免疫荧光技术应用临床应用

• 自身抗体检测的标准和最经典的实验方法是间接免疫荧光 检测法（IFA)。
• 需要荧光显微镜。 • 操作者需要一定的专业知识。 • 操作者需要一定的工作经验。
显微镜下的结果判断为综合 知识的体现，到目前为止， 尚没有任何仪器可取代人工 读片。
国内现状
✓自身抗体的测定不普遍 ✓欠规范 ✓对其意义了解尚少 ✓缺乏研究
1
间接免疫荧 光法（IFA Indirect Fluorescen t Assay ）
2
酶联免疫吸 附法 （ELISA）
3
免疫印迹法 （IB）
Westernblot LIA
4
其它：IDA、 RIA等
间接免疫荧光法实验原理
• 细胞、组织切片或纯化的、生化性质明确的物质均 可作为检测自身抗体或病原体抗体的抗原基质。
自身抗体种类繁多
常见自身抗体： • 抗核抗体谱(ANAS)检测 • 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）检测 • 类风湿因子和抗CCP抗体 • 自身免疫性肝病相关自身抗体检测
Tankertanker Design
检验科
拟开展自身抗体检测 项目介绍及相关自身免疫性 疾病
检验项目
抗核抗体 （ANA）
ANA谱3
自身免疫性疾病的共同特征：
• 患者血清中有多种自身抗体或自身反应性致敏淋 巴细胞存在，患者组织器官的病理特征为免疫炎 症，用相同抗原在某些动物实验中可复制出相似 的疾病模型，多数病因不明，疾病有重叠现象， 即一个病人可同时患一种以上自身免疫病，病程 一般较长，多迁延为慢性，有遗传倾向。
• 鉴于自身免疫性疾病的共同特征，通过检测自身抗体可以 有效准确的诊断自身免疫性疾病，为临床提供高效准确的 诊断依据。
• 如标本为阳性，已稀释血清中的特异性抗体将与包 被在固相上的抗原结合。
• 第二步，已结合的抗体与荧光素标记的抗人抗体结 合，然后在荧光显微镜下观察结果。
• 阳性标本经系列稀释后可测出其滴度。最适稀释因 子为3.162（10的平方根），这样，每隔一步就出现 一个10的整数倍数（1:10、1:32、1:100、1:320、 1:1000、 1:3200, 1:10000等
间接免疫荧光法检测的特点
• 特异性高：阳性与阴性标本的荧光强度差别明显。每种
已结合的抗体在相应抗原的位置产生典型的荧光模型。
• 基质中抗原谱完整，可检测多种抗体，并且检出 率高。
• 可在一种生物基质上同时检测多种抗不同生化特 性抗原的抗体。
• 当酶免试剂所需要的抗原难以制备或无法获得时， 可选择间接免疫荧光法。
免疫荧光技术临床的应用
随着人们生活水平和意识的不断提 高，各种因素的影响，近年来每31个人 中就有一个人在受到自身免疫性疾病的 折磨，临床表现复杂，不易早期发现。
自身免疫性疾病涉及 多学科
（风湿免疫科、内分泌科、 血液科、妇产科、皮肤科、 肾病科、消化科等等）
自身免疫性疾病涉及多病种
(混合结缔组织病、系统性红斑狼疮、磷脂综合症、原发性系 统性血管炎、韦格纳肉芽肿、坏死性新月体肾小球肾炎、显 微多动脉炎、习惯性流产、干燥综合征、皮肌炎、多肌炎、 原发性胆汁性肝硬化、原发性胆管炎等等）
97.6 438
抗核抗体（ANA）
定义——以细胞核内物质为抗原的抗体
• ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊断、病 情判断和疗效观察的指标（SLE的筛查抗体）。
• 在非结缔组织病（感染、慢肝、肺纤维化或肿瘤）中也可出现阳性。 • 正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且常表现为IgM型。 • 高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病。
均质型
与AHA（抗组蛋白抗体）、抗DNA有关， 引起LE形成主要见于SLE、药物性狼疮
核膜型
与抗ds-DNA有关， 多见于SLE，特别是有肾炎者
斑点型
与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体
核仁型
多见于硬皮病
着丝点型
多见于CREST综合征
抗核抗体谱（ANAs）
• 项目包含nRNP/Sm、Sm、SS-A、Ro-52、SS-B、Scl70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小 体、组蛋白、核糖体P蛋白、AMA M2，共15项。
抗核抗体（ANA）
方法——间接免疫荧光法 结果判断:
①滴度〉1：100为阳性 ②常见核型——5种
不同核型的临床意义不同
ANA常见五种核型及临床意义
核膜型——与抗ds-DNA有关， 多见于SLE，特别是有肾炎者
均质型——与AHA、抗DNA有关，引起LE形成 主要见于SLE、药物性狼疮
斑点型——与抗ENA有关，应进一步查特异性抗体 核仁型——多见于硬皮病 着丝点型——多见于CREST综合征
双链DNA 角蛋白抗体（AKA） 环瓜氨酸肽（CCP）抗体
肝抗原谱9项
蛋白酶3 （PR3）、髓过氧化物酶 （MPO）、肾小球肾炎
抗中性粒细胞浆抗体 过敏原特应性组合
试剂价格 18.9
180
22 Biblioteka Baidu9.5
39 176
78
38 300
收费标准 43.8
329.6
19.5 19.5 78.2 221.4
146.4
• 抗nRNP抗体：高滴度的抗U1-nRNP抗体是混合性结缔组织（MCTD，夏 普综合征）的标志，阳性率为95-100%，抗体滴度与疾病活动性相关， 在30-40%的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-nRNP抗体，但几乎总 伴有Sm抗体。
自身抗体检测的开展，不仅让我院在自身免疫性疾病 诊断治疗上有很大的提高，还可为陇东南地区400万人口提 供更准确、更专业的自身免疫性疾病诊断服务。节省患者去 外院检测诊断所花费的时间和费用，使我院在整个地区具有 一定的影响力，也会为医院带来可观的经济效益。鉴于此， 我院完全有必要应用间接免疫荧光技术开展自身抗体项目的 检测。
目前，ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。
抗核抗体（ANA）
系统性红斑狼疮 • 活动期95－100% • 非活动期80－100% • 药物诱导的红斑狼疮100% • 混合性结缔组织病（MCTD、Sharp综合征）100% • 类风湿性关节炎20－40% • 进行性系统性硬化症20－50% • 多发性肌炎及皮肌炎85－95% • 干燥综合征30－50% • 慢性活动性肝炎70－80% • 溃疡性结肠炎30－40% • 其它风湿病26% • 正常人5-10%