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高效液相色谱-荧光检测法测定人尿中3-甲基组氨酸

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１ ８ ； ：３ ９５４２５
４ ｎｌ Ｐ ，ｎａｓ Ｔ Ｇ ｉｉ Ｒ ａ．Ｊ ｒ Ｍｉ ｅ Ｅ Ｉ ｌ Ｓ ｒｆ ｋ ｒ ｇ ， ｆｎ Ｌ ｌ Ｃ ｏ ｈ－
ｍａｏｒ ９ ７４ ３ ３ ｔｇ ，１８ ；１ ：３
５ ｅｅｖ Ｘ Ｇ ｉ ｉ Ｍ， ａｐｎｉ Ｆ ａ Ｍｅ ｂｌｍ， Ｌ ｖ ｅ ｕ ｎ ｒ Ｃ ｒ ｔｒ ｔ ｒ ， ｇｅ ｅ ｅ ｅｌ ． ｔ ｏｓ ａ ｉ
酸衍生物。 二极管阵列检测器的灵敏度低， 需要 １０Ｌ的生物样品， ０μ 蘈 比荧光检测器所需样品多１ 倍。
故需要进一步调整梯度洗脱程序。 从图１ 可看出， 尿中其他氨基酸等杂质对３ － ＭＨ
的检测 无干扰 。 可进一步 应用二极 管 阵列检测器 验 证 尿 中的３ＭＨ。 图２ － 从 可看 出３ － 标 准品 的紫外 ＭＨ 吸收谱 图与尿 中３ＭＨ色 谱峰的紫外 吸收谱图完全 － 一致， 可见 图１ 中所 确定 的３ＭＨ 峰是正 确的 ， 且 － 而 是纯 ３ － ＭＨ色谱 峰。
ｆ ｍ ｄ ｐｓ ｔｎｌｉ ａｍ ｄｉｔｎ ｏｃｒｉ ｔｉ ｒｉ ｅ ｏｔｅ ｐｐｄ ｃａ ． ｆｒ ｎ ｒ ｏ ｅ ｂ ｏｔｒ ｓｔｎｌ ｉ ａｏｓ ｅａ ｈ ｉｎ ｅｄ ｓ ｈ ｐｌ ｅｔｅ ｉ Ａｔ ｂｉｇ ｒ ｙ －ａ ａｏ ｏ ｆ ｉ ｆ ｎ ｉ ｄ ｅ ｕ ｆ ｏ ｃ ｔ ｓ ｓ ｙ ｉ ｈｎ ｅ ｅ ｅ －
Ｙｕｎ ｓｅｇ Ｓ ｅ Ｍｉ ａｄ Ｊ ｓｏ ａ Ｙ ｈｎ ， ｈｎ ｎ Ｌ ｉ ｈｕ ｉ ｎ ｉ ｅ
（ ｅ ｒ Ｈｏ ｉｌ Ｎａｊ ｇ ｍ ａｄ Ｎａｊ ｇ ２００） Ｇｎ ａ ｓ ｔ ｏ ｅ ｌ ｐ ａ ｆ ｎｉ Ｃ ｍ ｎ ， ｎｎ ， １０２ ｎ ｏ ｉ Ａ ｓ ａｔ ｈｅ ｍ ｔｙ ｉｉｎ （－ ） ｓｔｔ ａ ｉ ｅｒｌ ｐｎｎ ｏ ｂｔ ａｔ ａｄ ｏｉ ｔ ｂｔ ｃ Ｔ ｒ － ｅ ｌｓｄ ｅ ＭＨ ｃｎｔｕ ｓ ｎ ｇａ ｃｍ ｏｅｔ ｏ ｃｎ ｍ ｓ ．Ｉ ｉ ｒ ｅ ｈ ｈ ｔｉ ３ ｏ ｉ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ ｈ ｉ ｎ ｙ ｎ ｓ
生 成 删具 有 荧 光 或 有 紫 外 吸 收 的 物 剩 ， 产 生 的 干 扰 故
按 前 述 方 法 分 析 ， 得 ３ Ｍ Ｈ 与 内 标 ＥＡ 的 峰 面 积 求 －
较多。 中３ＭＨ 的含量较 微 ， 其他杂质 的色谱 尿 － 易被 峰干扰 。 经过色谱条件 反复 比较及优化 ， 确定在本实 验条件下 ， ＭＨ 与尿中的其他杂质在２ｍ ｎ内得到 ３ － ５ｉ
Ｅ 的分 离 情 况 。 Ａ
５０ ｍ ｌ ０ 蘭 ｏ Ｌ的３ ／ － 标准品和 内标 Ｅ 用前述方法 ＭＨ Ａ， 分析 ， 测得３ 种浓度的平均 回收率为 （４３ ． ９．±２７ 。
重 复 性 缘 的 实 验 方椒 法 ， 即 谀 在 尿 中 加入 阎 已 知 Ａ量
的３ － 标 准 品和 内标 ， 定峰 面 积 比 ， ＭＨ 测 计算 得 日 内、 日间变异 系数分别 为５０ （ ｎ＝ ５ 和 ７７ ╪ ． ╪ ． ｎ
３５ 讨论 ． 本文所介绍 的方法 可同时或单独用荧光 检测器 和二极 管阵列检 测器测 定 Ｏ Ａ衍 生反应 后 的氨基 Ｐ
二极管 阵列检测器的干扰杂 质多于荧光检 测器检测 的干扰杂质 ， 虽然对３ － 无干扰 ， ＭＨ 但用二极管 阵列 检测器 测定其他氨基酸 时对某 些氨基酸 产生干 扰 ，
ｅ ｍ＝ ４５ｍ； ５ｎ 或用二极管 阵列检测 器检测 ， 定波 测 长３８ｍ， ３ｎ 参考波 长３０ｍ。 ９ｎ
表１ 梯度洗脱表
２ 实验部分 ２１ 仪器与试剂 ．
仪器 Ｈ １９ Ｍ 液 相 色谱 仪和 Ｈ １４ Ａ Ｐ ０ ０ Ｐ ６ ０
２３ 样品预处理及衍生化 ．
收集２ｈ 样计 总量 ， １ Ｌ尿 样置于 －２℃ ４尿 取 ｍ ０ 冰箱保存 至分析 。
ｌ ｓ ｄｒ ｇ ｔｎ ｒｄｔ ｎ ｅ ｅ ｕ ｎ ｐ ｅ ｄｇａａｏ ３ ａ ｄ ｒ ｉ ｅ ｏ ｉ － ｃ ｎｔ ｒ ｔｚｄ ｐｏ ｉｓｎｈｓ ｉｍ ｓｅ ｉｒ ｉｙ ｒ － ＭＨ ｎ ｏ ｂ ｅ ｉ ｅ ｆ ｒ ｅ ｙｔ ｉ ｎ ｃ ａｄ ａ ｄ ｅｃ ｔ ａ ｅ ｌ ｏ ｔｎ ｅ ｓ ｕ ｌ ｎ ｓ ｌ ｘ ｅ ｕｉ ｒ ｐ ｅ ｉ ｔｅ ｎ ，ｓ ａ ｓ ｓｅ ｆ ｔＮ ． ｓ ｒ ｔａ ９ ％ ｔｅ ｌ ａ ３ ｄ ｈ ｕ ｅ ａ ｉｌ ｋ ｉ ｐｃｉ Ｒ Ａ Ａ ｍ ｅ ｎ ｏ ｈ ｔ ａｈｍ ｎ ｎ ｒ ｉ ｔ ｔ ｃ ｓ ｉｃ ｏ ｈ ０ ｆ ｏ ｕ ｔ － ｐｏｅｉｓ ｋｌａ ＭＨ ｌ ｔｉ ｓｅ ｔｌ ｏ ｘ ｎ ｅ ｓ
高效液相色谱－ 荧光检测法测定人尿中３甲基组氨酸 －
袁倚盛
提要
酸的 含 岬 暮
沈 敏
ห้องสมุดไป่ตู้
黎介寿
（ 南京军区总医院 南京 ２０ ２ １ ０） ０
用带梯度洗脱 系统 的高效液相色谱仪配制 国产色谱柱和试剂 ， （ 荧光 紫外 ） 检测外科病人尿中３甲基组氨 －
浚 察 考炝 了 － 甲基 组 榘氨 酸 与 尿 中 其 他 氨 基 酸 岷 驮 杂又 实 姆 掷 肭 情 况 以 方 法 奶 煨 ， 特性 匾裕 为 床 手术 治 疗 后 病 临 彩
荡 ， 心 １ｍｎ １ ＯＯ／ ｉ 。 上 清 液 ５ ， 离 Ｏ ｉ ５ ｒ ｎ 取 Ｏ ｍ ０Ｌ 加
度为２５ ｍ ｌ ．ｍ ｏ／ Ｌ的３ － 美国Ｓ ｍ 公司） ＭＨ（ ｉａ ｇ 标准溶
液 ； 苯二 甲醛 （ Ｐ 衍 生试 剂 ： 取 Ｏ Ａ 瑞 士 邻 Ｏ Ａ） 称 Ｐ
Ｏ Ａ衍生试剂５ Ｐ ０Ｌ和０５ Ｌ硼酸缓冲液（．ｍ ｌ ．ｍ ０４ ｏ ／
人的康复提供 了有价值的参考 。 关键词
１∏ 把
高效液相色谱法 ，－ ３甲基组氨酸 ， 柱前衍生化 ， 人尿
纯四氢呋喃（ 宜兴第二化学试剂厂）其他试剂均为 。
市售分析纯级 ， 水溶液试剂均用双蒸水配制 。
３甲基 组氨 酸 （－ ｅ ｙ ｉｉｎ ， － － ３ｍ ｔ ｌ ｓｄ ｅ ３ＭＨ） ｈ ｈ ｔｉ 主要 分布在 肌 肉蛋 白质 中 ， 于肌球 蛋 白重 链的 球状头 位 部 和肌 动 蛋 白多肤 链 的第 ７位 残基 。 ３ 释放 的３ＭＨ － 不再结 合到 ｔ Ｎ 转 移核 糖核 酸 ） ， Ｒ Ａ（ 上 而是 从尿 中 定量排 出， 没有再循环 的问题 。－ ３ ＭＨ排 出的增多主 要见于外 科创伤 、 感染 等应激情况 ［ ３ 监测尿 中３ １］ ～。 － ＭＨ的含量对外 科创伤病人和烧伤病 人等的治疗和 康 复有着重要意 义。 本文介 绍应 用高 效液 相色谱－ 荧光检 测器 或二 极 管阵列 检测器 测定 人尿 中３ － ＭＨ， 萃取 ， 乙腈 邻苯 二 甲醛柱前 衍生 化反应 ， 相 Ｃ１ 离 ， 键合 柱分 二元梯 度洗脱 。 ２ｍｎ内， 中３ 在 ５ｉ 尿 － 与其他 氨基酸 以及 ＭＨ 杂质得 到完全 的分离 ， 有 良好 的线性 关系和 回收 并 率 ， 确度 和重 复性也达到 了设计要 求。 精
１８ ；７ ８４ ９８ ３ ：４
２ ｅ ｒ Ｈ Ｖ ｎ －ａｒＭ－ Ｊ Ｔ ｊ ｌＪ Ｆ ａ Ｐｔｓ ， ａ ＥｐＢａ Ａ ｒｂ ｓ ｅ Ｐ ｒ ｔ ， ｉ ｅ Ｍ ｅ ｌ ｔ ．
Ｍｅ ｂｌｍ，１８ ；８ ３ ７ ｔ ｏ ａ ９９ ３ ：９
Ｈ ｎｎ ｅ ｇ ， ｋｌｕｎｄ Ａ ， ｔｊｅｒｔｏ ． ｌ ｂ ｅｒ ｎｒｍ Ｃ ｓ Ｈ ｉ ｔ， Ｎ ｕ
＝ ６） 。
３ ４ 床 τ 应
将４例手术治疗后的 胃癌病人 随机分成 ４ ： ５ 组 ① 不外加氨基酸支持液组 （ 对照组 ）②外 加８５ 氨基 ， ．
酸嶂支 持 液 组 С 忠 鹤 椋 ８ ５ Ａ Ａ 组椋 ） ，③外饧 加 １０ 被 氨 基 酸嶂支 С 持
液组 （０ Ａ １ Ａ组 ）④ 个体化 氨基酸组 （ ， 根据 病人营 养状况有 目的的外加某些氨基酸 ， Ａ 组） Ｉ Ａ Ｄ 。 术后 蛋 白质 分解 速率 加快 ，－ 排 出量 明显 ３ＭＨ
３２ 线性范围试验 ． 将３ＭＨ标准溶液的浓度分别配成２．，００ － ００５．
２０５０ １０ ｏ Ｌ， ５ ０和 ００ｍ ｌ 并分别 加入 内标 Ｅ ５ 。 ／ Ａ ０Ｌ
术前 水平 ， 代谢支持组均低 于术前 水平 。 测定结果见 表２ 。
表２ ＭＨ排出量 μ ｏｋ ） ３ － 浚 蘭 ｌｇｄ ｍ／
Ｌ ｐ １．） Ｈ ８振荡混合 ， ６ｓ ０ 在 ０ 内进样 ２ 。 ０Ｌ
Ｆ ｋ 公司）０ ｇ加４５ Ｌ甲醇和５μ ｌａ ｕ ２ｍ ， ．ｍ ０Ｌ巯基乙醇 蘈
（ 瑞士 Ｆｕａ 司）混 匀后再 加０５ Ｌ的０４ ｏ Ｌ ｌ 公 ｋ ， ．ｍ ．ｍ ｌ ／
３ 结果与讨论
３ １ 色谱 分离 ． 尿 中除 了３ － 外， ＭＨ 主要 含有 游离 氨基 酸 和 伯 氨类有机化合物 。 这些物质都 可以与 Ｏ Ａ 发生反 应 Ｐ
用离子交换法纯化尿样， 测定其中的３Ｎ 所 －Ｍ， 需尿样量大， 预处理手续繁琐， 分析时间大于１［ ｈ５ ］ 而且需要特定的色谱仪。 本方法是在测定人血清氨 基酸方法的基础上加以改进［， ６ 仅需５ ］ μＬ样品， ２ｍｎ内即可完成１ ５ｉ 次分析。
参 考 文 献
１ ｏｇ Ｌ Ｄｌｒ Ｄ Ｂ ｄｉ Ｊ ｅ ａ Ｍｅ ｂｌｍ， Ｌ ｎ Ｃ ， ｉ ｄ Ｒ ｏｚ Ｗ ｌ ｔ ｏｓ ａ ， ｎ ｔ ． ａｉ
荧光检测器（ 中国惠普公司）Ｍｉｏｕｅ ， ｃ ｆ Ｅ离心机 ｒ ｇ
（ 国 Ｂｃｍ ｎ公 司 ）溶 剂 过滤 器 （ 国 Ｍｉｐｒ 美 ｅ ａ ｋ 。 美 ｌｏ ｌ ｅ ｉ 公 司） 。 试剂 ３ － 标 准溶 液 ： ＭＨ 用双 蒸水精 确配 制 浓
取贮存尿样５ （ ０Ｌ二极管阵列检测器检测需取 １０Ｌ ， ０ 加内标Ｅ ５ Ａ ０Ｌ混合， 再加２０Ｌ乙腈振 ０
２２ 色谱亲件 ． 色谱柱： 大连依利特公司产２ｃ ０ｍ×４６ ｍ ｄ ．ｍ ｉ ． ． 不锈钢色谱柱， 内填５ｍ ｈｒｏｂ 键合相填料， Ｓ ｅｓ Ｃ８ ｐ ｉｒ １

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高效液相色谱法测定洗手液中的3-甲基-4-异丙基苯酚的含量

高效液相色谱法测定洗手液中的3-甲基-4-异丙基苯酚的含量

高效液相色谱法测定洗手液中的3-甲基-4-异丙基苯酚的含量王娟;于文【摘要】HPLC detection method of 3-methyl-4-isopropyl phenol in hand cleanser is introduced with higher accuracy and reliability. Standard solution has a liner relationship in the range of 1mg/ml to 200mg/mL. The minimum quantitative detection limit of hand cleanser sample is 10 mg/kg.%介绍了高效液相色谱检测洗手液中3-甲基-4-异丙基苯酚的方法。

该方法有较高的准确度和可靠性。

标准溶液在浓度1mg/ml～200mg/ml内呈线性关系。

洗手液样品的最低定量检测限为10mg/kg。

【期刊名称】《中国洗涤用品工业》【年(卷),期】2016(000)011【总页数】4页(P38-41)【关键词】洗手液;3-甲基-4-异丙基苯酚;高效液相色谱【作者】王娟;于文【作者单位】西安开米股份有限公司，陕西西安，710075;西安开米股份有限公司，陕西西安，710075【正文语种】中文【中图分类】TQ658.2现在市场上的许多洗手液会加入一些杀菌剂成分，他们宣称有杀菌抑菌效果，其中很多产品中添加有杀菌剂3-甲基-4-异丙基苯酚。

该物质是一种广谱的杀菌剂，应用广泛。

目前，文献中大多采用气相色谱-质谱联用的检测方法，少有其他仪器检测，或者是对该物质本身及其消毒液的检测方法，如气相色谱-质谱法测定洗手液中多种防腐剂[1]、气相色谱-质谱法分析检测莳萝酊的挥发成分[2]和甘肃产柴胡挥发油化学成分GCMS分析[3]。

洗手液中含有一定量的表面活性剂和其他成分，对分析干扰较大。

本方法采用高效液相色谱仪来检测洗手液中3-甲基-4-异丙基苯酚的含量。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定人体尿液中的酪氨酸和色氨酸

高效液相色谱-串联质谱法同时测定人体尿液中的酪氨酸和色氨酸

高效液相色谱-串联质谱法同时测定人体尿液中的酪氨酸和色氨酸支小平;崔盼盼;柳英霞【摘要】建立了高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS／MS）同时测定人体尿液中游离酪氨酸和色氨酸分析新方法。

采用乙腈－0．1％甲酸溶液（10：90，V：V）为流动相，流速为0．3 mL·min－1。

在全扫描模式下，将m／z为182．2、205．2的离子分别确定为酪氨酸和色氨酸的母离子，m／z136．1与188．0分别为定量子离子。

在质谱的多反应监测正离子模式下进行分析，酪氨酸和色氨酸的检测限分别为0．10和0．25 ng·mL－1。

在已优化的色谱和质谱条件下，待测样品经过简单的离心、过滤后即可直接进样检测。

在3个不同添加水平的回收实验中，酪氨酸和色氨酸的平均回收率为74．0％～124．0％，RSD值小于7．97％，表明该方法可满足实际样品检测要求。

该方法操作简单、快速、灵敏度高，可用于人体尿液中游离酪氨酸和色氨酸的同时测定。

%A new method for the simultaneous determination of free tyrosine and tryptophan in human urine samples by HPLC-MS/MS was developed.The chromatographic separation was achieved on an Agilent XDB-C18 column(4.6×50mm,1.8μm),the column temperature was 25 ℃,the mobile phase wasCH3CN-0.1%HCOOH(10:90,v/v),the flow rate was 0.3 mL·min-1 .In the full scan mode,the m/z 182.2 and m/z 205.2 were identified as the precursor ions of tyrosine and tryptophan,the m/z 136.1 and m/z 188 were quantitative product ion,respectively.The analysis was realized by multiple reaction-monitoring modes.Under optimal conditions,the linear ranges of tyrosine and tryptophan were 0.001-2.00μg · mL-1 ,and the limits ofdetection were 0.10 and 0.25 ng·mL-1 ,respectively.The average recoveries for tyrosine and tryptophan(spiked at three different levels)ranged from 74.0 to 124.0%,the RSD was below 7.97%.The method is simple,rapid and sensitive,and suitable for the simultaneous determination of free tyrosine and tryptophan in human urine.【期刊名称】《南昌大学学报（理科版）》【年(卷),期】2016(040)004【总页数】5页(P341-345)【关键词】高效液相色谱-串联质谱;人体尿液;酪氨酸;色氨酸【作者】支小平;崔盼盼;柳英霞【作者单位】南昌师范高等专科学校，江西南昌330103;南昌大学分析测试中心，江西南昌 330047;南昌大学分析测试中心，江西南昌 330047【正文语种】中文【中图分类】O657氨基酸不但是构建生物体的基本物质，而且在生物机体的生命活动中扮演着重要角色，它是生物化学、蛋白质组学、临床医学等领域的重要研究内容[1-2]。

高效液相色谱法快速、灵敏测定尿中3-甲基组氨酸含量

高效液相色谱法快速、灵敏测定尿中3-甲基组氨酸含量

高效液相色谱法快速、灵敏测定尿中3-甲基组氨酸含量朱珠
【期刊名称】《分析测试学报》
【年(卷),期】1993(000)005
【摘要】无
【总页数】3页(P60-62)
【作者】朱珠
【作者单位】无
【正文语种】中文
【相关文献】
1.产后奶牛血、尿中羟脯氨酸、3-甲基组氨酸和3-MEHIS浓度的研究 [J], 田文儒;何剑斌;刘云枫;王国卿
2.高效液相色谱-荧光检测法测定人尿中3-甲基组氨酸 [J], 袁倚盛;沈敏;黎介寿
3.高效液相色谱法测定3-巯基丙酸中硫代乳酸和3,3-二硫代二丙酸的含量 [J], 贾玉荣;张建超;尤昆;贾玉静
4.异硫氰酸苯酯衍生法测定孵育液中的3-甲基组氨酸与酪氨酸 [J], 刘放南;谭力;罗楠;周伟
5.氨基酸分析仪快速测定尿中3-甲基组氨酸含量 [J], 周成贵;孙玮;崔应瑞;董燕麟;陈东升;杨家驹
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反相高效液相色谱法对人血浆中甲氨蝶呤的测定

反相高效液相色谱法对人血浆中甲氨蝶呤的测定

反相高效液相色谱法对人血浆中甲氨蝶呤的测定摘要：建立反相高效液相色谱法测定甲氨蝶呤血药浓度的方法，以指导临床合理用药。

采用Agilent ZOBAX SB-C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为0.025 mol/L磷酸二氢钠溶液（pH 6.30）-甲醇（76/24，V/V）；流速为1.00 mL/min；检测波长为313 nm；柱温为35 ℃；10%（V/V）高氯酸为蛋白沉淀剂。

结果表明，血浆中甲氨蝶呤浓度在0.05～5.00 μg/mL（Y1 = 35.556 C+0.771，r=0.999 9）和5.00～100.00 μg/mL（Y2 = 36.727 C +1.700，r=0.999 9）范围内与峰面积呈良好线性关系，平均回收率为99.03%和97.04%。

日内精密度小于1%，日间精密度小于2.5%（n=6），定量浓度为0.05 μg/mL。

该方法色谱条件稳定、操作简单、出峰时间快、线性范围宽、精密、准确、特异性强、回收率高，适用于甲氨蝶呤血药浓度的监测。

关键词：反相高效液相色谱法；甲氨蝶呤；血药浓度大剂量甲氨蝶呤-甲酰四氢叶酸钙（Methotrexate-citrovorum factor，MTX-CF）解救是目前防治儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）髓外浸润的主要措施。

在该方案实施过程中，MTX血药浓度个体差异较大，患者体内的MTX血药浓度过高和持续时间过长是导致其细胞毒性作用的直接原因，而且MTX特异性差，除对肿瘤细胞产生毒性外，对所有快速分裂的正常细胞也有严重毒性。

因此及时监测MTX的血药浓度对确保临床用药的安全有效具有重要意义。

本试验参考文献[1-6]，优化了测定血浆中MTX的RP-HPLC法，该法样品预处理简单、线性范围宽、分离效果好、色谱峰对称、灵敏度高、结果稳定可靠，可为分析人血浆中的MTX提供参考。

1 材料与方法1.1 材料与试剂血浆样品由赣南医学院提供。