关于荧光免疫分析技术的专题报告
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荧光免疫层析技术原理进展荧光免疫层析技术(Fluorescent Immunoassay,FIA)是一种基于荧光标记物的免疫分析技术,具有高灵敏度、高选择性和高速度的特点。
近年来,随着发展和进步,荧光免疫层析技术在医学诊断、药物研发和生物分析等领域得到了广泛应用,并取得了重要的进展。
荧光免疫层析技术的原理主要分为两个方面:一是免疫反应,二是荧光检测。
免疫反应在采样点的免疫固定区域进行,通过特定抗体与待测物结合形成复合物。
荧光检测则是利用荧光标记的抗体或荧光标记的近红外荧光染料对复合物进行检测和测量。
荧光标记的抗体在光源的照射下会发出荧光信号,这个信号可以通过荧光分析仪器进行定量检测和计算。
在技术进展方面,荧光免疫层析技术主要表现在以下几个方面:1.荧光标记物的改进:荧光免疫层析技术中使用的荧光标记物是整个技术的核心,近年来,研究者们不断改进和优化荧光标记物的性能,如改进荧光染料的光稳定性,提高荧光信号的强度和稳定性,提高荧光标记的抗体的经济性和稳定性等。
2.抗体的改进:抗体作为免疫反应的关键组分,对免疫分析的灵敏度和特异性具有重要影响。
随着单克隆抗体技术的发展,研究者们可以定制更加特异和高亲和力的抗体,从而提高了荧光免疫层析技术的检测灵敏度和准确性。
3.生物纳米技术的应用:荧光免疫层析技术与生物纳米技术的结合为技术的发展提供了新的契机。
生物纳米技术可以提高免疫反应的效率和精确性,通过改变纳米材料的形态和物理化学性质,使得荧光信号和靶标物之间的相互作用更加紧密和稳定。
4.自动化分析系统的发展:荧光免疫层析技术在实验室中的自动化分析系统的发展为技术的应用提供了更多的可能性。
自动化系统可以提高检测的速度和精确性,减少操作的复杂性和人为误差的发生,使得技术更加实用和可靠。
总的来说,荧光免疫层析技术在过去几年取得了很多进展,不仅在医学诊断和生物分析等领域表现出了广泛应用的潜力,也为技术的进一步发展提供了很多的新思路和新方法。
应用荧光微球技术进行免疫检测研究荧光微球技术(Fluorescent microsphere)是一种新兴的免疫检测技术,通过将荧光染料标记于微米级的聚合物微球表面,实现对多个分子的检测和分析。
该技术具有高灵敏度、高选择性、多重检测和高通量等特点,被广泛应用于生物医学、环境监测和食品安全等领域。
荧光微球技术的原理是在制备微球的过程中加入荧光染料,并使其与聚合物结合。
当荧光微球与目标分子发生特异性反应时,就可以通过荧光信号的变化来检测和定量目标分子的存在。
首先,制备荧光微球。
这一步骤涉及合成聚合物和聚合物化学、微观粒子物理和胶体化学等学科的知识。
荧光染料可以通过共聚合、后修饰等方法与聚合物结合,从而实现微球的荧光标记。
其次,对荧光微球进行功能化修饰。
利用化学交联、共价结合或物理吸附等方法,将具有特异性反应的生物分子(如抗体、DNA探针等)固定在荧光微球表面。
这样做可以使荧光微球对目标分子具有高度的特异性。
然后,进行靶标分析。
将样品中的目标分子与具有特异性的荧光微球共同孵育,目标分子与荧光微球之间发生特异性反应。
通过检测荧光信号的强度或变化来定量目标分子的浓度。
最后,荧光信号的检测和分析。
荧光信号可以通过流式细胞术、荧光显微镜等设备进行定量检测和分析。
这些荧光信号可以通过计算机软件进行处理和解析,得到目标分子的浓度、分布和相关信息。
荧光微球技术可以同时检测多个目标分子,具有高通量的优势。
此外,荧光微球具有高度的稳定性和耐久性,可以重复使用。
因此,它被广泛应用于分子诊断、生物传感器和药物筛选等方面。
总之,荧光微球技术是一种先进的免疫检测技术,具有高灵敏度、高选择性、多重检测和高通量等特点。
通过合理设计和功能化修饰荧光微球,可以实现对多个目标分子的定量检测和分析,为生物医学研究和临床应用提供了新的手段和途径。
荧光分析技术的原理和方法荧光分析技术是一种分析和检测物质的方法,它不仅具有灵敏度高、特异性强等优点,而且还可以使用相对简单、易操作的设备和方法进行分析。
本文将探讨荧光分析技术的原理和方法,以及其在实际应用中的优缺点。
一. 荧光分析技术的原理荧光分析的基本原理是物质吸收能量后,由激发态自发辐射发出荧光。
荧光发射的波长与物质的结构和环境密切相关,因此可以根据荧光发射的波长来分析物质的成分和性质。
二. 荧光分析技术的方法荧光分析技术主要有荧光光谱分析、荧光显微镜、荧光免疫分析等几种。
1. 荧光光谱分析荧光光谱分析是一种利用荧光发射波长来分析物质的方法。
它通过激发样品,测量样品发出的荧光光谱来确定物质的化学成分和性质。
荧光光谱分析在生物医学领域有着非常重要的应用,比如用于检测蛋白质和动物细胞等生物分子。
2. 荧光显微镜荧光显微镜是一种利用荧光物质在显微镜下展现的亮度和颜色来观察样品的方法。
它可以将荧光染料标记在生物样品中,从而实现对生物分子和细胞的可视化。
荧光显微镜已经成为生物医学领域中最重要的观测手段之一,也是生物光学、光子学研究领域的必备工具。
3. 荧光免疫分析荧光免疫分析是一种利用荧光标记的抗体来检测分子的方法。
它通过将荧光标记的抗体与特定的分子结合,在荧光显微镜下观察荧光信号以检测分子。
荧光免疫分析主要用于医学诊断中的分子检测和细胞成像。
三. 荧光分析技术的应用荧光分析技术在许多领域中都有着广泛的应用。
主要涉及到生物医学、环境监测、食品安全检测、工业生产等方面。
1. 生物医学荧光分析在生物医学中的应用较为广泛,包括荧光显微镜观察生物结构、荧光免疫分析检测各种分子等。
2. 环境监测荧光分析技术可以将其应用于环境监测和环境污染控制。
比如用于污染物的快速检测、废水污染的监测、空气污染的监测等。
3. 食品安全检测荧光分析也可以用于食品安全检测,比如寻找食品中有害物质如农药、污染、病原体等。
4. 工业生产荧光分析技术也可以应用于工业生产,如半导体晶片生产、光学元器件制造等。
免疫荧光技术的原理及应用1. 引言免疫荧光技术是一种用于检测和定位特定抗原或抗体的广泛应用的方法。
它基于免疫学原理和荧光显微镜技术,可用于分析和研究细胞、组织和细菌等样本中的特定抗体或抗原。
本文将重点介绍免疫荧光技术的原理和应用。
2. 原理免疫荧光技术的原理基于特定抗原与特异性抗体之间的结合反应。
该技术利用荧光染料的特性,在荧光显微镜下可观察到荧光信号的产生。
主要包括以下步骤:2.1 抗原-抗体结合在免疫荧光技术中,首先需要特异性抗体与抗原结合。
抗体可以通过免疫化学方法从动物或人体中获得。
抗原可以是细胞表面蛋白、细胞器、病原体、药物或其他生物分子。
抗原-抗体结合反应是免疫荧光技术的核心步骤。
2.2 荧光染料标记为了观察到抗原-抗体结合,需要将荧光染料标记在抗体上。
荧光染料有多种选择,常用的包括荧光素、荧光素同分异构体、荧光蛋白等。
荧光染料标记后的抗体可通过荧光显微镜观察到荧光信号。
2.3 荧光显微镜观察标记了荧光染料的抗体与抗原结合后,可以使用荧光显微镜进行观察。
荧光显微镜利用特殊的光源和滤光片,能够选择性地激发和检测荧光信号。
观察到的荧光信号可以通过相机或其他图像采集设备记录下来,用于定量分析和图像处理。
3. 应用免疫荧光技术在生物医学研究和临床诊断中有广泛的应用。
以下是免疫荧光技术的一些常见应用:3.1 免疫组织化学免疫组织化学是免疫荧光技术的重要应用之一。
它可以用于检测和定位细胞和组织中的特定蛋白。
例如,在肿瘤研究中,免疫荧光技术可以用于检测肿瘤标志物的表达,并观察其在细胞或组织中的分布和定位。
3.2 免疫细胞化学免疫细胞化学是研究细胞表面标志物、细胞器和细胞间相互作用的重要方法。
通过使用荧光染料标记的抗体,可以准确地检测和定位细胞表面受体、膜蛋白和其他细胞分子。
这对于研究细胞信号传导、细胞生理学以及疾病机制等方面具有重要意义。
3.3 病原体检测免疫荧光技术在病原体诊断和研究中也有广泛应用。
免疫荧光技术实验报告免疫荧光技术实验报告免疫荧光技术是一种通过将荧光标记的抗体与特定抗原结合来检测和定位生物分子的方法。
本实验旨在探究免疫荧光技术的原理和应用,并通过实验验证其可行性。
一、实验原理免疫荧光技术基于抗原与抗体的特异性结合原理。
在本实验中,我们选择了一种常用的抗原-抗体反应,即兔抗小鼠IgG。
首先,将小鼠IgG注射到兔体内,兔体会产生针对小鼠IgG的抗体。
然后,将这些抗体与荧光染料标记,形成荧光标记的抗体。
当荧光标记的抗体与小鼠IgG结合时,可以通过荧光显微镜观察到荧光信号。
二、实验步骤1. 准备样本:将小鼠IgG溶解在缓冲液中,制备不同浓度的小鼠IgG溶液。
2. 固定标本:将小鼠IgG溶液滴加到载玻片上,使其均匀分布,并用乙醇固定。
3. 孵育抗体:将荧光标记的兔抗小鼠IgG加入载玻片上,与固定的小鼠IgG反应。
4. 清洗样本:用缓冲液洗涤载玻片,去除未结合的抗体。
5. 观察结果:在荧光显微镜下观察载玻片上的荧光信号。
三、实验结果在实验中,我们观察到荧光显微镜下载玻片上出现了荧光信号。
荧光的强度与小鼠IgG的浓度成正比,即小鼠IgG浓度越高,荧光信号越强。
这表明荧光标记的抗体与小鼠IgG发生了特异性结合。
四、实验分析免疫荧光技术的原理是利用抗体与抗原的特异性结合来检测和定位生物分子。
在本实验中,我们成功地将荧光标记的抗体与小鼠IgG结合,形成荧光信号。
这表明免疫荧光技术可以用于检测特定抗原,并通过荧光显微镜观察到信号。
免疫荧光技术在生物医学研究中具有广泛的应用。
它可以用于检测病原体、研究细胞蛋白定位、诊断疾病等方面。
例如,在病原体检测中,可以使用荧光标记的抗体来检测病原体的存在和定位,从而提高病原体的检测灵敏度和准确性。
在细胞蛋白定位研究中,免疫荧光技术可以用于观察蛋白在细胞内的分布情况,从而揭示蛋白的功能和相互作用关系。
在疾病诊断中,荧光标记的抗体可以用于检测特定抗原的存在,从而帮助医生进行疾病的早期诊断和治疗。
免疫荧光的原理和应用原理免疫荧光是一种基于抗体与目标分子之间的特异性结合而进行的荧光标记技术。
其原理基于以下几个关键步骤:1.抗原结合:样品中的目标分子与特异性的抗体反应,形成抗原-抗体复合物。
2.二抗结合:将荧光标记的二抗加入体系中,该二抗能够与抗体特异结合。
3.荧光标记:荧光标记的二抗与抗原-抗体复合物结合,形成荧光标记的复合物。
4.检测:使用荧光显微镜或其他检测设备观察荧光信号。
免疫荧光技术的主要原理是通过荧光信号来定位和检测目标分子在细胞或组织中的位置和表达水平。
荧光标记的抗体可以与特定的抗原结合,产生荧光信号,从而实现对目标分子的定位和检测。
应用免疫荧光技术具有广泛的应用领域,以下列举了一些常见的应用:•细胞免疫荧光检测:通过标记荧光抗体,可实现对细胞中特定蛋白质的检测和定位。
这种技术可以用于研究细胞的生理功能和病理变化。
•肿瘤标记:免疫荧光技术可以用于肿瘤标记,通过标记荧光抗体,可实现对肿瘤标志物的检测。
这对于早期肿瘤的诊断和治疗具有重要意义。
•免疫组织化学:免疫荧光技术在组织学研究中应用广泛。
通过标记荧光抗体,可以检测组织中各种蛋白质的分布和表达水平,从而了解组织的结构和功能。
•流式细胞术:免疫荧光技术在流式细胞术中也有重要应用。
通过标记荧光抗体,可以定量、快速地检测细胞表面蛋白的表达水平,实现对细胞的分析和分类。
•实时荧光PCR:免疫荧光技术在实时荧光PCR中也得到了广泛应用。
通过标记荧光抗体,可以实时检测PCR扩增反应的结果,从而快速、精确地分析DNA的定量和变异。
优势免疫荧光技术相比传统的化学标记技术具有以下几个优势:•高特异性:免疫荧光技术基于抗体与目标分子之间的特异性结合,具有高度的特异性。
这使得免疫荧光技术在细胞和组织中的定位和检测方面具有明显的优势。
•高灵敏度:荧光信号可以被高度敏感的仪器检测到,使得免疫荧光技术具有较高的灵敏度。
这可以实现对目标分子的快速和准确的检测,甚至在低表达水平下也能够得到可靠的结果。
免疫标记技术实验报告前言在生命科学研究中,免疫标记技术是一项十分重要的实验技术。
它利用特异性抗体或结合蛋白,标记或定位待检测分子,实现对生物体内各种生物分子的检测和研究。
本实验报告以免疫荧光标记技术为例,详细介绍了该技术的实验原理、实验步骤及结果分析,旨在帮助读者深入了解免疫标记技术的实验方法和应用。
实验原理免疫荧光标记技术是利用荧光标记的抗体特异性识别和结合目标分子,从而对目标分子进行检测和定位。
本实验中,我们通过荧光标记的抗体识别和结合细胞膜表面的受体,实现对目标细胞的检测和定位。
实验中所使用的抗体标记方式是间接标记法,即将特异性初级抗体与荧光标记的二级抗体结合,从而实现对目标细胞的检测。
实验步骤1.细胞培养和处理将细胞培养于无菌培养皿中,细胞密度约为80%时,加入刺激剂并继续培养。
处理时间和刺激剂的浓度需根据不同的实验目的和要求进行调整。
2.制备抗体溶液将荧光标记的抗体或间接标记法所需要的初级抗体和二级抗体制备至适当浓度。
常用抗体浓度范围为1:100-1:500。
3.活细胞荧光标记用1倍PBS将培养皿中的细胞洗涤3次,去除细胞培养基和死细胞。
随后,向细胞中加入刚才制备好的荧光标记的抗体,并在室温下旋转轻轻混合15分钟。
4.洗涤和染色用1倍PBS将细胞混合物洗涤2次,并用1倍PBS悬浮细胞混合物。
接着,用50%甘油液将混合物微量涂于载玻片上,用甘油溶液瞬时固定细胞,形成细胞染色。
5.显微镜观察用荧光显微镜观察载玻片中的细胞荧光信号,并拍摄显微镜图像。
可以通过比对不同实验条件下的细胞标记和没有标记的对照组,对实验结果进行分析和比较。
结果分析免疫荧光标记技术的应用范围十分广泛,本实验以细胞膜表面受体为例,介绍了该技术的实验步骤和原理。
通过观察显微镜下的荧光图像,可以发现被荧光标记的细胞荧光信号比未被标记的细胞荧光信号强烈许多,从而实现了对目标细胞的检测和定位。
但是需要注意的是,免疫标记技术中所使用的荧光标记物在实验过程中会产生光漂白和光淬灭的现象,从而降低检测信号的强度和可靠性。
荧光免疫层析技术的原理与进展荧光免疫层析技术(Fluorescence immunoassay)是一种通过利用特定抗原与抗体之间的特异性结合来检测和定量分析生物标志物的技术。
该技术结合了免疫学和荧光分析技术,具有高灵敏度、高选择性、快速性和准确性等优点。
荧光免疫层析技术的原理基于免疫体系,其中一种成分是特异性结合抗原的抗体,另一种成分是标记有荧光染料的抗体。
荧光染料发射的荧光信号与所检测的生物标志物的浓度成正比,因此可以通过测量荧光信号的强度来定量分析目标物质的浓度。
荧光免疫层析的步骤包括样品预处理、荧光标记、免疫反应和信号检测等。
首先,样品需要进行预处理,包括去除干扰物和处理样品矩阵,以提高分析的准确性和灵敏度。
然后,通过将荧光染料与特异性抗体偶联,将其标记到待测分析物上。
标记过的抗体用于与待测物质发生特异性结合。
在免疫反应中,样品和荧光标记的抗体混合反应,使待测物质与标记抗体发生结合。
最后,通过荧光检测设备检测荧光信号的强度,从而定量分析待测物质的浓度。
荧光免疫层析技术在医学、生物学、环境监测等领域得到了广泛的应用与进展。
在临床诊断中,荧光免疫层析技术可以用于检测病毒、细菌、代谢产物等生物标志物,帮助医生进行疾病的早期筛查和诊断。
在生物学研究中,该技术可以用于定量检测蛋白质、细胞因子等生物分子,研究其功能和作用机制,为生物学研究提供重要的实验手段。
在环境监测和食品安全领域,荧光免疫层析技术可以用于检测污染物和有害物质,提高检测速度和准确性。
近年来,随着纳米技术、微流控技术和生物传感器技术的发展,荧光免疫层析技术也得到了一系列的改进和创新。
例如,通过利用纳米颗粒标记抗体,增强荧光信号的强度和稳定性,提高了荧光免疫层析技术的灵敏度和稳定性。
此外,微流控技术的应用可以实现样品的自动化处理和分析,提高了分析的速度和准确性。
生物传感器技术的引入,使荧光免疫层析技术具有更大的灵活性和可扩展性,为多种分析需求提供了解决方案。
荧光免疫分析技术在食品安全中的应用随着人们对食品安全的关注度越来越高,食品安全检测技术也逐渐被人们所重视。
荧光免疫分析技术是一种非常先进和精准的检测技术,其应用在食品安全领域能够有效地保障人们的饮食健康。
本文将从荧光免疫分析技术的基本原理、在食品安全中的应用及其优势和不足等方面进行探讨。
一、荧光免疫分析技术的基本原理荧光免疫分析技术是指利用特异性抗体与抗原结合的特性,使标记有荧光物质(如荧光素、硫化铟等)的抗体与抗原结合,从而通过荧光测定技术实现对抗原或抗体的高灵敏、高特异性检测的一种技术。
它主要是利用荧光激发与发射特性、异物的免疫原性与抗原识别能力,以及特异性抗体与抗原之间的结合性质相结合,通过对荧光剂的检测和显示,来定量分析某一特定抗原或抗体物质的技术。
在荧光免疫分析技术中,一般将检测物标记为荧光标记物,它可以是荧光素或其他不同的荧光标记物。
一旦与目标抗原或抗体结合,标记物则会生成一个特定的荧光信号。
在检测中,荧光光源会用荧光化学染料或者荧光素激发,然后通过滤光器选择性地分离目标物的荧光信号,最后通过检测仪器测量荧光强度,以此来确定目标物的存在与否及其浓度。
二、荧光免疫分析技术在食品安全中有很多的应用,如对食品中的农药残留、兽药残留、毒素、细菌等有害物质的快速检测。
这些有害物质的残留会对人类健康造成严重的危害,因此及时检测和控制这些有害物质是食品安全的一个重要内容。
1. 荧光免疫分析技术在农药残留检测方面的应用农药残留是指危害儿童健康的一类有害物质。
现行的农药残留检测方法有GC-MS和HPLC等,但是这些方法繁琐、费时,且需要高精密的仪器设备,因此价格较高。
荧光免疫分析技术在农药检测中的优势在于其高度的灵敏度和快速性。
荧光免疫分析技术可以检测多种不同农药的残留,同时又不需要对样品进行复杂的处理,因此是一种非常有效和经济的检测方法。
2. 荧光免疫分析技术在食品中毒素检测方面的应用毒素是指某些微生物代谢产物,它们存在于某些食物种类中,当人体食用该种食物中毒素过多时,会对人体健康造成很大的危害。
福州大学专题报告姓名/学号:王佳婕/10112010517
学院:物理与信息工程学院
专业:通信与信息系统
导师:洪蛤畔副教授
研究方向:生物医学信息的检测与处理
荧光免疫分析定量检测技术
免疫分析(immunoassay , IA)是基于抗原和抗体特征性反应的一种分析技术。
根据标记技术手段的不同,免疫分析主要分为放射免疫分析、酶免疫分析、化学发光免疫分析、荧光免疫分析等[1]。
1941年,Cons等用荧光素和抗体的结合来定位组织中的抗原,提出了荧光免疫分析法(Fluorescence Immunoassay,FIA)的概念[2]。
荧光免疫分析法常用试剂是荧光素,荧光素一直是分析领域中常用的有机荧光分子标记物。
在特定波长的激发光作用下,某些有机荧光分子很容易被激发至饱和状态并发出荧光,而这些荧光分子还能在很短的时间内进行多次的重复激发和测量。
荧光免疫分析法就是根据荧光分子的这种特性进行定量分析的。
一、荧光免疫分析
荧光免疫分析的方法有很多,常见的有以下几种:荧光偏振免疫分析、荧光猝灭免疫分析、荧光增强免疫分析。
荧光免疫分析在国内外被广泛地应用在临床检测中,如内分泌疾病检测(甲状腺、糖尿病及生长素类的检测)、传染病检测(肝炎、艾滋病等)、妇产科疾病检测(HCG、FSH、Testosterone等)、肿瘤标志物检测(AFP、PSA、CA系列)、遗传科疾病检测(产前筛查、新生儿筛查及基因杂交检测等)、血液及细胞学检测(贫血、白血病及细胞试验与分析等)[3]。
免疫组织化学、微阵列、多标记物的免疫分析等新应用也不断地涌现出来[4]。
荧光免疫分析技术的基本原理是将抗原抗体反应的高度特异性
与荧光的可测量性结合起来,以荧光物质作为示踪剂标记抗体(或抗原)制成特异性试剂,可用于检测特定的抗原抗体浓度,以便进一步进行病理学或免疫组织化学的免疫分析[4]。
相对于定性检测和半定量检测,定量检测在临床应用中更具有实际意义。
它可以直接读出待测物质的浓度,为临床诊断提高可靠依据,可应用于疾病的早期诊断。
二、荧光免疫定量检测
1.荧光检测机理
某些物质经紫外光的照射,吸收了一定波长的入射光(紫外光)后,即可发射出较入射光波长稍长的光,这种光称为荧光。
由于物质的分子结构不同,所能吸收紫外光的波长及发射荧光的波长也有所不同,利用这个特性可以对待测物质进行有针对性的检测。
在一定条件
下,待测物质浓度越高,紫外光照射后所发射的荧光越强;反之,浓度越低,所发射的光也越弱;根据荧光强度的强弱,可以对待测物质的浓度进行判定。
任何发射光的物质都存在两个特征的光谱,即激发光谱与荧光光谱。
物质的组成与结构不同,所能吸收入射光的波长和所发射荧光的波长也不同。
待测物质的激发光谱是表征待测物质在不同波长的激发光照射条件下,能产生对应的荧光强度的关系谱图;荧光光谱,是指物质辐射出的不同波长的荧光所对应的荧光强度[5]。
定量检测的关键点之一是根据待测物质的荧光光谱,找到待测物质荧光强度最大点对应的激发光的波长,根据不同浓度的待测物质经特定波长的激发光激励后产生的荧光强度的大小,来确定待测物质浓度的大小。
2. 如何定量表示荧光强度
待测物质浓度的大小对应荧光强度的大小。
如何精确测量荧光强度是实现待测浓度精确判断的关键。
通常借助光电器件和电子芯片。
光强是描述发光强弱的物理量,可以借助现有器件,如光电倍增管[6]等将荧光强度转化为便于分析的电信号(常为电压信号)。
光电倍增管是一种可以接收辐射荧光的光电传感器件。
通常辐射出的荧光强度较为微弱,需要对接收到的信号进行放大、AD转换等一系列的处理之后,才便于进行特征值的分析与提取。
选择分辨率高的AD器件可以实现采样数据的高分辨率分析,减小误差,这样可以提高荧光信号的检测精度和准确度。
荧光免疫分析仪的测量精度取决于其对荧光信号检测电路的抗噪声能力。
采用电流模放大电路和暗电流自动补偿技术可以显著地减小噪声,较大地提高信噪比,提高信号采集精度、灵敏度、稳定性和可靠性,从而提高荧光免疫分析仪的整体性能,提高其检测极限和检测精度[7]。
数据采集系统借助芯片完成,常用于数据采集与控制的有单晶芯片微型计算机、超级精简指令集机器ARM、数字信号处理器DSP等。
已有文献中,使用DSP的强大数据处理能力,来实现数据的采集与转换较为多见。
三、一种荧光免疫检测仪
国内外荧光免疫定量检测的专利和文献有很多,检测对象多样,但是荧光的检测一般以激光激发荧光检测较为常见。
检测的手段可以对采集到的荧光图像来分析[8],也可以是对荧光强度的评估。
下面是一种典型的双通道(绿光激光器和红光激光器两个激光通道可供选择)激光激发荧光检测生物芯片荧光强度的仪器,该仪器可
以实现现了双光路生物芯片激光共聚焦扫描定量检测系统[9]。
激光共聚焦扫描仪工作原理框图
在该设计系统中,生物芯片是一类能对生物分子进行快速并行处理和分析的指甲盖大小的薄型固体器件[10]。
如常见的试条,也算是一种生物芯片。
整个仪器分成以下几个部分[9][11][12]。
光学系统部分
该部分的主要功能是引导激发光路汇聚激光到待检测生物芯片上,诱导芯片上的荧光分子产生荧光,并通过荧光汇聚光路汇聚到光电倍增管PMT上,生成可供A/D 进行采样的电压信号。
分辨率、灵敏度、信噪比是光学系统要考虑的性能指标。
运动系统部分
通过对运动平台的精确控制可以使生物芯片上位于扫描范围内的任意一点运动到光学系统的焦点上,进而实现二维平面扫描。
控制运动系统的运动速度、精度、平稳度,才能降低运动系统对整个系统的影响。
数据采集及信号处理部分
实现信号的适当放大是数据采集的基础,在放大部分也需要考虑抗噪和稳定性。
对PMT 输出的信号进行滤波,去除环境和系统噪声,并对信号进行放大,使之适合AD采样的幅值要求,提高系统的动态范围。
由于系统中各部分因素的影响,在进行荧光值和浓度值之间的关系拟合时,需要找到合适的数学曲线模型,采用多参数对数拟合是一种常用的思想[3]。
通信及应用程序控制部分
通信部分可以实现系统的指令和数据的传输,应用程序实现计算机和扫描仪之间的控制操作,并对仪器进行控制。
主要包含指令传递、数据传输等。
激光器发出的激光经过光路选择器选通后,照射到生物芯片上,芯片上的荧光物质受激发产生荧光。
荧光经反射、透射、滤光被光电倍增管接收,并进行光电转换,得到的电信号经过放大滤波,再由
A/D将模拟信号转化为数字信号。
实现对数字信号的处理之后,可以找到特征值与浓度间的对应关系曲线,从而建立一种可以较为精准地估测待测物质的方法。
整个系统调试完成以后,对检测的控制是通过简单的按钮操作实现的,这极大地提高了检测的效率,体现了智能医疗仪器在临床检测中的应用。
现代荧光免疫分析技术主要朝着两个方向发展[13]。
一是新型荧光物质的探索,寻求纳米级颗粒的稀土元素晶体作为抗原抗体反应的结合物,其在特定激发光激发的条件下,比一般荧光物质(如镧系离子)具有更小的背景干扰、更高的系统稳定性和可靠性。
另一方面,结合现代芯片技术和光电检测技术,可以弥补试剂本身带来的各种噪声和干扰,提高测试仪器的整体性能。
精确和定量是免疫检测仪器追求的目标。
随着荧光免疫分析技术的不断发展,荧光免疫检测将在生物医药临床定量检测中发挥不可替代的作用。
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