类风湿因子RF测定胶乳凝集法-检验科免疫室作业指导书

类风湿因子（RF）测定一、用途体外定量测定血清样品中类风湿因子（RF）的含量。

二、临床意义（一）概述类风湿因子是机体针对天然及变性或凝集的免疫球蛋白Fc部分所产生的一组异常免疫球蛋白的总称。

因为首先在类风湿性关节炎患者的血清中发现，故称之为类风湿因子。

（二）临床意义1.类风湿性关节炎：RF阳性率为52%〜92%,多在70%〜80%左右。

特异性88.5%左右。

RF阳性者疗效差且多有并发症（如周围神经炎及动脉炎等）。

RF阴性表示病症较轻，且并发症少，疗效好。

持续高滴度RF常提示RA疾病活动，且骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等全身并发症，提示预后不佳。

区尸主要出现在类风湿性关节炎患者，约70%〜90%的血清中和约60%的滑漠液中可检出IgG类RF,这很可能是自身IgG变性所引起的一种自身免疫应答的表现。

作为类风湿的诊断，对于稀释度的注意非常重要，一般1:32以上才有价值。

但RF也象ANA一样，并不是RA独有的特异性抗体。

2.正常人：阳性率为2〜5%,随年龄增长有增高趋势。

5%正常老年人可出现阳性。

75岁以上阳性率为2%〜25%。

3.自身免疫性疾病：阳性率：SLE(30%)、I°SS(70%〜90%)、SSc(20%〜30%)、PM/DM(5%〜10%)、MCTD(50%〜60%)、IgA肾病(25%〜40%)、恶性贫血为80%，自身免疫性溶血性贫血为75%，慢活肝为60%。

阴性：人$、赖特综合征、。

八、银屑病关节炎、肠病性关节炎。

4.其他：慢性感染性疾病：亚急性细菌性心内膜炎、结核、麻风、梅毒、黑热病、传染性肝炎、血吸虫病等。

非感染性疾病：弥漫性肺间质纤维化、肝硬化、慢性活动性肝炎、结节病、巨球蛋白血症等。

三、检验原理类风湿因子是一种发生于类风湿性关节炎患者体内的抗人变性片6自身抗体。

采用微粒子增强免疫比浊法。

样品中抗人变性IgG自身抗体与包被有人Y-球蛋白的胶乳微粒在液相中相遇，立即形成不溶性抗原-抗体复合物，并产生一定的浊度。

类风湿因子(RF)测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）说明书【产品名称】类风湿因子(RF)测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）【包装规格】a)试剂1：1×20mL试剂2：1×5mLb)试剂1：2×40mL试剂2：1×20mLc)试剂1：4×60mL试剂2：2×30mLd)试剂1：2×80mL试剂2：2×20mL【预期用途】用于体外定量测定人血清中类风湿因子的含量。

类风湿因子的检测可以作为类风湿性关节炎的诊断依据，也可作为病情进展的指标。

另外有助于诊断系统性红斑狼疮、慢性肝炎等。

测定类风湿因子常用于类风湿性关节炎的辅助诊断依据[1]。

【检验原理】类风湿因子是和人IgG的Fc片段起免疫反应。

用人IgG包被胶乳微粒和样本中RF发生免疫反应，引起微粒凝聚，致使浊度增加，其增加的程度与RF的含量成正相关。

【主要组成成分】试剂1主要组分三羟甲基氨基甲烷缓冲液18.5mmol/L 聚乙二醇（PEG）4% ProClin300适量试剂2主要组分三羟甲基氨基甲烷缓冲液18.5mmol/L 抗原致敏胶乳类风湿因子(RF)抗体适量ProClin300适量注：不同批号试剂盒中各组分未经试验不可互换。

【储存条件及有效期】1.试剂原包装在2～8℃储存，有效期为12个月，生产日期、有效期见标签。

2.开口后的试剂在仪器仓中（2～8℃）可稳定30天。

【适用仪器】艾威德AS-420/AS-660/AS-1200；日立HITACHI7020型/7060型/7180型/7600型/LABOSPECT008AS型；贝克曼AU400/AU480/AU640/AU680/ AU2700/AU5400/AU5800/AU5811/AU5821；佳能TBA-FX8/TBA-120FR/ TBA-2000FR；罗氏cobas8000c702/cobas8000c701/cobas8000c502；西门子SIEMENS ADVIA1800/ADVIA2400；雅培ABBOTT ARCHITECT c8000/ARCHITECT c16000/ARCHITECT ci8200；西森美康SYSMEX BM6010/C；科华KHB卓越310/卓越330/卓越400/卓越450/ZY-1200/ ZY-1280；迪瑞CS-240/CS-T300/CS-300B/CS-380/CS-400A/CS-400B/ CS-600A/CS-600B/CS-800A/CS-800B/CS-1200/CS-1200ISE/CS-1300B/ CS-1400；迈瑞MINDRAY BS-220/BS-330/BS-350E/BS-380/BS-390/ BS-400/BS-430/BS-600/BS-800/BS-2000M；颐兰贝ES-200/ES-380/ES-480；赛诺迈德SUNMATIK-9050型；雷杜Chemray420；英诺华D280；特康TC6010L；锦瑞GS400；普康6066。

D二聚体检测（胶乳凝集法）作业指导书1.原理用D-二聚体的单克隆抗体致敏胶乳颗粒，当血浆中D-二聚体浓度升高，胶乳颗粒将发生凝集。

2. 标本采集：2.1 标本采集前病人准备：受检者应空腹。

2.2 标本种类：血浆2.3标本要求：采集静脉血2ml，枸橼酸钠抗凝(蓝色盖子的抗凝管)，分离血浆备用。

3. 标本储存：待测血浆室温下储存不超过4小时，4℃不超过8小时，-20℃不超过一个月。

4. 标本运输：室温运输。

5. 标本拒收标准：凝集、溶血、脂血和细菌污染标本不能作测定。

6. 试剂6.1 试剂名称：D二聚体检测试剂盒6.2 试剂生产厂家：美国Fisher科技有限公司6.3 包装规格：80 Test/kit6.4 试剂组成：6.4.1 致敏胶乳试剂---Latex Reagent6.4.2 阳性对照---Positive Control6.4.3 阴性对照---Negative Control6.4.4 样品稀释液---Saline Solution6.4.5 实验板6.4.6 搅棒6.5 试剂储存条件及有效期：保存于2～8℃，有效期1年。

7. 操作步骤：7.1 定性检测：7.1.1 用前将所有试剂回复至室温。

7.1.2 按下表在实验板#1，#2，#3区域滴加试剂。

7.2.1 用前将所有试剂恢复至室温。

7.2.2 用样品稀释液稀释标本：阴性：呈现圆滑均匀的乳状悬液。

阳性：呈现凝集颗粒。

半定量测定：浓度为出现阳性结果的最高稀释度×0.25µg/ml9. 参考范围：阴性或<0.25µg/ml10. 质量控制：每次试验均应设阴性和阳性对照，其结果应与预期相符。

11. 临床意义：11.1 高凝状态，血栓性疾病和DIC时，血浆D-二聚体明显升高，是诊断DIC的重要依据。

11.2 D-二聚体在继发性纤溶症时升高，而在原发性纤溶症时正常，这是鉴别两者的重要依据。

12. 操作性能：快捷简便、灵敏度0.225µg/ml，重复性好，特异性高。

血清类风湿因子(RF)的检测1.目的规范类风湿因子(RF)检测试验，确保检测结果准确性和重复性。

2．范围本操作规程适用于生化室工作人员、实习人员、进修人员的操作前培训。

3.术语4．测定原理样本中RF与胶乳颗粒超敏化的变性的人IgG抗体反应，出现凝集反应，在波长660nm处检测其吸光度的变化，其变化程度与样本中的RF含量成正比。

5. 标本采集与处理5.1标本类型：标本最好不要溶血。

留取标本后请尽快分离血清/血浆。

5.2标本稳定性：血清标本在2-8℃稳定48天,或-20℃可稳定6个月。

6. 试剂6.1试剂：本科使用金斯尔试剂盒，即用式液体试剂。

试剂内主要成分如下：规格: R1 3×20ml R2 1×20ml6．2试剂准备试剂为液体双试剂，开瓶即可使用。

6．3试剂稳定性原装试剂在2～8℃避光保存，稳定期12个月。

试剂开瓶载机2～8℃稳定28天。

7.仪器参数设定AU2700参数设定：金斯尔试剂仪器参数具体参加试剂厂家提供的相应仪器的参数说明书.8．校准：具体参见临床生化校准程序8.1 校准条件：8.1.1仪器光路系统经过光路保养或更换光源等重要部件后。

8.1.2仪器经过大保养后。

8.1.3挪动仪器的安装地点。

8.1.4更换试剂批号。

8.1.5室内质控失控。

8．2 AU2700金斯尔试剂系统的校准：8.2.1 准备：金斯尔配套校准物.8.2.2 保存和稳定性：原校准品在2～8℃保存至有效期。

8.2.3保存位置：2号冰箱。

8.2.4操作步骤：蓝色样本架的1号位置放蒸馏水；黄色样本架的相应位置放定标液→仪器主画面[USER] →[Calibration] →[选择校准项目]→[START]→[YES]。

9．室内质控及失控纠正：见临床生化室内质控程序9．1质控物来源：柏乐液体质控品(批号:45612/45613)。

9．2质控物储存条件及准备：-15～-20℃保存至有效期，从低温冰箱取出后室温平衡30分钟。

SOP_13-6 手工免疫检验项目标准操作程序一、目的：统一项目操作规程，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。

二、适用范围：免疫学检验项目。

三、操作人员：检验科授权工作人员。

四、项目内容：抗链球菌溶血素“O ”(ASO) 类风湿因子(RF) 梅毒（TP ）抗链球菌溶血素“O ”(ASO)【方法】快速胶乳法。

【用途】血清中ASO 的测定，用于链球菌感染的诊断。

【原理】高滴度的病人血清被适量的溶血素中和了正常水平的抗体后还有多余ASO ，这些多余的抗体即与ASO 胶乳试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。

ASO 胶乳试剂系羚化聚苯乙烯胶乳与溶血素“O ”共价交联的产物。

【试剂】以1g ／L 叠氮钠防腐。

1．溶血素“0”溶液2瓶：每瓶可测定100人次，用时摇匀。

2．ASO 胶乳试剂2瓶：每瓶可测定100人次，用时摇匀。

3．阳性控制血清1瓶：已稀释灭活，可直接使用。

4．阴性控制血清1瓶：已稀释灭活，可直接使用。

【操作】1．血清标本用生理盐水1：15稀释(血清0．1ml+生理盐水1．4m1)。

2．在反应板(和妊娠诊断胶乳试剂使用的相同)各格子上分别滴加稀释待检血清1滴(约50 l)以及阳性和阴性控制血清1滴，再各滴加溶血素“0”溶液1滴，轻轻摇动1分钟，使其充分混匀，均匀分布于方格内。

3．每格各滴加ASO 胶乳试剂1滴，轻轻摇动3分钟(室温为18～20℃)，将反应板平放在实验桌上，有清晰凝集者为阳性，不出现清晰凝集者为阴性，阴性者的ASO ≤250IU ／ml 。

4．阳性者的1：15稀释血清，进一步稀释为1：30和1：60，再重复步骤2和3，出现凝集的血清稀释度和ASO 滴度问的关系大致如下：【附注】1．ASO胶乳加入后，轻轻摇动到本说明指定的时间时应立即记录结果，超过规定时间后再出现的凝集不列为阳性。

阳性控制血清应在本说明指定的时间内出现清晰凝集，但不能将阳性控制血清出现凝集的时间视为判断结果的时间界限。

类风湿因子RF测定1检验目的指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。

2原理RF是针对自身的变性IgG分子结晶片段的一种自身抗体。

本试剂将人微球蛋白胶合于胶乳微粒，与待测样本中的RF 发生免疫反应，引起微粒的凝集，导致反应体系浊度增加，该浊度的高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比。

与通过同样处理的标准液比较，即可计算出样本中的RF。

3标本要求3.1使用新鲜血清,不使用血浆.3.2在采集血液后2h分离血清.3.38h内不能及时测定血清可存放于2-80C冰箱保存,3天后测定的血清置-150C―-200C 冰冻保存,但冰冻血清只能复融一次.3.4严重溶血或脂血的标本不能作测定.4试剂4.1试剂：本科使用浙江伊利康生物技术限公司的试剂盒. （浙食药监械（准）字2014第2400384号YZB/浙2314-40-2014）4.1.1试剂盒组成如下:R1三羟甲基氨基缓冲液：20mmol/L叠氮钠：0.95g/LR2：类风湿因子致敏胶乳液：适量叠氮钠：0.95g/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

4.1.3 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。

4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

4.1.5 注意事项：试剂中含有稳定剂，可能存在一定的刺激作用和毒性，请勿直接接触皮肤及眼睛。

一旦接触，即用大量清水冲洗。

请勿吞服。

4.2 校准品：使用浙江伊利康生物技术限公司提供的RF校准品对自动分析仪进行校准。

4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。

5 仪器AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。

6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。

类风湿因子(RF)测定试剂盒(胶乳凝集法)类风湿因子检测试剂盒(乳胶凝集法)[产品名称]通用名称:类风湿因子检测试剂盒(乳胶凝集法)商品名:类风湿因子检测试剂盒(乳胶凝集法)英文名称:类风湿因子试剂盒(玻片乳胶凝集法)[包装规范]每个包装箱为5毫升；胶水乳液；阳性对照0.5毫升；；阴性对照0.5毫升[临床意义]用于定性或半定量测定血清中的射频，用于辅助诊断。

[试验原理]该试剂胶乳是由纯化的人IgG和羧基化聚苯乙烯胶乳共价交联形成的抗原胶乳乳液射频乳胶的灵敏度调整到XXXX年。

[适用仪器]手动操作[样品要求]通过离心获得新鲜血清样品，并在2-8℃下储存48小时。

如果时间太长，必须冷冻保存。

[试验方法]定性实验:试剂在使用前预设为室温；轻轻混合乳胶试剂；检查阴性和阳性对照；向反应板孔中加入一滴未稀释的血清(20微升)。

然后在血清中加入一滴乳胶试剂。

搅拌均匀，轻轻摇动使其充分混合，2分钟后观察结果。

半定量实验:血清用生理盐水稀释(0.9g氯化钠溶于蒸馏水中，稀释至100ml)倍，可按以下方法操作稀释释放时间1: 2 1: 4 1: 8 1: 16青雪100μl生理盐水100μl 100μl 100μl→100μl→100μl→100μl→100μl标准量为20μ l 20μ l 20μ l在样品中未发现判断RF [试验方法的局限性]本试剂适用于人体内类风湿因子含量的定性和半定量检测。

如果需要定量检测，可以使用类风湿因子定量试剂[产品性能指数]1，灵敏度:20IU/ml阳性2.可测范围:20-60IU/ml[预防措施]1，添加试剂以及阴性和阳性质控品，以确保液滴大小一致2.如果阴阳控制结果异常，则不能使用该试剂。

3.该试剂样品中血清的样品量为20 μ L。

阴阳对照的样品量为对照瓶中的一滴(约50μl)。

4.试剂盒应储存在2-10℃的环境中。

加热会导致试剂的高阳性率。

不要冷冻它5年，阴和阳质控品的乙型肝炎表面抗原、丙型肝炎病毒和艾滋病毒检测结果为阴性，但它们仍需要像患者样本一样小心处理[参考。

类风湿因子RF测定胶乳凝集法原理RF是一种主要发生于类风湿性关节炎患者体内的抗人变性IgG抗体，可与IgG的Fc段结合。

将变性IgG包被于聚乙苯烯胶乳颗粒上，此致敏胶乳在与待测血清中的RF相遇时,即发生肉眼可见的凝集。

标本采集2.1采集前病人准备：受检者应空腹2.2标本种类：血清2.3标本要求：采集病人静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。

标本储存：2-8°C保存不应超过24小时，-20°C不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。

标本运输：密封，室温运输。

标本拒收标准：污染、标本量不足、脂血或严重溶血标本不宜作此项检测。

试剂6.1试剂名称：类风湿因子测定试剂6.2试剂生产厂家：西班牙BioSystemsS.A.6.3包装规格：60Test/Kit6.4试剂盒组成：RF胶乳悬液，阳性对照血清，阴性对照血清。

6.5试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。

操作步骤7.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C）。

7.2分别吸取50μl阳性对照和阴性对照血清均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。

7.3吸取50μl待测血清均匀铺加在纸卡的另一圆圈中。

7.4加胶乳试剂50μl于上述血清中。

7.5处分混匀后立即摇动反应板，2分钟内于直射阳光下观察。

结果判断：出现明显凝集者为阳性。

质量控制：每次测定均做阴阳对照，阴性对照不出现凝集物，阳性对照出现明显凝集。

10.参考范围：阴性11.临床意义：RF是一种以变性IgG为靶抗原的自身抗体。

RF阳性常见于类风湿关节炎患者和自身免疫性疾病患者。

少数健康人也会出现阳性结果。

12.操作性能：灵敏度、特异性高。

13.方法局限性：检测出的RF主要为IgM类。

14.注意事项14.1试剂的使用：在大于10°C室温条件下进行；使用前必需充分混匀。

14.2应在2分钟内判读结果。

14.3必要时阳性标本可进一步作对倍稀释，测定RF滴度。