袋式培养在铁皮石斛组培苗生根中的应用研究和效率评价

铁皮石斛组培快繁技术研究进展作者：王朝雯来源：《现代农业科技》2020年第11期摘要; ; 铁皮石斛是濒危药材之一，本文通过查阅铁皮石斛相关文献，对其组织培养繁殖技术研究现状进行了综述，以期为铁皮石斛组培快繁技术研究提供参考。

关键词; ; 铁皮石斛;组织培养;快繁技术中图分类号; ; S567.239; ; ; ; 文献标识码; ; A文章编号; ;1007-5739（2020）11-0068-01; ; ;开放科学（资源服务）标识码（OSID）铁皮石斛为多年生草本植物，可有效提升人体免疫力，具有延缓衰老、增强血管扩张的效果。

由于铁皮石斛种子小且没有胚乳，只有在真菌环境下才有萌发的可能，因而栽培难度较大[1]。

组织培养是快速繁殖铁皮石斛的主要方式，目前国内外专家进行了大量研究，并取得了较为显著的成果。

1; ; 外植体的选取外植体除种子外，还有无菌幼苗茎段。

饶宝蓉等[2]通过分析发现，以种子作为外植体较茎段外植体其无菌系的建立效率较高，种子诱导感染率更低。

同时，种子外植体的长势更加整齐。

总体来说，选取种子作为外植体较为理想。

2; ; 初代培养基选择培养基选择是组培的关键，不同的物种、品种以及外植体材料所采用的培养基也应有所区别。

同时，处于不同培养阶段、基于不同目的而进行的培养，应从培养基上进行区分。

2.1; ; 基本培养基诱导培养基是常见的初代培养基，也可采用分化培養基作为初代培养基。

铁皮石斛有多种培养基，可根据外植体的不同而选择适合的培养基。

林江波等[3]采用SRR检验方法对各处理因子进行检验后发现，从原球茎诱导率方面分析，MS培养基与1/2MS培养基并没有明显差异，而二者与VW培养基的诱导率差异较为明显。

杨立昌等[4]对铁皮石斛的愈伤组织情况进行了分析，结果发现，与MS培养基相比，1/2MS培养基的出芽率更高，表明在激素浓度适合的情况下，培养基的盐含量较低对不定芽的分化更加适合。

2.2; ; 激素及添加物有利于铁皮石斛愈伤组织的培养基种类较多，NAA与IBA等激素的应用较为常见;此外，还有6-BA等激素。

铁皮石斛组织培养研究进展1、1 种子萌发1.2 基本培养基铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。

赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。

曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。

罗吉凤等比较了*** / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。

1.3 激素在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。

2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。

6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。

KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。

ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L为最佳。

1.4 天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。

1.5 炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 ％蔗糖。

曾宋君等在改良N6＋NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素2 原球茎增殖2.1 基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。

铁皮石斛组培快繁技术的研究分析摘要：铁皮石斛的种子极为细小、无胚乳，自然条件下需要与某些真菌共生才能萌发，因此自然繁殖率很低，不易获得实生苗；而传统的分株、杆插等方式的繁殖率极低，加上人为的过度采挖和破坏生境，其资源已濒临灭绝，被国家列为重点保护的药用植物之一。

文章基于此，对铁皮石斛组培快繁技术进行综述性分析。

关键词：铁皮石斛；组培快繁；技术研究植物组织培养技术是20世纪初，以植物生理学为基础发展起来的一门新兴技术。

植物组织培养是指在离体条件下利用人工培养基对植物器官、组织、细胞、原生质体等进行培养，使之生长、繁殖或长出完整植株的技术和方法。

目前，植物组织培养技术己经在科学研究以及实际生产上得到非常广泛的应用。

该技术不仅具有缩短育种年限、加快繁殖过程，改良品质，节省空间，减少劳力，并可全年进行生产，不受季节、气候等自然条件限制等特点，而且组培苗的体积不大，方便运输和资源交流。

在促进农林业现代化方面展现出了巨大的经济、社会和生态效益，被认为是一项很有潜力的高新技术。

铁皮石斛种子细如粉尘，一个果实内所含种子达100万粒之多，由于缺乏胚乳，种子需与真菌共生才能正常萌发，自然条件下萌发率非常低。

因此，虽然分布广，但生活环境狭窄，产量还不能满足目前药用需求，利用组织培养技术繁殖试管苗是解决铁皮石斛种苗的有效途径。

铁皮石斛的组织培养中有几个关键的时期：原球茎的诱导、原球茎的继代增殖、壮苗的培育。

根据这几个重要的时期及其组织培养的外界条件，我国研究人员在铁皮石斛组培快繁技术方面的研究取得了一定的进展。

在20世纪70年代谭文澄等就进行铁皮石斛组织培养研究并获得完整植株；何静波等尝试通过种胚培养繁殖铁皮石斛；左春芳等于1985年开始研究铁皮石斛的组织培养，并取得进展。

1外植体的选择在植物组织培养中，外植体的选择是十分关键的因素，不同的取材部位和时期，培养的结果也不一样。

目前，诱导铁皮石斛原球茎采用的外植体主要有种子种子、无菌苗幼苗茎段、根尖、不定芽、幼叶，及人工种子等。

铁皮石斛种苗组培实施方案铁皮石斛（Dendrobium）是一种重要的兰科植物，具有多种药用价值，被广泛用于中药材生产和养生保健。

其种苗组培是一种快速繁殖的方法，可以大大提高植物的繁殖效率和质量。

下面将介绍铁皮石斛种苗组培的实施方案。

一、材料准备1. 无菌种子：选择外观完整、无病害的铁皮石斛种子。

2. 培养基：配制适合铁皮石斛生长的培养基，包括营养物质、植物生长调节物质等。

3. 器具：培养瓶、无菌操作台、无菌手套、无菌培养室等。

二、种子消毒1. 将铁皮石斛种子浸泡于75%酒精中消毒5分钟，然后用无菌水冲洗3次。

2. 将种子浸泡于含有0.1%过氧化氢的无菌水中消毒20分钟，然后用无菌水冲洗3次。

3. 最后将种子浸泡于含有0.1%漂白粉的无菌水中消毒15分钟，然后用无菌水冲洗3次。

三、组培操作1. 在无菌操作台上进行操作，先将培养瓶中的培养基加热至121摄氏度，压力15磅，持续20分钟，使其无菌化。

2. 将消毒处理好的种子移入无菌培养瓶中，每瓶放入适量的种子。

3. 将培养瓶密封，放入无菌培养室中，温度控制在25-28摄氏度，光照强度控制在3000-5000勒克斯，光照时间为12小时。

四、生长管理1. 定期观察种苗生长情况，发现有病虫害立即进行处理。

2. 每隔一周更换一次培养基，保持培养基的新鲜和养分充足。

3. 控制培养室的温度、湿度和光照，提供良好的生长环境。

五、移栽1. 当种苗长到一定高度时，可以进行移栽。

将种苗移入含有适量营养物质的培养基中，继续进行培养。

2. 移栽后继续进行生长管理，直至种苗长成成熟植株。

通过以上实施方案，可以实现铁皮石斛种苗的组培繁殖，提高植物繁殖效率，为铁皮石斛的种植生产提供了可行的技术方案。

希望这些内容对您有所帮助。

铁皮石斛的组织培养作者：黄子聪来源：《农家科技下旬刊》2014年第09期摘要：铁皮石斛是兰科石斛属多年生附生草本植物，为传统名贵中药。

由于对生境要求十分苛刻，加之人为过分采收，现已濒临灭绝，已被列为“濒危珍稀植物”。

对铁皮石斛的组织培养及人工栽培进行研究，实现保护野生铁皮石斛资源的同时满足人们的消费需求，具有重要的现实意义。

关键词：铁皮石斛；组培快繁一、铁皮石斛组培培养（一）材料与方法1.供试材料供试材料：果荚：从浙江省购买回来的组培苗，栽种于温室大棚中，选择品质纯正的、生长健壮的铁皮石斛单株进行授粉，获得果荚。

茎段：从浙江省购买回来的组培苗，栽种于温室大棚中，选择品质纯正的、生长健壮的、二年生的、具有20厘米以上的铁皮石斛，自上而下剪下15厘米左右，带回实验室，备用。

2.方法（1）消毒方法果荚的消毒方法：将生长了5个月的果荚用消毒的剪刀从植株上剪下，带到超净工作台下，用75%的酒精浸泡2分钟，然后用灭菌去离子水清洗两次，放在灭菌的空瓶中。

播种前，将要切开的部位及花朵着生位置在酒精灯下稍微过火，然后再将基切开，播种。

（2）种子无菌播种将灭菌的果荚在果荚蒂附近的位置上用灭菌的手术刀切开一个约1.5厘米的切口，然后直接将种子均匀地撒在培养基上。

放在培养架上进行光照培养。

培养基配方：Z0：MS+NAA0.1mg/L+土豆汁100g/L（3）原球茎的增殖及分化将转绿的原球茎转接到增殖分化培养基上，每瓶接种6个点，每个点5个原球茎，5瓶一个重复，设3次重复。

茎段的消毒方法：选取茎段特征明显的铁皮石斛单株，用消毒的剪刀从节间靠下的位置将优选单株剪下，然后将叶片摘除，在自来水下将表面的灰尘洗去。

接下来将茎段上的叶鞘撕掉，特别是底部与节相连接的位置要去干净，同时注意不要伤到休眠芽，再用洗洁精进行表面清洗，在自来水下将洗洁精清洗干净，带到超净工作台下，用75%酒精浸泡两分钟，期间不断地搅拌，再用灭菌去离子水清洗2两，切成每段3-5节，用0.1%升汞（加吐温20 2滴）浸泡9分钟，期间不断地搅拌，倒去升汞溶液，再用灭菌去离子水清洗6次，每次2分钟。

铁皮石斛的组织培植简介铁皮石斛（Dendrobium officinale）是一种珍贵的中药材，被公认为具有滋补养生的功效。

由于其野生资源减少，组织培植成为了其繁殖的重要途径。

本文将介绍铁皮石斛的组织培植方法，用于指导相关研究和实践。

材料与方法1. 无菌实验室条件：培养室温度为25℃，相对湿度为60%-70%，光照强度为3000-4000lx。

2. 培养基配方：- MS培养基：含有葡萄糖（30g/L）、琼脂（8g/L）、pH值调整到5.8。

- 添加生长调节剂：添加6-苄氨基酸（0.1mg/L）和吲哚-3-乙酸（0.5mg/L）。

过程1. 选取健康无病的铁皮石斛茎段作为外植体，将其进行消毒处理。

使用70%酒精浸泡2分钟，随后用0.1%高锰酸钾溶液浸泡10分钟，最后用无菌蒸馏水冲洗3次。

2. 切取消毒后的茎段偏上部位的小芽组织，每个芽组织含有1-2个小芽。

3. 将切取的芽组织置于含有MS培养基和生长调节剂的培养瓶中。

4. 培养瓶密封并置于培养室中，进行组织培养。

每周移植一次，移至新的含有培养基的培养瓶中。

结果与讨论经过适当的组织培养时间，铁皮石斛的小芽可以快速生长并分化出根系。

在合适的培养条件下，每个芽组织可以发育成为整株植物，从而实现大规模繁殖。

值得注意的是，在铁皮石斛的组织培植过程中，应加强对培养基和环境条件的控制。

培养基中添加的生长调节剂和孕育液质量对结果有重要影响。

同时，无菌操作的严格执行也是保证培植过程成功的关键。

结论铁皮石斛的组织培植方法是一种有效的繁殖途径，能够满足市场需求，并促进可持续发展。

通过合理控制培养基配方和环境条件，可以实现铁皮石斛的大规模繁殖与种植，为相关产业的发展提供有力保障。

这一研究对于进一步深入了解铁皮石斛的生物学特性和开发利用具有重要意义。

铁皮石斛组织培养研究进展组织培养摘要：近年来，对铁皮石斛的需求日趋增加，而野生资源难以满足市场需求，组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。

从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况，并展望了发展前景。

铁皮石斛为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。

《神农本草经》列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。

现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。

由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。

为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。

1种子萌发1.1胚龄不同种龄的种子萌发率不一样。

叶秀嶙等取铁皮石斛6个月种龄的种子进行组织培养发现，种龄愈长，萌发率愈高。

2个月种龄的种子接入改良N6培养基中，萌发率仅为6 % ; 3个月种龄的种子接入改良叹培养基中，培养2周后开始萌发，萌发率为87 % ; 4 一 6个月种龄的种子接入培养基中，只要培养一周即可萌发，萌发率为95 %。

曾宋君等将铁皮石斛种子接入改良N6培养基中进行组织培养，亦得到相似的结论，幼胚胚龄在60d以下时，萌发率极低，随着胚龄的增长，其萌发期逐渐缩短，萌发率逐渐升高，成苗率也逐渐升高，但到达一定的胚龄后，差异并不明显。

1.2基本培养基铁皮石斛种子在N6,改良N6, MS , 1 / 2 MS , SH、KS、VW、KundsonC , 1 / 2N6, White等培养基上均可萌发。

赵天榜等比较风、MS 等14种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH、Kn、MS次之，1 /2MS、1 / 2 Vw最差。

曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH、改良N6、MS、KS、VW、KundsonC培养基中培养，得出最适培养基为改良N6 或自制PT培养基。

铁皮石斛茎段组织培养与栽培摘要: 为试验铁皮石斛茎段组织培养与栽培，以铁皮石斛茎段为外植体，结合铁皮石斛的生物学特性，综述铁皮石斛组织培养与栽培的过程技术。

观察研究基本培养基、天然附加物和植物生长调节剂对铁皮石斛生长的影响。

验证和探究铁皮石斛茎段组织培养技术并对铁皮石斛的组织培养与栽培管理技术进行了思考与展望。

关键词: 铁皮石斛; 组织培养; 茎段; 移栽; 驯化0.引言铁皮石斛( Dendrobium officinale Kimura et Migo) 是兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium Sw．)多年生草本植物，又名黑节草，俗称铁皮枫斗，分布于云南、安徽、贵州、浙江、江西、广东和广西等地，是我国传统名贵珍稀中药材，其有效成分主要为石斛多糖、石斛碱、氨基酸等，其中石斛多糖的含量高达21.7%，能显著提高机体免疫功能，具有养胃出津、补肾益力、滋阴清热、耐缺氧、抗疲劳、抗肿瘤等功效。

现代药理学研究发现，石斛还具有抗衰老和扩张血管的作用。

铁皮石斛喜荫凉、湿润的环境，常附在高海拔悬崖峭壁或林内树干和岩石缝隙中。

由于其药用价值高、生长条件特殊和分布受局限，且经长期人为采挖，野生资源濒临灭绝。

铁皮石斛是2005版《中华人民共和国药典》收载的3种石斛属植物之一，为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。

铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低，是一种珍稀的药用植物和和名贵的室内观赏植物.。

铁皮石斛自然繁殖力极低, 常规繁殖又较困难, 且多年来对铁皮石斛的采集量远大于其生长量, 野生铁皮石斛自然繁殖已濒临绝迹。

由于药用价值高，人为的过度开采与生态破坏，野生铁皮石斛已濒临灭绝，1987年国务院将其列为国家重点保护植物。

1 材料与方法1. 1 试验材料野生云南铁皮石斛，取材于浙江农林大学组培实验室，取其茎段作为外植体进行组织培养。

1. 2 试验方法1. 2. 1 外植体消毒取铁皮石斛的茎，去除多余叶片后用解剖刀将茎切成含 3 ～ 4 个节点的茎段，保留节点。