台盼蓝染色方法

台盼蓝染色实验原理
台盼蓝(Ｔrypan Blｕe) 就是细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,还常用于检测细胞就是否存活。

活细胞不会被染成蓝色,而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式:C34H24N6O１４S４Na4,分子量: 960、82,可溶于水(10mg/ml)。

实验原理:正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡。

因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞与死细胞。

台盼蓝就是组织与细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。

实验步骤:
1、配制4％台盼蓝母液:称取4ｇ台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至１０0ml,用滤纸过滤,4℃保存。

使用时用PＢS稀释至0、
4 %。

２、胰酶消化贴壁细胞,制备单细胞悬液,并作适当稀释。

3、染色:细胞悬液与０、4％台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

(终浓度0、04%)
4、计数:在3分钟内,分别计数活细胞与死细胞。

5、镜下观察,死细胞被染成明显的蓝色,而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力:活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100%
注意:
1、保存条件:室温保存。

２、有潜在致癌危险,实验时穿实验服并戴一次性手套与口罩操作。

台盼蓝染色实验原理台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。

实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

实验步骤：1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。

使用时用PBS稀释至0.4 %。

1 / 22、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

（终浓度0.04%）4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%注意：1.保存条件：室温保存。

2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

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材料：
1. 显微镜、玻片、盖玻片、滴管；
2. 试剂：0.4%台盼蓝染液；
3. 台盼蓝（Trypan blue）：0.4g；
4. 生理盐水：100ml；
操作步骤：
1. 用Hanks液配制0.1%台盼蓝溶液；
2. 用0.5%胰蛋白酶：0.2%EDTA=1：1混合液来消化培养的贴壁细胞；
3. 再加入适量Hanks液制成细胞悬液；
4. 将待染色细胞稀释至所需浓度（方法及浓度范围与细胞计数相同）；
5. 每0.1ml细胞悬液约加新鲜配制的染液一小滴，室温下染3—5min；
6. 染色过的细胞材料，取一滴细胞悬液置玻片上，加盖玻片后放高倍镜下观察；
7. 死亡的细胞着浅蓝色并膨大，无光泽。

活细胞不着色并保持正常形态，有光泽；
8. 计数1000个细胞中的活细胞和死细胞数目；
9. 统计未染色细胞。

可按公式计算出细胞活率。

细胞活率（%）=未染色的细胞数/观察的细胞总数×100。

注意事项：
1. 染色时间不能太长，否则活细胞也会逐渐积累染料而染成颜色，使监测结果偏低；
2. 另可结合细胞计数方法，同时进行细胞计数和活力检测。

台盼蓝染色实验原理台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。

实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

实验步骤：1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。

使用时用PBS稀释至0.4 %。

2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

（终浓度0.04%）4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%注意：1.保存条件：室温保存。

2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

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台盼蓝染色实验原理台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: 960.82，可溶于水（10mg/ml)。

实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。

台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

实验步骤：1、配制4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。

使用时用PBS稀释至0.4 %。

2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

（终浓度0.04%）4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而活细胞拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%注意：1.保存条件：室温保存。

2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

台盼蓝染色操作步骤
2011／5／5来源：上海泛柯生物科技有限公司
台盼蓝是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。

还常用于细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，死细胞会被染成蓝色。

操作步骤：
1、制作4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至100ml,用滤纸过滤，4度保存。

使用时，用PBS 稀释至0.4%
2、胰酶消化单壁细胞，制备单细胞悬液，并适当稀释。

3、染色：细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合均匀。

（终浓度为0.04%）
4、计数：在三分钟内，分别计数活细胞盒和死细胞
5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，活细胞拒染呈无色透明状
6、统计细胞活力：活细胞率（%）=活细胞数／（活细胞数＋死细胞数）×100%
PBS:磷酸缓冲液。

台盼蓝染色实验原理
台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: ，可溶于水（10mg/ml)。

实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。

台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

实验步骤：
1、配制4%台盼蓝：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至
100ml，用滤纸过滤，4℃保存。

使用时用PBS稀释至 %。

2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

3、染色：细胞悬液与%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

（终浓度%）
4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%
注意：
1.保存条件：室温保存。

2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

台盼蓝染色实验原理和顺序蓝染是一种传统的织物染色工艺，其原理是利用蓝液中的染料与纤维物质发生化学反应，将染料牢固地固定在纤维素纤维上。

在蓝染过程中，主要包括浸泡、氧化和还原三个步骤。

下面将详细介绍蓝染色实验的原理和顺序。

实验原理：1.染料选择：蓝染色实验中一般选择天然蓝染料，如蓝靛。

这些染料在碱性条件下可以溶解并与纤维素纤维发生反应，形成稳定的染料-纤维素结合物。

2.碱性条件：蓝染实验中通常会添加碱液来改变染液的酸碱性，增强染料与纤维素纤维的反应性。

碱液还可以使染料变得更可溶于水，并提高染色的效果。

3. 氧化还原反应：蓝染实验中涉及到氧化还原反应。

染色初始阶段，染料经过氧化过程与纤维素发生反应，形成游离的蓝色阳离子离子（Indigo），此时纤维变为黄色。

接着，通过还原反应，将染料还原为无色的蓝靛并沉淀附着于纤维素上。

这个过程叫做“固定”。

实验顺序：1.准备：将天然蓝染料（如蓝靛）粉末溶解于适量水中，制成蓝液。

同时准备纱线、棉布等需要染色的织物。

2.处理织物：将织物酒精湿润，然后浸泡在碱性水溶液中，以增强织物吸收染料的能力。

3.浸泡：将处理好的织物放入蓝液中，使其完全浸泡。

浸泡时间根据需要染色的颜色深浅而定，一般为几分钟到几小时不等。

4.取出：将浸泡好的织物从蓝液中取出，让它自然晾干。

这个过程中，纤维上的染料阳离子会与氧发生氧化反应，生成蓝靛沉淀。

5.固定：取出已干燥的织物，将其暴露在空气中，蓝液中的染料阳离子会经过氧化还原反应，转化为稳定的靛蓝色素并与纤维素纤维牢固结合。

6.染色效果增强：染色后，如果需要加强染色效果，可将织物反复进行浸泡和晾干，直至达到理想的颜色深浅。

7.旋洗：完成染色后，可将织物用清水进行旋洗，以去除多余的染料。

8.干燥定型：最后将织物晾干，并进行烘干定型处理，以使染料与纤维更牢固地结合。

总结：蓝染色实验主要包括浸泡、氧化还原和还原三个步骤。

通过选择适当的蓝染料、调节酸碱度和控制染色时间，可以实现理想的染色效果。

台盼蓝染色实验原理和步骤LEKIBM standardization office【IBM5AB- LEKIBMK08- LEKIBM2C】台盼蓝染色实验原理台盼蓝（Trypan Blue) 是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，还常用于检测细胞是否存活。

活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。

分子式：C34H24N6O14S4Na4，分子量: ，可溶于水（10mg/ml)。

实验原理：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。

因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和。

台盼蓝是组织和中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

注意也有台盼蓝拒染现象。

台盼蓝染色后，通过显微镜下或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞进行比较精确的定量。

台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成，并且操作非常简单。

实验步骤：1、配制4%台盼蓝：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加至100ml，用滤纸过滤，4℃保存。

使用时用PBS稀释至 %。

2、胰酶消化贴壁细胞，制备单细胞悬液，并作适当稀释。

3、染色：细胞悬液与%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。

（终浓度%）4、计数：在3分钟内，分别计数活细胞和死细胞。

5、镜下观察，死细胞被染成明显的蓝色，而拒染呈无色透明状。

6、统计细胞活力：活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）×100%注意：1.保存条件：室温保存。

2.有潜在致癌危险，实验时穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。

台盼蓝染色实验原理和步骤一、原理台盼蓝染色实验是利用台盼蓝（Toluidine Blue）染料与细胞或组织中的核酸结合，形成紫蓝色染色体。

台盼蓝染色的染料溶液带有酸性成分，其酸羧基在酸性条件下可与细胞核酸中的碱基形成氢键结合。

台盼蓝染料主要染色核酸，使得细胞核、细胞核周围的细胞质和一些细胞器着色，从而能够观察到细胞核结构、核仁和核膜的位置和形态，以及纤维蛋白、蛋白多肽和糖蛋白的酸性地带。

二、步骤1.组织固定：将需要染色的组织切片取出，用4%的冷醇固定液浸泡20分钟。

2. 渗透：将固定的组织切片用0.1%的Tween 20溶液处理3次，每次5分钟。

Tween 20可以增加细胞膜的通透性，有利于染料进入细胞内。

3.染色：用0.05%的台盼蓝染料溶液将组织切片浸泡5-10分钟，让染料与组织中的核酸结合形成染色体。

染色时间可以根据需要调整，一般情况下5分钟就足够。

4. 洗涤：用去离子水或者含有0.1%Tween 20的PBS缓冲液洗涤组织切片3次，每次5分钟。

这一步是为了去除多余的染料。

5.脱水：用70%、85%和95%的无水酒精将组织切片脱水，每个浓度的酒精浸泡3-5分钟。

6.透明化：将组织切片用苯酚-甲苯中透明化数小时。

透明化液一般是苯酚和甲苯的混合物，可以使组织切片变得透明，便于观察。

7.封片：将透明的组织切片取出，放到玻璃切片上，用封片胶将其封住，然后放置干燥。

8.观察：将封好的玻璃切片放在显微镜下观察，可以用不同倍数的物镜来观察不同部位的细胞和组织结构。

三、注意事项1.染色过程中注意避免阳光直射，避免光照会影响染色效果。

2.处理切片要轻柔，避免切片碎裂或变形。

3.实验操作要严格遵守安全规范，注意保护实验人员的安全。

4.封片时要避免出现气泡，以免影响观察。

综上所述，台盼蓝染色实验是一种常用的染色方法，通过与细胞核酸结合，可以使细胞和组织结构得到清晰可见。

实验步骤简单，但是在操作过程中需要注意一些细节，确保染色效果和实验安全。