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ） 的 原 理 是 ：利 用 大 肠 菌 群 细 菌 能 产 生 ｐ２ 半 乳 糖 苷 酶 （ Ｂ２Ｄ２ｇａ１ａｃｔｏｓｉｄａｓｅ ） 分 解 ＯＮＰＧ （ Ｏｒｔｈｏ２ ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙ１２￣２Ｄ２ｇａｌａｃｔｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ），使 培 养 液 呈 黄 色 ，检测水样 中是否含有大肠菌群。利用大肠埃希氏 菌 产 生 Ｂ２葡 萄 糖 醛 酸 酶 （１３２ｇｌｕｅｕｒｏｎｉｄａｓｅ） 分 解 ＭＵＧ （４２ ｍ￣ｔｈｒ＇１２ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒｙ１２￣２Ｄ２ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ），使

Ａｂ ｔａ ｔ Ｎｅ ｉｅ ｅ （ｔｎ ａｄ Ｍｅｈ ｄｆｒＤ ｉｋｎ ｔｒ ＧＢ ５ ４ 一 ０ ６ｒ ｑ ｉ ｄ ｔａ ｈ ｎＴ ｔｌＣ ｌｆｎ ｓｒ ｃ： ｗ Ｃｈｎ ｓ ￣ ａ ｄ ｒ ｔｏ ｒｎ ｉｇＷａｅ ） ７ ９ － ０ ｅ ｕｒ ｔ ｅ ｏａ ｏｉ ｏ ｎ Ｓ ｏ ） ２ ｅ ｈ ｗ ｌ
个样品
使用的 ５ 管法）
器 皿 单价 缚个 样 品 的价 格 备 注
可 晕复 使 用 的 平皿 ※
６ ３元／ 个
＞ １５儿 ３
＞８儿 ６
每 个 样 品 至 少需 要 ５
个平皿 每 个 样品 至 少需 要 ｌ ０
可 重 复使 用 的 发酵 管 ※ ６ ８元／ 个
ｓｏ ｓ ｏｉｖ， － ｏｉ ｓ ｂ ｓ ｄｆｒ ｅ．ｎｔｉ ａｔ ｌ ｕｅＤ ｆ ｅ ｕ ｓ ａｅ ｅ ｈ ｏｏｙ （ Ｓ、 ｎｙ ｅｓｂｔ ｔ ｈｗ ｓ ｅ Ｅ Ｃ ｌｍｕｔ ｅｔ ｔ ｔ ｒＩ ｓ ｒ ｃ ｓ ｅ ｎ ｄＳ ｂｔ ｔ Ｔ ｃ ｎ ｌ ｐ ｔ ｉ ｅｅ ａｈ ｈ ｉｅ ｉ ｒ ｇ Ｄ Ｉ ｅ ｚｍ ｕ ｓ ａｅ ｒ ｔ ｈｉｕ ～科立 得 ａｄｍｕ ｉｌ－ｕｅｆ ｍ ｎａｉ ｃｎｑ ｅｏｔｓＴ ｔ ｏｉｒ ｎ —ｏｉｎＷ ｔ ． ｎ ｏ ａｅ ｅ ｎｑ ｅ ｃ ｎ ｈｐｅｔｂ ｒ ｅｔ ｏ ｔ ｈｉｕ ｔ ｏａ Ｃｌｏ ａｄＥ ｃｌｉ ａｅ Ａ ｄｃｍｐｌ ｅ ｔｎ ｅ ｔ ｅ ｌ ｆｍ ｒ
１引言 ． 供水企业 为保证供水 水质必 须对原水 、 出厂 水 、 管 网水进 行大量的水 质检测 工作 ，其 中大 肠菌群 的含量 是水质的重要指标 。国家标准 Ｇ ５４ － ０６中规定 Ｂ ７９ ２ ０ 大肠 菌群及大肠埃 希 氏菌的方法 ，有传统 的经典 的 多 管 发酵 法和 最新 的 固定 底物 （Ｓ ） 底物 ５ 孔 定量 Ｄ Ｔ酶 １ 盘法 。 本文依照两个标准检查 了成 本分析和经 济比价 。 ２多 管发 酵法 ． ２ １培养基 与价 格分 析 ．

酶底物法检测水中粪大肠菌群方法验证摘要：本文对《水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法》HJ1001 -2018、《生活饮用水标准检验方法》GB/T5750-2006进行了方法验证，以评价该两种检测方法是否适用于水中粪大肠菌群的检测工作，以确保该方法能够满足水中粪大肠菌群的测定。

关键词：粪大肠菌群；质控样品。

引言：试样与固定底物酶底物法（DST）采用大肠菌群能产生β—半乳糖苷酶分解ONPG使培养液呈黄色的原理，来判断水样中是否含耐热大肠菌群，大肠菌群的培养温度是44.5℃。

1.测定方法与参数（注：方法为酶底物法法，参数为质控样品）2.仪器与设备2.1恒温培养箱2.2冰箱2.3高压蒸汽灭菌锅2.4烘箱2.5量筒2.6吸管2.7程控定量封口机2.8 51孔或97孔定量盘2.9无菌水样瓶（100mL）2.10阳性比色盘2.11干热灭菌器3培养基和试剂3.1无菌水3.2科立德（固定底物技术酶底物法）检测试剂：MMO-MUG培养基。

4.样品的采集和保存4.1采样前准备：4.1.1采样瓶：高压灭菌瓶。

4.2样品采样及注意事项4.2.1将已灭菌和封包好的采样瓶，无论在什么条件下采样时，均要小心开启包封纸和瓶盖，避免瓶盖及瓶子颈部受杂菌污染。

4.2.2在采集江，河湖，库，地表水时，可握住瓶子底部直接将采样瓶插入水中，约距水面10-15厘米时，瓶口朝来水方向，使水样灌入瓶内。

如果没有水流，可握住瓶子水平前推，直至充满水样为止。

采样后，迅速盖上瓶盖和包装纸。

采样后，采样瓶内上不应留有一些空隙，一边检验前充分混匀水样。

4.2.3从自来水龙头采集样品时，不要选用漏水的水龙头，采水前可先将水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌或用75﹪酒精溶液消毒水龙头，然后将水龙头打开，放水数分钟后除去水管中的滞流杂质。

采水时控制水流速度小心接入瓶内。

4.2.4在同一采样点进行分层采样时，应自上向下进行，以免不同层次的干扰；同一采样点与理化检测项目同时采样时，应先采集细菌等检验样品，否则样品可能被污染，采样前，不得用水样刷洗采样瓶。

两种方法对水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌检测的对比论述发布时间：2021-03-23T04:11:47.963Z 来源：《学习与科普》2020年19期作者：邱磊[导读] 文章首先分析了实验时所使用的材料和试验方法，其次阐述了试验结果，最后对试验结果进行了总结。

谱尼测试集团江苏有限公司摘要：文章首先分析了实验时所使用的材料和试验方法，其次阐述了试验结果，最后对试验结果进行了总结。

通过结果，得出结论，在水中，对总大肠菌、大肠埃希氏菌进行实际试验检测的过程中，通过两种方法来对其检测，这两种方法是酶底物法和多管发酵法。

通过试验检验结果来看，酶底物法检测的时间比较短，操作简单，方便进行观察，是值的普及和推广的一种检测方法。

关键词：大肠埃希氏菌；总大肠菌；酶底物法；多管发酵法1.材料和方法1.1使用材料、仪器试验检测的过程中，使用材料及仪器有MMO-MUG培养基，EC-MUG、乳糖蛋白胨培养基。

还有培养箱36℃±1、44.5℃±0.5℃；紫外灯，其波长是366m.1.2方法（1）试验前准备在试压之前，要先做好相应的准备工作，试验正式开始前，准备好实用性菌株和加标水样等，同时还要准备培养基粉末（2.7±0.4）g；然后在结合配置有关要求，将EC-MUG、乳糖白胨培养液制作好。

（2）方法原理在检测总大肠菌的时候，应用MMO-MUG来检测，能够产生胨半乳糖苷酶，其能够分解ONPG，分解完成后，这个时候，会出现颜色上的变化，在检测大肠埃希氏菌的时候，应用MMO-MUG及EC-MUG培养基来检测，这个时候会产生β-葡萄糖醛酸酶，然后在进行分解，分解后挥释放荧光，而且通过紫外线照射，特征性荧光也十分的明显[1]。

（3）试验方法在进行适用性实验的时候，要先把分装好的MMO-MUG以及EC-MUG等培养液取出来，取出来后，将混悬液分别加入到各个管中，其结果要在二十四小时后来进行观察。

①灵敏度试验在试验之前，将培养后的侵袭性培养物取出来，这种培养物培养了二十四个小时，取出来之后，在将制成0.5适度菌液，然后在进行稀释，稀释的时候要对其菌液进行十倍稀释，一直稀释到1500MPN/100mL～1MPN/100mL，在开始灵敏度试验。

接种量 （mL）
阳性孔数（个） 大孔 小孔
查表结果 （MPN/100mL）
检测结果 （MPN/L)
备注 XXXX-04-J071
分析人：
校核人：
审核人：
分析日期及时间：
XXXXXX 有限公司
2021 年 09 月 09 日颁布
水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌（酶底物法）分
析原始记录（续表）
培养温度℃培养时间 h 大肠埃希氏菌 黄色 无色
金黄色葡萄球菌 无色
培养温度℃培养时间 h 大肠埃希氏菌 黄色 无色
金黄色葡萄球菌 无色
培养温度℃培养时间 h 大肠埃希氏菌（耐热型） 黄色有荧光 无荧光
产气肠杆菌 无色
样品空白对照
样品编号
接种量 （mL）
阳性孔数（个） 大孔 小孔
接种量 （mL）
阳性孔数（个） 大孔 小孔
查表结果
（MPN/100mL）
检测结果
（MPN/L)
样品编号
接种量 （mL）
阳性孔数（个） 大孔 小孔
接种量 （mL）
阳性孔数（个） 大孔 小孔
接种量 （mL）
阳性孔数（个） 大孔 小孔
查表结果
（MPN/100mL）
检测结果
（MPN/L)
样品编号
接种量 （mL）
阳性孔数（个） 大孔 小孔
接种量 （mL）
检出限
10MPN/L
采样日期
样品描述
液态色澄清浑浊
样品种类 分析步骤
地表水地下水工业废水 生活污水 其他
环境条件
温度℃；湿度 RH%
1. 样品稀释：根据样品污染程度确定接种量，接种量为 10mL 时，取 10mL 样品加入到盛有

ｉ ａ ｅ （ｎ ｙ ｅ ｓｂ ｔａ ｅｍ ｔｏ ）Ａ ｗ ｔ ｒ ｅ ｚｍ ｕ ｓｒ ｔ ｅ ｈ ． ｎ ｏｐ ｒ ｎｙ ｅ ｓｂ ｔａ ｅｍ ｔ ｏ ｗ ｔ ｄ ｄ
ｕ ｔ ｐ ｅ ｔ ｂ ｅ ｍ ｎｔｍ ｈ ｔ ｅ ｅ ｔ ｔ ｅ ｔ ｔ ｌｃ ｉ ｏ ｍ ｍ ｌ ｉ ｌ － ｕ ｅ ｆ ｒ ｅ ｔ ｏ ｏ ｄ ｔ ｃ ｈ ｏ ａ ｏｌ ｆ ｒ ｓ、 ｅ ｃ ｒｉ ｈｉ ｃ ｉ ａ ｄ ｅ ｄ ｓ ｈｅ ｃ ａ ｏｌ ｎ
Ｚ ａ ｇａ Ｓ ｎ ｏｇ ｅ Ｃ ｅｘ ｐ ｎ ｈ ｙｊ ｅ ｕ ｚｎ ｋ ｈ ｎ ｉｉ ｇ ｎ ｉ Ａ ｓｒ ｃ ：Ｏ ｊ ｃ ｉｅ Ｍ ｔｏ ｓ ｂ ｔａ ｔ ｂ ｅｔ ｖ ｅｈ ｄ Ｒｓｌｓ ｅｕ ｔ Ｃ ｎ ｌｓ ｏ ｏ ｃｕ ｉｎ
Ａ ｓ ｒｃ Ｔ ｉ ｒ ｉ ｌ ａ ｎ ｙ ｉ ｔ ｏ ｕ ｅ ｔ ｏ ｈ ｃ ａ ａ ｔ ｄ ｔ ｃ ｏ ｉ ｏ ｂ ｔ ａ ｔ： ｈ ｓ ａ ｔ ｃ ｅ ｍ ｉ ｌ ｎ ｒ ｃ ｓ ａ ｍ ｈ ｗ ｉ ｈ ｃ ｆ ｓ ｅ ｅ ｔ ｃ ｌ ｆ ｒ ｄ ｅ ｄ ｎ ｍ
酵法对地表水中总大肠菌群的俭测结果无显著性差异目 呈中度正相关 （ ｔ 配对 检验 ｔ２５，．２＜＜．５ ＝．７ｏ０５Ｐ００； 直线相关分析 ５７ ．２＜＜．５ ；（）酶底物法对大肠埃希氏菌的检测结果与多管发酵法对粪大肠 ９ ，ｏ０５Ｐ００ ） ２
Ｉ佥 测
菌群的Ｉ测结果呈高良丑相关 （ 佥 直线 关 纷析 ｒＯ８３ ．２＜＜．５ 。结论：酶底物法可 －．６ ，ｏ０５Ｐ００ ） －
目 前，我国生物防护材料及 功能ｌ防护装备品种数量饺少， 生 特别是高效、便携、成本
低 、无污染、使用简单的生物防护器材，远不能满足平时、战时及突发公共卫生事故时生 物防护 的需要。与传统病毒分离方法相比，荷 电体 电吸附作用吸附分离病毒 ，不造

卫生学评价 ， 检测的指标为大肠 菌群和大肠埃希 氏菌 或粪大肠菌群 （ 耐热大肠菌群） 以这些指标作为粪便 ， 污染的指示 菌。 采用的标准检测方法为膜过滤法和多 管发酵法。但这两种方法检测时间相对较长 ， ４— 需 ８ ７ ２小时 ， 需验 证 试 验 ， 验 步骤 较 为 繁 琐 ， 以 不 能 试 所
ｔｏ ｈｎ ｌ ｒｐ ｅｙ－ｐ－ －ｇｌｃｏ ｙ ａ ｏｉｅ 使培 养液 呈 黄 Ｄ ａａｔｐ ｒｎ ｓ ） ｄ
３２ 耗材 ： ． 取样 瓶或 使 用 灭 菌的 玻 璃瓶 ；ｌ 定 ５孔
量盘 或 ９ ７孔定 量盘 。
注 ： 孔定 量盘 可在 无需 稀释 的情 况 下 检测 ｌ ５ ｌ ～
２ 放在 ３ ±１ ） ６ ℃培养箱 ， 培养 ２ 小时 ； ４ 注： 如检测耐热大肠菌群 （ 粪大肠菌群） 则需放在
４ ．℃ ， ４５ 培养 ２ ４小时 ； 果 培养 时 间超过 ２ 时 ， 如 ８小 呈 阴性 结果 则结果 有效 ，如果 呈 阳性 结果 则结 果 无效 ， 需 重做 此水样 。
可在 ２ ４小时内同时定量检测出大肠茵群和 大肠埃希 氏菌。 此方法大大的减少 了 工作量 ， 免 了 避 使用 多管法的逐 级稀释带来的操作误差 ； 也避免 了使用滤膜 法时肉眼读数的人 为误差， 所以其假 阳性率和假 阴性率都比传统方
法低 。 由于 ２ ４小时 内就得 到 结果 ， 以很 好 的用 于 突发事件应 急 。 可
关键词 ： 大肠菌群 大肠埃希氏菌 固定底物酶底物 法 Ｃ ｌｅｔ可立得 试剂 ｏｌ （ ｉｒ
１背 景
出水 样 中大肠 菌群和 大肠埃 希 氏菌 的 ＭＰ 值 。 Ｎ
目前 我 国对 生 活饮 用 水 、 源 水 、 水 地表 水 等 进 行

酶底物法和多管发酵法检测水中的总大肠菌群的比较研究目的比较酶底物法和多管发酵法对饮用水中的总大肠菌群检测结果的一致性。

方法使用酶底物法和多管发酵法对指定水样进行检测，观察结果。

结果两种方法的检测结果有一致性，两者差异无统计学意义（P>0.05）。

结论酶底物法可替代多管发酵法用于评价水质微生物。

标签：大肠菌群；酶底物法；多管发酵法Comparative Research on Enzyme Substrate Technique and Multi-tube Zymolytic Method in Detecting Total Coliform Group in WaterJIANG Ling，LI XueCenter for Disease Control and Prevention of Daying，Daying，Sichuan Province，629300 China[Abstract] Objective To compare the consistency of test results of enzyme substrate technique and multi-tube zymolytic method for total coliform group in water. Methods The appointed water sample was detected by the enzyme substrate technique and multi-tube zymolytic method，and the results were observed. Results The test results of the two methods were consistent，and the difference between the two groups had no obvious significance，P>0.05. Conclusion The enzyme substrate technique can replace the multi-tube zymolytic method to evaluate the water quality and microorganism.[Key words] Coli group；Enzyme substrate technique；Multi-tube zymolytic method有资料表明：酶底物法试剂盒弥补了多管发酵法的不足，是现代微生物快速检测的发展方向，超过90%以上的美国国家实验室都使用此方法[1]。

方法验证报告项目名称：水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定方法名称：《水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定酶底物法》 HJ 1001-2018报告编写人：参加人员：审核人员：报告日期：1 实验室基本情况1.1人员情况表1参加验证的人员情况登记表1.2 检测仪器/设备情况表2使用仪器情况登记表1.3 检测用试剂情况表3使用试剂登记表1.4 环境设施和条件情况实验室具有检定合格的温湿度计，环境可以控制在温度18⁓26℃，湿度45%⁓65%的要求范围内，满足检测环境条件，实验室人员每天对环境条件进行监控。

另外实验室配备了洗眼器、喷淋设施、护目镜、灭火器等的安全防护措施，符合实验室安全内务的要求。

2 实验室检测技术能力2.1检测步骤2.1.1样品稀释根据样品污染程度确定接种量，避免接种样品培养后97孔定量盘出现全部阴性或全部阳性。

接种量小于100ml时，应稀释样品后接种，接种量为10ml时，取10样品加入到盛有90ml无菌水的三角瓶中，混匀制成1：10的稀释样品，其他接种量的稀释样品依此类推。

对于未知样品，可选用多个接种量进行检测。

2.1.2接种量取100ml样品或稀释样品于灭菌后的三角瓶中，加入2.7g±0.5g培养基粉末，充分混匀，完全溶解后，全部倒入97孔定量盘中，以手抚平97孔定量盘背面，赶除孔内气泡，然后用程控定量封口机封口。

观察97孔定量盘颜色，若出现深于或类似标准阳性比色盘的颜色，则需排查样品、培养基、无菌水等一系列因素后，中止试验或重新操作。

2.1.3培养测定总大肠菌群和大肠埃希氏菌时，将封口后的97孔定量盘放入恒温培养箱中37℃±1℃培养24h。

测定粪大肠菌群时，将封口后的97孔定量盘放入恒温培养箱44.5℃±0.5℃培养24h。

2.1.4对照试验2.1.4.1空白对照每次试验都要用无菌水按照试验步骤进行实验室空白测定。

培养后的97孔定量盘不得有任何颜色反应，否则该次样品测定结果无效，应查明原因后重新测定。

当代化工研究Modern Chemical Research 2020・08百家争鸣总大肠菌群和大肠埃希氏菌检测方法的对比分析*陈翠玲(东营市胜丰职业卫生检测评价有限责任公司山东257000)摘耍：为了探究酶底物法、多管发酵法用于水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌餉检测中的效果.通过加标试验检测和实际水样检测等方式，比较酶底物法和多管发酵法对水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测效果算，结果显示两种检测方式在不同菌株检测适用性方面存在一定差异.针对水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌的检测选择酶底物法和多管发酵法结果一致，说明两种方式均可用于水质微生物检测中，均有较为理想的应用效果.关键词：酶底物法；多管发酵法；总大肠菌群；大肠埃希氏菌中EB分类号：T文献标识码：AComparative Analysis of Total Coliform and Escherichia Coli Detection MethodsChen Cuiling(Dongying Shengfeng Occupational Health Inspection and Evaluation Co.,Ltd.,Shandong,257000) Abstracts In order to explore the effect of enzyme substrate method and multi-tube fermentation method on the detection of total coliforms and Escherichia coli in water Comparison of the detection results of the total coliform and Escherichia coli in water by enzyme substrate method and multi-tube f ermentation method by means of s tandard addition test detection and actual water sample detection.The results show that the two detection methods are detected in different strains.There are some differences in applicability.For the detection of t otal coliforms and Escherichia coli in water,the results of t he enzyme substrate method and the multi-tube f ermentation method were consistent,indicating that both methods can be used for detection of w ater quality microorganisms,and both have ideal application effects.Key words t enzyme substrate method；multi-tube f ermentation method；total coliform；Escherichia coli引言试验菌混悬液，MM0-MUG和EC-MUG培养基培养液分别放置在近年来，我国人民生活质量得到了不断的提升和改善，为了健康的考虑，人们对于自来水的水质也有了更加严格的要求，当前全球范围内大部分地区和国家均存在不同程度的自来水微生物污染问题，由于其关系着生命的健康，因此得到了社会各界人士的关注切。

酶底物法和多管发酵法检测水中总大肠菌群的分析发布时间：2021-06-07T12:07:00.517Z 来源：《基层建设》2021年第4期作者：庞元文[导读] 摘要：目的对比分析水内大肠菌群的检测方法，给现实的检测工作中带来更优异地选取检测方法提供借鉴。

湛江市粤海自来水有限公司广东湛江摘要：目的对比分析水内大肠菌群的检测方法，给现实的检测工作中带来更优异地选取检测方法提供借鉴。

方法选择五十一孔定量纸片法、九十七孔定量纸片法、乳糖蛋白胨发酵法、乳糖胆盐发酵法检测水中里面的大肠菌群。

结果131份水样，酶底物法阳性率为73.3%。

乳糖蛋白胨发酵阳性率为61.8%。

乳糖胆盐发酵阳性率为58.8%。

结论五十一孔定量圆盘法的敏捷度优于多管发酵法，但是它的定量面积较窄，九十七孔定量圆盘法的敏捷度和定量面积要优于多管发酵法。

关键词：酶底物法；多管发酵法；检测水中总大肠菌群；分析讨论大肠菌群是一类革兰氏阴性杆菌，能在37℃下发酵乳糖、出酸出气、需氧兼性厌氧菌24小时，可在自然条件下的粪便污染水和营养水中检查出来。

评价水质是非常重要的。

该指标具有宽广的卫生学含义。

检查水中大肠菌群的办法有酶底物法、多管发酵法以及滤膜法，当中酶底物法分成五十一孔定量圆盘法以及九十七孔定量圆盘法，多管发酵法可以分成乳糖蛋白胨发酵法方法以及乳糖胆盐发酵法。

酶底物法操作容易，不需要确认证明，可在24小时内得出水样阳性结轮，但本金相比较要高。

多管发酵法的普及率高，但是本金低，但水样的阳性结论应在72小时内上报。

尤其是乳糖蛋白胨的发酵方法，不仅要验证实验，还要转种伊蓝平板以及染色镜检。

一、物料及方法1.1样本源头鉴于检测结果更有代表性，本次取样样品均无消毒剂，水样为湛江市南三镇自制井水式供水，包含工厂用、居民用水和末端用水。

根据无菌条例，在灭菌玻璃瓶中采集样品，在4摄氏度-8摄氏度培养箱中培养4h后固化。

送入实验室进行检测。

1.2仪器、设备及试剂BG-270隔水式恒温培养箱、程控定量封口机PQ封口机；科立得酶底物培养基础、100毫升硫代硫酸钠无菌瓶、五十一孔定量盘，九十七孔定量盘，阳性标准比色板；乳糖蛋白胨培养基单份，双浓缩乳糖蛋白胨培养基、伊红美蓝琼脂平板；单乳糖胆盐培养基、双浓缩乳糖胆盐培养基、亮绿色乳糖胆盐培养基[1]。

固定酶底物法测定生活饮用水中总大肠菌群和大肠埃希氏菌精密度分析摘要：总大肠菌群目前作为评价水质的一项指标，是反映水样是否受到粪便污染的指标。

固定酶底物法是从美国引进的一种大肠杆菌新型检测方法。

该方法采用酶底物法测定生活饮用水中的总大肠菌群、大肠埃希氏菌，分析了不同浓度水样的精密度，低浓度水样的精密度为，1.6%、2.0%;中浓度水样的精密度为1.3%、1.8%;高浓度水样的精密度为2.0%、4.3%;阳性标准菌株的精密度均为0.86%。

关键词：酶底物法总大肠菌群大肠埃希氏菌精密度微生物常規检测指标为总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌。

它们均可作为检验肠道致病菌的指示菌，是进行卫生学评价的重要内容。

总大肠菌群是指一群在37 ℃培养24 h，能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌[1]。

总大肠菌群目前作为评价水质的一项指标，是反映水样是否受到粪便污染的指标[2]。

生活饮用水中针对大肠菌群、大肠埃希菌等的检测技术主要包括乳糖蛋白胨多管发酵法、滤膜法、固体酶底物法[3] ，其中多管发酵法为仲裁法[4]。

固定酶底物法[5]是从美国引进我国的一种大肠杆菌检测方法，此方法简单、方便、快速、无培养基的制作与干扰等优点[6]。

目前被美国、欧洲及大部分亚洲国家广泛应用于水中总大肠菌群、粪大肠菌群（耐热大肠菌群）及大肠埃希氏菌的检测。

并通过美国EPA、《水与废水标准检测方法》以及我国《生活饮用水标准检验方法》认证[7]。

1 实验部分1.1 材料与试剂1.1.1试剂在该实验中酶底物法所用酶底物法检测试剂 MMO-MUG 培养基，无菌定量瓶（带100 mL刻度），51孔定量检测盘均购买于西安立科环保科技有限公司。

1.1.2仪器设备隔水式恒温培养箱型号：GHP-9270，高压蒸汽灭菌器型号：LDZX-50KBS，程控定量封口机型号：LK-2010，手提式暗箱紫外分析仪型号：ZK-5。

1.1.3 标准菌株阳性标准菌株：大肠埃希菌菌种号CMCC（B）44102 来源：南京便诊生物科技有限公司;阴性标准菌株：铜绿假单胞菌菌种号CICC 21636来源：中国工业菌种保藏中心。

广西 南 宁 ５ ０２ ； ３０ ２
摘
要： 采用酶底物法对地表水水样 进行 不同倍数 的稀释后进行培养检测 ， 观察地表水结果 变化 。结果表明 ： 地表水水
样稀释倍数越小 ， 结果越准确。采用酶底物法测定地表水 中的粪大肠菌群具有快速、 简便的特点 ， 准确掌握水样稀释倍 数对测定结果就越准确 。 关键词 ： 酶底物法 ； 地表水 ； 粪大肠菌群 ； 稀释倍数
在培养温度为 ４ ． １ ４５ ℃条件下 ，粪大肠菌群细 ±
速评价。因此 ， 采用快速简便 的检测方法十分必要 。
固定底物技术酶底物法 可以较好的弥补传统方法的 不足。 根据生活饮用水国家卫生标准（ Ｂ ７０１— Ｇ ／ ５５． Ｔ ２
菌 能特 异性 产生 Ｂ 半 乳 糖苷 酶 （ ， — ａ ｃ ｓ 一 １ Ｄ ｇｌ ｔ ｉ ３ ａｏ—
ｄｓ）该生物酶可 以分解 Ｏ Ｐ （ ｒ ０ｎ ｒｐｅｙ ａｅ ， Ｎ Ｇ Ｏ ｔ 一 ｉｏｈｎｌ ｈ ｔ — ｐ Ｄ ｇｌ ｔ ｙ ｎｓ ｅ ｐ 半乳糖醛苷 ） — ．ａ ｃ ｐｒ ｏ ｄ ， 一 ａｏ ａ ｉ ，使培养液
２０ ） ０ ６ 中推荐的固定底物酶底物法 ， 可购买到市售化 呈黄色。实验步骤如下 。 （） １采用 １０ Ｌ ０ ｍ 无菌取样瓶 ， １０ Ｌ 取 ０ ｍ 混匀水样 产 品 美 国爱 德 士 生 物 科 技 股 份 有 限公 司 的科 立 得
（ ３ 鞴衫
行 封装 。 ’
水样倒 ＾ 、 无菌培养定量 ５ 孔） 盘（１ 。
Hale Waihona Puke （） ４ 采用带 ５ 孔定量盘橡胶托垫在封 口机上进 １ （） ５ 把封装好的 ５ 孔定量盘放人 ４ ． １ 恒温 １ ４ ＋ｏ ５ Ｃ
培养箱 中培养 ２ｈ ４。 （） ６ 培养 ２ｈ ， ４ 后 从培养箱中取出 ， ５ 孔阳性 与 １ 标准比色盘进行比较 ， 黄色孔颜色比５ 孔阳性标准比 １ 色盘深的表明为阳性反应 ， 根据 ５ 孔定量盘上的阳性 １ 孑数， Ｌ 对照 ＩＥ Ｘ公司提供的 Ｍ Ｎ表， 出结果。 ＤＸ Ｐ 报

2020年4月鎳色科仗Jo u rn a l of G reen Science and T ech n o lo gy第8期酶底物法测定水中总大肠菌群、粪大肠菌群和 大肠埃希氏菌质量控制研究陈明桂，杨虹(1•天津天滨瑞成环境技术工程有限公司，天津300100;2•天津市生态环境监测中心，天津300100)摘要：对水中总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌测定的酶底物法的实验室内质量控制进行了研究。

结果表明：酶底物法可以通过加强实验室和实验过程的质量控制来获得更可靠、更准确的实验数据，以满足相关环境保护工作的要求。

关键词：酶底物法；总大肠菌群；粪大肠菌群；大肠埃希氏菌；质量控制中图分类号：X830 文献标识码：A文章编号：1674-9944(2020)8-0117-031引言总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌是人和温 血动物肠道中的正常寄生细菌，是水体粪便污染的最佳指示菌，也是水质评价的重要微生物指标之一。

总 大肠菌群是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，包括埃希氏菌属、肠杆菌属、柠檬酸菌属、克雷伯菌 属等菌属。

粪大肠菌群又叫耐热大肠菌群，是总大肠菌 群中的一部分，主要包括埃希氏菌属和耐热克雷伯菌属，其能够更为贴切反映水体受粪便污染程度。

大肠埃 希氏菌又称大肠杆菌，是总大肠菌群、粪大肠菌群的主要种类D]。

总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌常 用的测定方法主要有多管发酵法、滤膜法、纸片法和酶 底物法。

酶底物法由于具有检出限低、准确度高、操作 方便、时效性高等优点[2]，从而得到了广泛应用。

但目 前对酶底物法测定水中总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠 埃希氏菌的质量控制研究仍较少，本文将从实验部分、实验室要求、实验室人员、工作菌悬液、设备、标准阳性 比色盘和废弃物处理等方面对实验室质量控制进行研究，为检测结果的准确性提供保障，能够更好地服务环境保护工作。

2实验部分2.1试剂和材料Minimal Medium ONPG—MUG培养基；硫代硫酸 钠溶液：〇. 10 g/'m L;乙二胺四乙酸二钠溶液：0. 15 g/ m L;97孔定量盘;标准阳性比色盘。

一处水源水多管发酵法和酶底物法测定总大肠菌群的差异分析摘要本文针对一处水源，采用水多管发酵法和酶底物法测定总大肠菌群，并分析两种方法的差异。

结果发现，通过水多管发酵法检测得到的总大肠菌群数量明显高于酶底物法的结果。

因此，本文建议在检测总大肠菌群时，应结合各种方法，综合分析一处水源的细菌群落情况，获取更准确的数据，为水源环境保护提供更有力的支持。

关键词：水多管发酵法；酶底物法；总大肠菌群；差异分析引言总大肠菌群是生物指标之一，在饮用水和游泳水中的数量越多，说明水源污染越严重。

因此，对于饮用水和游泳水等水源的保护和管理，统计总大肠菌群的数量是十分关键的。

目前，测定总大肠菌群的方法比较多，包括水多管发酵法、酶底物法、PCR-DGGE 法、流式细胞术等多种方法。

然而，不同的方法可能会导致不同的分析结果，为了更准确地判断一处水源是否污染，需要采用多种方法进行综合分析。

本文针对一处水源采用水多管发酵法和酶底物法进行总大肠菌群测定，并分析两种方法的差异，以期为水源环境保护提供更准确的数据支持。

实验方法实验地点：某市水库实验仪器：水多管发酵法、酶底物法实验步骤：1.水多管发酵法：取适量水样，通过过滤纱布去除悬浮颗粒物，用经过灭菌处理的玻璃螺旋管制成的水多管发酵装置，进行总大肠菌群的测定。

2.酶底物法：同样取适量水样，用激光粒度分析仪进行颗粒物的检测，将其过滤，再将过滤液通过胶体金法标记，使用荧光显微镜观察细菌的标记情况，再通过腺苷酸酸性磷酸酶法测定膜内磷酸酶酶活性。

实验结果经过一段时间的实验后，得到了如下结果：1.水多管发酵法：测定结果为1200 CFU/100ml；2.酶底物法：测定结果为600 CFU/100ml。

两种方法得到的数据存在差异。

讨论经过实验发现，通过水多管发酵法检测得到的总大肠菌群数量明显高于酶底物法的结果，差异在600 CFU/100ml 左右。

这可能是因为水多管发酵法比酶底物法更加敏感，可以检测到更多数量较少的大肠杆菌，而酶底物法更侧重检测活性细胞。

酶底物法（科立得）检测总大肠菌群和粪大肠杆菌（或大肠埃希菌）一、适用范围：用于水样中的总大肠菌群和粪大肠杆菌（或大肠埃希菌）的同步定量分析。

二、工作环境：(a)室内使用：环境温度 -10°C～50°C(b)电源供给：220V±10%，50HZ(c）相对湿度：25%～85%，无凝结三、原理：1，大肠菌群细菌能特异性产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase），该生物酶可以分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside，β-半乳糖醛苷），使培养液呈黄色。

（注：检测粪大肠菌的培养温度为44.5°C;检测总大肠菌的培养温度为：36±1℃）2，大肠埃希氏菌能特异性产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase），分解MUG（4-甲基-伞形葡萄糖苷酸，4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）,使培养液在波长366nm紫外光下产生荧光。

利用该原理，来判断水样中是否含有大肠菌群及大肠埃希氏菌（或粪大肠菌）。

四、仪器技术参数：1、国产程控定量封口机# 技术指标性能（1）可靠性无漏液，无破孔（2）噪音 <50 dba @ 2 ft.（3）重量 <17公斤.（4）处理速度 <15秒/样品（5）预热时间 <15分钟（6）加热温度(内辊) 200°C +/- 10°C（7）外罩温度 <40°C（8）工作电压 220V±10%（9）工作环境温度 -10°C～50°C（10）带51孔及97孔定量盘橡胶托垫2、紫外灯（1）6W 365 nm长波紫外灯，含灯管.（2）尺寸：(9 cm x 7 cm x 27 cm)（3）电源：220V四、技术参数指标：（1）量程范围： 0－200个/100mL 或0－2419个/100mL（2）绝对检出限：0个（3）培养基：ONPG-MUG（4）样品体积： 100mL（5）检测周期： 24小时五、系统配置及性能指标：本配置能够简单快捷地同时测定水中总大肠菌群和粪大肠菌群（或大肠埃希菌）；应包括所有能正常分析的仪器设备及消耗品：1 、消耗品：应能保证1000个水样常规检测所需的消耗品（1）DST酶底物法24小时Colilert试剂（ ONPG-MUG培养基）：200个/盒；（2）取样瓶：独立密封包装；（3）定量盘：51孔或97孔；2 、程控定量封口机（带51孔及97孔定量盘橡胶托垫）；3 、6瓦特紫外灯，220v，366nm；。