免疫细胞功能检测技术44页PPT

各实验室操作不规范，质量难以保证。有学者认为ELISA 技术已逐步走向退化，可能会逐步退出临床实验室。
• 化学发光免疫测定法出现于20世纪90年代初，是一种新
型标记免疫测定技术
• 化学发光是在常温下由化学反应产生的光的发射。其机
制为某些化合物（发光剂或发光底物）可以利用一个化
学反应产生的能量使其产物分子或反应中间态分子上升
• 标记物及其类别 • 常见三大免疫标记检测原理
• 随着基础免疫学研究的深入和现代免疫学
理论的建立，使大量免疫学检测技术被不 断地创新、发明；在临床疾病诊治的应用 中也不断地推陈出新。目前应用免疫学原 理检测的检验项目占到三级综合医院检验 科全部检验项目的1／4，医疗收入约占1／
• 三大常使用标记物质
土元素，需要外在的稳定光源照射，光的波长产生stoke位移，并
有一个时间滞后以化便学于发检光测波长改变后的光子时数间量分。辩荧光
标记物 酶-发光底物、发光剂
稀土离子，如铕
稳定性
稳定性非常好
影响被标记物的生物活性与免 疫活性
灵敏度
灵敏
稍高于化学发光
反应体系
接近中性
酸性，易引起蛋白质变性
包被技术
不透明微量孔壁吸附, 提高分析灵敏度,降低
大
• 标准曲线有效期短，必须每次定标，造成浪费 • 操作步骤很难自动化 • 反应时间长，出报告时间长
• 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，加入酶
标抗原或抗体、酶反应的底物后，底物被酶催化 变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量 直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或 定量分析
1971年Engvall和Perlman建立了固相酶免疫测定方法（ELISA），这种 非放射标记免疫测定在临床检验，特别是感染性疾病的诊断中取得了 广泛应用。 缺点 ➢试剂制备困难 ➢操作步骤复杂，耗时长 ➢影响因素多，质量控制难以保证 ➢最后测定的是颜色的光密度，其精密度、敏感性、可检测范围远不 如发光免疫技术

免疫功能检查ppt课件
• 免疫系统概述 • 免疫功能检查的方法与技术 • 常见免疫功能异常疾病 • 免疫功能检查的临床意义与价值 • 未来免疫功能检查的发展方向
01
免疫系统概述
免疫系统的定义与功能
免疫系统的定义
免疫系统是人体内的一个复杂的 网络系统，由多个器官、组织和 细胞组成，负责抵御外来病原体 入侵，维持内环境稳定。
免疫系统在组织损伤后能够促进修复和再 生，帮助身体恢复健康。
免疫系统具有自我调节功能，能够根据不 同的抗原刺激产生相应的免疫应答，防止 过敏反应和自身免疫疾病的发生。
02
免疫功能检查的方法与技术
血液免疫检测
血液免疫检测是通过采集患者的血液样本，检测其中的免疫细胞数量、免疫分子水 平以及免疫细胞活性等指标，以评估患者的免疫状态。
免疫系统的功能
免疫系统具有识别、清除外来抗 原，促进组织修复和再生，以及 调节免疫应答等重要功能。
免疫系统的组成
01
02
03
免疫器官
骨髓、胸腺、淋巴结、脾 脏等是免疫系统的主要器 官，负责产生和存储各种 免疫细胞。
免疫细胞
淋巴细胞、巨噬细胞、树 突状细胞等是免疫系统的 主要细胞，负责执行免疫 应答和防御功能。
免疫分子
抗体、细胞因子、补体等 是免疫系统产生的生物活 性物质，参与免疫应答和 炎症反应。
免疫系统的重要性
抵御病原体入侵
维持内环境稳定
免疫系统能够识别和清除外来病原体，如 细菌、病毒、真菌等，防止感染发生。
免疫系统能够清除体内异常细胞，如肿瘤 细胞，维持内环境的稳定和健康。
促进组织修复和再生
调节免疫应答
常见的血液免疫检测方法包括血常规检查、免疫球蛋白检测、补体检测、细胞因子 检测等。

正常小鼠肝中枯否细胞可吞噬清除90% 炭粒，脾巨噬细胞约吞噬清除10%炭粒。据 此给小鼠定量静脉注射印度墨汁(炭粒悬液)， 间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒 的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判 断巨噬细胞的功能。
vv
(二)吞噬功能检测
巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有很强的 吞噬功能，常用鸡红细胞(CRBC)、白色念珠 菌、酵母细胞等作为吞噬颗粒，用斑蟊敷贴 法收集人巨噬细胞或从腹腔渗出液获得鼠巨 噬细胞。
12～16
核大小、染色质 增大、疏松
增大、疏松
核仁
清晰、1～4个 有或无
有丝分裂
有或无
无
胞质、着色
增多、嗜碱
增多、嗜碱
浆内空泡
有或无
有或无
伪足
有或无
有或无
vv
未转化的淋巴细胞
6～8 不增大、密集 无 无 极少、天青色 无 无
2. 淋巴细胞转化的刺激物
非特异性刺激物： PHA ------T细胞 ConA -------T细胞 PWM -------T、 B细胞 LPS -------B细胞
体内抗体产生的特异性抗原有白喉类毒素、 破伤风类毒素、多价肺炎链球菌菌苗等。 将适量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫 前及免疫后1周、2周、3周分别采血，分离血 清，测定受检者免疫前后相应抗体的效价，判 断受检者体内B细胞的功能。
vv
三、NK细胞活性测定
形态法 酶释法 荧光法 同位素法 化学发光法
vv
(一) 细胞运动功能——趋化功能检测
1.原理：
vv
2. 方法： 滤膜渗透法（Boyden 小室法）
琼脂糖平板法
vv
(二)吞噬和杀菌功能测定 1．显微镜检查法：

单核细胞（monocyte）。 Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细
胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。
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细胞分离基本原理
不同细胞密度不同 不同细胞表面生物学特性不同 不同细胞表面分化抗原不同
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不同细胞密度不同
人的红细胞密度为1.093 粒细胞密度为1.092 单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的密度为 1.075-1.090
将发光分析系统和免疫测定相结合而建立的一种新的超微量 免疫分析技术。
优点：该方法既具有免疫反应的高度特异性又有发光分析的 高灵敏度。
30
化学发光免疫测定 吖啶酯、鲁米诺 生物发光免疫测定 萤火虫、发光水母
化学发光酶免疫测定 辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（AP） 电化学发光免疫测定
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第三节 免疫细胞功能的检测
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39
免疫细胞的分离
外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离 T细胞和B细胞的分离 T细胞亚群的分离
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(一)外周血单个核细胞分离
外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）包括淋巴细胞和
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应用与方法学评价：
该方法既可检测抗体分泌细胞，又可检 测抗体分泌量。 优点：
稳定、特异、抗原用量少； 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌，并可定量； 可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞。
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ELISPOT技术简介
酶联免疫斑点试验( Enzyme linked immunospot assay) 80 年代，国外的科研工作者根据 ELISA 技术的基本原理，
非遗传控制的的意外的细胞 坏死（accidental cell death）

应用
细胞免疫检测技术在医学领域广泛应用于感染性疾病、肿瘤 、自身免疫性疾病等的诊断、治疗监测和预后评估。
发展趋势
自动化与高通量
随着技术的发展，细胞免疫检测 正朝着自动化、高通量、高灵敏 度的方向发展，以提高检测效率
和准确性。
标准化与规范化
为了确保检测结果的可靠性和可比 性，需要建立和完善细胞免疫检测 技术的标准化和规范化体系。
机遇
随着科技的不断进步，新的技术和方法不断涌现，为细胞免疫检测技术的发展提供了更多的机遇和可能性。
未来研究方向与展望
研究方向
未来细胞免疫检测技术的研究方向主要包括 提高检测的灵敏度和特异性、降低检测成本 、开发新的技术和方法等。
展望
随着科技的不断进步和研究的深入，细胞免 疫检测技术有望在未来得到更广泛的应用， 为疾病的诊断、治疗和预防提供更多的帮助 和支持。
《细胞免疫检测技术 》PPT课件
xx年xx月xx日
• 引言 • 细胞免疫检测技术概述 • 细胞免疫检测技术的基本方法 • 细胞免疫检测技术在医学中的应
用 • 案例分析 • 总结与展望
目录
01
引言
课程背景
01
细胞免疫检测技术是生物学、医 学等领域的重要研究手段，广泛 应用于疾病诊断、治疗和预防。
肿瘤免疫诊断中常用的细胞免疫检测技术包括流式细胞术、 免疫组织化学、酶联免疫吸附试验等。这些技术能够检测肿 瘤细胞表面的标志物、分泌的细胞因子和免疫细胞浸润等情 况，为肿瘤的诊断和治疗提供重要依据。
自身免疫病诊断
自身免疫病是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身 组织损害的疾病。细胞免疫检测技术在自身免疫病诊断中 具有重要作用。
常用的细胞免疫检测技术包括混合淋巴细胞培养、细胞毒试验、抗体检测等。这 些技术能够检测供、受体之间的免疫差异和排斥反应的标志物，为移植后管理和 治疗提供指导。

原理：单次差速密度梯度离心的分离法 组成：2份6%聚蔗糖蒸馏水溶液+1份34%
泛影葡胺生理盐水溶液。 比重：1.077±0.001(最佳)
齐齐哈尔医学院免疫
1.077±0.001的分层液可将细胞分离
红细胞：1.093 粒细胞：1.092 单个核细胞1.0齐7齐6哈—尔医1.学0院9免0疫
齐齐哈尔医学院免疫
免疫细胞标志与功 能检测技术
掌握：免疫细胞的分离; 淋巴细胞功能检测 熟悉：免疫细胞表面标志和功能检测的临床
应用;淋巴细胞表面标志及亚群分类； 了解：其他免疫细胞功能检测技术；检测的
临床应用。
齐齐哈尔医学院免疫
一、免疫细胞的分离
二、淋巴细胞标志及亚群分类
三、抗原提呈细胞的表面标志
四、淋巴细胞的功能检测
密度梯度离心(Ficoll)离心
细胞纯度95%；细胞收率80%；淋巴细胞90%--95%
齐齐哈尔医学院免疫
二 、淋巴细胞分离
掌握
目的--去除单核细胞
1.贴壁粘附法 2.吸附柱过滤法: 将PBMC加入葡聚糖
凝胶SephadexG-10中，从柱上洗脱下 来的主要是淋巴细胞。 3.Percoll分离液法：经聚乙烯吡咯烷 酮（PVP)处理的硅胶颗粒。
用分层液是（ C）
A 明胶
B 右旋糖酐
C Ficoll分层液 D Percoll分层液 E 葡聚糖
2.Ficoll液单次密度梯度离心后外周血细胞分布由上至下
依次为（ C）
A 单个核细胞、血小板和血浆、粒细胞、红细胞
B 血小板和血浆、粒细胞、单个核细胞、红细胞
C 血小板和血浆、单个核细胞、粒细胞、红细胞
D 血小板和血浆、单个核细胞、红细胞、粒细胞

免疫细胞功能检测技术 的临床应用
CHAPTER
感染性疾病的诊断与监测
感染性疾病的诊断 感染性疾病的监测
肿瘤的免疫诊断与治疗
肿瘤的免疫诊断
肿瘤的免疫治疗
自身免疫性疾病的诊断与治疗
自身免疫性疾病的诊断
通过检测免疫细胞的功能，有助于诊断 自身免疫性疾病，如类风湿性关节炎、 系统性红斑狼疮等。
VS
自身免疫性疾病的治疗
免疫细胞功能检测在疾病诊断、治疗 监测和药物研发等方面具有重要意义， 有助于深入了解免疫系统在健康和疾 病状态下的反应和功能。
检测技术的发展历程
早期阶段
进展阶段
现代阶段
检测技术的应用领域
01
02
医学研究
临床诊断
03 药物研发
02
免疫细胞功能检测技术 的基本原理
CHAPTER
免疫细胞的分类与功能
T细胞
巨噬细胞
B细胞 树突状细胞
检测技术的生物学基础
抗原-抗体反应 补体激活
检测技术的分子机制
信号转导
基因表达分析
03
免疫细胞功能检测技术 的方法与操作
CHAPTER
流式细胞术
总结词
一种快速、准确、多参数的细胞分析技术
详细描述
流式细胞术是一种利用流式细胞仪对细胞进行快速、准确、多参数分析的技术。通过将待测细胞与荧光染料结合， 在流式细胞仪中经过激光照射和光电倍增管检测，可以对细胞表面的抗原、细胞内的活性物质等进行定量和定性 分析，从而评估免疫细胞的功能状态。
利用人工智能和机器学习技术对免疫 细胞功能检测数据进行深度分析和预 测。
光学技术
利用光学技术提高免疫细胞功能检测 的灵敏度和分辨率。
未来发展方向及前景