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单克隆抗体的制备及应用单克隆抗体是由淋巴细胞杂交瘤产生的、只针对复合抗原分子上某一单个抗原决定簇。
单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique)：一种免疫学技术，将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交，获得既能产生抗体，又能无限增殖的杂种细胞，并以此生产抗体。
是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体，对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。
1 单克隆抗体的优点与局限性：1.1 单克隆抗体的优点：(1)杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断地生产高特异性、高均一性的抗体。
(2)可以用相对不纯的抗原，获得大量高度特异的、均一的抗体。
(3)由于可能得到“无限量”的均一性抗体，所以适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法，如IRMA和ELISA等。
(4)由于单克隆抗体的高特异性和单一生物学功能，可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗。
总体来说，即：高特异性、高纯度、重复性好、敏感性强、成本低和可大量生产等。
1.2 单克隆抗体的局限性：(1)单克隆抗体固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围。
由于单克隆抗体不能进行沉淀和凝集反应，所以很多检测方法不能用单克隆抗体完成。
(2)单克隆抗体的反应强度不如多克隆抗体。
(3)制备技术复杂，而且费时费工，所以单克隆抗体的价格也较高。
2 单克隆抗体的制备：单克隆抗体的制备原理：应用细胞杂交技术使骨髓瘤细胞与免疫的淋巴细胞二者合二为一，得到杂种的骨髓瘤细胞。
这种杂种细胞继承两种亲代细胞的特性，它既具有B淋巴细胞合成专一抗体的特性，也有骨髓瘤细胞能在体外培养增殖永存的特性，用这种来源于单个融合细胞培养增殖的细胞群，可制备抗一种抗原决定簇的特异单克隆抗体。
单克隆抗体的制备过程：抗原准备、动物的选择与免疫、细胞融合、选择杂交瘤细胞及抗体检测、杂交瘤的克隆化、杂交瘤细胞的冻存与复苏、单克隆抗体的纯化等步骤。
D二聚体的检测方法和临床应用二聚体是指由两个相同或不同的分子通过非共价键（如氢键、范德华力等）结合而形成的复合物。
在生物学中，二聚体广泛存在于蛋白质和其他生物大分子中，具有重要的结构和功能特性。
常用的二聚体检测方法主要包括生物物理学方法、生物化学方法和生物学方法。
下面将详细介绍这些方法及其临床应用。
一、生物物理学方法1.X射线晶体学：通过晶体学方法可以解析蛋白质的三维结构，从而确定其是否形成二聚体。
这种方法通常需要纯化蛋白质并生长合适的晶体，然后利用X射线进行结构解析。
X射线晶体学方法在发现和研究二聚体相关的蛋白质结构中具有重要作用。
2.核磁共振(NMR)：NMR方法利用核磁共振现象对样品进行谱学分析，可以获得蛋白质高分辨率的三维结构信息。
通过对蛋白质NMR谱图的分析，可以确定蛋白质是否为二聚体。
二、生物化学方法1.凝胶过滤色谱：凝胶过滤色谱是常用的二聚体检测方法之一、通过调整凝胶孔径大小，可以将不同大小的蛋白质分离开来。
如果目标蛋白质是二聚体结构，则它将形成相对较大的峰，可以通过检测这些峰来确定是否为二聚体。
2.蛋白质交联：蛋白质交联是利用交联剂将蛋白质分子中的两个或多个结合位点连接起来，从而形成二聚体或多聚体。
通过蛋白质交联反应可以直接观察到蛋白质是否发生了二聚化。
三、生物学方法1.免疫共沉淀：免疫共沉淀是通过抗体特异性地与目标蛋白质结合，然后利用沉淀方法从混合物中沉淀出来。
如果目标蛋白质是二聚体结构，可以通过与其相互作用的蛋白质一起被沉淀下来，从而证明其为二聚体。
2.双杂交法：双杂交法是一种通过蛋白质-蛋白质相互作用来检测蛋白质二聚体的方法。
该方法通过将目标蛋白质与一个报告基因（如荧光素酶）的两个部分连接起来，当与蛋白质相互作用时，可以观察到荧光素酶活性的改变。
这种方法常用于筛选新的蛋白质二聚体对。
在临床应用方面，二聚体检测方法有着广泛的应用。
二聚体在许多疾病的发生和发展中起着重要的作用，因此对二聚体的检测对临床诊断和治疗具有重要的价值。
D-二聚体（D-Dimer）测定标准操作规程1检验原理：本试剂采用单克隆抗体和乳胶增强免疫比浊法测定人血浆中D －二聚体的含量。
血浆中的D-D抗原与试剂中相应抗体在液相中结合，形成抗原抗体复合物，产生浊度变化，乳胶试剂可以特异的增大该浊度变化，增大试剂的灵敏度。
该浊度变化的高低与样本中D-D的含量成正比。
测定该浊度，与标准血浆比较，即能得出样本血浆中D-D含量。
2.试剂主要组成成分：R1:PBS缓冲液、表面活性剂R2:PBS缓冲液、表面活性剂、鼠抗人D-D的致敏乳胶颗粒悬液。
3.样本要求：采集静脉血，置于含有1/10体积0.109mol/L枸橼酸钠采血管中，通过离心管收集上层血浆，应避免溶血；当天采集当天测试，如当天采集样本不能及时测定应保存于-20℃（建议1个月内使用），测定前37摄氏度快速融化，切忌反复冻融。
4.检验方法：全自动血凝分析仪测定（详见雷杜RAC-1830标准操作规程）5.参考区间：0-0.5mg/L6.检验结果的解释：专业人员负责检验结果的审核。
检验结果的分析，受年龄、性别、饮食、地域影响，通常在参考区间内认为正常，如超出范围，应重新测定进行确认。
检测结果仅反应采样当时状态，需临床医生结合临床及其他检测指标进行相关判断。
检查结果如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析查找原因。
7.检验方法的局限性7.1本试剂线性范围为0.2—20mg/mL(37℃)，超出线性范围的样本应用生理盐水稀释后重测。
7.2本法受许多测试前因素的影响，包括样本采集及保存、技术人员熟练程度、感染物质等，因此必须严格控制这些因素。
8.产品性能指标：8.1线性范围：在0.2—20.00mg/mL（37℃）范围，相关系数（r）应≧0.9908.2重复性：CV≦10%8.3批间差：≦15%。
8.4准确度：相对偏差不超过±15%9.4临床意义DIC时，血浆D－二聚体明显升高，呈阳性反应，是诊断DIC的重要依据.D －二聚体在原发性纤溶症时正常，继发性纤溶亢进则显著增高，是二者鉴别的重要指标，此外，各型白血病，急性心肌梗死、脑血管疾病、肺脏疾病、外科手术等均可见血浆D－二聚体水平增高。
免疫比浊法和免疫荧光定量法测定D—二聚体的研究比较作者：卢俊婉程聪来源：《中国保健营养·中旬刊》2013年第10期【摘要】探讨免疫比浊法和免疫荧光定量法测定D-二聚体的可行性以及在临床的应用价值。
在STAGO血凝分析仪上采用免疫比浊法测定D-二聚体，在美国博适Triage检测仪上采用免疫荧光定量法测定D-二聚体，对两种不同方法测定D-二聚体进行比较。
试验数据表明：免疫比浊法测定D-二聚体的重复性好于免疫荧光定量法；两种方法测定D-二聚体在线性范围、灵敏度、抗干扰能力接近，试剂稳定性均能保存一年；美国博适Triage检测仪的免疫荧光定量法使用方便，是一种准确、简捷的测定方法，适用于临床的急诊心肺功能五联检验；STAGO血凝分析仪的免疫比浊法定量检测D-二聚体含量方便、快捷，敏感性高，易在大多数医院普遍推广【关键词】二聚体；血栓形成；免疫荧光定量法【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）10—0074—02D-二聚体（D-Dimer，D-D）是纤维蛋白单体经活化因子XIII交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，是一个特异性的纤溶过程标记物。
只要机体血管内有活化的血栓形成及纤维溶解活动，D-二聚体就会升高。
其对静脉血栓形成高度敏感，在排除静脉血栓形成的诊断中具有极其重要的价值。
另外，D-D在心血管疾病、DIC、恶性肿瘤等疾病也有明显变化，足反映疾病严重程度、发展变化、以及疗效和预后的有用指标[1-2]在全血或血浆中，利用D-D的抗体可以很容易的检测到D-D含量。
已建立了多种有价值的D-D的检测方法[3]。
但临床上迫切需要一种取样简单、操作方便、时间节约、结果准确的D-D测定方法。
其中临床实验室常规检测方法是免疫比浊法。
笔者采用丽水中心医院检验科2种测定D-D的方法并加以对照分析，为临床采用正确的D-D检测方法提供依据，现报告如下。
1 材料与方法1.1 标本：样本来源于丽水中心医院门诊患者和病房患者2012年6月至12月收集的80例血清标本（其中无溶血、黄疸、乳糜的正常人血浆60例，无溶血、黄疸、乳糜的D-二聚体高值血20例，浓度在8～16μg/mL之间）。
d2聚体定量D2聚体定量是一种用于定量表征蛋白质聚集状态的方法，该方法主要基于差示扫描量热法（Differential Scanning Calorimetry，DSC）和荧光共振能量转移技术（Fluorescence Resonance Energy Transfer，FRET）。
此文将着重阐述D2聚体定量方法及其在蛋白质学研究领域中的应用。
1.D2聚体定量原理D2聚体定量的原理可以用如下图所示来描述：首先将需要研究的蛋白质样品经过高压下冷却，使其形成原初的单体状态。
然后将样品加热，当温度达到一定值时，样品中的聚体开始分解，随着温度的升高，单体不断分解，直到最后形成所有单体的状态。
这一过程中，样品中的热量变化会被DSC仪器监测到，因此可以通过绘制出热量变化随温度的曲线（称为DSC曲线），来判断样品中聚体分解的状态。
而荧光共振能量转移技术是通过在蛋白质分子中构造荧光探针来实现的。
具体地，将一个荧光标记放置在蛋白质的一个位置，同时在另一个位置放置一个荧光标记，这两个标记中心之间距离越近，荧光共振越强；反之，距离越远，共振越弱。
因此，在分析蛋白质的聚集状态时，可以根据共振能量转移的强度和距离之间的关系来推断蛋白质分子中的聚体状态。
2.D2聚体定量的应用D2聚体定量的应用非常广泛，其中最常见的应用是在药物研发领域。
人们常常使用D2聚体定量来研究药物的药效，因为药物分子的聚集状态往往会影响药物的药效。
例如，一些药物的分子结构与天然物质相似，它们往往将会在体内聚集成大颗粒，这会导致药物不能在体内充分发挥药效。
因此，如果研究者能够在药物开发和优化的过程中了解药物的聚合行为，就可以解决这个问题。
此外，D2聚体定量还可以用于研究蛋白质的聚集行为。
当蛋白质在体内受到多种不同信号的刺激时，往往会发生聚集。
例如，一些神经退化性疾病的发生与脑中一些特定的蛋白质的聚集有关。
因此，通过研究这些蛋白质的聚集机制，就可以更好地理解和治疗这些疾病。
D二聚体的检测及临床意义1.检测原理概述D-二聚体是交联纤维蛋白在纤溶酶作用下的特异性降解产物，它的存在反映了体内纤维蛋白的溶解活性，是体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物之一。
检测D-二聚体的原理主要基于其抗原-抗体反应，利用特异性抗体与血浆中的D-二聚体结合，形成免疫复合物，进而通过比色法、免疫比浊法或荧光免疫法等手段进行定量或定性分析。
2.检测方法介绍目前，D-二聚体的检测方法主要有以下几种：免疫比浊法：最常用方法之一，通过检测反应体系中浊度的变化来推算D-二聚体的浓度，具有操作简便、快速、灵敏度高、重复性好等优点。
乳胶凝集法：利用乳胶颗粒与D-二聚体特异性抗体结合后发生凝集反应，通过观察凝集程度来判断D-二聚体的存在与否，适用于快速筛查。
ELISA（酶酶联免疫吸附试验）：高灵敏度、高特异性的检测方法，通过酶促反应放大信号，定量检测D-二聚体浓度，适用于科研及特定临床需求。
3.正常参考值范围D-二聚体的正常参考值范围因检测方法、实验室条件及人群差异而略有不同，一般健康人群的血浆D-二聚体浓度小于0.5mg/L（酶具体 值需参照各实验室标准）。
老年人、孕妇等特殊人群的正常范围可能会有所调整。
4.临床应用领域D-二聚体检测广泛应用于多个临床领域，包括但不限于：血栓性疾病：如深静脉血栓、肺栓塞、心肌梗死等疾病的辅助诊断。
弥散性血管内凝血酶DIC）：早期识别与病情监测。
妊娠并发症：如先兆子痫、胎盘早剥等风险的评估。
溶栓治疗监测：评估溶栓药物的效果及安全性。
5.（疾病诊断价值D-二聚体升高往往提示体内存在继发性纤溶亢进，对于上述疾病，尤其是血栓性疾病的诊断具有重要参考价值。
但其特异性不高，需结合临床症状、体征及其他检查综合判断。
6.（治疗监测指标在治疗过程中，D-二聚体水平的变化可作为溶栓、抗凝治疗疗效的监测指标之一。
有效治疗后，D-二聚体水平通常会逐渐下降，若持续升高则可能提示治疗无效或存在新的血栓形成风险。
D-二聚体的检测及临床意义一、概述正常凝血过程中，凝血酶可将纤维蛋白原裂解为纤维蛋白单体，再激活凝血因子ⅩⅢ,催化纤维蛋白单体发生交联，最后形成稳定的纤维蛋白凝块。
D-二聚体（D-D）是纤溶酶降解交联纤维蛋白后生成的特异性降解产物，是体内活动性血栓形成和继发性纤溶亢进的分子标志物。
二、检测方法1、血浆D-D检测方法较多，有酶联免疫吸附试验、酶联免疫荧光试验、全血凝集试验、乳胶凝集试验、免疫比浊法等。
2、较为理想的 D-D检测方法应该具有以下特点：①可以定量检测；②具有较高的敏感性和阴性预测值；③具有较好的可重复性；④结果处于临界值水平时的变异系数低；⑤方法简便，快速。
目前临床多用乳胶凝集免疫比浊法在全自动血凝仪上进行定量检测。
三、参考值1、定性：凝集法：阴性。
2、定量：D-D检测试剂品种繁多，在试剂检测的线性范围，参考区间等性能方面也有很大差异。
一般D-D的正常阈值为0.5mg/L，随年龄增长，D-D有升高趋势。
四、临床意义1、D-D与静脉血栓栓塞性疾病D-D是临床检测血栓形成的敏感标志物，但缺乏特异性。
因此，依据正常阈值范围内的D-D水平有助于排除静脉血栓栓塞性疾病（VTE）的诊断，D-D对VTE有高敏感度(82%～100%)、低特异度(40%～43%)和高阴性预测值(95%)的特点。
健康人血液中D-D含量很低，而在血栓形成与继发性纤溶时 D-D浓度显著增高，常大2～3 mg/L。
当D-D<0.5mg/L 时血栓形成的可能性较小，但如临床上已有明显的血栓形成所致的症状与体征时, D-D仍<0.5mg/L，则应考虑患者有无纤溶活性低下的可能。
2、D-D与妊娠健康妊娠人群血浆D-D水平生理性升高，目前尚无统一的正常妊娠妇女血浆D-D的参考范围。
D-D随孕期增加而逐渐升高，可高至基础值的3～4倍，妊娠晚期达到高峰，分娩后D-D水平降至正常。
3、D-D与DICDIC是凝血酶生成增加和纤溶增强导致的消耗性凝血病。
