选修一专题二微生物的培养

1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。 称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动
作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。 溶化：①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯
化钠继续加热；③加入琼脂；④用蒸馏水定容到100mL。 整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致 烧杯破裂。
培养乳酸杆菌时需要添加 维生素 ， 培养霉菌时需要将培养基pH调节为 酸性 ， 培养细菌时需要将pH调节为 中性或微碱性 。
（2）获得纯净培养物的关键是什么？ （3）避免杂菌污染的方法主要包括哪四个方面 （4）什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？
无菌技术包括： （1）对实验操作空间、操作者的衣着 和手进行 清洁和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基 等器具进行 灭菌 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操 作应在 酒精灯火焰附近 旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。
答：可以用手触摸盛有培养基的锥形 瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手 时，就可以进行倒平板了。
2、为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微 生物污染培养基。
3、平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固 后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
灭菌的方法：
1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160-170 ℃ 下加热1-2h。 3、高压蒸汽灭菌：100kPa、 121 ℃下维持15-30min.
6、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤 7、如何倒平板？
三、实验操作

专题2 微生物的培养与应用
课题1 微生物的实验室培养
1
（一）培养基
1、定义：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制 出供其生长繁殖的营养基质。 2、培养基成分:碳源、氮源、水和无机盐等4类 ★另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,以及 氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。如:培养乳酸菌时需 添加维生素、霉菌PH调成酸性、细菌PH调成中性或微碱 性、厌氧微生物提供无菌条件。 ★ 4类成分齐全的培养基叫基本培养基，例如牛肉膏蛋白 胨培养基
根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指
示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种类的
微生物。
3
液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
4
固体培养基：菌落
单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落特征是鉴定菌种的重要依据。
5
于计算平均值，因为它不接近真实值，应重新实验
并注意：将菌液摇匀后再接种 P22
35
㈤.微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
半固体培养基：
无动力
有动力(弥散)
(是否运动) 6
选择培养基:从微生物群中选择具有特定表型的细胞. 使之进行繁殖所用的培养基,称为选择培养基.
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌

4.平板划线时不能划破培养基，为什么？ 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿 着划破处生长，会形成一个条状的菌落。
思 考:
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与 系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？
答：应从操作的各个环节保证“无菌”。 1.酒精灯与培养皿的距离要合适； 2.吸管头不要接触任何其他物体； 3.要在火焰周围迅速操作。
将接种后和未接种（作为对照组）的培养基均放到 370C的恒温箱中，培养12～24h后进行观察并记录结果。
二、纯化大肠杆菌——稀释涂布平板法
a.梯度稀释菌液：1ml Biblioteka ml 1ml 1ml 1ml 1ml
重复以上操作，在三、四、五区域内划 线。注意不要将最后一区的划线与第一 区相连。
左手将皿盖打开一条缝隙，右手将 沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，
划___3__至__5___条平行线，盖上皿盖。
注意不要划破培养基。
将入培平养板箱_倒_中_置_培_放
养。
将已_冷___却__的接种环伸
.
入菌液中蘸取一环菌液
微量移液器
101
102
103
104
105
106
菌液
注意：
6支试管，分别加入9ml无菌水
1.移液管需要经过灭菌
2.操作时，试管口和移液管应在离火焰1-2CM处
二、纯化大肠杆菌——稀释涂布平板法
b.涂布平板：
1、从酒精中取出涂布器时，要让其上多余的酒精滴 尽，然后 将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃
2、所有操作都应在火焰附近进行
较为温和理化方法， 强烈的理化方法，

选修1专题2《微生物的培养与应用》章检测一、选择题1. 下列对菌落的表述不正确的是A. 每个菌落都是由多种细菌大量繁殖而成B. 各种霉菌在面包上生长形成的不同颜色的斑块即为菌落C. 噬菌体能使固体培养基上的细菌裂解，菌落变得透明D. 细菌和真菌在培养基上形成的菌落形态不同2. 将醋酸菌接种到四个相同的培养基中，放在以下条件下培养，其中菌落形成最快的是3. 下列说法不正确的是（）A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。

4. 利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物D. 若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌5. 某混合样品中微生物R含量极少，要得到大量的R，比较理想的方法是采用( )A．天然培养基 B．稀释涂布平板法C．利用适合R生长但同时抑制或阻止其他种类微生物生长的选择培养基D．用显微镜直接观察、寻找，再培养6. 稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。

下列相关叙述错误的是A．操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释B．需将不同稀释浓度的菌液分别涂布到固体培养基表面C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理7. 培养基、培养皿、接种环、实验操作员的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法A．⑤③②①④⑥ B．①②③④⑤⑥ C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤8.微生物的接种技术最常用的有①平板划线法②稀释涂布平板法③斜面接种④穿刺接种A.①②③B.①②C.②③④D.①②③④9. 下列是对四种微生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述，正确的一组是微生物种类乳酸菌根瘤菌硝化细菌衣藻A 能源糖类光能NH3光能B 碳源糖类CO2CO2CO2C 氮源NO3－N2NH3NO3－D 代谢类型异样厌氧型自养需养型自养需养型自养需养型A.整个接种过程都要在酒精灯的火焰附近进行B.接种环放在酒精灯火焰上灼烧之后即可伸入菌种试管挑取少许菌种C.菌种试管口和待接种的试管口接种前后都要通过酒精灯火焰2至3次D.带菌的接种环应在培养基斜面上由底部向上轻轻划“S”型曲线11. 下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是A.操作顺序为配制培养基、调节pH、分装、灭菌、包扎、倒平板B.琼脂在制备固体培养基时，可作为凝固剂C.将培养基冷却至50℃左右时进行倒平板D.将培养基趁热分装到试管中，培养基的高度约为试管高度的1∕512. 细菌培养过程中分别采用了高压蒸气、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌A．接种环、手、培养基 B．高压锅、手、接种环C．培养基、手、接种环 D．接种环、手、高压锅13. 有关平板划线操作正确的是（）A．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌B．打开含菌种的试管需通过火焰灭菌，取出菌种后无需通过火焰，马上塞上棉塞即可C．将沾有菌种的接种环迅速伸人平板内，划三至五条平行线即可D．最后将平板倒置，放人恒温培养箱中培养14. 通常用来作为菌种鉴定的重要依据是A.菌落的特征B.细菌的形态C.细菌体积D.细菌结构15. 用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是A．未接种的选择培养基 B．未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C．接种了的选择培养基 D．接种了的牛肉膏蛋白胨培养基16. 请选出下列正确的取样培养操作步骤①土壤取样②称取10g土壤取出加入盛有90ml无菌水的锥形瓶中③吸取0.1ml进行平板涂布④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度A．①②③④ B．①③②④C．①②④③ D．①④②③17.下列关于微生物分离和培养的有关叙述，错误的是( )A．微生物培养前，需对培养基进行消毒B．测定土壤样品中的细菌数目，常用菌落计数法C．分离土壤中不同的微生物，要采用不同的稀释度D．分离能分解尿素的细菌，要以尿素作为培养基中唯一的氮源18.关于灭菌和消毒的理解不．正确的是( )A．灭菌是指杀灭环境中一切微生物的细胞、芽孢和孢子B．消毒和灭菌实质是相同的C．接种环用灼烧法灭菌D．常用灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等19.产生标准菌落的细菌的最初数目和培养基分别是( )A．一个细菌，液体培养基B．许多细菌，液体培养基C．一个细菌，固体培养基 D．许多细菌，固体培养基20.培养基中浓度过高抑制微生物生长的原因是（）A含热量太多 B 会使微生物失水C 导致微生物休眠D培养基中的碳源和氮源比例失衡21.可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是( )A．以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B．以尿素为唯一氮源的培养基中加入二苯胺试剂C．以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹Ⅲ试剂D．以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂22.下列关于纤维素酶的说法，错误的是A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种B. 纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖23.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是( )A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌 B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板 D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板24.如右图是微生物平板划线示意图。