第五节 病毒病的实验室诊断方法.

病毒的检测方法病毒是一种微生物，它可以侵入宿主细胞并利用宿主细胞的生物合成系统复制自己。

病毒的检测是非常重要的，它可以帮助人们及时发现病毒的存在，采取相应的措施来控制和治疗病毒感染。

目前，病毒的检测方法有很多种，包括免疫学方法、分子生物学方法、细胞学方法等。

下面将详细介绍几种常见的病毒检测方法。

首先，免疫学方法是一种常用的病毒检测方法。

这种方法利用人体免疫系统产生的抗体来检测病毒的存在。

常见的免疫学方法包括ELISA法、免疫荧光法和免疫印迹法。

这些方法可以通过检测血清、唾液、尿液等样本来确定病毒感染的情况。

免疫学方法具有操作简单、结果快速的特点，因此被广泛应用于临床诊断和流行病学调查中。

其次，分子生物学方法也是一种常用的病毒检测方法。

这种方法利用PCR、实时荧光定量PCR、核酸杂交等技术来检测病毒的核酸。

分子生物学方法具有高灵敏度和高特异性的特点，可以检测到病毒的极低浓度，因此被广泛应用于病毒性疾病的诊断和研究中。

另外，细胞学方法也是一种常用的病毒检测方法。

这种方法利用细胞培养和显微镜技术来检测病毒的存在。

通过观察细胞的形态和结构变化，可以判断细胞是否受到病毒感染。

细胞学方法具有直接观察病毒感染的优势，可以帮助人们更直观地了解病毒的生物学特性。

总的来说，病毒的检测方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。

在实际应用中，可以根据具体情况选择合适的检测方法来进行病毒检测。

同时，随着科学技术的不断发展，病毒的检测方法也在不断更新和完善，相信在不久的将来，会有更多更准确、更快速的病毒检测方法出现，为人们的健康保驾护航。

病原体实验室检测方法病原体实验室检测方法是指通过特定的实验室技术来检测病原体（包括细菌、病毒、寄生虫等）是否存在以及确定其类型和数量。

这些检测方法在诊断和监测传染病、疫情调查和预防控制等方面起着至关重要的作用。

以下将介绍一些常用的病原体实验室检测方法。

一、细菌检测方法：1.细菌涂片检测法：将样品刮取或脱落涂布到玻璃片上，然后通过染色和显微镜观察细菌的形态、结构和分布情况，从而快速鉴定细菌种类。

2.培养法：将样品在适当的培养基上进行培养，利用细菌的生长特性、形态和抗生素敏感性等进行细菌的鉴定和分类。

3.PCR（聚合酶链反应）法：通过扩增微生物DNA或RNA片段，利用特定引物和酶的作用，可以检测微生物的存在和种类，并且可以从非活体样本中检测到微生物。

4.药敏试验：通过将不同抗生素与细菌进行作用，观察其对生长的影响，从而确定该细菌的药物敏感性。

二、病毒检测方法：1.核酸提取和PCR法：通过提取病毒RNA或DNA，然后用特定的引物扩增并检测病毒核酸，从而确定病毒的存在和种类。

2.组织培养法：将样品接种到合适的细胞培养物上，观察细胞的形态和病变，并通过电镜、PCR等方法检测细胞内的病毒。

3.免疫学检测：通过检测病毒抗原或抗体的存在和滴度来确定病毒感染的情况，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光试验（IFA）等。

4.电子显微镜法：通过电子显微镜观察样品中的病毒颗粒，从而确定其形态和类型。

三、寄生虫检测方法：1.寄生虫涂片检测法：将样品制作成薄片，在显微镜下观察寄生虫的形态、结构和分布情况，从而确定寄生虫的种类。

2.氏染色法：染色使寄生虫产生独特的颜色特征，借助显微镜观察寄生虫的颜色和形态特征，从而鉴定寄生虫种类。

3.蛋囊检测法：通过提取样品中的蛋囊，观察其形态和特征，从而确定寄生虫的存在。

4.免疫学检测：通过检测寄生虫抗原或抗体的存在和滴度来确定寄生虫感染的情况，包括ELISA、IFA等方法。

四、其他病原体检测方法：1.快速诊断试剂：通过特定的化学试剂和技术，可以快速检测病原体的存在和种类，如快速血液测试、尿液测试和呼气测试等。

病毒感染的实验室诊断病毒感染的试验室检查包括病毒分别与鉴定、病毒核酸与抗原的直接检出以及特异性抗体的检测。

临床医师依据流行病学资料，疾病的症状与体征综合推断可能为何种病毒感染，留取相宜的标本送检。

一、检材的采集与送检病毒性疾病通常采集血液、鼻咽分泌液、咯痰、粪便、脑脊液、疱疹内容物、活检组织或尸检组织等。

供分别病毒、检出核酸及抗原的标本的，要求：(一)尽早实行在发病初期(急性期)实行，较易检出病毒，越迟阳性率越低。

(二)部位相宜由感染部位实行，如呼吸道感染实行鼻咽洗漱液或咯痰；肠道感染实行粪便；脑内感染实行脑脊液；皮肤感染实行病灶组织；有病毒血症时实行血液。

(三)冷藏速送病毒离活体后在室温下很易死亡，故采得检材应尽快送检。

若距离试验室较远，应将检材放入装有冰块或干冰的空器内送检。

病变组织则应保存于50%的甘油缓冲盐水中。

污染检材，如鼻咽分泌液、粪便等应加入青霉素、链霉素或庆大毒素等，以免杂菌污染细胞或鸡胚，而影响病毒分别。

检测特异性抗体需要实行急性期与恢复期双份血清，第一份尽可能在发病后马上实行，其次份在发病后2～3周实行。

血清标本放4℃-20℃保存，试验前血清标本以56℃30分钟处理去除非特异性物质及补体。

无菌性脑炎患者也可取脑脊液检测特异性lgM。

表80-1 病毒检材采集与检验结果的关系实行标本的时期检查病毒及其成分测定抗体埋伏期及前驱期刚发病或急性期恢复期及康复期较难查见最多查见很难查见未增多未增多或增多不明显明显增多(常超过4倍)表80-2 供病毒分别的检材临床表现常见病毒关心诊断有用的检材呼吸道感染腺病毒巨细胞病毒流感病毒副流感病毒呼肠孤病毒合胞病毒咽试、肛拭咽试或含漱液、尿液咽拭或含漱液咽拭含漱液咽拭、粪便或肛拭咽拭或含漱液、鼻咽洗液出疹疾病柯萨奇病毒巨细胞病毒埃可病毒EB病毒单纯疱疹病毒麻疹病毒风疹病毒水痘带状疱疹病毒粪便或肛拭、咽拭咽拭或含漱液、尿液粪便或肛拭、咽拭咽拭或含漱液病灶棉拭或吸取液、咽拭咽拭或含漱液、尿液咽洗液、鼻咽拭病灶棉拭或吸取液、咽拭脑炎虫媒病毒单纯疱疹病毒麻疹病毒血液、脑脊液脑活检、脑脊液、疱疹棉拭或吸取液脑脊液、咽拭或含漱液、尿液粪便或肛拭、咽拭、脑脊液无菌性脑膜炎柯萨奇病毒埃可病毒腮腺炎病毒脑脊髓液、粪便或肛拭、咽拭脑脊液、粪便或肛拭、咽拭脑脊髓液、口颊粘膜棉拭失天或新生儿感染巨细胞病毒风疹病毒单纯疱疹病毒尿液、咽拭或含漱液咽拭或含漱液、尿液病灶棉拭或吸取液、回拭眼部感染腺病毒结膜棉拭、咽拭、肛拭结膜棉拭、病灶棉拭或吸取液、咽拭其它感染巨细胞包涵体疾病单核细胞增多综合征心包炎、心肌炎巨细胞病毒巨细胞病毒EB病毒柯萨奇B病毒埃可病毒尿液、咽拭尿液、咽拭咽拭或洗液心包液、粪便、咽拭心包液、粪便、咽拭二、病毒的分别与鉴定(一)病毒的分别病毒分别的一般程序见表80-3。

病毒的诊断和检测方法一、病毒越来越多随着科技的不断进步，我们的医学工具也在不断改善。

但是，一些新疾病越来越普遍，特别是病毒性疾病。

新兴病毒通过空气、飞沫、凝胶、体液等多种传播方式传播，对我们的健康构成了严重的威胁。

二、病毒诊断的方法在医学的疫情分析中，病毒检测是最基本的诊断方法之一。

通常，病毒的检测可以分为以下几种方法：1. 肉眼观察检测：这是最原始的方法之一。

通过检查感染部位、体液和病变器官等，分析病原体的感染位置、数量和分布情况。

但是，由于肉眼观察的局限性，这种方法只适用于一些表面的病变。

2. 细胞培养检测：这种方法是将样本放入细胞培养基中，培养封闭原型细胞和病毒，并使用特定的抗体来检测病毒的数量和类型。

这种方法可以检测世界上几乎所有病毒，但其检测过程可能需要几天或更长时间。

3. 核酸检测：这是一种最先进的方法之一，通过PCR（聚合酶链式反应）等技术检测病毒的RNA或DNA等相关标记，从而确定病毒的数量和类型等。

此外，还可以将这种方法与质谱或微阵列相结合，以获得更准确的结果。

4. 血浆检测：基于血浆和血清中的抗体和抗原来检测病毒。

虽然速度较慢，但对于许多病毒有很高的检测率。

三、病毒检测技术的特点就目前的一些技术而言，各种病毒检测技术各有特点。

例如，肉眼观察简单方便、细胞培养可用于多种病毒的检测，而核酸检测和血浆检测则更为准确。

虽然各种技术的快速性和安全性也各不相同，但研发人员正探索着新的方法。

随着大量数据的产生，人工智能也已经应用于病毒检测领域。

对于病毒的识别、分型以及感染路径分析，人工智能已经被广泛使用，并已取得了一定的成果。

一些诊断设备也已更新，使人们能够更准确地检测病毒。

四、结论总体来看，现代医疗科技正在努力寻找更好的检测病毒的方法。

虽然新型病毒的产生是不可避免的，但我们期待这些新技术的应用能够更快速、更可靠的预防和治疗这些疾病，对于人类健康事业做出更大的贡献。

病毒的分离和鉴定:㈠标本的采集和运送:为了保证采集充足量活病毒标本，必须注重：采集部位、时光及运送过程。

1.标本采集部位: 标本材料包括血液、组织器官如脑、肝、肌肉等；鼻液、乳汁、脓汁等分泌物或渗出物；咽喉拭子；粪便；无菌的体液或鸡胚液。

按照临床症状、流行病学举行分析，初步判断可能是哪一种病，再决定采集何种标本。

大多数情况采集动物脏器或淋巴组织；腹泻动物，采集粪便，检测细小病毒或轮状病毒；疑似口蹄疫，采集水疱皮或水疱液等。

用拭子采集到的标本（如鼻、肛），应赶紧浸泡于生理盐水、PBS或细胞培养液中。

有的病毒不稳定，如单纯疱疹病毒、流感病毒等，应尽早接种敏激动物或组织。

2.标本采集时光: 在发病的早期，普通越早越好。

晚期：①可能发生继发感染，增强判断艰难；②体内易产生抗体，病毒成熟释放减少, 分离病毒比较艰难③尸体标本最好在死后6小时内采集，否则病毒容易死亡。

3.标本的运送: 大多数病毒对热不稳定，以赶紧接种为好。

如需运送或保存，必须在冷环境。

48小时内，普通在50%中性甘油中 4℃保存；较长时光，最好放在-20℃以下、干冰或液氮保存。

4.分离材料尽量避免反复冻融。

㈡标本的处理1.研磨与稀释2.除菌处理:①抗生素处理，4℃过夜。

青链霉素②离心10，000 r/min第 1 页/共 4 页③对乙醚有抵御力的病毒如肠病毒、鼻病毒、呼肠孤病毒、腺病毒、痘病毒等可以加等量乙醚，4℃过夜。

㈢标本的接种途径: （标本接种于哪一种动物、鸡胚或细胞，以及选择哪一种接种途径，主要决定于病毒的嗜性）普通嗜神经性病毒主要举行动物脑内接种嗜呼吸道病毒接种动物的鼻腔或鸡胚尿囊腔嗜皮肤性病毒接种动物皮内、皮下或鸡胚绒毛尿囊膜嗜内脏病毒可接种动物的腹腔、静脉、肌肉υ鸡胚羊膜腔和尿囊腔：普通是测定其血凝素的产生，如流感病毒、新城疫病毒υ绒毛尿囊膜接种主要看见其痘斑υ卵黄囊接种主要看见鸡胚的死亡υ不同病毒复制需要的宿主细胞不同υ原代细胞最敏感。

第二章病毒第五节病毒病的实验室诊断方法畜禽病毒性传染病是危害最严重的一类疫病，给畜牧业带来的经济损失最大。

除少数如绵羊痘等可根据临床症状、流行病学、病变作出诊断外，大多数病毒性传染病的确诊，必须在临床诊断的基础上进行实验室诊断，以确定病毒的存在或检出特异性抗体。

病毒病的实验室诊断和细菌病的实验室诊断一样，都需要在正确采集病料的基础上进行，常用的诊断方法有：包涵体检查、病毒的分离培养、病毒的血清学试验、动物接种试验、分子生物学的方法等。

一、病料的采集、保存和运送病毒病病料采集的原则、方法以及保存运送的方法与细菌病病料的采集、保存和运送方法基本是一致的，不同的是病毒材料的保存除可冷冻外，还可放在50%甘油磷酸盐缓冲液中保存，液体病料采集后可直接加入一定量的青、链霉素或其他抗生素以防细菌和霉菌的污染。

二、包涵体检查有些病毒能在易感细胞中形成包涵体。

将被检材料直接制成涂片、组织切片或冰冻切片，经特殊染色后，用普通光学显微镜检查。

这种方法对能形成包涵体的病毒性传染病，具有重要的诊断意义。

但包涵体的形成有个过程，出现率也不是100%，所以，在包涵体检查时应注意。

（能出现包涵体的重要畜禽病毒见表2-3）表2-3 能产生包涵体的畜禽常见病毒病毒名称感染范围包涵体类型及部位痘病毒类狂犬病病毒伪狂犬病病毒副流感病毒III型马鼻肺炎病毒鸡新城疫病毒传染性喉气管炎病毒人、马、牛、羊、猪、鸡等狼、马、牛、猪、人、猫、羊、禽等犬、猫、猪、牛、羊等牛、马、人马属动物鸡鸡嗜酸性，胞浆内，见于皮肤的棘层细胞中嗜酸性，胞浆内，见于神经原内及视网膜的神经节层的细胞中嗜酸性，核内，见于脑、脊椎旁神经节的神经原中嗜酸性，胞浆及胞核内均有，见于支气管炎、肺泡上皮细胞及肺的间隔细胞中嗜酸性，核内，见于支气管及肺泡上皮细胞、肺间隔细胞、肝细胞、淋巴结的网状细胞等嗜酸性，胞浆内，见于支气管上皮细胞中嗜酸性，核内，见于上呼吸道的上皮细胞中三、病毒的分离培养将采集的病料接种动物、禽胚或组织细胞，可进行病毒的分离培养。

病毒感染性疾病的检验诊断及方法发表时间：2013-02-28T13:37:24.560Z 来源：《中外健康文摘》2012年第47期供稿作者：邱一凡[导读] 病毒性疾病检验诊断应首先根据临床特征和流行病学资料，初步判断可能感染的病毒。

邱一凡（黑龙江省大庆油田总医院163000）【中图分类号】R511 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）47-0133-02病毒性疾病检验诊断应首先根据临床特征和流行病学资料，初步判断可能感染的病毒。

然后根据可疑病毒的生物学特点、机体免疫应答和临床过程，结合患者当前所处的时机，确定检验诊断的方法。

有些病毒感染潜伏期较短，发病时机体免疫系统尚未完全应答，没有抗体产生，因此可选择测定病毒颗粒、病毒抗原或病毒核酸。

对于潜伏期超过10天的病毒感染，可检测特异性的IgM抗体来进行早期快速诊断、区别初次和再次感染。

对可在机体内形成持续感染或潜伏感染的病毒，可检测急性期和恢复期双份血清的IgG抗体滴度有无4倍以上升高，或直接检测病毒核酸。

对原因不明，可能有新病毒感染时，应采集相应部位的标本进行病毒分离，同时应采取双份血清以确认分离的病毒为病原病毒。

对同一症状可由多种病毒引起的情况，应同时检测几种相关病毒的病毒颗粒、抗原或抗体，对由多个型别组成的病毒可测定它们的共同抗原。

病毒感染的实验室检查包括病毒分离与鉴定、病毒核酸与抗原的直接检出以及特异性抗体的检测。

1 标本的采集与送检临床医师根据流行病学资料，疾病的症状与体征综合判断可能为何种病毒感染，留取适宜的标本送检。

实验结果对诊断病毒感染的价值，很大程度上取决于标本的采集和处理的方式是否恰当。

正确采集标本，及时运送和处理，是极为重要的。

1.1 采集标本的时间尽可能在发病的初期，急性期或患者入院的当天进行。

疾病后期由于机体产生免疫力，开始清除病毒，使病毒数量减少或消失，不易检出。

1.2 标本种类的选择根据临床感染的症状及流行病学资料，判断可能感染病毒种类，选择相应部位采取标本。