浅谈高效液相色谱仪期间核查(荧光检测器)

高效液相色谱仪期间核查规程1 目的保证高效液相色谱仪计量的准确度。

2 范围适用于高效液相色谱仪的期间核查。

3 期间核查项目和技术要求3.1. 泵流量设定值误差应Ss≤±2%；流量稳定性误差应SR≤±2%。

3.2. 定性测量重复性误差(5次定量环进样)应RSD≤1.5%。

3.3. 定量测量重复性误差(5次定量环进样)应RSD≤1.5%。

4 核查步骤4.1. 泵流量设定值误差Ss，流量稳定性误差SR的核查。

4.1.1. 仪器与用具分析天平，万分之一，秒表，精度0.01秒，10ml容量瓶。

4.1.2. 操作程序4.1.2.1. 将泵、进样器、色谱柱和检测器连接好，以甲醇为流动相。

4.1.2.2. 按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先精密称定过重量的容量瓶收集流动相，同时用秒表记录，准确收集10～25分钟，再精密称定其重量。

收集时间应符合下表规定，每个设定值重复测定3次。

4.1.3. 结果计算按下列公式计算SS和SR：Fm=（W2-W1）/（P.t）SS=（Fm-FS）/FS×100%SR=(Fmax-Fmin)/F×100%W2为容量瓶+流动相的重量(g)W1为容量瓶的重量P为实验条件下的流动相密度(g/cm3)t为收集流动相的时间(min)PFm流量实测值(ml/min)FS流量设定值Fmin同一组测量中流量最小值Fmax同一组测量中流量最大值F为同一组测量中流量的算术平均值4.1.4. 结果判断：SS和SR值应符合下表规定流量设定值(ml/min) 1.0测量次数 3收集流动相时间(min) 5允许误差 SS 2%SR 2%4.1.5. 注意事项:收集时间应将“秒”换算为“分”代入公式计算。

4.2. 定性、定量测量重复性试验4.2.1. 色谱条件色谱柱：C18流动相：乙腈：水（55：45）流速：1ml/min波长：350nm进样量：20ul（定量环或是自动进样）4.2.2.操作程序将仪器连接好，使之处于正常的工作状态，待基线稳定后，用进样阀的定量环注入20ul，浓度为1ug/ml左右的甲醛衍生物溶液或稳定的待分析样品溶液，连续进样5次，记录甲醛的峰保留时间和峰面积。

高效液相色谱仪期间核查操作规程1目的为使高效液相色谱仪检测功能在检定期间内处于正常的工作状态，确保检验结果的准确性和有效性。

在仪器设备两次检定期间，对该设备进行期间核查，以验证设备是否保持校准时的状态,确保检验结果的准确性和有效性。

2范围适用于中心U3000高效液相色谱仪的期间核查。

3 核查项目泵流量设定值误差S S、泵流量稳定性S R、基线噪声、基线漂移，采用有证的标准物质萘甲醇溶液（已知浓度u并给出不确定度Ur的单标准物质）1.0×10-7g/ml、1.0×10-4g/ml，检出限（L）、定性重复性、定量重复性。

4 核查依据JJG694-2009《原子吸收分光光度计检定规程》5 核查方法计量器具控制包括：两次检定之间或大修（修理更换泵、光路等）后的运行检查。

5.1 核查条件（1）环境条件核查室应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，通风良好。

室温（15—30）℃，检定过程中温度变化不超过3℃，室内相对湿度20%—85%。

仪器应平稳的放在工作台上，周围无强烈机械振动和电磁干扰源，仪器接地良好。

（2）其他要求核查用试剂：色谱级甲醇，纯水，萘-甲醇溶液1.00×10-4g/ml和1.00×10-7g/ml。

拓展不确定度小于4%，k=2。

5.2通用技术要求：目视、手动检查。

5.3输液系统泵流量稳定性S R设定流量1ml/min，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先称重过的洁净容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集5min时间流出的流动相，在分析天平称重，按公式计算S s和S R，重复测量3次。

式中：——流量3次测量值算术平均值，ml/min；——流量设定值，ml/min式中：F max——同一设定流量3次测量值的最大值，mL/min;F min——同一设定流量3次测量值的最小值，mL/min。

F min=(W2-W1)/（ρt·t）(2) 式中：F m——流量实测值，ml/min；W2——容量瓶＋流动相的质量，g；W1——容量瓶的质量，g；ρt——实验温度下流动相的密度,g/cm3（不同温度下流动相的密度参见JJG694-2009《原子吸收分光光度计检定规程》附录C）t——收集流动相的时间，min。

高效液相色谱-质谱联用仪期间核查操作规程1 目的为了确保高效液相色谱-质谱联用仪检测性能在仪器两次检定期间内处于正常状态，对仪器设备进行期间核查，以确保检测结果的准确性和有效性。

2 范围适用于高效液相色谱-质谱联用仪的期间核查。

3核查项目检测器：分辨力、信噪比、峰面积重复性、保留时间重复性。

4 核查依据JJF 1317-2011 液相色谱-质谱联用仪校准规范、液相色谱-质谱联用仪操作指导书。

5 核查方法5.1 测定条件：温度：15～30℃，相对湿度20～80%。

仪器室不得有明显的机械振动,无电磁干扰。

标准物质：利血平溶液标准物质，相对扩展不确定度由于5%（k=2）移液器或移液管：量程范围100uL或200uL，B级或以上；容量瓶：10mL或25mL，B级或以上。

5.2 分辨力将仪器运行稳定后，根据仪器说明书的推荐条件设置参数，将扫描范围设为606~612,直接注入，注入5ng利血平，观察质谱图，记录m/z为609质谱峰，并计算其50%峰高处的缝宽，得到W1/2，作为分辨力的结果。

5.3 信噪比根据附录B设定液相色谱条件并优化质谱条件，将检测离子的m/z设为表2中特征离子的m/z,经色谱柱注入相应量的利血平。

观察色谱图，记录其色谱峰峰高作为Hs。

同时记录信号峰后1min~3min时间内的基线输出信号的最大值与最小值之差，作为Hn。

根据公式计算信噪比S/N，连续测量6次，以6次测量S/N的平均值作为信噪比的结果。

S/N= Hs /Hn式中：Hs——为提取离子m/z的色谱峰峰高H n ——为基线噪声值信噪比测量条件表5.3 峰面积重复性与保留时间重复性：根据附录B 设定液相色谱条件并优化质谱条件，将检测离子的m/z 设为表2中特征离子的m/z,经色谱柱注入相应量的利血平。

连续测量6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，按下述公式计算相对标准偏差RSD.RSD=1001)1/()(12⨯⨯--∑=x n x x ni i %6 评定标准6.1 三重四级杆串联质谱： 6.1.1 分辨力ESI+≤1u ；6.1.2 信噪比ESI+≥30:1；ESI-≥10:1；APCI+≥30:1 6.1.3 峰面积重现性≤10% 6.1.4 保留时间重复性≤1.5%； 7 核查周期在仪器设备两次检定之间，每六个月核查一次。

高效液相色谱仪期间核查操作规程1 目的为了确保高效液相色谱仪检测性能在仪器两次检定期间内处于正常状态，对仪器设备进行期间核查，以确保检测结果的准确性和有效性。

2 范围适用于高效液相色谱仪的期间核查。

3核查项目检测器：基线噪声、基线漂移、定性定量重复性；4 核查依据JJG 705-2014 液相色谱仪检定规程、液相色谱仪操作指导书。

5 核查方法5.1 测定条件：温度：15～30℃，相对湿度20～80%。

5.2 基线噪音和基线漂移的测定紫外检测器和二极管阵列检测器：选用C18色谱柱,以100%甲醇为流动相,流量为1.0mL/min,检测器的波长选择在254nm,检测灵敏度调到最灵敏档。

开机预热，待仪器稳定后记录基线30min。

荧光检测器：选用C18色谱柱,以100%甲醇为流动相,流量为1.0mL/min,激发波长设定为290nm,发射波长设定为330nm。

开机预热，待仪器稳定后记录基线30min。

示差折光检测器：选用C18色谱柱，将仪器各部分连接好，以甲醇为流动相，流量为1 mL/min,参比池充满流动相，灵敏度选择在最灵敏当，接通电源，待仪器稳定后，记录基线30min5.3 整机性能（定性、定量重复性）测定将仪器各部分连接好，选用C18色谱柱，选择100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，根据仪器配置的检测器选择测量参数，紫外-可见光检测器和二极管阵列检测器波长设定为254nm，灵敏度选择适中，基线稳定后由进样器注入10uL的1*10-4g/mL萘的甲醇溶液；荧光检测器将激发波长和发射波长分别设定为290nm和330nm，灵敏度选择在中间档，基线稳定后注入10uL的1*10-5g/mL萘的甲醇溶液；示差折光检测器灵敏度选择在中间档，注入10 uL的200μg/mL的甲醇中胆固醇标准溶液, 连续测量6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，计算相对标准偏差RSD.6 评定标准7 核查周期在仪器设备两次检定之间，每六个月核查一次。

1目的对高效液相色谱仪运行情况进行检查，保证其正常使用，确保检验数据准确可靠。

2范围适用于本公司高效液相色谱仪在两次检定之间或修理后的运行检查。

3职责3.1检测中心液相主要使用人负责液相色谱仪期间核查的准备工作、操作及记录。

3.2检测中心设备管理员负责统筹安排及记录归档。

4计量性能要求4.1 输液系统泵流动稳定性应符合表1的要求。

表1 泵流量稳定性S的指标要求仪器的检测器的主要技术指标见表2。

表2 液相色谱仪检测器的主要技术指标4.3 整机性能仪器的整机性能用定性定量测量重复性表示，指标要求见表3。

表3 液相色谱仪整机性能指标要求5 通用技术要求5.1 仪器外观仪器上应有仪器名称、型号、制造厂名、产品系列号、出产日期等内容的标牌，国产仪器应有制造计量器具许可证标志。

5.2 仪器电路系统仪器电源线、信号线等插接紧密，各开关、旋钮、按键功能正常，指示灯灵敏，显示器清晰。

6 计量器具控制计量器具控制包括：两次检定之间或大修（修理更换泵、光路等）后的运行检查。

6.1 核查条件6.1.1 环境条件6.1.1.1 核查室应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，通风良好。

6.1.1.2 室温（15—30）℃，检定过程中温度变化不超过3℃（对示差折光率检测器，室温变化不超过2℃），室内相对湿度20%—85%。

6.1.1.3 仪器应平稳的放在工作台上，周围无强烈机械振动和电磁干扰源，仪器接地良好。

6.1.1.4 电源电压为（220±22）V，频率为（50±0.5）Hz。

6.1.2 核查设备6.1.2.1 秒表：最小分度值不大于0.1s。

6.1.2.2 分析天平：最大称量不小于100g，最小分度值不大于1mg。

6.1.2.3 数字温度计：测量范围为（0—100）℃，最大允许误差为±0.3℃。

以上器具需经计量检定合格。

6.1.3 其他要求6.1.3.1 核查用试剂：色谱级甲醇，纯水，分析纯的丙酮和异丙醇，紫外分光光度计，萘-甲醇溶液1.00×10-4g/ml和1.00×10-7g/ml，甲醇中胆固醇溶液200μg/ml和500μg/ml 和胆固醇等。

高效液相色谱仪常用的检测器及其性能(1)紫外吸收(UV)检测器UV检测器是目前HPLC应用最广泛的检测器。

它是依据光吸收原理，以适当的光路和电路，输出一个与试样组分浓度成正比的紫外一可见光吸收信号，其结构与一般光度计相似。

其流通池是组分流过的光学通道，池体积一般为8μl，内径小于lmm，长度10mm左右。

这种检测器灵敏度高，线性范围宽，对流速和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱分离。

紫外吸收检测要求被检测样品组分有紫外一可见光吸收，而使用的流动相无吸收，或在被测组分吸收波长处无吸收。

一般选择在欲分析物有最大吸收的波长处进行检测，以获得最大灵敏度和抗干扰能力。

在没有最大吸收时，可采用末端吸收。

检测波长的选择除取决于待测物质的成分和分子结构外，还必须考虑流动相组成、共存组分干扰等因素。

特别是各种溶剂都有一定的透过波长下限值，超过这个波长，溶剂的吸收会变得很强，以至于不能很好地测出待测物质的吸收强度。

表1列出了HPLC中一些常用的溶剂透过波长的下限。

(2)光电二极管阵列(IJDA)检测器PDA检测器又称为二极管阵列检测器(diode array UV detector，DAD)，这种检测器以光电二极管阵列作为检测元件，可进行多通道并行检测，在一次色谱测量中，可同时获得时间、波长、吸光度三者的关系，通过计算机处理，在荧光屏上显示出三维图谱，也可作出任意波长的吸光度一时问曲线和任意时间的吸光度一波长曲线。

DAD的光路与紫外检测器不同，光源发出的光聚焦后先通过检测池，通过检测池的透射光由全息光栅色散成多色光，不同波长的色散光按波长顺序聚焦在阵列元件上，每个元件对应一定的纳米数。

当光照射到光电二极管时，光电二极管产生讯号。

由于色散过程及透射光的检测是全波长范围的，可在瞬间检测流经检测池的全吸收光谱，得到三维色谱一光谱图。

计算机化的数据处理，还可进行色谱峰光谱相似性比较、峰纯度检测及利用谱图库对掣定样品进行检索等，为定性、定量分析提供更丰富的信息。

高效液相色谱仪期间核查方法一、依据和目的保证高效液相色谱仪的正常运行，在两次检定/校准之间进行期间核查，验证该设备是否保持检定/校准时的状态，确保其检验数据的有效性和准确性。

二、使用范围该运行检查方法适用于使用中的1200高效液相色谱仪的期间核查检查方法。

三、基本原理高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。

四、仪器工作条件及要求1、环境温度：15～35℃环境湿度：≤75RH%2、室内无强磁场干扰；3、室内部不存在妨碍仪器正常工作的震动；4、室内清洁，无腐蚀性气体；5、稳压器正常，并保持良好接地；6、供电电源：交流电压220V±10%；7、排风设备完好，排风量达到实验要求；8、仪器放置在坚固的实验台上，并避免阳光直射。

五、核查方法1、通用技术要求(1)检查贮液器是否清洁；(2)检查滤头是否堵塞；(3)检查仪器电源线、信号线等插接是否紧密；(4)检查各开关、旋钮、按键等功能是否正常，指示灯是否灵敏；将仪器各部分连接好，以100%甲醇为流动相，流量为1.0mL/min，启动仪器，待压力平稳后保持10min ，用滤纸检查各管路接口应无湿迹2、泵流量设定值误差SS 、流量稳定性误差的检定SR分别设定流量为0.5 mL/min 、1.0 mL/min 、2.0 mL/min ，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集5 min 流出的流动相，在分析天平上称重，按式（1 ）、式（2 ）计算S S 和S R 。

%100/)(⨯-=s s m S F F F S （1）%100/)(⨯-=m in m R F F F S （2）式中：m F ――()()t W W F m *-=ρ/12, 流量实测值，mL/min ；2W ――容量瓶+流动相的质量，g;1W ――容量瓶的质量，g ；ρ――试验温度下流动相的密度，g/mL ；t ――收集流动相的时间，min ；m F ――同一组测量的算术平均值，mL/min ；S F ――流量设定值，mL/min ；m F ――同一组测量中流量最大值，mL/min ；in F ――同一组测量中流量最小值，mL/min ；3、基线噪声和基线漂移选用C 18色谱柱，以甲醇：0.02mol/L 乙酸铵=5：95为流动相，流速为1.0 mL/min ，紫外检测器的波长选在230nm ，检测灵敏度调到最灵敏档，开机预热，待仪器稳定后记录基线10 min ，由检测器的衰减倍数和测得的基线峰-峰高对应标度，计算基线噪声，用检测器自身的物理量（AU ）作单位表示。

高效液相色谱仪期间核查操作规程1目的为使高效液相色谱仪检测功能在检定期间内处于正常的工作状态，确保检验结果的准确性和有效性。

在仪器设备两次检定期间，对该设备进行期间核查，以验证设备是否保持校准时的状态,确保检验结果的准确性和有效性。

2范围适用于中心U3000高效液相色谱仪的期间核查。

3 核查项目泵流量设定值误差S S、泵流量稳定性S R、基线噪声、基线漂移，采用有证的标准物质萘甲醇溶液（已知浓度u并给出不确定度Ur的单标准物质）1.0×10-7g/ml、1.0×10-4g/ml，检出限（L）、定性重复性、定量重复性。

4 核查依据JJG694-2009《原子吸收分光光度计检定规程》5 核查方法计量器具控制包括：两次检定之间或大修（修理更换泵、光路等）后的运行检查。

5.1 核查条件（1）环境条件核查室应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，通风良好。

室温（15—30）℃，检定过程中温度变化不超过3℃，室内相对湿度20%—85%。

仪器应平稳的放在工作台上，周围无强烈机械振动和电磁干扰源，仪器接地良好。

（2）其他要求核查用试剂：色谱级甲醇，纯水，萘-甲醇溶液1.00×10-4g/ml和1.00×10-7g/ml。

拓展不确定度小于4%，k=2。

5.2通用技术要求：目视、手动检查。

5.3输液系统泵流量稳定性S R设定流量1ml/min，启动仪器，压力稳定后，在流动相出口处用事先称重过的洁净容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集5min时间流出的流动相，在分析天平称重，按公式计算S s和S R，重复测量3次。

式中：——流量3次测量值算术平均值，ml/min；——流量设定值，ml/min式中：F max——同一设定流量3次测量值的最大值，mL/min;F min——同一设定流量3次测量值的最小值，mL/min。

F min=(W2-W1)/（ρt·t）(2) 式中：F m——流量实测值，ml/min；W2——容量瓶＋流动相的质量，g；W1——容量瓶的质量，g；ρt——实验温度下流动相的密度,g/cm3（不同温度下流动相的密度参见JJG694-2009《原子吸收分光光度计检定规程》附录C）t——收集流动相的时间，min。

1．目的为了解高效液相色谱仪的状态,维护高效液相色谱仪在两次检定期间校准状态的可信度,减少由于仪器稳定性变化造成的试验结果偏差,特对高效液相色谱仪进行期间检查。

2. 人员及职责2.1检验员按照指导书负责期间核查计划的具体实施及负责期间核查的核查记录。

2.2审核人：负责审核核查方案、监督期间核查过程、确认核查效果、审核数据。

审核人可由中心负责人兼任。

2.2 质量部长审核期间核查结果并负责组织处理核查发现的不符合项目,审核批准核查报告。

2.3 资料管理员负责仪器设备期间核查记录的归档保管。

3. 引用标准3.1 jjg705-2002液相色谱仪检定规程3.2液相色谱仪使用、维护说明书。

4. 核查条件4.1 环境条件4.1.1环境温度5~35 ℃，相对湿度20%~85%。

4.1.2室内无强烈的机械振动和电磁干扰。

4.2 仪器安装要求：仪器应安装在平稳的工作台面上，电缆线的接插件应紧密配合，仪器接地良好。

4.3 电源要求：电压为（220±22）V，频率为（50±1）HZ。

4.4期间核查的准备4.4.1测试设备秒表：分度值不大于0.1秒电子分析天平微量注射器：10μL， 50μL，（自动进样器不需）游标卡尺：15cm/0.02mm以上器具需计量检定合格4.4.2试药：萘甲醇（色谱纯）4 测试方法4.1 流量设定值误差SS 和流量稳定性误差SR选用C18色谱柱，用100%甲醇为流动相，流速为1.0ml/min，启动仪器，待压力稳定后，在流动相出口处用清洁、干燥已称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集5分钟，测量3次，称重，计算SS 和SR。

S S=（Fm平-FS）/FS×100%S R =（Fmax-Fmin）/ Fm平×100%式中：SS—流量设定值误差（%）F m —流量实测值 Fm=（W2-W1）/ρt·tW2—容量瓶+流动相的质量（g）W1—容量瓶的质量（g）FS—流量设定值（mL/min）ρt—实验温度下流动相的密度（g/cm3）t—收集流动相的时间（min）SR—流量稳定性误差（%）Fmax—同一组测量中流量最大值（mL/min）Fmin—同一组测量中流量最小值（mL/min）Fm平—同一组测量的算术平均值（mL/min）4.2 基线噪声ND和基线漂移选用C18色谱柱，用100%甲醇为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为254nm，启动仪器，待压力稳定后，记录基线30min，计算基线噪声（用AU表示）。

高效液相色谱仪期间核查作业指导书1. 目的在仪器设备两次检定之间，进行期间核查，验证设备是否保持校准时的状态，确保检验结果的准确性和有效性。

2. 核查项目标准曲线相关系数、定量重复性、检出限（DL）、基线噪声和基线漂移。

3. 使用的标准物质（核查标准）萘、苯甲酸、山梨酸标准品4. 核查依据；高效液相色谱使用说明书。

JJG 705-2002《液相色谱仪检定规程》5. 核查方法环境条件5.1.1安装仪器的房间应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，室内排风良好。

5.1.2仪器应平衡地放在工作台上，便于操作，周围无强烈的机械振动和电磁干扰，仪器接地良好5.1.3环境温度10~30℃，8小时内温度波动不超过±3℃，相对湿度低于85%。

电源要求5.2.1电源电压：220±22V5.2.2电源频率：50±仪器与试剂5.3.1秒表，分度值小于5.3.2电子天平，最大称重200g，最小分度5.3.3容量瓶50ml5.3.4微量注射器100μl5.3.5甲醇（色谱纯）5.3.6色谱用水核查方法5.4.1泵流量设定值误差SS 、流量稳定性误差SR的检查。

5.4.1.1技术要求5.4.1.2按表设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集10~25min，称重。

按式（1）、（2）计算SS 和SR。

SS =(Fm-Fs)/Fs×100% (1)SR =(Fmax-Fmin)/F×100% (2)式中：SS----流量设定值误差，%Fm =（W2-W1）/（ρi·t），流量实测值，mL/min；W2----容量瓶+流动相的重量，g；W1----容量瓶的重量，g；FS----流量设定值，mL/min；ρi----实验温度下流动相的密度，g/cm3；t----收集流动相的时间，min；SR----流量稳定性误差，%；Fmax---同一组测量中流量最大值，mL/min；Fmin---同一组测量中流量最小值，mL/min；F----同一组测量中流量的算术平均值，mL/min。

高效液相色谱仪经常使用检测器的种类及分析之樊仲川亿创作检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变更转化为可供检测的信号，经常使用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。

1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet－visibledetector，UVD)紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。

其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。

紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。

(1)紫外吸收检测器紫外吸收检测器经常使用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并装置一个光栅型单色器，其波长选择范围宽(190nm～800nm)。

它有两个流通池，一个作参比，一个作丈量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。

当组分进入丈量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。

局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不克不及做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不克不及小于溶剂的截止波长。

(2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector，PDAD)也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。

它采取光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描收集数据，得到吸收值(A)是保存时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。

高效液相色谱仪经常使用检测器的种类及分析之欧侯瑞魂创作检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变更转化为可供检测的信号，经常使用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。

1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet－visibledetector，UVD)紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最广泛的检测器之一，几乎所有的液相色谱仪都配有这种检测器。

其特点是灵敏度较高，线性范围宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用。

紫外可见检测器的工作原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计。

(1)紫外吸收检测器紫外吸收检测器经常使用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区范围的连续波长，并装置一个光栅型单色器，其波长选择范围宽(190nm～800nm)。

它有两个流通池，一个作参比，一个作丈量用，光源发出的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几乎无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出。

当组分进入丈量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关。

局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不克不及做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的工作波长不克不及小于溶剂的截止波长。

(2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector，PDAD)也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器。

它采取光电二极管阵列作为检测元件，构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描收集数据，得到吸收值(A)是保存时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图。

农产品检测中心高效液相色谱仪期间核查作业指导书1、目的查明仪器潜在问题，及时处理，确保仪器处于最佳运转状态。

2、适用范围适用于本中心高效液相色谱仪Aginent 1100和岛津LC-30AD 期间核查作业指导。

3、职责技术负责人审核、批准核查规程。

高效液相色谱仪责任人执行核查工作。

4、核查内容4.1核查周期：核查时间应安排在仪器检定周期中间进行。

若发生特殊情况(如仪器搬动、仪器出现故障等)时，也应安排仪器期间核查。

4.2 核查项目：检测器4.3 核查指标:指标紫外检测器荧光检测器定量重复性RSD ≤5％≤5％4.4 核查方法4.4.1可变波长紫外检测器的定量重复性测试选用与仪器匹配的色谱柱，100％甲醇为流动相，设定紫外检测器的波长为254nm。

开机预热，待基线稳定后，测定1×10 -4g/ml 的萘-甲醇标准溶液（一般进样体积为5μL -20μL），连续测定6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，计算相对标准偏差RSD。

nRSD.....X.X./.n.1..1 .100% （1）定性定量i.1iX式中RSD定性（定量）－定性、定量重复性相对标准偏差；Xi－第i次测得的保留时间或峰面积；X－n次测量结果的算术平均值；i－测量序号；n－测量次数。

4.4.2荧光检测器的定量重复性测试选用与仪器匹配的色谱柱，以100%甲醇为流动相，激发波长设定为290nm，发射波长为330nm，开机预热稳定后，测定1×10 -4g/ml的萘-甲醇标准溶液（一般进样体积为5μL-20μL），连续测定6次，记录色谱峰的保留时间和峰面积，按公式1计算RSD。

5、相关记录仪器设备期间核查记录表。

高效液相色谱仪期间核查作业指导书1 目的为了使高效液相色谱仪保持良好的运行状态，确保检验结果的准确性和有效性。

2 职责仪器使用负责人负责按此规程对设备进行定期核查，并及时做好核查记录，并对此数据负责。

3 环境条件室温在 15-30 ℃，室内湿度在 10%-75%RH范围内；仪器应平稳放在工作台上，周围无强烈机械震动和电磁干扰源，仪器接地良好。

4 使用的标准物质1× 10-4、1× 10-7 萘/ 甲醇溶液1× 10-3丙三醇/ 水溶液大豆油对照品5 核查依据JJG705-20146 核查方法6.1外观检查按要求，用目视、手动检查6.2.输液系统检查6.2.1.泵流量设定值误差 Ss、流量稳定性误差 SR检查按下表 2 的要求以纯化水为流动相，启动仪器，设定流量，待压力稳定后，在流动相出口处用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集表 2 规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式（1）、式（2）、式（3）计算Ss 和S RFm=(W2 -W1)/ ρr·t 式(1)S S=︱F-F S︱/F S× 100% 式(2)S R=(Fmax-F min ) /F × 100% 式(3)式中: F m: 流量实测值， ml/min ;W2 : 容量瓶+流动相的质量， g;W1 : 容量瓶的质量， g;ρr : 实验温度下流动相的密度，g/cm ;F S: 流量设定值， ml/min;T: 收集流动相的时间， min;Fmax: 同一组测量中流量最大值，ml/min;Fmin: 同一组测量中流量最小值，ml/min ;F: 同一组测量的算术平均值，ml/min ；表 2 泵流量设定值误差S s流量稳定性误差S R的技术要求6.3.检测器6.3.1.紫外检测器、二极管阵列检测器a.基线噪声和基线漂移将仪器的各部分连接好，紫外检测器波长调到254nm，流动相为100%甲醇，柱温35℃，流速为1.0ml/min，吸收度范围选择最灵敏档，开机，待基线稳定后，记录基线30分钟，计算基线漂移和噪声。

⾼效液相⾊谱-质谱联⽤期间核查操作规程⾼效液相⾊谱-质谱联⽤仪期间核查操作规程1 ⽬的为了确保⾼效液相⾊谱-质谱联⽤仪检测性能在仪器两次检定期间内处于正常状态，对仪器设备进⾏期间核查，以确保检测结果的准确性和有效性。

2 范围适⽤于⾼效液相⾊谱-质谱联⽤仪的期间核查。

3核查项⽬检测器：分辨⼒、信噪⽐、峰⾯积重复性、保留时间重复性。

4 核查依据JJF 1317-2011 液相⾊谱-质谱联⽤仪校准规范、液相⾊谱-质谱联⽤仪操作指导书。

5 核查⽅法5.1 测定条件：温度：15～30℃，相对湿度20～80%。

仪器室不得有明显的机械振动,⽆电磁⼲扰。

标准物质：利⾎平溶液标准物质，相对扩展不确定度由于5%（k=2）移液器或移液管：量程范围100uL或200uL，B级或以上；容量瓶：10mL或25mL，B级或以上。

5.2 分辨⼒将仪器运⾏稳定后，根据仪器说明书的推荐条件设置参数，将扫描范围设为606~612,直接注⼊，注⼊5ng利⾎平，观察质谱图，记录m/z为609质谱峰，并计算其50%峰⾼处的缝宽，得到W1/2，作为分辨⼒的结果。

5.3 信噪⽐根据附录B设定液相⾊谱条件并优化质谱条件，将检测离⼦的m/z设为表2中特征离⼦的m/z,经⾊谱柱注⼊相应量的利⾎平。

观察⾊谱图，记录其⾊谱峰峰⾼作为Hs。

同时记录信号峰后1min~3min时间内的基线输出信号的最⼤值与最⼩值之差，作为Hn。

根据公式计算信噪⽐S/N，连续测量6次，以6次测量S/N的平均值作为信噪⽐的结果。

S/N= Hs /Hn式中：Hs——为提取离⼦m/z的⾊谱峰峰⾼H n ——为基线噪声值信噪⽐测量条件表5.3 峰⾯积重复性与保留时间重复性：根据附录B 设定液相⾊谱条件并优化质谱条件，将检测离⼦的m/z 设为表2中特征离⼦的m/z,经⾊谱柱注⼊相应量的利⾎平。

连续测量6次，记录⾊谱峰的保留时间和峰⾯积，按下述公式计算相对标准偏差RSD.RSD=1001)1/()(12--∑=x n x x ni i %6 评定标准6.1 三重四级杆串联质谱： 6.1.1 分辨⼒ESI+≤1u ；6.1.2 信噪⽐ESI+≥30:1；ESI-≥10:1；APCI+≥30:1 6.1.3 峰⾯积重现性≤10% 6.1.4 保留时间重复性≤1.5%； 7 核查周期在仪器设备两次检定之间，每六个⽉核查⼀次。

科技论坛任何测量设备/仪器，由于材料的不稳定、或元器件的老化、或使用中的磨损、或使用与保存环境的变化等原因，都可能导致其计量性能的变化。

在校准间隔期内，由上述各影响源引起的测量设备计量性能变化，既可能是相互叠加的，也可能是相互抵消的，或还与各影响源对测量设备影响的权重相关。

因此，其变化是多种多样比较复杂的。

则需要进行一定的检查来确保设备/仪器的准确度。

高效液相色谱仪是精密仪器，仪器的部件老化磨损以及长时间使用都会对仪器造成影响，仪器测定数据的不准确，使之结果不可信。

并且为了解仪器状态，维护仪器设备在两次校准期间校准状态的可信度，减少由于仪器稳定性变化造成的结果偏差，对在用的主要仪器设备进行运行检查和在两次检定（校准）之间进行核查，以保证检测仪器设备及相关检测结果的准确性和可靠性。

则我们需对其定期做期间核查，来确保仪器在实验过程中不会成为影响数据结果准确可行的障碍。

我们以Waters2695高效液相色谱仪为例来谈一谈高效液相色谱仪的期间核查。

首先我们需要检查Waters2695高效液相色谱仪的外观，仪器的外观应完整，无破损，应具有铭牌，并注有仪器名称、型号、编号、制造厂商等，并有仪器的状态标识牌。

仪器的各调节按钮、按键、开关、指示灯、显示屏均应工作正常。

仪器的管路及连接接口应无漏液现象。

仪器的外观检查主要是保证仪器的完好，并且是否符合检定标准。

其次我们需要检查Waters2695高效液相色谱仪的工作环境，仪器工作环境温度应控制在10～30℃，相对湿度应为40%～70%。

仪器摆放的室内不得存放与实验无关的易燃、易爆和强腐蚀的物质。

仪器的周围不得有强烈的机械振动和电磁干扰。

如果实验室的温湿度不合格，亦或是存在易燃易爆，亦或是有对仪器进行干扰的物质存在，都会对仪器本身造成损坏，并且影响期间核查及平时检验的结果。

最后我们需要进行Waters2695高效液相色谱仪性能检查，在进行性能检查时，需将仪器按操作要求开机，并待机器运行稳定30min 后，再进行以下实验：１柱温箱Waters2695高效液相色谱仪拥有可自动控温的柱温箱，我们需要检查柱温箱的控温功能是否达到仪器的设定。

高效液相色谱仪经常使用检测器的种类及阐发之五兆芳芳创作检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变更转化为可供检测的信号，经常使用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等.1.紫外可见吸收检测器(ultraviolet－visibledetector，UVD)紫外可见吸收检测器(UVD)是HPLC中应用最普遍的检测器之一，几近所有的液相色谱仪都配有这种检测器.其特点是灵敏度较高，线性规模宽，噪声低，适用于梯度洗脱，对强吸收物质检测限可达1ng，检测后不破坏样品，可用于制备，并能与任何检测器串联使用.紫外可见检测器的任务原理与结构同一般分光光度计相似，实际上就是装有流动地的紫外可见光度计.(1)紫外吸收检测器紫外吸收检测器经常使用氘灯作光源，氘灯则发射出紫外-可见区规模的连续波长，并装置一个光栅型单色器，其波长选择规模宽(190nm～800nm).它有两个流通池，一个作参比，一个作丈量用，光源收回的紫外光照射到流通池上，若两流通池都通过纯的均匀溶剂，则它们在紫外波长下几近无吸收，光电管上接受到的辐射强度相等，无信号输出.当组分进入丈量池时，吸收一定的紫外光，使两光电管接受到的辐射强度不等，这时有信号输出，输出信号大小与组分浓度有关. 局限：流动相的选择受到一定限制，即具有一定紫外吸收的溶剂不克不及做流动相，每种溶剂都有截止波长，当小于该截止波长的紫外光通过溶剂时，溶剂的透光率降至10%以下，因此，紫外吸收检测器的任务波长不克不及小于溶剂的截止波长.(2)光电二极管阵列检测器(photodiodearraydetector，PDAD) 也称快速扫描紫外可见分光检测器，是一种新型的光吸收式检测器.它采取光电二极管阵列作为检测元件，组成多通道并行任务，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接收器上的全部波长的光信号，然后对二极管阵列快速扫描收集数据，得到吸收值(A)是保存时间(tR)和波长(l)函数的三维色谱光谱图.由此可实时不雅察与每一组分的色谱图相应的光谱数据，从而迅速决定具有最佳选择性和灵敏度的波长.单光束二极管阵列检测器，光源收回的光先通过检测池，透射光由全息光栅色散成多色光，射到阵列元件上，使所有波长的光在接收器上同时被检测.阵列式接收器上的光信号学的办法快速扫描提取出来，每幅图象仅需要10ms，远远超出色谱流出峰的速度，因此可随峰扫描.2．荧光检测器(fluorescencedetector，FD) 荧光检测器是一种高灵敏度、有选择性的检测器，可检测能产生荧光的化合物.某些不发荧光的物质可通过化学衍生化生成荧光衍生物，再进行荧光检测.其最小检测浓度可达0.1ng／ml，适用于痕量阐发；一般情况下荧光检测器的灵敏度比紫外检测器约高2个数量级，但其线性规模不如紫外检测器宽.近年来，采取激光作为荧光检测器的光源而产生的激光诱导荧光检测器极大地增强了荧光检测的信噪比，因而具有很高的灵敏度，在痕量和超痕量阐发中得到普遍应用.3.示差折光检测器(differentialrefractiveIndexdetector，RID) 示差折光检测器是一种浓度型通用检测器，对所有溶质都有响应，某些不克不及用选择性检测器检测的组分，如高份子化合物、糖类、脂肪烷烃等，可用示差检测器检测.示差检测器是基于连续测定样品流路和参比流路之间折射率的变更来测定样品含量的.光从一种介质进入另一种介质时，由于两种物质的折射率不合就会产生折射.只要样品组分与流动相的折光指数不合，就可被检测，两者相差愈大，灵敏度愈高，在一定浓度规模内检测器的输出与溶质浓度成正比.4.电化学检测器(elec)chemicaldetector，ED)电化学检测器主要有安培、极谱、库仑、电位、电导等检测器，属选择性检测器，可检测具有电活性的化合物.目前它已在各类无机和有机阴阳离子、生物组织和体液的代谢物、食品添加剂、情况污染物、生化制品、农药及医药等的测定中取得了普遍的应用.其中，电导检测器在离子色谱中应用最多.电化学检测器的优点是：①灵敏度高，最小检丈量～般为ng级，有目可达pg级；②选择性好，可测定大量非电活性物质中极痕量的电活性物质；③线性规模宽，一般为4～5个数量级；④设备复杂，成本较低；⑤易于自动操纵.5.化学发光检测器(c.iluminescencedetector，CD) 化学发光检测器是近年来成长起来的一种快速、灵敏的新型检测器，因其设备复杂、价廉、线性规模宽等优点.其原理是基于某些物质在常温下进行化学反响，生成处于激起态势反响中间体或反响产品，当它们从激起态前往基态时，就发射出光子.由于物质激起态的能量是来自化学反响，故叫作化学发光.当别离组分从色谱柱中洗脱出来后，立即与适当的化学发光试剂混杂，引起化学反响，导致发光物质产生辐射，其光强度与该物质的浓度成正比.这种检测器不需要光源，也不需要庞杂的光学系统，只要有恒流泵，将化学发光试剂以一定的流速泵入混杂器中，使之与柱流出物迅速而又均匀地混杂产生化学发光，通过光电倍增管将光信号酿成电信号，就可进行检测.这种检测器的最小检出量可达10-12g.。