鸡传染性法氏囊病抗体检测诊断方法。
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鸡传染性法氏囊病的现场检疫检验构架鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是一种由传染性法氏囊病病毒引起的急性、高度接触性的传染病,主要侵袭5-12周龄的肉鸡,导致鸡的免疫器官法氏囊受损,严重影响鸡的免疫系统,给家禽养殖业带来巨大的经济损失。
为了及时发现和控制该病的传播,需要对鸡进行现场检疫检验。
下面我们将介绍一份关于鸡传染性法氏囊病的现场检疫检验构架。
一、病鸡诊断1.1 临床症状IBD的临床症状主要包括:消瘦、腹泻、食欲不振、粪便异常、步态不稳、立羽减少、鸡腹囊充血、法氏囊肿大、肝脏淤血等。
现场检验时应仔细观察鸡的临床表现,及时发现疑似病鸡。
1.2 鸡群调查鸡传染性法氏囊病多为群发性,因此进行鸡群调查是非常重要的。
通过鸡舍密度、日龄、死亡率、患病率、饲料喂养、饮水情况等方面进行鸡群调查,对鸡群进行全面了解。
1.3 标本采集在现场检验中需要采集鸡的法氏囊标本、肝脏标本和血清标本。
法氏囊标本是最为重要的检验标本,通过检测法氏囊病毒的RNA和抗体来确定鸡是否感染IBD。
二、实验室检验2.1 病毒分离将采集的法氏囊标本和血清标本进行病毒分离,通过病毒培养和传代鉴定法,以及免疫荧光染色法等方法检测病毒,并鉴定是否为传染性法氏囊病病毒。
2.2 RNA检测对疑似感染IBD的鸡的法氏囊标本进行RNA提取和PCR检测,确定法氏囊病毒的存在和数量,以及鸡的感染程度。
2.3 血清学检验通过血清学检验,对鸡的血清标本进行抗体检测,了解鸡的免疫状态,判断是否感染了传染性法氏囊病病毒,并了解鸡的免疫状况。
三、现场监测3.1 卫生条件检查对鸡舍的卫生条件进行检查,包括卫生设施、饮水设施、饲料储存设施、疫苗接种情况等,确保鸡舍的卫生达到标准。
3.2 饮水和饲料检测对饮水和饲料进行检测,了解是否受到污染,及时清理和更换可能存在的受污染的饮水和饲料,预防传染性法氏囊病的传播。
3.3 清洁消毒对鸡舍进行定期的清洁和消毒,使用有效的消毒剂进行鸡舍的彻底清洁,杀灭传染性法氏囊病病毒,预防疾病传播。
鸡传染性法氏囊病抗体检测诊断方法。
原理:
可溶性抗原和抗体的可以在琼脂凝胶中扩散,当抗原、抗体相遇时发生特异性结合,在最适处发生沉淀,此沉淀物因颗粒较大而不扩散,形成肉眼可见的白色沉淀带。
材料与试剂
普通琼脂平板、打孔器、针头、加样枪、枪头、V型血凝板、玻璃板、生理盐水
鸡法氏囊阳性血清、法氏囊标准抗原、待检卵黄抗体/血清
方法
1.琼脂板的制备:
1g优质琼脂溶于含0.1%石炭酸的8%氯化钠溶液100ml。
用时倒在平皿内或置于玻片上,琼脂厚度2.5~3mm。
2.打孔:
用打孔器在琼脂平板上打孔,中央1个孔,周围6个孔,形成梅花形图案。
要求:孔径4mm,孔距3mm。
3.挑出孔内琼脂。
4. 封底:在火焰上缓缓加热,使孔底的琼脂略熔化封底,避免加样后液体从孔底渗漏。
5.卵黄液进行倍比稀释。
V型板先在第一排每孔加生理盐水50μl,再在第一孔加50μl的卵黄液, 反复吹吸3次后,吸50μl混和液加入第2孔,吹吸混匀,依次倍比稀释至第4孔……最后一孔吸50μl弃去,这样1至4孔的抗体稀释倍数依次为1:2、1:4、1:8和1:16……。
6.加样:
在中心孔加法氏囊标准抗原约50μl。
第1孔加法氏囊标准阴性血清;第2孔加法氏囊标准阳性血清。
3、4、5、6孔分别加原液、1:2、1:4、1:8、1:16……的待检卵黄液。
每孔以加满为度。
7.加毕后,盖上平皿盖,将平皿翻过来,置湿盘中,在37℃下自由扩散24-48小时。
结果判定:
若待检血清与抗原孔之间出现白色沉淀线,则表示阳性,若不出现沉淀线,为阴性。
若用于检测血清效价,则以出现沉淀线的血清最高稀释倍数表示(2n)。
用于两种抗原比较时,沉淀线有多种情形,应具体分析。
注意事项
1. 做好标记,防止顺序混乱。
2. 挑剔琼脂时注意不要挑破琼脂边缘。
3.加样时,注意不要产生气泡,以加满为度。
否则影响反应结果。