生化试剂的基础知识
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生物高一所有试剂知识点
生物高一所有试剂知识点生物是一门基础科学，其中试剂是进行实验研究的重要工具。
在高一生物学习中，了解并熟悉各种试剂的性质、用途以及实验操作是非常重要的。
本文将为你介绍生物高一所有试剂的知识点。
一、常用试剂1. 水：用于配制溶液、洗涤试剂瓶、清洗仪器等。
2. 盐酸（HCl）：用于调节pH值、去除金属氧化物、消化组织等。
3. 硫酸（H2SO4）：用于消化组织、脱水、酸碱滴定等。
4. 高锰酸钾（KMnO4）：常用于氧化反应，如检测有机物的存在与否。
5. 碘液（KI/I2）：常用于检测淀粉的存在与否，也可用于消毒。
6. 苏木精：用于染色组织切片，以便观察细胞和组织的形态结构。
7. 快速脱水液：用于组织固定和脱水，使组织保持完整性。
8. 甲醛：用于固定组织样本，以便后续的染色和显微观察。
9. 乙醇：用于固定和脱水组织，也可用于制备染色剂。
10. 苯酚：常用于提取核酸和蛋白质，也可用于制备染色剂。
二、分子生物学试剂1. 缓冲液：用于调节实验溶液的pH值，保持反应体系的稳定。
2. DNA提取试剂盒：用于从细胞中提取DNA，进一步进行分析和研究。
3. RNA提取试剂盒：用于从细胞中提取RNA，进行基因表达研究。
4. 聚合酶（DNA聚合酶、逆转录酶等）：用于DNA扩增和RNA逆转录反应。
5. 凝胶：如琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶，用于电泳分离DNA、RNA和蛋白质。
6. 荧光染料：如SYBR Green、荧光素等，用于检测DNA扩增反应的产物。
7. 蛋白质标记试剂：如辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）等，用于蛋白质的检测与标记。
三、细胞生物学试剂1. 细胞培养基：提供细胞生长所需的营养物质和环境，如DMEM、RPMI-1640等。
2. 胰蛋白酶：用于细胞消化，从培养基中解离细胞。
3. 乳化液：用于制备细胞内器官的离心悬液，进一步进行细胞分析。
4. 细胞凋亡检测试剂盒：用于检测细胞凋亡（程序性细胞死亡）。
5. 细胞增殖试剂盒：用于检测细胞增殖情况，如MTT法、CCK-8法等。
生化试剂培训ppt课件(1)
4
一
基本术语
6、线性范围 指该试剂盒按其说明书使用时可准 确测量的范围，线性是试剂的主要性能指标之一， 如果试剂线性达不到要求，将直接影响高浓度样 本的检测。线性的测量与仪器相关。 7、标 准 差 标准差是方差的算术平方根。标 准差能反映一个数据集的离散程度。平均数相同 的，标准差未必相同。
5Leabharlann 一 基本术语
5、延迟时间 指试剂与样品混合后到监测开始之间的时间。 一般用于两点法和速率法。 注意：在速率法和两点法中，延长延迟时间必然缩 短线性监测期，减少测定的线性范围，也易发生底 物耗尽.ALT,AST,BUN,HBDH等负反应试剂 ， 浓度极高时测值不一定是超线性，还有可能是底物 耗尽而导致测值很低，这时要注意看线并且把吸光 度界限设定在0.5 。当有吸光度界限超出报警进行 稀释再测定。一般进行10倍稀释再做，如有超出继 续稀释。
生化试剂培训教材
1
第一部分 基本术语
一、临床化学自动分析使用术语
1、双波长 由主波长和副波长构成，可以消除对 实 验结果的影响。主波长是生成的产物颜色对 光吸收的特有波长。副波长是为消除其他干扰物质 在主波长造成测定干扰所设定的波长。 2、反应杯空白 在特定波长下，光通过以蒸馏水 或空气为反应体系所测得的吸光度值。
（7） 指数函数法（非线性法） 工作曲线随浓度的增加吸光度出现离散趋势,校准曲线如图2-12所示:
图2-12 指数函数校准曲线（非线性法）
21
三、常见校准方法
（4） Logit-log3P（非线性法） 适用于随浓度升高而吸光度表现为收敛 的工作曲线,Logitlog3P（非线性法）校准曲线如图2-9所示:
图2-9 Logit-log3P校准曲线（非线性法）
一
基本术语
6、线性范围 指该试剂盒按其说明书使用时可准 确测量的范围，线性是试剂的主要性能指标之一， 如果试剂线性达不到要求，将直接影响高浓度样 本的检测。线性的测量与仪器相关。 7、标 准 差 标准差是方差的算术平方根。标 准差能反映一个数据集的离散程度。平均数相同 的，标准差未必相同。
5Leabharlann 一 基本术语
5、延迟时间 指试剂与样品混合后到监测开始之间的时间。 一般用于两点法和速率法。 注意：在速率法和两点法中，延长延迟时间必然缩 短线性监测期，减少测定的线性范围，也易发生底 物耗尽.ALT,AST,BUN,HBDH等负反应试剂 ， 浓度极高时测值不一定是超线性，还有可能是底物 耗尽而导致测值很低，这时要注意看线并且把吸光 度界限设定在0.5 。当有吸光度界限超出报警进行 稀释再测定。一般进行10倍稀释再做，如有超出继 续稀释。
生化试剂培训教材
1
第一部分 基本术语
一、临床化学自动分析使用术语
1、双波长 由主波长和副波长构成，可以消除对 实 验结果的影响。主波长是生成的产物颜色对 光吸收的特有波长。副波长是为消除其他干扰物质 在主波长造成测定干扰所设定的波长。 2、反应杯空白 在特定波长下，光通过以蒸馏水 或空气为反应体系所测得的吸光度值。
（7） 指数函数法（非线性法） 工作曲线随浓度的增加吸光度出现离散趋势,校准曲线如图2-12所示:
图2-12 指数函数校准曲线（非线性法）
21
三、常见校准方法
（4） Logit-log3P（非线性法） 适用于随浓度升高而吸光度表现为收敛 的工作曲线,Logitlog3P（非线性法）校准曲线如图2-9所示:
图2-9 Logit-log3P校准曲线（非线性法）
生化试剂原理
生化试剂原理
生化试剂原理是指在生物学实验中使用的各种化学试剂和物质的作用机制和原理。
这些试剂可以用于分析、测量、分离和检测生物体内的不同分子和化合物，从而帮助研究者了解生物体内的生物化学过程和功能。
生化试剂原理涉及多个方面，以下是一些常见生化试剂的原理：
1. 酶的原理：酶是一类生化催化剂，能够加速生物化学反应的进行。
酶的活性与温度、pH值、底物浓度等因素有关。
常见
的试剂如蛋白酶、DNA酶等在反应中发挥催化作用，加速底
物的转化。
2. 染色试剂的原理：染色试剂在细胞和组织的观察和研究中起到重要作用。
染色试剂可与特定分子或结构反应，使其在显微镜下可见。
常见的试剂如荧光染料、组织切片染色试剂等可使细胞核酸、蛋白质等变得可见。
3. 缓冲液的原理：缓冲液是为了调节反应体系的pH值而使用
的试剂。
它能够在一定范围内稳定维持溶液的酸碱度，防止
pH值的剧烈变化。
常见的缓冲液如Tris缓冲液、PBS缓冲液
等能够维持酶催化和反应的稳定性。
4. 标记试剂的原理：标记试剂是指将特定化合物或分子与检测目标结合，以便在实验中追踪和检测目标分子的存在和变化。
常见的标记试剂如荧光标记物、辣根过氧化物酶标记物等能够通过荧光、发光或颜色变化来表示检测结果。
总之，生化试剂原理是研究者在实验中理解和运用各种化学试剂的作用方式和效果的重要基础。
不同的生化试剂具有不同的原理和功能，能够在许多生物学实验中发挥重要作用。
生化试剂的基础知识
生化试剂的基础知识生化试剂的基本知识一、生化试剂的分类 (4)(一)按照化学性质分类4(二)按照临床应用分类4二、反应速度特性 (5)(一)终点法试剂5(二)动力学法试剂6三、显色原理 (9)(一)NAD-NADH和NADP-NADPH系统9(二)p-NP和p-NA系统10(三)H2O2偶联的指示系统10(四)抗原抗体反应指示系统10(五)其它显色反应11四、性能评价方法 (11)(一)主要性能指标：11(二)性能评价方法12一、生化试剂的分类(一)按照化学性质分类1.酶类：包括ALT,AST,ALP,ACP,r-GT,α-HBDH,LDH,CK,CK-MB,α-AMY,MSO,ADA,ChE 等。
2.底物/代谢产物类：包括TG,TC,HDL-C,LDL-C,UA,UREA,Cr,Glu,TP,Alb ,T-Bil,TBA,NH4+,CO2等。
3.无机离子类：包括Ca,P,Mg,Cl等。
4.特种蛋白类：包括apoAl,apoB,Lp(a),C3,C4,PFB(B因子)，IgG,IgA,IgM等。
(二)按照临床应用分类1.无机离子：包括Ca，P，Mg，Cl等。
2.肝功能：包括ALT，AST，r-GT，ALP，MSO，T-Bil，D-Bil，TBA，TP，Alb等。
3.肾功能：UA，UREA，Cr等。
4.心肌酶谱：CK，CK-MB，LDH，α-HBDH，AST，MSO。
5.糖尿病：GLU等。
6.前列腺疾病：ACP，p-ACP等。
7.胰腺炎：α-AMY。
8.血脂：TC，TG，HDL-C，LDL-C，apoA1，apoB，Lp(a)。
9.痛风：UA。
10.有机磷中毒：ChE。
11.免疫性疾病：C3，C4，PFB(B因子)， IgG，IgA，IgM，Kappa链，Lambda链。
二、反应速度特性按照反应速度，可以分为终点法试剂和动力学试剂。
而动力学试剂又可再分为零级动力学法和一级动力学法。
(一)终点法试剂终点法，指经过一段时间(一般为几分钟)的反应，反应进行到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡法，这是最理想的分析类型。
生化试剂培训课件
详细介绍生化试剂制备的一般步骤，包括提取、分离、纯化、结晶等环节。
实验操作技巧
阐述实验操作过程中的注意事项，包括温度控制、溶剂使用、pH调节等方面 的技巧。
制备过程中的常见问题及解决方法
产品质量问题及解决方法
列举生化试剂制备过程中可能出现的蛋白质变性、结晶质量差、残留杂质等问题 ，并提出相应的解决方案。
生物医药研究：用于基 因工程、蛋白质工程等 研究中，提供基础性的 工具和方法。
药物研发：用于药物的 发现、制备、药理活性 检测、药物质量控制等 方面。
生产过程：用于生物医 药产品的生产过程中， 如制备疫苗、抗体等。
在疾病诊断与治疗领域的应用
生化试剂在疾病诊断 与治疗领域中也有着 广泛的应用。例如在 糖尿病、高血脂、肝 病等疾病的诊断中
农业生产过程优化：用 于优化农业生产过程， 如通过调节植物生长调 节剂的施用，改善植物 生长环境和产量。
04
生化试剂的质量控制
质量检验的方法与标准
外观检验
含量测定
观察试剂的性状、颜色和澄清度等，判断试 剂是否符合要求。
采用化学分析方法测定试剂的含量，如滴定 法、光谱法等。
纯度检验
细菌内毒素检测
通过气相色谱、高效液相色谱、质谱等手段 检测试剂的纯度。
质量提高的途径与方法
持续改进
通过收集用户反馈、质量信息等， 不断改进产品质量，提高客户满意 度。
技术创新
引进先进的生产技术和设备，提高 产品的质量和生产效率。
培训与交流
加强员工培训和交流，提高员工素 质和技能水平，促进质量意识的形 成。
质量管理体系建设
建立完善的质量管理体系，严格执 行质量标准和管理制度，确保产品 质量稳定可靠。
实验操作技巧
阐述实验操作过程中的注意事项，包括温度控制、溶剂使用、pH调节等方面 的技巧。
制备过程中的常见问题及解决方法
产品质量问题及解决方法
列举生化试剂制备过程中可能出现的蛋白质变性、结晶质量差、残留杂质等问题 ，并提出相应的解决方案。
生物医药研究：用于基 因工程、蛋白质工程等 研究中，提供基础性的 工具和方法。
药物研发：用于药物的 发现、制备、药理活性 检测、药物质量控制等 方面。
生产过程：用于生物医 药产品的生产过程中， 如制备疫苗、抗体等。
在疾病诊断与治疗领域的应用
生化试剂在疾病诊断 与治疗领域中也有着 广泛的应用。例如在 糖尿病、高血脂、肝 病等疾病的诊断中
农业生产过程优化：用 于优化农业生产过程， 如通过调节植物生长调 节剂的施用，改善植物 生长环境和产量。
04
生化试剂的质量控制
质量检验的方法与标准
外观检验
含量测定
观察试剂的性状、颜色和澄清度等，判断试 剂是否符合要求。
采用化学分析方法测定试剂的含量，如滴定 法、光谱法等。
纯度检验
细菌内毒素检测
通过气相色谱、高效液相色谱、质谱等手段 检测试剂的纯度。
质量提高的途径与方法
持续改进
通过收集用户反馈、质量信息等， 不断改进产品质量，提高客户满意 度。
技术创新
引进先进的生产技术和设备，提高 产品的质量和生产效率。
培训与交流
加强员工培训和交流，提高员工素 质和技能水平，促进质量意识的形 成。
质量管理体系建设
建立完善的质量管理体系，严格执 行质量标准和管理制度，确保产品 质量稳定可靠。
【PPT文档】1-生化-试剂-介绍
某些速率法的反应线性较差，没有近乎直线的 反应平衡期或者这种平衡期很短，就需要使用两 点速率法来进行测定。
一、基本概念
两点速率法的反应示意图
吸 光 度 A
R1 S R2
t1 t2 t3 t4
吸 光 度 A
R
时间t
S t1 t2 t3
时间t
一、基本概念
关于测定方法的几个概念：
A、跟速率法（包括两点速率法）有关的 延迟时间：指试剂与样品混合后到检测开始之间的时间。一般用于速
物质反应完全，反应终止达到平衡（终点） 点，即反应处于稳定阶段，反应液的吸光 度不再增加也不再减少，吸光度保持相对 稳定，测定光的吸收强度，此吸光度与被 测物的浓度成正比，以此计算待测物的浓 度。
一、基本概念
终点法的反应示意图
吸
吸
光
光
度
度
A
A
R1 S
R2
t1
t2
t3 t4
反应时间t
RS
t1
t2
两点终点法可以达到去除杂反应干扰（双
试剂）、去除血清本底等的效果。
一、基本概念
两点终点法的反应示意图
吸
吸
光
光
度
度
A
A
R1 S
R2
t1 t2 t3
t4 t5
反应时间t
RS
t1 t2
t3
t4
反应时间t
一、基本概念
（4）两点速率法 测定2个测光点，此两点既不测反应初
始吸光度也不是终点吸光度，在单位时间 内计算2点间的吸光度之差用于样本浓度的 计算，称为2点速率法
一、基本概念
3、波长 测定使用的入射光的波长，根据被测物质或底物或生成
生化试剂的基础知识
生化试剂的基本知识一、生化试剂的分类1(一）按照化学性质分类1(二)按照临床应用分类1二、反应速度特性2(一）终点法试剂2（二)动力学法试剂3三、显色原理4(一)NAD-NADH和NADP-NADPH系统4（二)p—NP和p-NA系统5(三)H2O2偶联的指示系统5(四)抗原抗体反应指示系统5（五)其它显色反应5四、性能评价方法5(一）主要性能指标：5(二）性能评价方法6一、生化试剂的分类(一)按照化学性质分类1.酶类：包括ALT，AST，ALP,ACP，r—GT,α-HBDH，LDH，CK,CK-MB，α—AMY,MSO,ADA,ChE等。
2.底物/代谢产物类：包括TG,TC,HDL—C，LDL—C,UA,UREA，Cr，Glu,TP,Alb,T—Bil，TBA，NH4+，CO2等。
3.无机离子类:包括Ca，P,Mg，Cl等。
4.特种蛋白类：包括apoAl，apoB,Lp(a)，C3，C4,PFB（B因子),IgG,IgA,IgM等。
(二)按照临床应用分类1.无机离子：包括Ca,P，Mg，Cl等。
2.肝功能：包括ALT，AST，r-GT，ALP，MSO,T—Bil，D-Bil，TBA，TP，Alb等。
3.肾功能:UA,UREA，Cr等。
4.心肌酶谱：CK，CK-MB,LDH,α-HBDH，AST，MSO。
5.糖尿病:GLU等.6.前列腺疾病：ACP，p-ACP等.7.胰腺炎:α—AMY。
8.血脂：TC，TG，HDL-C，LDL-C，apoA1，apoB，Lp（a)。
9.痛风:UA。
10.有机磷中毒：ChE。
11.免疫性疾病:C3,C4，PFB(B因子)，IgG，IgA，IgM，Kappa链,Lambda链。
二、反应速度特性按照反应速度，可以分为终点法试剂和动力学试剂。
而动力学试剂又可再分为零级动力学法和一级动力学法。
(一)终点法试剂终点法，指经过一段时间（一般为几分钟)的反应，反应进行到完全，使全部底物(被测物)转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡法，这是最理想的分析类型。
生化试剂检测原理
生化试剂检测原理
生化试剂检测原理是通过特定的化学反应来测定样品中存在的化学物质的量或活性。
这些试剂可以与目标分子发生特异性的反应，通过观察反应产物的生成或消失，可以确定目标分子在样品中的存在与否。
生化试剂检测原理主要分为以下几种类型：
1. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：该方法通过将目标分子与特异性抗体结合，然后再添加与抗体结合的酶标记物，并加入相应的底物，观察底物的转化产物来检测目标分子的存在。
2. 荧光染料法：该方法通过与目标分子结合的荧光标记物，在激发光的作用下发出特定的荧光信号，通过荧光信号的强度或发射波长来检测目标分子的存在。
3. 核酸杂交法：该方法通过与目标DNA或RNA序列互补的探针结合，形成双链结构，然后通过探针上的标记物（如放射性同位素或荧光标记物）来检测分子间的杂交反应，从而确定目标序列的存在。
4. 酶活性测定法：该方法通过测定样品中特定酶的活性来间接推断目标物质的存在。
通常是通过观察底物的转化速率或生成物的产生量来确定酶的活性，从而间接反映目标物质的存在。
总的来说，生化试剂检测原理是通过利用特定的化学反应，结合适当的试剂和检测方法，可以准确地检测目标分子在样品中
的存在与否。
不同检测原理的选择取决于待测分子的性质和所需的检测灵敏度、特异性等要求。
生化试剂
一、生化试剂概况生化试剂（Biochemical reagent）是指有关生命科学研究的生物材料或有机化合物，以及临床诊断、医学研究用的试剂。
生物学的研究已从细胞水平发展到分子水平，可以上说是50年代以来发展最快的学科之一。
用生物化学和分子生物学的方法与技术研究生命现象本身，已经应用于生物学的各个领域。
生化试剂可以定义为：生命科学中所用的化学试剂。
自20世纪50年代以来，分子生物学是生物学的前沿与生长点，生物大分子，特别是蛋白质和核酸结构功能的研究，是分子生物学的基础。
1. 以核酸为实验对象的所用的试剂习惯上称为分子生物学试剂，主要包括克隆与表达试剂（感受态细胞、载体、模板、转化试剂、转染试剂）、PCR试剂（dNTP 溶液、内切酶、聚合酶等）、反转录试剂、核酸提取与纯化试剂（DNA提取纯化、质粒提取纯化、RNA提取纯化.）、核酸电泳试剂（琼脂糖凝胶、核酸分子量标准、上样缓冲液和电泳缓冲液）。
2. 以蛋白质为实验对象所用的试剂成为蛋白质研究相关试剂。
主要包括：蛋白质分析与检测（蛋白质定量，蛋白质标记以及蛋白质印迹）、蛋白质电泳试剂（聚丙烯酰胺凝胶-预制胶、蛋白质分子量标准、凝胶染色液和脱色液、上样缓冲液和电泳缓冲液）、蛋白质分离纯化试剂（电泳和离子交换层析、亲和层析、分子筛）。
3. 免疫试剂是指提供作为抗原或抗体的试剂。
如人体和不同动物（如兔、羊、鼠、马、猴、鸡、犬等）的血清标志物、抗血清和标记的抗血清。
免疫试剂因其高特异性，是诊断试剂的重要原料。
免疫学诊断试剂正逐步取代临床生化试剂用于临床诊断。
4. 诊断试剂按照医学检验项目，临床诊断试剂大致可分为临床化学检验试剂、免疫学和血清学检测试剂、血液学及细胞遗传学检测试剂、微生物学检测试剂、体液排泄物及脱落细胞的检测试剂、基因诊断试剂等种类。
其中以临床化学所占市场份额最大，接近34%；其次为免疫学市场，约占29%。
新型免疫诊断试剂和基因诊断试剂是20世纪80年代后期发展起来的，无论技术还是市场，都是目前所有诊断试剂产品中发展最快的。
1 生化 试剂 介绍
（8）Spline多点非线 性法
吸 光 度
从校准液（1）测定 到校准液（5）或（6）， 绘制出工作曲线。该工 作曲线是将校准液各点 的吸光度值用圆滑曲线 连接起来，校准曲线如 图所示:
STD(6) STD(5)
STD(4)
STD(3)
STD(2)
STD(1) C1 C2 C3 CA C4 C5 C6
某些速率法的反应线性较差，没有近乎直线的 反应平衡期或者这种平衡期很短，就需要使用两 点速率法来进行测定。
一、基本概念
两点速率法的反应示意图
吸 光 度 A
吸 光 度 A R1 S R2
R
S
t1
t2 t3
t4
时间t
t1 t2
t3
时间t
一、基本概念
关于测定方法的几个概念：
A、跟速率法（包括两点速率法）有关的 延迟时间：指试剂与样品混合后到检测开始之间的时间。一般用于速 率法。本段时间的作用是使样品和试剂温度等反应条件达到最佳状态， 进入反应稳定期。 读数时间：延迟时间过后开始进入读数期，记录有效吸光度变化的时 间。 B、跟终点法（包括两点终点法）有关的 终点时间：终点法试剂盒测定到达反应终点，吸光度不再变化的时间。 读数时间：终点法只有一个时间，默认从零时间开始，此时间必须大 于终点时间；两点终点法除了后面这个大于终点时间的点外，在加入 R2之前还有一个读点，这两个点之间的为读数时间。
一、基本概念
速率法的反应示意图
吸 光 度 A
吸 光 度 A R1 S R2
R
S
t1
t2 t3
t4
时间t
t1 t2
t3
时间t
吸 光 度
从校准液（1）测定 到校准液（5）或（6）， 绘制出工作曲线。该工 作曲线是将校准液各点 的吸光度值用圆滑曲线 连接起来，校准曲线如 图所示:
STD(6) STD(5)
STD(4)
STD(3)
STD(2)
STD(1) C1 C2 C3 CA C4 C5 C6
某些速率法的反应线性较差，没有近乎直线的 反应平衡期或者这种平衡期很短，就需要使用两 点速率法来进行测定。
一、基本概念
两点速率法的反应示意图
吸 光 度 A
吸 光 度 A R1 S R2
R
S
t1
t2 t3
t4
时间t
t1 t2
t3
时间t
一、基本概念
关于测定方法的几个概念：
A、跟速率法（包括两点速率法）有关的 延迟时间：指试剂与样品混合后到检测开始之间的时间。一般用于速 率法。本段时间的作用是使样品和试剂温度等反应条件达到最佳状态， 进入反应稳定期。 读数时间：延迟时间过后开始进入读数期，记录有效吸光度变化的时 间。 B、跟终点法（包括两点终点法）有关的 终点时间：终点法试剂盒测定到达反应终点，吸光度不再变化的时间。 读数时间：终点法只有一个时间，默认从零时间开始，此时间必须大 于终点时间；两点终点法除了后面这个大于终点时间的点外，在加入 R2之前还有一个读点，这两个点之间的为读数时间。
一、基本概念
速率法的反应示意图
吸 光 度 A
吸 光 度 A R1 S R2
R
S
t1
t2 t3
t4
时间t
t1 t2
t3
时间t
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生化试剂得基本知识
一、生化试剂得分类 (2)
（一）.......................................................................... 按照化学性质分类 (2)
（二）按照临床应用分类
2
二、反应速度特性 (2)
（一）.......................................................................... 终点法试剂 2
（二）动力学法试剂
3
三、显色原理 (4)
{—） NAD-NADH 与NADP-NADPH 系统 (5)
（二）p-NP 与p-NA 系统 (5)
（三）H2O2 偶联得指示系统
5
（四）.......................................................................... 抗原抗体反应指示系统.. (5)
（五）.......................................................................... 其它显色反应 6
四、性能评价方法 (6)
（一）主要性能指标：6
（二）性能评价方法 (6)
一、生化试剂得分类
（一）按照化学性质分类
1.酶类：包括ALIAST, ALP, ACP, r-GT u —HBDH,LDH,CK,CK—MB, u -AMY, MSO, ADA,ChE
等。
2.底物/代谢产物类:包括TG, TC,HDL-C, LDL-C,UA, UREA, Cr, Glu, TP,Alb,T-Bil,TBA,NH4+,
CO2 等.
3.无机离子类：包括Ca, P, Mg, Cl等。
4.特种蛋白类：包括apoAl, apoB,Lp （a）, C3,C4,PFB （B 因子）＞IgGJgAJgM 等。
（二）按照临床应用分类
1.无机离子:包括Ca, P, Mg, Cl等。
2.肝功能:包括ALL AST, r—GTALRMSOJ-Bil, D—Bil, TBA,TP, Alb 等.
3.肾功能:UA, UREA, Cr 等。
4.心肌酶谱：CK, CK—MB, LDH,a-HBDH,AS「MSO。
5.糖尿病：GLU等。
6.前列腺疾病:ACP, p-ACP等.
7.胰腺炎：« -AMY.
8.血脂：TC,TG, HDL-C,LDL—C,apoAl,apoB, Lp （a）。
9.痛风：UA.
10.有机磷中毒：ChEo
11.免疫性疾病:C3, C4, PFB （B 因子）,IgGJgAJgM, Kappa 链,Lambda 链。
二、反应速度特性
按照反应速度，可以分为终点法试剂与动力学试剂。
而动力学试剂又可再分为零级动力学法与
一级动力学法。
（-）终点法试剂
终点法，指经过一段时间（一般为几分钟）得反应，反应进行到完全，使全部底物（被测物）
转变成产物，称终点法，更确切地说应称平衡法，这就是最理想得分析类型。
如图（1）。
整个反应达到平衡，由于正向反应得平衡常数很大，可认为所有得被测定物已转变为产物，反
应液得吸光度不再增加（或降低），吸光度得增加（或降低）程度与被测定物得浓度成正比.
终点法对反应条件（如酶量、pH、温度）小得改变不敏感，只要这种改变不影响在一左时间内
反应达到平衡即可，就是最理想得反应模型。
图（1）
属于终点法得试剂主要有：
TG, TC, HDLCLDL—C, UA, Glu, TRAIb, T-Bil, D-Bil, Cr （氧化酶法）,NHf,C02 , Ca, P,Mg,CI, apoAl,apoB,Lp（a）,C3, C4,PFB（B 因子）,IgGJgAJgM 等.
（二）动力学法试剂
1.零级动力学法
零级动力学法，指反应过程中反应速度维持不变，达到最大，与底物浓度无关,因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测泄溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加得速度（AA/min）与被测物得活性或浓度成正比，主要用于酶活性得测定。
如图（2）。
实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应得进行，底物消耗到一定程度后，反应速度不再维持不变，同样从启动反应到达到最大速度需要一宦时间。
因此，零级动力学法就是针对特立时间而言得，各试剂商对这段时间有严格规左。
图（2）
属于零级动力学法得试剂主要有：
ALT, AST,ALP, ACRr-Gl； a —HBDH,LDH,CK,CK—MB, a —AMY, MSO,ADA, ChE ,TBA 等.
2.一级动力学法
在一定得反应时间内，反应速度与底物浓度得一次方成正比，由于底物在不断得消耗，因此整个反应得速度在不断得减少，表现为吸光度得增加（或降低）速度越来越小，这类反应达到平衡得时间很长，理论上可以在任意时间段进行监测，但由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，经过一段延迟时间才能进入稳左反应期，必需在特左时间段内进行监测，各试剂商对这段时间有严格规立。
如图（3）.
在一固定时间间隔中，底物浓度得变化量正比于底物得初浓度，这就是一级反应得同性。
该段时间内吸光度得增加或降低与被测物得浓度成正比。
图（3）
属于一级动力学法得试剂主要有：
Cr （苦味酸法）,UREA（紫外监测法）
三、显色原理
显色系统主要有以下几种：
>NAD-NADH 与NADP-NADPH 系统
>p-NP与p-NA系统
>H2O2偶联得指示系统
>抗原抗体反应指示系统
>英它显色反应
（一）NAD—NADH 与NADP—NADPH 系统
NADH与NADPH在340nm有特征性吸收峰，而NAD与NADP在340nm无特征性吸收峰,利用其偶联得脱氢酶（工具酶）反应，根据340nm吸光度得变化，可以测左物质得浓度或活性。
作为该指示系统常用得工具酶有LDH、MDH、GLDH与G6PDH
目前利用此指示系统进行测泄得临床项目有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB. u —HBDH、
Glu、UREA、NH4+、C02 等。
（二）p-NP 与p—NA 系统
P-NP与p-NA在405nm有特征性吸收峰，根据405nm吸光度得变化，可以测立物质得浓度或活性.
目前利用此指示系统进行测左得临床项目有ALP、ACP、r-GT、AMY等。
（三）H2O2偶联得指示系统
H2O2在过氧化物酶得作用下，可使单一个或成对得无色得色素原氧化成有色得色素，导致某一波长吸光度得增加,因此可用来测定物质得浓度或活性
用于此指示系统得单一色素原有TMB、ABTS等;成对色素原有酚与4AA、MBTH与DMA 等。
目前利用此指示系统进行测定得临床项目有TC、TG、HDL-C、LDL—C、Glu、Cr、UA等。
（四）抗原抗体反应指示系统
特异性抗体与抗原（待测物质）在相应得缓冲环境下反应生成抗原抗体复合物，形成一左得浊度，导致特左波长透光率得改变。
在抗体过剩得前提下，改变程度与抗原浓度成正比。
目前利用此指示系统进行测定得临床项目有apoAk apoB、Lp（a）、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP 等。
（五）英它显色反应
蛋白质中得肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物，在一立浓度范仿I内颜色反应强度与蛋白质得浓度成正比。
用于TP得测立.
澳甲酚绿（BCG）在非离子去污剂Brij-35得存在下，可与白蛋白形成紧密结合得绿色复合物。
用于Alb得测圧。
重氮苯磺酸盐与胆红素生成红紫色偶氮胆红素。
用于总胆红素与直接胆红素得测定。
甲基麝香草酚兰（MTB）在碱性条件下可与Ca、Mg形成有色络合物。
用于Ca、Mg得测定。
四、性能评价方法
（-）主要性能指标：
1.稳定性:指在规左条件下经过一段时间得保存，仍能达到相应得性能指标，如试剂空白吸光度、线
性范围、灵敏度等。
2.反应灵敏度:指单位浓度（或活性）得测左物反应所产生得反应度，反应度越髙，灵敏度越大。
3.精密度:结果间相互符合得一致程度
4.准确度：与参考测泄程序结果得一致性
5.线性范围:在规左得重复性与线性偏差下，测得得浓度或活性值与设左得浓度或活性值之间得比
例关系得范用。
6.基质效应:基质指得就是样品中被分析物以外得组分.基质常常对分析物得分析过程有显著得干
扰，并影响分析结果得准确性。
例如，溶液得离子强度会对分析物活度系数有影响，这些影响与T•扰被称为基质效应（matrix effect）.
7.抗干扰性：
8.其它:试剂/样本比例、反应时间、价格等。
（二）性能评价方法
1.稳定性:连续观测，每日试验;热加速试验。
2.反应灵敏度：直接汁算单位浓度反应物得吸光度变化或变化率.
3.精密度:按照NCCLS EP5-A进行。
4.准确度:按照NCCLS EP9-A2进行。
5.线性范围：按照NCCLS EP6-A进行。
6.基质效应:通过回收试验确左
7.抗干扰性:按照NCCLS EP7-A进行。