粪便钙卫蛋白检测试剂盒说明书-中文
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标准品钙卫蛋白分析浓度分别为 30,90,300,900,1800ug/g。
2 标准品和质控品在检测时直接使用，无需稀释。
根据需要可由供应商提供的试剂
粪便提取设备
Smart-Prep
50 支
Schebo® Quick- 50 支
Prep
1.3ml，直接使用
B-CAL-RD B-CAL-SOFI
试剂储存条件和效期
粪便钙卫蛋白检测试剂盒 （酶联免疫法）
货号 EK-CAL EK-CAL2
96T 192T
用途：
瑞士 BÜ HLMANN 公司生产的粪便钙卫蛋白检测试剂 盒（酶联免疫法）用于定量检测人粪便中的钙卫蛋白 （MRP8/14; S100A8/S100A9）。
产品原理
本试剂盒应用双抗体夹心法，基于不同位点的两种单 克隆抗-人钙卫蛋白抗体。标准品、质控品和稀释后的待测 样本加入到具有高亲和力的单克隆抗-人钙卫蛋白抗体包被 的微孔板微孔内。在第一次孵育步骤中，样本中钙卫蛋白被 固相抗体捕获。加入酶联物后第二次孵育时，形成以下复合 体：捕获抗体-人钙卫蛋白-酶标抗体结合物。接着加入 TMB 底物进行显色，加入酸液终止液终止显色反应，溶液变成黄 色。黄色亮度与样本中钙卫蛋白浓度成正比。最后在酶标仪 450nm 波长处测量吸光度。做出标准品浓度对相应 OD 值的 标准曲线，在其上计算出样本浓度。
试剂成分： 试剂
提取缓冲液 微孔板 （预 包被钙卫蛋 白单克隆抗 体） 封板膜 浓缩洗涤液 （10X） 含防腐剂 孵育缓冲液 含防腐剂 标准品 1,2 质控品 高 值/低值 酶联物
量
3 瓶，125ml 12*8 孔
3张 1 瓶，100ml
2 瓶，125ml 5 支，1ml 2 支，1ml 1 支，12ml
样本采集和储存
提取程序需要的粪便样本量为 50-100mg 将粪便样本放入试管中，在 2-8 度可储存 6 天 粪便样本冷冻后，钙卫蛋白的浓度会略有上升。因此，如需 长期保持，建议将提取物储存于-20 度，可保存至少 4 个月。 重要提示：样本收集装置不可含有其它生物或化学成分。
注意事项： 安全措施
未开封试剂
2-8 度储存，失效期标注在试剂盒标签上，不要使用超过失
效期的试剂盒
已开封试剂
提取缓冲液
2-8 度储存，直至失效期
微孔板
未使用的板条立即重新放回装有干燥
剂的铝箔袋中，并封上自封口。
2-8 度储存，直至失效期
已稀释的洗涤 2-8 度储存，最多 6 个月
液
孵育缓冲液
标准品
质控品
2-8 度储存，直至失效期
试剂盒内的微孔板、标准品和校准品还有人源性成分，尽管 已经过检测，HBV 表面抗原、HCV 以及 HIV1/2 均为阴性， 但仍然应视为有潜在传染性的物质对待，遵守实验室规程并 采取适当的防护措施。 底物和终止液：TMB 底物还有联苯胺、H2O2 以及二甲基甲 酰胺，终止液含有硫酸（0.25M），这些试剂都会刺激眼睛、 皮肤和黏膜，避免试剂接触眼睛、皮肤并穿着合适的防护服、 手套、和眼镜。如试剂接触到眼睛和皮肤，应立即用清水冲 洗。 未使用的溶液必须按当地法规进行处理。
技术措施
试剂盒组件 不要使用超过标签上所示有效期的试剂盒 不要混合不同批号的试剂 避免试剂、样本和孔间的交叉污染 使用前将试剂恢复到室温并混匀 微孔板不可重复利用 提取 为了获得准确的定量结果，必须将加入到提取缓冲液中的已 称重的所有粪便样本变成匀浆。要避免样本残留在管帽处。 样本提取时最短需要 5 分钟可获得有浑浊的液体，延长离心 时间可以减少或消除浊度，但试验表明浊度对 ELISA 的定量 结果无影响。 ELISA 过程 为获取可重复的准确结果，清洗步骤是必不可少的。洗涤液 加入到每个检测孔后，每次必须至少孵育 20 秒，洗板次数 也要按照要求进行。 如使用自动洗板机，强烈建议使用“板模式”，可缩短孵育 时间。 检测板震荡参数：400-600 转/分（<10HZ）。 建议标准品、校准品和标本做复孔，每次实验都必须使用本 次新做的标准曲线。 如果某个未知样本的检测到的浓度比最高的标准品浓度还 要高，则需要将这个未知样本进一步稀释并重新检测，由此 产生的稀释系数必须体现到计算结果中。
试验过程
提取
标准提取程序
1、 将接种环和贴上标签的空 PE 管称重
2、 用接种环将 50-100mg 的粪便样本加入到 PE 管内
3、 估算样本的净重
4、 向管中加入提取缓冲液（样本净重的 49 倍），并盖紧管
子。
粪便重量（mg） 提取液体积（ml）
50
2.5
55
2.7
60
2.9
65
3.2
70
3.4
编号
B-CAL-EX B-CAL-MP
B-CAL-WB
B-CAL-IB B-CAL-CASET B-CAL-CONSET B-CAL-EL
说明
直接使用 直接使用
用 900ml 去离子水 稀释 直接使用
直接使用 直接使用
直接使用
TMB 底物
B-TMB12
直接使用
终止液
B-STS12
直接使用
1 钙卫蛋白标准品从 A 到 E 的实际浓度为 4,12,40,120 和
240ng/ml。使用低范围检测程序时（样本用提取缓冲液 1:50
倍稀释，提取物再用孵育缓冲液 别为 10,30,100,300,600ug/g。
如使用扩展范围检测程序时（样本用提取缓冲液 1:50 倍稀
释，提取物再用孵育缓冲液 1:150 倍稀释，共稀释 750 倍）
酶联物
TMB 底物
终止液
需要但没提供的材料
抽提程序
10ul 一次性接种环(Sarstedt: 86.1562.010) 15ml 带帽聚丙烯管(Sarstedt: 62.554.502) 层流工作站 多管旋涡混合器 精密天平(10 - 150 毫克) 小型离心机（≥3000 g）
ELISA 程序
10、100 及 1000ul 移液器及配套吸嘴 用于样本稀释的一次性试管 用于稀释洗涤液的 1000ml 量筒 用于洗板的洗板机或塑料挤瓶 吸水纸 酶标仪（450nm）
75
3.7
80
3.9
85
4.2
90
4.4
95
4.7
100
4.9
5、 将样本管放入多孔漩涡混匀器，用最高速充分震荡 30 分钟，使样本变成匀浆。
6、 将匀浆转移到 2ml 的微量离心管，放入微型离心机，用 3000xg 离心 5 分钟。
