丹参提取工艺研究

第1篇一、实验目的1. 学习和掌握丹参提取制备的基本原理和操作方法。

2. 提高对丹参中有效成分丹参酮的提取纯化技术的认识。

3. 了解薄层扫描法和高效液相色谱法（HPLC）在丹参酮含量测定中的应用。

二、实验原理丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）是中药材中常用的活血化瘀药，其主要有效成分为丹参酮类化合物。

本实验采用溶剂提取法从丹参药材中提取丹参酮，并通过薄层扫描法和HPLC法对丹参酮A进行含量测定。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：丹参药材、甲醇、石油醚、氯仿、正己烷、硅胶薄层板、HPLC色谱柱、紫外检测器等。

2. 实验仪器：分析天平、超声波清洗器、旋转蒸发仪、薄层色谱仪、高效液相色谱仪等。

四、实验方法1. 丹参酮提取（1）称取干燥的丹参药材粉末5.0g，置于50mL具塞锥形瓶中。

（2）加入20mL甲醇，超声提取30分钟。

（3）过滤，收集滤液，旋转蒸发浓缩至近干。

（4）用适量石油醚溶解残渣，转移至分液漏斗中。

（5）依次用氯仿、正己烷萃取，合并萃取液。

（6）旋转蒸发浓缩至近干，用适量甲醇溶解残渣，转移至10mL容量瓶中，定容至刻度。

2. 薄层扫描法测定丹参酮A含量（1）制备硅胶薄层板，用氯仿-甲醇（8:2）为展开剂。

（2）取适量丹参酮A对照品溶液和提取样品溶液，点样于薄层板上。

（3）展开，取出晾干。

（4）用紫外灯（254nm）照射，观察斑点。

（5）用薄层扫描仪测定斑点面积，计算丹参酮A含量。

3. HPLC法测定丹参酮A含量（1）色谱条件：色谱柱为C18柱，流动相为甲醇-水（80:20），流速为1.0mL/min，检测波长为254nm。

（2）样品制备：取适量丹参酮A对照品溶液和提取样品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤，进样。

（3）测定：记录峰面积，计算丹参酮A含量。

五、实验结果与分析1. 丹参酮提取通过实验，成功从丹参药材中提取出丹参酮。

采用薄层扫描法测定，丹参酮A平均回收率为99.8%，RSD为2.15%。

一、实验目的1. 学习丹参药材的提取和纯化方法。

2. 掌握薄层色谱法、高效液相色谱法等分离纯化技术。

3. 提高对丹参药材中主要活性成分的认识。

二、实验原理丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）为唇形科植物，其根茎入药，具有活血化瘀、通络止痛、清心除烦等功效。

丹参中含有多种活性成分，如丹参酮、丹酚酸等。

本实验采用乙醇提取法提取丹参中的有效成分，利用薄层色谱法进行初步分离，再通过高效液相色谱法进行纯化。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：丹参药材（干燥）、乙醇、正己烷、硅胶、薄层板、高效液相色谱仪等。

2. 仪器：电子天平、回流提取器、旋转蒸发仪、薄层色谱仪、高效液相色谱仪等。

四、实验方法1. 丹参提取（1）称取干燥丹参药材10g，置于回流提取器中；（2）加入50mL 95%乙醇，回流提取1h；（3）冷却，过滤，收集滤液；（4）将滤液旋转蒸发至近干，用正己烷溶解，备用。

2. 薄层色谱分离（1）制备薄层板：将硅胶均匀涂布在玻璃板上，晾干；（2）点样：将提取液点于薄层板上，晾干；（3）展开：将薄层板置于展开缸中，加入正己烷，展开至溶剂前沿；（4）显色：将薄层板取出，晾干，喷以10%FeCl3乙醇溶液，显色。

3. 高效液相色谱纯化（1）制备样品：将薄层色谱分离得到的化合物溶解于甲醇中，制成一定浓度的样品溶液；（2）色谱条件：色谱柱：C18柱；流动相：甲醇-水（体积比80:20）；流速：1.0mL/min；检测波长：254nm；（3）进样：将样品溶液进样，记录色谱图。

五、实验结果与分析1. 薄层色谱分离结果通过薄层色谱分离，观察到丹参药材中存在多个斑点，说明丹参中含有多种活性成分。

2. 高效液相色谱纯化结果通过高效液相色谱纯化，成功分离出丹参中的主要活性成分，如丹参酮IIA、丹参酮IIB等。

六、实验结论1. 本实验采用乙醇提取法成功提取了丹参中的有效成分；2. 通过薄层色谱法对丹参中的活性成分进行了初步分离；3. 高效液相色谱法进一步纯化了丹参中的主要活性成分。

丹参提取工艺研究丹参由脂溶性成分和水溶性成分组成，其酯溶性成分丹参酮ⅡA是治疗心脑血管疾病的有效成分。

本方案采用乙醇回流提取，通过正交实验（将丹参用不同提取时间、浓度乙醇溶液、不同溶媒量及提取次数各设置3个水平）选择最佳乙醇提取工艺条件，并以丹参酮ⅡA含量作为考察指标。

通过实验最终得：以12倍量85%的乙醇回流提取3次，1.5 h/次，丹参酮ⅡA的提取率最高。

标签：丹参；丹参酮ⅡA；提取工艺；正交试验1丹参提取方法丹参提取方法有：①水煎煮法，②乙醇回流法，③乙醇回流-水煎煮提取法，④超临界提取法，⑤超声提取法。

2丹参研究的现实意义近年来管疾病的治疗取得迅猛发展，溶栓药物和介入治疗等大大改善了冠心病患者的预后。

随着人们生活水平提高，人们越来越关注自身的健康问题，天然药物及其保健品的需求也越来越大，为了更好地发挥丹参的药用价值，本文采用乙醇回流提取法，运用正交设计法，考察丹参醇提的影响因素，并以丹参酮ⅡA 作为参考指标，筛选最佳提取工艺条件。

2.1实验材料2.1.1仪器，见表1。

2.1.2试剂及药材乙醇（95%）（分析纯，杭州长征化工厂）；甲醇（分析醇，杭州双林化工试剂厂）；甲醇（色谱纯）。

丹参药材（20140108，亳州市安利达药业有限公司）。

2.2实验步骤2.2.1正交试验的设计2.2.1.1正交试验因素水平表根据影响乙醇回流提取的因素：以乙醇浓度、提取时间、溶媒量、提取次数为因素，每个因素拟定3个水平，因素水平表，见表2。

2.2.1.2 L934正交试验将丹参药材粉碎为粗粉，平行精密称取9份药材，每份10 g，按L934正交试验表安排实验，以丹参酮ⅡA的含量为指标。

将丹参药材粗粉，置蒸馏烧瓶中，精密加入规定量乙醇，称重，加热回流，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失重量，摇匀，合并提取液，滤过，续滤液，即得。

2.2.2含量测定2.2.2.1色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（75-25）为流动相；检测波长270 nm。

丹参提取工艺分析论文摘要：目的优选丹参脂溶性及水溶性成分的集成提取工艺条件。

方法采用正交设计法，以丹酚酸b、丹参酮ⅱa为测定指标，采用高效液相色谱法测定其含量，并以此为指标优选集成提取工艺条件。

结果集成法可同时对丹参中脂溶性及水溶性成分进行提取。

优选的提取工艺条件为：加8倍量70%乙醇，提取2次，每次1 h。

结论采用集成方法同时提取丹参水溶性及脂溶性部位，可省时、省工、节能，使丹参的提取工艺合理可行。

主题词：丹参提取工艺【中图分类号】s567.53丹参为唇形科植物丹参salvia miltiorrhiza bge.的干燥根及根茎，主要含有二萜醌类脂溶性及酚酸类水溶性成分。

2005年版《中华人民共和国药典》（一部）以丹参酮ⅱa和丹酚酸b为指标，对丹参药材进行质量控制。

为了能同时兼顾丹参脂溶性及水溶性两类有效成分，我们采用正交试验法，以丹参酮ⅱa和丹酚酸b的含量为考察指标，对丹参的提取工艺进行全面优选，以使丹参的提取工艺更科学、合理。

一、仪器与试药agilent 1100高效液相色谱仪。

丹参酮ⅱa（批号110766- 200518）、丹酚酸b（批号111562-200605）标准品购自中国药品生物制品检定所；丹参药材购自安国药材市场（经河北省药品检验所中药室孙宝惠主任药师鉴定为正品）。

甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

二、方法与结果1、丹参提取液中丹参酮ⅱa的含量测定方法采用phenomenex luna c18色谱柱（5 μm，250 mm×4.6 mm，广州菲罗门科学仪器有限公司），流动相：甲醇-水（75∶25），流速：1.0 ml/min，检测波长：270 nm。

精密称取丹参酮ⅱa对照品10.21 mg，置50 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2 ml，置25 ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液（每1 ml中含丹参酮ⅱa 16.32 μg）。

分别取溶剂考察、粒度考察、正交试验及验证试验中回流提取液的稀释液，以0.45 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

丹参最主要含有的成分为脂溶性的二萜类成分和水溶性酚酸类成分，所以在设计丹参提取分离时，主要考虑的是这两类物质的提取过程。

其中脂溶性成分以丹参酮ⅡA为主要有效成分，其含量也相对较高；而水溶性成分以丹参素、丹参酚酸类、原儿茶醛为主要成分，原儿茶醛虽为活性成分，但其在丹参中含量很低。

且水溶性成分对于热的敏感性强，脂溶性成分有升华性，在长时间热处理过程中容易成分损失。

1、提取已知丹参中成分热不稳定，采用梯度渗漉法对脂溶性成分和水溶性成分进行提取。

先以95%乙醇对丹参药材进行浸泡溶胀一段时间后，再用95%乙醇进行渗漉，采用正交法选用合适的渗漉速率，注意低温操作。

滤去渗漉液A（主要为提取丹参酮等脂溶性成分），再用8倍量水对药渣进行渗漉，滤去渗漉液B，提取水溶性成分。

两份渗漉液均需要采用减压浓缩的方式进行适当浓缩，温度不宜过高，时间也不宜过长。

2、分离对渗漉液A可以采用水沉法进行精制。

因为丹参酮ⅡA等二萜醌类成分具有共轭体系，刷型作用力强，也可以选用合适的大孔树脂吸附进行分离，再使用95%的乙醇进行解吸附。

对渗漉液B可以采用醇沉法，查资料可以加醇使药液含醇量达50%，能减少成分的损失，起到最好的分离效果。

另外，由于水溶性酚酸成分中，丹酚酸具多个酚羟基、且分子量较大，可以采用大孔吸附树脂和聚酰胺树脂吸附的方法进行分离；而丹参素与原儿茶醛分子量小于丹酚酸类成分，分子间作用力相对于丹酚酸类较小，因此与水的亲和力更大，更适合于阴离子交换树脂进行分离。

若要对丹酚酸类成分过大孔树脂进行分离，可采用先用水洗脱，再用醇洗脱的方式进行分离纯化。

3、超临界流体萃取法超临界流体萃取法是现行方便、有效提取丹参中有效成分的方法，同样在条件的选择上需要控制温度、压力、时间等因素，另外可以加入适当的夹带剂来提高提取效率。

如脂溶性成分可以加入高浓度的乙醇来增加脂溶性成分的溶解性，而水溶性成分也可以选用合适的夹带剂，有文献提出可以选用10%醇和非离子表面活性如吐温的混合体系溶液进行提取。

复方丹参片工业化提取工艺研究摘要】目的：解决复方丹参片工业化生产丹参中有效成分转移率低，成本高问题。

过程：通过本次试验研究工业化生产过程中丹参的主要有效成分丹参酮ⅡA和丹酚酸B在制剂过程中的转移情况及影响因素，减少了有效成分的损失。

结论：故建议车间对丹参浸泡1小时，采用6 倍量乙醇、50%乙醇、水提取，分步浓缩。

减少液态中间体的存放时间，控制浓缩温度及干燥温度。

[关键词】复方丹参片，丹酚酸B，丹参酮ⅡA[中图分类号】R2 [文献标号】A [文章编号】1671-8725（2014）11-0161-01复方丹参片为《中国药典》2010 年版一部收载品种，具有活血化瘀、理气止痛作用。

在工业化生产过程中需要很好地控制各工序的参数，才能有效保证本品的质量。

1 仪器与试剂DT-3m3 热回流提取浓缩机组（上海德科制药设备厂）、圆形真空干燥机（江苏范群干燥设备厂）、EA-TF-009喷雾干燥机组（江苏范群干燥设备厂）、LC-20A高效液相色谱仪（岛津）乙醇（内蒙古利牛生物化工公司）、水为纯化水2 试验过程2.1 提取方法取丹参90kg，加乙醇加热回流1.5 小时，提取液滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，备用；药渣加50%乙醇加热回流1.5小时，提取液滤过，滤液回收乙醇并浓缩至适量，备用；药渣加水煎煮2小时，煎液滤过，滤液浓缩至适量，干燥。

2.2 加液量的选择在工业化生产过，分别选择10 倍、8 倍、6倍加醇量进行考察。

2.4 浓缩试验分别对混合浓缩和各提取液分步浓缩进行了考察。

2.5 浓缩温度考察分别对各醇提取液控制在70℃～80℃、60～70℃，水提液控制在80℃～90℃、70℃～80℃进行考察，减压空气压力控制在-0.06～-0.08Mpa。

2.6 干燥工艺参照溶缩工艺温度控制结果，分别采用70℃以下减压干燥及喷雾干燥进行了考察。

2.7 试验结果评价指标：以出膏率及干膏粉含量为指标进行考察（药典要求丹参酮ⅡA 不低于0.2mg/ 片；丹酚酸B 不低于5.0mg/片），提取结果见表1，浓缩结果见表2，干燥工艺结果见表3：2.8 结论综上所述，建议车间采用6倍量乙醇提取，分步进行浓缩。