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木瓜蛋白酶活力测定方法分别精密量取酪蛋白溶液5ml，置3支具塞试管中，置40℃水浴中保温10分钟，各精密加入供试品溶液2ml，摇匀，置40℃水浴中，开始记时，准确反应1小时，立即精密加入三氯醋酸溶液5ml，强力振摇混匀，置40℃水浴中放置30~40分钟，使沉淀的蛋白质完全凝固，滤过，滤液作为供试品溶液。
精密量取酪蛋白溶液5ml置另一具试管，于40℃水浴中保温1小时，精密加入三氯醋酸溶液5ml，强力振摇混匀，精密加入供试品溶液2ml，置40℃水浴中放置30~40分钟，滤过，滤液作为空白溶液。
照分光光度法（中国药典2000年版二部附录IV A），以0.1mol/L 盐酸溶液为空白，在275nm的波长处测定空白溶液、供试品溶液和对照品溶液的吸收度，按下式计算：效价（单位/mg）=A/As＊Cs＊12/2＊稀释倍数/W式中A为供试品溶液的吸收度减去空白溶液的吸收度：As为酪氨酸对照品溶液的吸收度：Cs为酪氨酸对照品溶液的浓度， ug/mlW为供试品重量，mg;在上述条件下，释放1ug的酪氨酸的酶量为一个活力单位。
试剂酪蛋白溶液：取酪蛋白1g，加0.05mol/L磷酸氢二钠溶液50ml,置沸水浴中煮30分钟，时时搅拌，冷至室温，加0.05mol/L枸椽酸溶液调节PH至6.0±0.1，并迅速搅拌，防止酪蛋白沉淀，用水稀释至100ml（临用新配）。
酶稀释液：取无水磷酸氢二钠3.55g，加水400ml溶解，加乙二胺四醋酸二钠1.1g和盐酸半胱氨酸2.74g，振摇溶解，用1mol/L盐酸或1mol/L氢氧化钠溶液调节PH6.5±0.1，用水稀释至500ml,混匀（临用新配）三氯醋酸溶液:取三氯醋酸17.99g，加醋酸钠29.94g和冰醋酸18.9ml，加适量水溶解后，加水使成1000ml，摇匀。
酶活力测定对照品溶液的制备:精密称取已105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量，用0.1mol/L盐酸溶液制成每1ml中约含40ug的溶液。
实验一、木瓜蛋白酶活性测定实验(明胶法)(一)实验原理木瓜蛋白酶从明胶中分解出氨基酸和肽，其氨基型氮可用甲醛复分解，产生氢离子，浓度可用氢氧化钠溶液滴定。
(二)定义一个木瓜蛋白酶单位相当于在规定条件下分解1ug分子量的肽键时所需的酶量。
(三)试剂1. 底物明胶2. 柠檬酸盐缓冲液(pH5.0) 取70.000g一水柠檬酸溶于720mL 1mol/L氢氧化钠溶液中。
用1mol/L氢氧化钠溶液将pH调至5.0，用蒸馏水定容至1000mL。
3. 37%甲醛溶液4. 酚酞溶液取0.5g酚酞溶于95%的乙醇中，并定容至50mL。
5. 0.1mol/L氢氧化钠溶液取4.0克氢氧化钠置于洁净干燥的烧杯中，加纯水稀释、搅拌溶解，将溶液移入1000ml洁净容量瓶中定容至刻度。
6. 酶溶液用蒸馏水溶解酶，每毫升配制溶液应含有40U左右。
酶的称量一定得按以下原则确定：用于主值和空白值试验的耗量之差应在1.8～2.2mL这一范围内。
此外需用一个合适的称量重复测定几次。
(四)操作步骤称取500mg明胶放入一只100mL锥形烧瓶内，加8mL蒸馏水，加热后明胶溶解。
待明胶完全溶解加2.0mL柠檬酸盐缓冲液，置于水浴中冷却至40℃。
加5.00mL已预热至40℃的酶溶液，于40℃下保温60min，加10.0mL甲醛溶液终止反应。
加0.5mL酚酞溶液后用0.1mol/L氢氧化钠溶液滴定，直至第一次出现明显的粉红色为终点。
用同样方法测定空白值，只是这里在添加酶溶液之前先添加甲醛溶液。
在空白值测定方面耗去大约5mL 0.1mol/L氢氧化钠溶液。
(五)计算用以下公式计算酶活性：酶活力(U/mg)=(H-B)/E W×100式中：H-用于主值的滴定耗量(mL)；B-用于空白值的滴定耗量(mL)；100-相当于1mL0.1mol/L氢氧化钠溶液；E W-每5.0mL所用酶液中含有酶的重量(mg)。
举例：测定一个木瓜蛋白酶样品。
从样品中称取68.2mg，定容100mL。
木瓜蛋白酶酶活力检测方法南宁庞博生物工程有限公司企业标准Q/NPB 01-2019食品添加剂木瓜蛋白酶制剂1、范围本标准规定了食品添加剂木瓜蛋白酶制剂的原辅料要求、技术要求、试验方法、检验规则、标志、包装、运输、贮存。
本标准适用于以木瓜果乳汁为原料，添加葡萄糖，经浸泡提取、过滤、浓缩、干燥、调配粉碎、包装等工艺制成的食品添加剂木瓜蛋白酶制剂。
2、规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准引用而成为本标准的条款。
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GB/T 191-2019 包装储运图示标志GB/T 601-2002 化学试剂标准滴定溶液的制备 GB/T 602-2002 化学试剂杂质测定用标准溶液的制备 GB/T 603-2002 化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB 2760 食品添加剂使用卫生标准GB/T 4789.2-2019 食品卫生微生物检验菌落总数的测定 GB/T 4789.3-2019 食品卫生微生物检验大肠菌群计数 GB/T 4789.4-2019 食品卫生微生物检验沙门氏菌检测GB/T 4789.6-2019 食品卫生微生物检验致泻大肠埃希氏菌检测 GB/T 4789.10-2019 食品卫生微生物检验金黄色葡萄球菌检验 GB/T 5009.3-2019 食品中水分的测定GB/T 5009.74-2019 食品添加剂中重金属限量试验 GB/T 5009.75-2019 食品添加剂中铅的测定 GB/T 5009.76-2019 食品添加剂中砷的测定 GB 5749-2019 生活饮用水卫生标准GB/T 6682-2019 分析实验室用水规格和试验方法 GB 7718 预包装食品标签通则GB/T 8170-2019 数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB/T 20880-2019 食用葡萄糖JJF 1070 定量包装商品净含量检验规则 NY/T 691-2019 番木瓜定量包装商品计量监督管理办法国家质量监督检验检疫总局令（2019）第75号 3、原辅料要求 3.1 水应符合 GB 5749-2019规定 3.2 木瓜果应符合NY/T 691-2019的规定 3.3 葡萄糖应符合GB/T 20880-2019中无水葡萄糖的规定 3.4 食品添加剂食品添加剂使用的品种和使用量应符合GB2760 的规定，质量应符合相应产品标准的规定。
木瓜蛋白酶的纯化和鉴定方法研究木瓜蛋白酶（Papain）是一种广泛存在于木瓜中的天然酶，具有优异的蛋白水解能力和广泛的应用领域。
对于木瓜蛋白酶的纯化和鉴定方法的研究，可以为其在食品、药物和生物技术等领域的应用提供重要的理论和实践基础。
纯化木瓜蛋白酶的常用方法主要包括：硫酸铵沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析和亲和层析等。
首先，通过将木瓜果肉或木瓜乳剂进行初步的提取和分离，得到粗木瓜酶液或浓缩液。
接下来，通过酸性、碱性或酶处理等方法，将杂质蛋白质去除，然后经过一系列的层析纯化步骤，最终获得纯度较高的木瓜蛋白酶。
其中，离子交换层析是最常用的纯化方法之一。
离子交换层析是根据蛋白质与固定在固定相上带电的离子交换基团之间的相互作用进行纯化的。
通常使用阳离子交换剂如DEAE-Sepharose CL-6B或阴离子交换剂如CM-Sepharose CL-6B作为固定相，可实现木瓜蛋白酶与其他蛋白质之间的分离。
通过控制缓冲液的pH和离子强度，可以调节木瓜蛋白酶在层析柱上的吸附和洗脱，从而实现对其的纯化。
凝胶过滤层析是另一种常见的纯化方法，其基本原理是根据蛋白质分子大小的差异进行纯化。
凝胶过滤层析对分子量较大且较纯的蛋白质具有较好的分离效果。
在纯化木瓜蛋白酶时，可以选择适当的凝胶过滤层析介质，如Sephadex G-75或Sephadex G-100等，将混合溶液在凝胶柱上进行层析，分离出目标蛋白质。
除了纯化方法的研究外，正确鉴定木瓜蛋白酶的纯度和活性也是非常重要的。
鉴定木瓜蛋白酶的常用方法主要包括：SDS-PAGE电泳、活性测定和质谱鉴定等。
其中，SDS-PAGE电泳是一种常用的蛋白质分子量分析方法，它可将蛋白质按照分子量大小进行分离和定量。
通过在分离凝胶上染色或通过Western blotting方法检测，可以确定木瓜蛋白酶的纯度和分子量。
活性测定是评价木瓜蛋白酶酶活性的重要手段。
常用的活性测定方法包括卟啉-酪蛋白分光光度法、酪蛋白分解能力法等。
实验一木瓜蛋白酶的提取及其活性测定一、实验目的通过本实验，要求学习和掌握木瓜蛋白酶酶源的选取、木瓜乳汁的采集及蛋白酶粗酶制剂提取等的基本原理和方法；学习并掌握木瓜蛋白酶活性的测定方法以及酶样中蛋白质含量的测定。
二、实验原理木瓜蛋白酶大量存在于木瓜汁液中，是一种巯基蛋白酶，其分子量为23900。
木瓜蛋白酶最适pH随底物而异，当以酪蛋白为底物时，酶的最适pH为7。
据此原理，本实验以未成熟的木瓜果实为材料，从果皮中采集新鲜乳汁，利用木瓜蛋白酶在pH7.2的磷酸缓冲液、35℃条件下水解底物酪蛋白产生酪氨酸，酪氨酸在275nm处有最大吸收峰，根据吸光值的大小反映酪氨酸的浓度，进而反映木瓜蛋白酶催化水解的反应速率，以此衡量该酶的活性。
考马斯亮蓝G-250在酸性条件下能够与蛋白质结合，形成的络合物在595nm 处具有最大吸光值，且吸光值的大小与蛋白质的含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。
三、实验材料和用具1、实验材料：新鲜、未成熟的木瓜。
2、试剂：0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.2）；1%的酪蛋白溶液：称1g的酪蛋白用0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.2）配至100mL；激活剂：用0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.2）配制含半胱氨酸20mmol/L，EDTA 1mmol/L的混合液；10%三氯乙酸（TCA）：称10g的TCA定容至100 mL；考马斯亮蓝G-250：称0.1g考马斯亮蓝G-250溶于50mL90%乙醇溶液中，加入85%磷酸溶液100mL，用蒸馏水定容到1000mL。
3、仪器、用具：恒温水浴锅、电子天平、紫外-可见分光光度计、研钵、烧杯、量筒、试管、移液管、吸耳球、漏斗、滤纸、标签纸、试管架、牙签等。
四、实验步骤1．木瓜乳的采集选取挂果30天以上的木瓜果实，用湿棉布小心擦净表面，用牙签等利器，在果实的表面划若干条深约3mm的划痕，此时有大量白色乳汁流出，于木瓜底部用干净的烧杯收集乳汁，片刻后收集的乳汁便会凝固。
一、实验目的1. 了解木瓜蛋白酶的性质和作用机理。
2. 探究不同条件对木瓜蛋白酶活性的影响。
3. 通过实验验证木瓜蛋白酶在食品加工中的应用潜力。
二、实验原理木瓜蛋白酶是一种含疏基(-SH)肽链内切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，对动植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有较强的水解能力。
木瓜蛋白酶的活性受pH、温度、离子强度等因素的影响。
本实验通过测定木瓜蛋白酶在不同pH、温度和离子强度下的活性，探讨其活性影响因素。
三、实验材料1. 木瓜蛋白酶样品2. 酚酞指示剂3. 酶反应缓冲液4. 硫酸铜溶液5. 碘液6. pH计7. 恒温水浴锅8. 移液器9. 试管四、实验方法1. pH对木瓜蛋白酶活性的影响（1）取5支试管，分别加入0.5ml酶反应缓冲液，编号为1、2、3、4、5。
（2）分别向5支试管中加入0.1ml木瓜蛋白酶样品，编号为1、2、3、4、5。
（3）分别向5支试管中加入0.5ml不同pH的酶反应缓冲液（pH 2、4、6、8、10）。
（4）将5支试管置于37℃恒温水浴锅中保温10分钟。
（5）向5支试管中加入0.5ml酪蛋白溶液，摇匀。
（6）观察并记录各试管溶液的颜色变化。
2. 温度对木瓜蛋白酶活性的影响（1）取5支试管，分别加入0.5ml酶反应缓冲液，编号为1、2、3、4、5。
（2）分别向5支试管中加入0.1ml木瓜蛋白酶样品，编号为1、2、3、4、5。
（3）分别将5支试管置于0℃、20℃、37℃、50℃、70℃恒温水浴锅中保温10分钟。
（4）向5支试管中加入0.5ml酪蛋白溶液，摇匀。
（5）观察并记录各试管溶液的颜色变化。
3. 离子强度对木瓜蛋白酶活性的影响（1）取5支试管，分别加入0.5ml酶反应缓冲液，编号为1、2、3、4、5。
（2）分别向5支试管中加入0.1ml木瓜蛋白酶样品，编号为1、2、3、4、5。
（3）分别向5支试管中加入不同离子强度的硫酸铜溶液（0.01mol/L、0.05mol/L、0.1mol/L、0.5mol/L、1.0mol/L）。
木瓜蛋白酶活力测定方法分别精密量取酪蛋白溶液5ml，置3支具塞试管中，置40℃水浴中保温10分钟，各精密加入供试品溶液2ml，摇匀，置40℃水浴中，开始记时，准确反应1小时，立即精密加入三氯醋酸溶液5ml，强力振摇混匀，置40℃水浴中放置30~40分钟，使沉淀的蛋白质完全凝固，滤过，滤液作为供试品溶液。
精密量取酪蛋白溶液5ml置另一具试管，于40℃水浴中保温1小时，精密加入三氯醋酸溶液5ml，强力振摇混匀，精密加入供试品溶液2ml，置40℃水浴中放置30~40分钟，滤过，滤液作为空白溶液。
照分光光度法（中国药典2000年版二部附录IV A），以L 盐酸溶液为空白，在275nm的波长处测定空白溶液、供试品溶液和对照品溶液的吸收度，按下式计算：效价（单位/mg）=A/As＊Cs＊12/2＊稀释倍数/W 式中A 为供试品溶液的吸收度减去空白溶液的吸收度： As为酪氨酸对照品溶液的吸收度： Cs为酪氨酸对照品溶液的浓度， ug/ml W为供试品重量，mg; 在上述条件下，释放1ug的酪氨酸的酶量为一个活力单位。
试剂酪蛋白溶液：取酪蛋白1g，加L磷酸氢二钠溶液50ml,置沸水浴中煮30分钟，时时搅拌，冷至室温，加L枸椽酸溶液调节PH至±，并迅速搅拌，防止酪蛋白沉淀，用水稀释至100ml（临用新配）。
酶稀释液：取无水磷酸氢二钠，加水400ml溶解，加乙二胺四醋酸二钠和盐酸半胱氨酸，振摇溶解，用1mol/L 盐酸或1mol/L氢氧化钠溶液调节±，用水稀释至500ml,混匀（临用新配）三氯醋酸溶液:取三氯醋酸，加醋酸钠和冰醋酸，加适量水溶解后，加水使成1000ml，摇匀。
酶活力测定对照品溶液的制备:精密称取已105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量，用L盐酸溶液制成每1ml 中约含40ug的溶液。
供试品溶液的制备:取本品适量（约相当于木瓜酶活力120万单位），精密称定，加酶稀释液振摇，制成每1ml中含200~300单位的溶液，摇匀。
第25 第2期西北农业大学学报V o l.25N o.2 1997年4月A cta U niv.A gric.Bo reali2occidentalis A p r.1997木瓜蛋白酶凝乳特性的研究张富新 田呈瑞(西北农业大学食品科学系,陕西杨陵712100) 摘 要 研究结果表明,木瓜蛋白酶最适凝乳温度为95℃;75℃以下,30m in以内酶凝乳活性稳定,85℃处理30m in活性完全丧失;pH为5～8时凝乳活性随乳的pH值的降低而增强;酶在pH3.2～7.7之间处理20h凝乳活性稳定;Ca2+具有明显的促凝乳作用;底物浓度对酶活性的影响符合米氏规律。
关键词 木瓜蛋白酶,凝乳活力,凝乳特性中图分类号 T S252.53木瓜蛋白酶是从木瓜乳液中提取的一种蛋白分解酶,作用底物较广泛,主要用于肉的嫩化和啤酒的澄清[1]。
据资料[1,2]报道,木瓜蛋白酶具有凝乳作用,但未见有关凝乳特性的详尽报道。
本文通过对木瓜蛋白酶凝乳特性的研究,为其在干酪中的应用提供基本参数。
1 材料与方法1.1 材料 木瓜蛋白酶为德国Sino2Am erican B i o techno logy Co.生产,脱脂奶粉为俄罗斯产品。
1.2 方法1.2.1 木瓜蛋白酶凝乳活力的测定 采用A ri m a方法[3]。
取5mL100g L-1的脱脂乳,在一定温度下保温5m in,加入0.5mL10g L-1的木瓜蛋白酶液,迅速混合均匀,准确记录从加入酶液到乳液凝固的时间(s)。
把40m in凝固1mL100g L-1的脱脂乳的酶量定义为一个索氏单位(Soxh let un it)[4],并以相对活性(RU)表示各因素的影响效果。
SU=2400T×50.5×D式中:T为凝乳时间(s);D为稀释倍数。
RU(◊)=各因素下SU最大SU×1001.2.2 酶的最适凝乳温度 分别在55,65,75,85,90,95,100℃下测定酶的凝乳活性。
木瓜蛋白酶性质测定
一、实验目的
1、学习并掌握木瓜蛋白酶活性测定的基本原理。
2、掌握影响木瓜蛋白酶性质的不同因素，如激活剂(如EDTA、半胱氨酸)，抑制剂、pH 等。
二、实验原理
木瓜蛋白酶（Papain）是一种巯基蛋白酶，它分解比胰脏蛋白水解酶更多、更广泛的蛋白底物。
它也具有脂酶活力。
其分子量约为23 000 左右。
木瓜蛋白酶是单条肽链，由211个氨基酸残基折叠成两部分形成裂缝，酶分子只有1 个巯基，对酶活力是必需的，激活剂有半胱氨酸、硫化物、亚硫酸盐和 EDTA等；抑制剂有巯基试剂，包括重金属、羧基试剂和过氧化氢等。
酪蛋白是一种蛋白质，它被木瓜蛋白酶降解生成的酪氨酸在紫外光区275 nm 处有吸收峰，根据测定275 nm 处的吸收值，可以判定木瓜蛋白酶的酶活力。
吸收值的大小与酪氨酸含量的多少有关，吸收值大说明酪氨酸含量高，也就是说木瓜蛋白酶分解的酪蛋白多，酶活力高。
三、仪器和试剂
1、市售木瓜蛋白酶；
2、仪器设备：磁力搅拌器（机）；离心机7000rpm（冷冻式）；紫外分光光度计；水浴槽；冰箱及常规玻璃仪器。
四、实验步骤
（一）激活剂（EDTA）对木瓜蛋白酶活力的影响
1、试剂
（1）3 mg·mL-1 木瓜蛋白酶液（用 0.1 mol/L 的磷酸缓冲液，pH 7.2 配制）；（2）0.1 mol·L-1的磷酸缓冲液，pH 7.2 ；
（3）激活剂：用 0.1 mol·L-1磷酸缓冲液（pH 7.2）配制含10 m mol·L-1半胱氨酸，分别含有0，0.2，0.6，1.0，2.0，4.0 m mol·L-1EDTA 的6 种混合液；（4）1%酪蛋白溶液：用0.1 mol·L-1磷酸缓冲液（pH 7.2）配制；
（5）15%三氯乙酸（TCA）溶液。
2、方法
EDTA 浓度
（mmol·L-1）
0 0.2 0.6 1.0 2.0 4.0
管号0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1
酶液（mL）0.2
0.2 0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
EDTA（mL） 1.8
1.8 1.8
1.8
1.8
1.8
1.8
1.8
1.8
1.8
1.8
1.8 37 ℃水浴预热10 min
1%酪蛋白（mL）0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0
37 ℃水浴10 min
TCA（mL） 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
1% 酪蛋白
（mL）
1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0
摇匀，静置5 min 过滤（或离心）
A
275nm
0 2.028 0 2.036 0 2.055 0 2.137 0 0.578 0 0.082
（二）抑制剂（过氧化氢）对木瓜蛋白酶活力的影响
1、试剂
配制浓度分别为0，0.25，0.5，1.0，2.0，4.0mmol·L-1的过氧化氢溶液。
2、方法
过氧化氢浓度
（mmol·L-1）
0 0.25 0.5 1.0 2.0 4.0
管号0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1
酶液（mL）0.2
0.2 0.2 0.2 0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
过氧化氢（mL）0.2
0.2
0.2 0.2 0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
37 ℃水浴预热10 min
1%酪蛋白（mL）0
1.0
0 1.0 0
1.0
1.0
1.0
1.0
37 ℃水浴10 min
TCA（mL） 2.0
2.0 2.0 2.0 2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
1% 酪蛋白（mL）1.0
1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0
摇匀，静置5 min 过滤（或离心）
A
275nm
0 1.595 0 1.505 0 1.500 0 1.445 0 1.035 0 1.330
（三）不同pH 值对木瓜蛋白酶活力的影响
1、试剂
pH 5.0 缓冲液0.1 mol·L-1乙酸－乙酸钠缓冲液；
pH 6.0 缓冲液0.1 mol·L-1磷酸氢二钠－磷酸二氢钠缓冲液；
pH 7.0 缓冲液0.1 mol·L-1磷酸氢二钠－磷酸二氢钠缓冲液；
pH 8.0 缓冲液0.1 mol·L-1磷酸氢二钠－磷酸二氢钠缓冲液；
pH 9.3 缓冲液 0.1 mol·L-1硼砂－氢氧化钠缓冲液；
2、用以上缓冲液分别配制不同pH 值的激活剂（1 m mol·L-1EDTA）和1%酪蛋白溶液。
缓冲液pH 5.0 6.0 7.0 8.0 9.3
管号0 1 0 1 0 1 0 1 0 1
酶液（mL）0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
0.2 0.2
0.2
0.2 0.2
EDTA（mL） 1.8 1.8 1.8 1.8 1.8
1.8 1.8
1.8
1.8 1.8
37 ℃水浴预热10 min
1%酪蛋白（mL ）
0 1.0
0 1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 37 ℃水浴10 min TCA （mL ） 2.0 2.0
2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 1% 酪蛋白（mL ）
1.0 0
1.0 0 1.0 0 1.0 0 1.0 0
摇匀，静置5 min 过滤（或离心）
A 275nm 0 0.034 0 0.011 0 0.113 0 0.043 0 0.023 五、实验结果分析
1、各实验组分析讨论实验结果，再由老师进行归纳总结。
2、做好实验曲线绘制及数据记录。
3、对该实验有哪些体会。
1.答：激活剂（EDTA ）对木瓜蛋白酶活力的影响
EDTA 浓度 （mmol·L -1）
0 0.2 0.6 1.0 2.0 4.0 管 号 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 A 275nm 0 2.028 0 2.036 0 2.055 0 2.137 0 0.578 0 0.082
抑制剂（过氧化氢）对木瓜蛋白酶活力的影响
过氧化氢浓度 （mm ol·L -1）
0 0.25 0.5 1.0 2.0 4.0 管 号 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 A 275nm 0 1.595 0 1.505 0 1.500 0 1.445 0 1.035 0 1.330
不同pH 值对木瓜蛋白酶活力的影响
缓冲液pH 5.0 6.0 7.0 8.0 9.3 管 号 0 1 0 1 0 1 0 1 0 1 A 275nm 0 0.034 0 0.011 0 0.113 0 0.043 0 0.023
则根据上述数据可绘制图如下：
激活剂（EDTA）对木瓜蛋白酶活力的影响
0.5
1
1.5
2
2.5
00.20.61
24
EDTA浓度吸光值
抑制剂（过氧化氢）对木瓜蛋白酶活力的影响0
0.5
1
1.5
2
00.250.51
24
过氧化氢浓度吸光值
不同pH 值对木瓜蛋白酶活力的影响
0.02
0.04
0.06
0.08
0.1
0.12
567
89.3
缓冲液pH 吸光值。
