实验三 大黄中游离蒽醌的提取及分离

利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分中药大黄（Rheum palmatum L.）是一种常用的中药材，具有泻火通便，清热解毒的作用，广泛用于临床治疗便秘、肝胆疾病、黄疸、热病等疾病。

其中的主要活性成分是游离蒽醌类物质，包括大黄素、大黄酚、大黄酚苷等成分，具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、杀菌等生物活性。

提取大黄中的游离蒽醌组分对其药用价值的研究具有十分重要的意义。

pH梯度萃取法是一种常用的提取方法，能够高效地提取出中药材中的活性成分。

该方法利用不同pH值的溶剂，可以选择性地提取出目标物质，具有操作简单、成本低廉和环保等优点。

本文将针对大黄中的游离蒽醌组分进行pH梯度萃取，并优化提取工艺条件，以期获得高效、经济的提取方法。

一、实验材料和仪器1. 实验材料中药大黄：产自四川成都，经鉴定为大黄科大黄属植物大黄（Rheum palmatum L.）。

二甲苯、乙醇、乙酸、丙酮：均为分析纯试剂，由国药集团化学试剂有限公司提供。

2. 仪器恒温振荡器（HH-2型）、电磁加热板（DF-101型）、电子天平（FA2004型）、紫外-可见分光光度计（UV-1800型）、高效液相色谱仪（LC-20A型）：均由上海仪器仪表有限公司提供。

二、实验步骤1. 大黄材料制备将大黄材料研磨成粉末，并通过50目筛筛选得到均匀细小的颗粒，以备后续实验使用。

2. pH梯度萃取（1）溶剂选择：分别选取pH=3、6、9的乙酸-乙醇混合溶液作为提取溶剂。

（2）提取条件：取3g大黄粉末与30mL乙醇-乙酸混合溶剂置于50mL锥形瓶中，装入恒温振荡器中进行提取。

提取时间6h，提取温度25℃，提取速率150r/min。

3. 液-液萃取将提取液经硅胶柱柱层析纯化，得到游离蒽醌组分混合物。

4. 结果分析利用紫外-可见分光光度计测定游离蒽醌混合物的吸收率，通过标准品法定量测定大黄素、大黄酚、大黄酚苷的含量。

三、实验结果与分析1. 游离蒽醌组分的提取率表1 pH梯度萃取法提取大黄中游离蒽醌组分的提取率pH=3 pH=6 pH=9游离蒽醌提取率（%）20.5±0.6 34.2±1.2 28.6±0.92. 游离蒽醌组分的纯度经过液-液萃取处理后，得到了纯度较高的游离蒽醌组分混合物。

大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。

由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。

根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。

2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。

具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。

以分离酸度不同的蒽醌苷元。

也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。

（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。

三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g加20%H2SO4 100ml，乙酸乙酯250ml，水浴回流2h，稍冷过滤乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液5%NaHCO3溶液萃取三次（80ml，60ml，40ml）碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层乙酸乙酯层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 0.25%NaOH溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或取三次（40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层乙酸乙酯层丙酮精制滴加浓盐酸，调 5%NaOH溶液萃橙色结晶（大黄素）节pH=2，放置取三次（40ml/次）沉淀物调pH=2,沉淀过滤（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素） -乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。

利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分1. 引言1.1 研究背景中药大黄是一种常用的中药材，具有泻下通便、清热泄火等药性。

其中的游离蒽醌组分是其主要活性成分之一，具有抗炎、抗氧化等生物活性。

游离蒽醌组分在大黄中存在量较少，提取难度较大。

为了更有效地提取大黄中的游离蒽醌组分，研究者们开始尝试利用pH梯度萃取法。

pH梯度萃取法是一种利用酸碱性差异来实现物质分离提取的方法。

通过调节溶剂的酸碱度，可以使目标物质在不同的pH环境下具有不同的溶解度，从而达到有效提取的目的。

对于大黄中的游离蒽醌组分，其在不同pH条件下的溶解度也会有所不同，因此pH梯度萃取法可以帮助提高提取效率。

通过利用pH梯度萃取法提取大黄中的游离蒽醌组分，可以有效提高提取效率，减少提取时间，降低成本。

这对于进一步研究大黄药材的活性成分、提高其药效具有重要意义。

本研究旨在探究pH梯度萃取法在大黄中游离蒽醌组分提取中的应用价值，为中药材的提取工艺优化提供参考和借鉴。

1.2 研究目的研究目的：本研究旨在探讨利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分的可行性及方法优化，为提高药材中游离蒽醌的提取效率和纯度提供有效的技术支持。

通过深入研究游离蒽醌在大黄中的存在形式和提取条件下的转移规律，探索最佳的pH梯度条件和提取方法，从而实现对中药大黄中游离蒽醌组分的高效提取和纯化。

将通过实验结果的分析和对提取效果影响因素的探讨，进一步阐明pH梯度萃取法在中药提取领域中的应用前景和潜力，为药用价值的开发和利用提供科学依据和技术支持。

通过本研究，旨在为中药大黄中游离蒽醌组分的提取工作提供一种可行的方法和技术路线，推动中药资源的综合利用和开发，促进中药现代化科研的进一步发展。

1.3 研究意义中药大黄是一种常用的中药材，含有丰富的游离蒽醌组分，具有明显的药效活性。

游离蒽醌是大黄的主要活性成分之一，具有抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种药理作用。

研究利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分的方法和效果具有重要的理论和实际意义。

大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定一、实验目的（1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法（2）掌握pH梯度提取法的原理和操作技术（3）学习蒽醌类化合物鉴定方法二、实验器材材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层层析硅胶板（2.5 cm×10 cm）、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子、点样毛细管、样品管等。

仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸（广口瓶）、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。

三、实验原理大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。

其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。

其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。

根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。

大黄酸R1=H R2=COOH大黄素R1=CH3R2=OH芦荟大黄素R1=CH2OH R2=H大黄素甲醚R1=CH3R2=OCH3大黄酚R1=CH3R2=H四、实验内容大黄素的提取、分离流程图大黄粗粉10g20%H2SO4 150 ml加热1h, 抽滤、干燥滤饼150ml乙醚回流提取1 h乙醚层水层（紫红色）乙醚层HCl 3大黄酸沉淀（粗品）水层（红色）乙醚层HCl 0.25% NaOH大黄素沉淀（粗品）水层（红色）芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物）具体操作步骤1. 游离蒽醌的提取（1）酸水解：称取大黄粗粉10g，加20%H2SO4水溶液150mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎，置250mL 圆底烧瓶中，加入乙醚150mL回流提取1小时（调45℃，回流即可），得到乙醚提取液。

大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定一、实验目的1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法二、实验原理1.提取原理双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。

由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。

根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。

2.分离原理pH梯度萃取法羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。

具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。

以分离酸度不同的蒽醌苷元。

也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。

（1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3）（2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。

三、实验方法四、 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程大黄药材（粗粉）50g乙酸乙酯提取液药渣去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次）直至乙酸乙酯层pH值呈中性乙酸乙酯提取液碱水层乙酸乙酯层滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次）沉淀物（黄色结晶或黄色絮状沉淀）碱水层沉淀过滤，冰醋酸精制滴加浓盐酸，调节溶液萃黄色结晶（大黄酸）沉淀物（橙色结晶或40ml/次）橙色絮状沉淀）沉淀过滤，碱水层丙酮精制橙色结晶（大黄素）节pH=2沉淀物（橙色絮状沉淀）黄色沉淀物乙酸乙酯层沉淀过滤，乙酸乙酯精制硅胶柱色谱黄色针晶洗脱剂为石油醚（60-90℃）（芦荟大黄素）-乙酸乙酯（15：1）大黄酚和大黄素甲醚混合物2.总蒽醌苷元的提取大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。

一、实验目的1. 掌握大黄游离蒽醌的提取方法。

2. 熟悉大黄游离蒽醌的分离与鉴定技术。

3. 了解大黄游离蒽醌的药理作用及临床应用。

二、实验原理大黄为蓼科植物掌叶大黄、唐古特大黄和药用大黄的干燥根及根茎。

大黄中含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚及其苷等成分，其中大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚等游离蒽醌类成分具有显著的生物活性。

本实验采用pH梯度萃取法提取大黄中的游离蒽醌类成分，并通过高效液相色谱法（HPLC）对其进行分离和鉴定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、氯仿、甲醇、乙腈、0.1%磷酸水、Diamonsil C18色谱柱等。

2. 实验仪器：高效液相色谱仪、超声波清洗器、电子天平、旋转蒸发仪、电热恒温水浴锅、紫外可见分光光度计等。

四、实验方法1. 大黄游离蒽醌的提取（1）称取大黄粗粉10g，加入100mL甲醇，超声提取30min。

（2）过滤，滤液浓缩至约10mL。

（3）向浓缩液中加入5mL浓硫酸，搅拌均匀，室温放置过夜。

（4）加入5mL氯仿，剧烈振荡，静置分层。

（5）吸取氯仿层，重复步骤（3）和（4）至氯仿层颜色变浅。

（6）合并氯仿层，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪浓缩至干。

（7）用甲醇溶解残渣，定容至10mL，得大黄游离蒽醌提取液。

2. 大黄游离蒽醌的分离与鉴定（1）色谱条件：Diamonsil C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水（75:25）；流速：1mL·min-1；柱温：35℃；检测波长：254nm。

（2）样品处理：取大黄游离蒽醌提取液，过0.22μm微孔滤膜，进样。

（3）数据分析：根据保留时间、峰面积等数据，对大黄游离蒽醌进行鉴定。

五、实验结果与分析1. 大黄游离蒽醌的提取通过pH梯度萃取法，从大黄中成功提取出游离蒽醌类成分。

实验结果显示，大黄中主要含有大黄酸、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚等成分。

大黄中的游离蒽醌类成分的提取方法
提取大黄中的游离蒽醌类成分，可以采用以下步骤：
1. 酸水解：使用稀硫酸将大黄中的蒽醌苷水解成游离的蒽醌苷元。

这一步可以采用超声提取，以提高效率和使水解更加充分完全。

2. 提取游离蒽醌：利用游离的蒽醌可溶于热三氯甲烷的性质，用三氯甲烷加热回流将其提取出来。

3. 分离：采用pH梯度萃取法，根据各种蒽醌类化合物酸性的不同进行分离。

具体操作流程可以参考科研院所、大学等机构所发布的相关文献，或者请教相关化学专家，以确保提取的安全性。

大黄中蒽醌类化合物的提取分离和鉴定
大黄（Rhizoma Rhei）是一种常用中药，主要含有蒽醌类化合物，如大黄素、大黄酚、大黄酸等。

提取、分离和鉴定大黄中的蒽醌类化合物的常用方法如下：
1. 提取：将大黄粉末与适量的乙醇或乙醚等有机溶剂进行浸泡提取，较常用的是乙醚提取。

在恒温搅拌的条件下，将大黄与乙醚按一定比例混合30分钟以上，然后进行过滤，过滤液即为提取液。

2. 分离：提取液中含有大黄中的多种化合物，其中包括蒽醌类化合物。

为了分离和纯化蒽醌类化合物，通常采用柱层析、薄层层析等技术。

柱层析是将提取液通过填料（如硅胶、活性炭等）柱进行洗脱，根据化合物在柱上的亲疏性和相互间作用力的差异，逐步分离目标化合物。

薄层层析则是将提取液涂抹在硅胶或其他载体上的薄层，再通过浸泡，将化合物分离开。

3. 鉴定：分离到目标化合物后，可以通过理化性质和光谱分析进行鉴定。

常用的鉴定方法有红外光谱（IR）、质谱（MS）和核磁共振（NMR）等。

红外光谱可以用于确定化合物的官能团，质谱可以用于分析分子的质量和结构信息，核磁共振则可以提供化合物的详细结构信息。

以上是大黄中蒽醌类化合物的提取、分离和鉴定的常用方法，通过这些方法可以对大黄中的蒽醌类化合物进行有效地提取、分离和鉴定。

一、实验目的1. 掌握大黄的提取、分离和鉴定方法。

2. 熟悉大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定过程。

3. 了解大黄中游离蒽醌的提取方法。

二、实验原理大黄是一种传统的中药材，具有清热解毒、凉血止血等功效。

大黄中含有丰富的蒽醌类成分，如大黄素、大黄酚等，这些成分具有抗菌、抗炎、抗肿瘤等药理作用。

本实验采用酸水解法提取大黄中的蒽醌类成分，并通过薄层色谱（TLC）法进行分离和鉴定。

三、实验材料与仪器1. 材料：大黄粗粉、浓硫酸、NaOH溶液、乙醚、硅胶G板、展开剂、显色剂等。

2. 仪器：电热恒温水浴锅、分析天平、研钵、滤纸、毛细管、紫外灯等。

四、实验步骤1. 大黄粗粉的制备：将大黄粗粉过40目筛，备用。

2. 酸水解：称取大黄粗粉10g，加入20%H2SO4水溶液150mL，置于电热恒温水浴锅中加热1小时，放冷，抽滤。

滤饼用NaOH溶液洗至近中性（pH约为6），于70℃干燥后，研碎。

3. 萃取：将干燥后的大黄粉末置于250mL回流装置中，加入适量乙醚，加热回流提取1小时。

冷却后，将提取液过滤，滤液即为大黄中游离蒽醌的提取液。

4. 分离：将提取液用TLC法进行分离。

具体操作如下：（1）制备硅胶G板：取硅胶G适量，加入适量水，搅拌均匀，倒入涂板器中，涂成均匀的涂层，晾干。

（2）点样：用毛细管吸取提取液，点于硅胶G板上，重复点样，直至样品点干。

（3）展开：将点样的硅胶G板置于展开剂中，展开至适宜位置。

（4）显色：取出展开后的硅胶G板，晾干，用显色剂进行显色。

5. 鉴定：根据大黄中游离蒽醌的Rf值，与标准品进行比较，确定大黄中游离蒽醌的种类。

五、实验结果与分析1. 实验结果：通过TLC法分离，大黄中提取出大黄素、大黄酚等蒽醌类成分。

2. 分析：大黄中游离蒽醌的提取、分离和鉴定成功，表明实验方法可行。

六、实验讨论1. 酸水解法提取大黄中蒽醌类成分，具有操作简便、提取效率高等优点。

2. TLC法分离大黄中蒽醌类成分，操作简便，分离效果好。

大黄游离蒽醌实验报告大黄游离蒽醌实验报告大黄游离蒽醌实验报告引言：大黄是一种常见的中药材，被广泛用于治疗便秘和胃肠道问题。

它的主要成分是蒽醌类化合物，其中最主要的成分是大黄素。

本实验旨在通过提取大黄中的大黄素，并通过游离蒽醌实验验证提取物中的有效成分。

实验步骤：1. 材料准备：我们使用的材料包括大黄粉末、乙醇和氯化钠。

2. 提取大黄素：首先，我们将大黄粉末与乙醇混合，并在常温下搅拌30分钟，以使大黄素充分溶解。

然后，用滤纸过滤混合物，收集滤液。

接下来，将滤液转移到蒸发皿中，用低温蒸发法除去乙醇，得到提取物。

3. 游离蒽醌实验：我们将提取物与氯化钠溶液混合，并用酸性醇溶液进行萃取。

然后，我们将萃取液进行离心分离，并收集上层溶液。

最后，我们用紫外可见光谱仪测量上层溶液的吸光度，以确定其中游离蒽醌的含量。

实验结果：通过游离蒽醌实验，我们测量了提取物中游离蒽醌的含量。

根据测量结果，我们发现提取物中的游离蒽醌含量为XX mg/mL。

这表明我们成功地从大黄中提取出了游离蒽醌，并且提取物中的游离蒽醌含量较高。

讨论：大黄素是一种具有抗炎、抗菌和抗氧化等多种药理作用的物质。

游离蒽醌实验是一种常用的方法，用于检测大黄素的含量。

通过本实验，我们确定了大黄提取物中游离蒽醌的含量，这为进一步研究大黄的药理作用提供了基础。

然而，本实验存在一些局限性。

首先，我们只测量了游离蒽醌的含量，而没有对其他蒽醌类化合物进行测量。

因此，提取物中可能还存在其他有效成分。

其次，我们只使用了一种提取方法，可能有其他更有效的提取方法可以提高提取物中游离蒽醌的含量。

结论：本实验成功地从大黄中提取出了游离蒽醌，并通过游离蒽醌实验测量了其含量。

提取物中游离蒽醌的含量为XX mg/mL。

这为进一步研究大黄的药理作用提供了基础。

然而，还需要进一步研究以确定提取物中其他有效成分的含量，并尝试其他更有效的提取方法。

总结：大黄游离蒽醌实验是一种常用的方法，用于检测大黄中游离蒽醌的含量。

大黄中游离蒽醌的提取、分离的实训操作王英;万红;彭志芬【摘要】大黄是我国的常用中药之一,含有多种蒽醌化合物,是具有代表性的蒽醌类衍生物,在中药化学、天然药物化学课程中都有大黄中游离蒽醌的提取、分离与检识的实验课程,在操作中运用到回流、连续回流、PH梯度法和色谱法.目的通过对大黄中游离蒽醌的提取、分离的实训操作,使学生能够轻松掌握回流、连续回流、PH梯度法的原理及操作技术,鉴定方法和运用色谱法进行蒽醌类成分的鉴别.【期刊名称】《中国中医药现代远程教育》【年(卷),期】2015(013)022【总页数】2页(P148-149)【关键词】大黄;游离蒽醌;中药化学【作者】王英;万红;彭志芬【作者单位】江西中医药高等专科学校药学系,抚州 344000;江西中医药高等专科学校药学系,抚州 344000;江西中医药高等专科学校药学系,抚州 344000【正文语种】中文大黄是我国的四大中药之一，名火参、金木、破门、绵纹等，来源于蓼科植物掌叶大黄、药用大黄或唐特大黄的根及根茎。

性寒，味苦，具有攻积导滞、泻火凉血、活血化瘀、利胆退黄的功效，内服治疗肠胃积滞、大便不通，外用治疗烧伤，并有止血作用，近来又将大黄中的游离蒽醌用作抗菌消炎药，其药性峻烈，素有“将军”之称，是具有代表性的蒽醌类衍生物，在中药化学、天然药物化学课程中都有大黄中游离蒽醌的提取分离与检识的实验，如何上好本实验课，我们认为如下做，有利于学生掌握操作。

掌握回流、连续回流、PH梯度法的原理及操作技术。

掌握蒽醌类化合物鉴定方法。

能够运用色谱法进行蒽醌类成分的鉴别。

大黄的主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%～5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元主要有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酚，结构如图1：大黄中的羟基蒽醌苷经酸水解成游离蒽醌苷元，苷元可溶于氯仿而被提取，再根据各羟基蒽醌的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。

其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。

利用pH梯度萃取法提取中药大黄中的游离蒽醌组分大黄是一种常见的中药材，具有泻热通便、利水消肿等功效。

游离蒽醌是大黄中的主要活性成分，具有很高的药理活性和医疗价值。

为了提取大黄中的游离蒽醌组分，可以利用pH梯度萃取法。

pH梯度萃取法是一种基于溶解度差异的分离技术，通过调节溶液的pH值，使目标物质在不同pH条件下产生溶解度的变化，从而实现目标物质的分离和提取。

对于提取大黄中的游离蒽醌组分，可以按照以下步骤进行操作：1. 准备所需试剂和设备：大黄粉末、甲醇、乙醚、氯仿、各种pH值的缓冲液（如醋酸缓冲液、硼酸缓冲液等）、离心管、离心机等。

2. 将大黄粉末加入离心管中，加入适量的甲醇，并进行超声提取。

超声提取可加速药物成分的释放和提取，提高提取效果。

3. 将提取液离心，将上清液与残渣分离。

上清液中含有大黄中的游离蒽醌组分，可以进一步提取和分离。

4. 准备一系列不同pH值的缓冲液。

通过溶解适量的醋酸和醋酸钠制备出pH为4-5的醋酸缓冲液，通过溶解适量的硼酸和氢氧化钾制备出pH为9-10的硼酸缓冲液。

根据实际需要，可以调整缓冲液的pH值范围。

5. 分别将上清液加入装有醋酸缓冲液和硼酸缓冲液的离心管中，然后使用旋转蒸发仪进行蒸发浓缩，直至溶液体积变小，浓缩程度适宜。

7. 将上清液转移至不同pH值的缓冲液中进行萃取，置于摇床中进行摇动，以促进物质的分配和提取。

8. 分别将醋酸缓冲液和硼酸缓冲液中的上清液分离，并反复进行3-4次提取，以提高提取效果。

9. 将提取液进行过滤，得到游离蒽醌的提取物。

利用pH梯度萃取法可以有效地提取中药大黄中的游离蒽醌组分。

这种方法简便易行，不需要特殊设备，提取效果较好。

提取得到的游离蒽醌组分可以进行进一步的分离、纯化和定量分析，为深入研究大黄的药理活性和开发新药提供了有效手段。