高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤

高效液相色谱法测定市售月饼中的三种防腐剂张　丰（萍乡市食品药品检验所，江西萍乡 337000）摘　要：以从市场购买的15种月饼样品为研究对象，采用高效液相色谱法测定月饼中3种常见防腐剂（苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸）的含量。

结果表明，3种防腐剂的标准曲线方程线性相关系数均在0.99以上，说明该方法可以应用于月饼中防腐剂的检测。

15种月饼样品中，有8种检出山梨酸，含量为0.016 2～0.746 0 g·kg-1；有9种检出脱氢乙酸，含量为0.080 3～0.250 0 g·kg-1；有3种未检出防腐剂；15种月饼样品中均未检出苯甲酸。

市售的15种月饼样品中3种防腐剂含量均符合最新的食品安全国家标准。

关键词：高效液相色谱法；月饼；苯甲酸；山梨酸；脱氢乙酸Determination of Three Preservatives in Mooncakes by HPLCZHANG Feng(Pingxiang Food Medicines Inspection Office, Pingxiang 337000, China) Abstract: Using 15 mooncake samples purchased from the market as the research object, the content of three common preservatives (benzoic acid, sorbic acid, dehydroacetic acid) in mooncakes was determined by high performance liquid chromatography. The results showed that the linear correlation coefficients of the standard curve equations of the three preservatives were all above 0.99, indicating that the method could be applied to the detection of preservatives. Among the 15 kinds of moon cake samples, 8 kinds of sorbic acid were detected, and the content was 0.016 2～0.746 0 g·kg-1; 9 kinds of dehydroacetic acid were detected, and the content was 0.080 3～0.250 0 g·kg-1; three preservatives were not detected; benzoic acid was not detected in 15 kinds of moon cake samples. The contents of three preservatives in 15 kinds of moon cake samples sold in the market all met the latest national food safety standards.Keywords: high performance liquid chromatography; mooncake; benzoic acid; sorbic acid; dehydroacetic acid月饼又称月团、丰收饼、团圆饼等，是中秋节不可或缺的美食[1]。

高效液相色谱法同时检测食品中脱氢乙酸、山梨酸、苯甲酸、糖精钠的含量【摘要】：由于生活水平的提高，人们越来越注重食品的安全性。

本文选用紫外检测器，反向C18柱，以甲醇醋酸铵水溶液（0.02mol/L)（5：95比例）为流动相，同时检测食品中脱氢乙酸、山梨酸、苯甲酸和糖精钠的含量，提高了试验的效率可执行性。

尤其是脱氢乙酸，在230nm波长下检验，降低了检出限，提高了痕量元素检测精确度。

【关键词】：食品添加剂；高效液相色谱法；食品卫生检验食品添加剂即为使食品的质量、色、香、味得到改善，延长存放的时间等需求下使用的合成或自然化学物质。

现阶段许多生产商家在饮品、酱制品、发酵豆制品中加入的甜味素一般是糖精钠、安赛蜜（AK糖）等。

使用的防腐剂通常是苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸。

但过度摄入这些添加剂对人体健康有一定的危害[1~2]。

目前，我国的《食品添加剂使用标准》(GB2760—2014）中对这些添加剂的应用范畴和最大允许使用量都有明确的规定[3~4]。

为了更好地测量和提高效率，在有关参考文献的基础上，本次研究选择高效液相色谱法同时检测了食品中脱氢乙酸、山梨酸、苯甲酸、糖精钠添加剂的含量，现报告如下：1 材料和方法1.1 关键仪器和实验试剂液相色谱仪：Waters 1525，装有紫外检测器；离心机：10 000r/min，TGL-16A离心机，长沙普通仪器有限公司；工业甲醇：色谱纯，tedia公司；乙酸铵：优级纯，广州试剂厂；碳酸氢钠：优级纯，Comio实验试剂；紫外线可见光度计：TU-1810，北京谱仪通用性仪器有限公司1.0mg/mL脱氢乙酸标液：精确称量0.100g脱氢乙酸标准物质，添加5mL碳酸氢钠（20g/L)，微热状态下溶解，转移到100mL容量瓶中，放水滴定剂至100mL，作为储备液，在4摄氏度的环境下保存。

1.0mg/mL山梨酸标液：精确称量0.100g山梨酸标准物质，添加5mL碳酸氢钠（20g/L)，加温溶解，转移到100mL容量瓶中，放水滴定剂至100mL，作为贮备溶液。

【实验室检测】高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠样品前处理方法张宗辉[摘要 ]目的探讨高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的样品前处理方法。

方法不同样品用不同前处理方法 , 用二极管阵列管检测品 (HPLC －DAD 分析测定 , 外标法定量。

结果该前处理方法线性关系良好 , 相对标准偏差分别为山梨酸 3. 18%、苯甲酸 2. 74%、糖精钠 2. 15%, 加标回收率均在 90% 100%之间。

结论该方法稳定性好、准确可靠、简单快速 , 适用于食品添加剂的测定。

[关键词 ]高效液相色谱法 ; 食品 ; 山梨酸 ; 苯甲酸 ; 糖精钠 [中图分类号 ]O657. 7[文献标识码 ]A[文章编号 ]1006－4028(2011 06－0480－03作者单位 :南充市疾病预防控制中心 (四川南充 637000作者简介 :张宗辉 , 男 , 副主任技师 , 医学检验Pretreatment Methods for Simultaneous Determination of Sorbic Acid , Benzoic Acid and Saccharin Sodium in Different Foods by HighPerformance Liquid ChromatographyZHANG Zong －huiNanchong Municipal Center for Disease Control and Prevention ,Nanchong 637000, Sichuan Province , China．Abstract Objective To establish pre －treatment methods for the simultaneous determination of sorbic acid , benzoic acid and saccharin sodium in different foods by high performance liquid chromatography (HPLC with DAD detection．Methods Different samples were pre －treated with different methods and detected by HPLC with the external standard quantification．Results There was a good linear relationship , the relative standard de-viations were 3. 18%for sorbic acid , 2. 74%for benzoic acid and 2. 15%for saccharin sodium．The recoveries ranged from 90%to 100%for the targeted components．Conclusion The method is simple , rapid , reliable and accurate , which is suitable for the determination of food additives．Key wordshigh performance liquid chromatography ; food ; sorbic acid ; benzoic acid ; saccharin sodium高效液相色谱法可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精钠 , 方便简单快捷。

高效液相色谱法同时测定食品中苯甲酸山梨酸脱氢乙酸的步骤1材料与方法：1.1仪器：(1)高效液相色谱仪(2) 分析天平，(3 )酸度计，(4)离心机，(5 )振荡器，(6)超纯水仪；试剂：(1)苯甲酸，(2) 山梨酸，(3) 脱氢乙酸，(4) 甲醇；提取试剂：(1)0.3%盐酸乙醇溶液，(2) 0.02mol/L磷酸氢二钾溶液1.2标准溶液的配制精密称取苯甲酸，山梨酸，脱氢乙酸对照品各适量，加乙醇溶解，配制成1.0mg/ml 的标准储备溶液。

1.3色谱参数和条件(1)色谱柱：DIONEX Acclaim 120 C18(4.6*250mm,5 ^m)(2)流动相：甲醇一0.02mol/L磷酸氢二钾溶液(10:90)(3)流速：1.0ml/min(4)进样量：10丄(5)检测波长：230nm(苯甲酸，山梨酸)，293nm (脱氢乙酸)1.4样品处理1.4.1固体样品(如熟肉制品.豆制品及糕点类)(1)称取捣碎混匀的样品5g (精确至0.01g )于具塞三角瓶中，(2)精密加入25ml提取溶剂，振荡1h后，于4C放置24h，(3)离心，取上清液3ml，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45 ym滤膜过滤,(4)进液相色谱仪分析。

1.4.2液体样品(如冷冻饮品)(1)将样品于室温下解冻后，称取10g (精确至0.001g )于25ml量瓶中，(2)用提取溶剂定容至刻度，混匀，于4C放置24h，(3)离心，取上清液3ml，用水定量稀释至10ml，离心，经0.45 ym滤膜过滤,(4)进液相色谱仪分析。

2数据处理2.1标准曲线与检出限精密量取标准储备溶液适量，用提取溶剂定量稀释制成每ml中含0.1旧,0.5血,1血,4旧,8旧,12旧,16旧,20旧的标准混合溶液，按前述色谱条件进行测定，且每个浓度做两组平行试验，以浓度C(g/ml)为横坐标，峰面积A为纵坐标制作标准曲线；以浓度C( pg/ml)对峰面积A进行线性回归，按信噪比3,计算检出限2.2精密度和方法回收率试验(1)精密度实验：取同一对照品溶液(各浓度均为10^/ml )，重复进样，测出各峰面积的RSD值。

苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸是目前国家允许使用的食品添加剂[1]，它们的分子结构如图1—4所示。

但此类物质摄入过多会造成潜在的健康风险[2]，所以同时准确高效地检测变得愈发重要。

现有的国家标准中，同时测定多种添加剂的方法较少，这给实际检验工作（需要满足高效准确的要求）带来了一定难度。

所以，需要开发改进同时检验上述4种添加剂的方法[3-6]。

图1　苯甲酸分子结构（CAS：65-85-0）图2　山梨酸分子结构（CAS：110-44-1）图3　糖精钠分子结构（CAS：128-44-9）图4　脱氢乙酸分子结构（CAS：520-45-6）目前，同时测定上述4种添加剂的国家标准尚未发布，部分地标采用磷酸盐缓冲液-甲醇体系的方法，虽然通过增加离子强度实现了分析目的，但对色谱柱寿命存在一定影响且对色谱柱要求较高[7]。

为此本文通过对苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸的化学特征和性质的分析，通过选择合适的色谱条件及样品前处理方法，提出改进方法，尽可能地达到稳定准确分析的目的。

1　实验部分1.1　仪器与试剂高效液相色谱仪：安捷伦1260型，配有二极管阵列检测器。

万分之一天平： EL204-IC，瑞士梅特勒。

千分之一天平：ML503/02，瑞士梅特勒。

离心机：10 000 r/min，TGL-16a高速离心机，长沙平凡仪器仪表有限公司。

酸度计：梅特勒320型，瑞士梅特勒。

甲醇：色谱纯，德国默克进口。

苯甲酸标准品、山梨酸标准品、糖精钠标准品、脱氢乙酸标准品：美国sigma公司。

其他试剂均为优级纯。

实验用水为满足GB/T 6682-2008的一级水。

1.2　标准溶液的配置苯甲酸储备液（1.0 mg/mL）：精密称取苯甲酸标准品100 mg至100mL容量瓶，用50%甲醇溶解并定容。

4 ℃保存，3个月有效。

山梨酸储备液（1.0 mg/mL）：精密称取山梨酸标准品100 mg至100mL容量瓶，用50%甲醇溶解并定容。

4 ℃保存，3个月有效。

超高效液相色谱法同时测定糕点中苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）和糖精钠的含量发表时间：2018-07-09T17:23:54.363Z 来源：《基层建设》2018年第14期作者：钟锐文[导读] 摘要：糕点中的苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）和脱氢乙酸（钠）、安赛蜜和糖精钠经水提取，脱脂、沉淀蛋白、离心、过滤后，采用超高效液相色谱法同时测定，样品标准加入平均回收率分别为99.01%~99.36%、99.51%~101.58%、98.90%~99.73%。

广州市澳键丰泽生物科技有限公司广东广州 510760摘要：糕点中的苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）和脱氢乙酸（钠）、安赛蜜和糖精钠经水提取，脱脂、沉淀蛋白、离心、过滤后，采用超高效液相色谱法同时测定，样品标准加入平均回收率分别为99.01%~99.36%、99.51%~101.58%、98.90%~99.73%。

关键词：超高效液相；糕点；苯甲酸（钠）；山梨酸（钾）；糖精钠Simultaneous Determination of Benzoic Acid（Sodium），Sorbic Acid（Potassium），and Saccharin Sodium in Cakes by Ultra Performance Liquid ChromatographyRuiwen Zhong（Guangzhou Alchemy Biotechnology Co.，Ltd.，Guangzhou，Guangdong 510760，China） Abstract：The benzoic acid（sodium），sorbic acid（potassium），dehydroacetic acid（sodium），acesulfame potassium，and sodium saccharin in the cake are extracted with water，delipidated，precipitated protein，centrifuged，and filtered，followed by ultra-high performance liquid chromatography.The average recoveries of the standard samples were 99.01%~99.36%，99.51%~101.58%，and 98.90%~99.73%，respectively.Key words：Ultra high performance liquid phase；Pastry；Benzoic acid（sodium）；Sorbic acid（potassium）；Sodium saccharin食品安全是当今关系民生的重大问题，直接关系到广大人民群众的身体健康，而食品的色香味取决于在食品加工过程中使用的适量的食品添加剂。

卫生化学实验七高效液相色谱法HPLC测定饮料中山梨酸和苯甲酸一、实验目的与要求1、掌握高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸和山梨酸的原理和方法2、了解高效液相色谱仪的基本结构和使用方法3、熟悉饮料样品的处理方法二、实验方法与原理苯甲酸和山梨酸广泛用于食品防腐剂,能够引起人的再生障碍性贫血,粒状白细胞缺乏等;因此国家严格限制其使用量;在本实验中,样品首先经过超声和加热除去二氧化碳和乙醇,然后过滤注入高效液相色谱仪,经反相C18液相色谱柱分离后,紫外检测器230 nm波长处检测;以色谱峰的保留时间定性,色谱峰面积在一定范围内与浓度呈线性关系进行定量分析;三、实验仪器与试剂1、仪器：高效液相色谱仪Waters,美国：2487紫外检测器、1525高压输液系统、717进样系统、Waters Breeze色谱工作站；超声震荡仪；100 ml烧杯1个； 1 ml和100 μl移液枪；离心管若干个；离心管架；微孔滤膜0.22 μm;2、试剂：1 甲醇色谱纯；醋酸铵溶液0.02 mol/L,色谱纯；流动相分别超声脱气10 min2 山梨酸储备溶液1.0 mg/ml：准确称取0.2500 g山梨酸,加超纯水定容至250 ml;3 苯甲酸储备液1.0 mg/ml：准确称取0.2500 g苯甲酸,加超纯水定容至250 ml;四、实验步骤1、样品处理碳酸饮料雪碧：吸取10 ml碳酸溶液超声5 min,然后用微孔滤膜0.22 μm 过滤,滤液备用;吸取100 μl滤液于离心管中,并加入900 μl超纯水,混合均匀标记为样品;2、配制标准溶液1 取一定量的苯甲酸储备液,经滤膜过滤于离心管中;吸取滤液50 μl于另一离心管并加入950 μl超纯水,得到50 μg/ml的苯甲酸标准品,做好标记;2 同理得到50 μg/ml的山梨酸标准品,做好标记;3 混合标准品配制：分别吸取500 μl过滤后的苯甲酸和山梨酸储备液于离心管中混合均匀,得到500 μg/ml的混合标准品;吸取50 μl混合标准品500 μg/ml于离心管中并加入950 μl超纯水,得到25 μg/ml的混合样,标记为混标;3、色谱条件：色谱柱：C18反相键合色谱柱流动相：甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液5 : 95流速：1 ml/min 检测波长：230 nm 进样量10 μl4、标准品和样品测定1 分别进苯甲酸50 μg/ml、山梨酸50 μg/ml标准品,确定保留时间;2 记录混合标准品25 μg/ml的峰面积并按下式计算样品中苯甲酸和山梨酸含量：计算方法：Cx=F×Cs×Ax÷As式中：Cx—为样品中被测物的含量μg/ml；Cs—为苯甲酸或山梨酸标准品的含量μg/ml;F—为稀释倍数；Ax—样品的峰面积；As—标准品的峰面积;五、实验数据记录及结果计算1、苯甲酸、山梨酸标准品的保留时间物质苯甲酸山梨酸保留时间min 6.780 9.1522、混合标准品及样品的峰面积物质苯甲酸山梨酸样品苯甲酸山梨酸峰面积mAUmin 386576 2067181 234426 31073、实验结果计算根据公式：Cx=F×Cs×Ax÷As计算得：C苯甲酸=10×25×234426÷386576=151.6μg/mlC山梨酸=10×25×3107÷2067181=0.375μg/ml雪碧中含有151.6μg/ml的苯甲酸,0.375μg/ml的山梨酸;六、注意事项1、如果被测溶液含有气泡,对测定和仪器的使用均有影响,因此需要将被测溶液超声加热除去二氧化碳;2 、苯甲酸的灵敏波长为230 nm,山梨酸的灵敏波长为254 nm,在此波长测定时苯甲酸的灵敏度较低;因此波长选择230 nm;3、平衡前用甲醇：水5:95冲洗柱子15 min,再用甲醇-0.02 mol/L醋酸铵溶液5:95进行平衡;4、开机顺序：高压输液系统、进样系统、柱温箱、检测器、电脑软件;5 、使用盐做流动相的时候：水：甲醇=95: 5冲洗柱子20 min以上；然后用甲醇冲洗色谱柱20 min以上,保存色谱柱;6 、关机：清洗结束后,点击并将泵流量输入为0,等压力降为0时,关掉泵电源,退出Breeze工作站,再关闭仪器各部分电源及计算机;7、注意在移液枪加完一种试剂之后,一定要记得换枪头。

高效液相色谱法同时测定四川豆瓣中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠及脱氢乙酸陈艳（乐山市产品质量监督检验所，乐山 614000）摘要：目的：建立高效液相色谱法同时快速测定四川豆瓣中5种食品添加剂安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠及脱氢乙酸的检测方法。

方法：样品提取液使用C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）、采用二极管阵列检测器进行检测；考察了检测波长、不同流动相体系，不同流动相比例、梯度洗脱及流动相流速对实验结果的影响。

结果：安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠及脱氢乙酸在5.0～100.0μg/mL范围内，浓度与峰面积有良好的线性关系，相关系数均大于0.99，样品的加标回收率分别为81.2%～92.2%、84.1%～96.8%、91.1%～99.0%、85.1%～92.3%、89.9%～101.2%，相对标准偏差均小于3.00%。

结论：本方法操作简单、快速、准确，可适用于四川豆瓣中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸及安赛蜜含量的同时测定。

关键词：四川豆瓣；安赛蜜；苯甲酸；山梨酸；糖精钠；脱氢乙酸；高效液相色谱法中图分类号：TS202.3/O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2020）10-0109-08doi：10.19804/j.issn1006-2513.2020.10.017Simultaneous determination of acesulfame K，benzoic acid，sorbic acid，saccharin sodium and dehydroacetic acid inSichuan traditional broad-bean sauce by HPLC methodCHEN Yan（Leshan Product Quality Supervision and Inspection Institute，Leshan 614000）Abstract：Objective：To establish a HPLC method for the simultaneous and rapid determination of acesulfame K，benzoic acid，sorbic acid，saccharin sodium and dehydroacetic acid in Sichuan traditional broad-bean sauce. Methods：C18 column（250mm×4.6mm，5μm）and diode array detector were used to detect the sample extract. The effects of detection wavelength、different mobile phase system，different mobile phase proportion，gradient elution and mobile phase flow rate on the experimental results were investigated. Results：The concentration of acesulfame K，benzoic acid，sorbic acid，saccharin sodium and dehydroacetic acid was in the range of 5.0～100.0 mg/L. There was a good linear relationship between the concentration and peak area. The correlation coefficients were all greater than 0.99. The average recovery of spiked samples was 81.2%～92.2%、84.1%～96.8%、91.1%～99.0%、85.1%～92.3%、89.9%～101.2% respectively，and the relative standard deviation was less than 3.00%. Conclusion：The method issimple，rapid and accurate. It can be used for the simultaneous determination of acesulfame K，benzoic acid，sorbic收稿日期：2020-05-15作者简介：陈艳（1984-），女，工程师，硕士研究生，研究方向为食品分析与检验。

分析检测超高效液相色谱法测定调味酱中的苯甲酸和山梨酸+杨宇郝迪萩I黑龙江省农垦科学院测试化验中心M立了超高效液相色谱快速测定调味酱中苯甲酸、山梨酸的方法。

样品以亚铁氰化钾和乙酸锌沉淀蛋白质。

使用C18色谱柱，流动相为0.02m o l/L乙酸铵-甲醇(95:5, v/v)，梯度洗脱，用二极管阵列检测器在波长240m n处检测，流速为0.35m L/m in。

结果表明，苯甲酸、山梨酸在5m in内可以很好的分离，加标回收率在96.00-99.30%之间，相对标准偏差（R S D)在0.53-1.39%之间。

该法简单、灵敏，适用于调味酱中苯甲酸和山梨酸的检测。

调味酱是我国人民日常生活中使用的产品，由于其中含有丰富的营养成分，在长期储存中极易变质，在大规模工业生产中，企业为防止其变质，会在其加工过程中常加入苯甲酸和山梨酸等防腐剂。

但是食用含有过量苯甲酸和山梨酸的食品会严重影响人体健康。

本实验的目的是建立一种超高效液相色谱法测定调味酱中的苯甲酸和山梨酸的方法，用于快速检测苯甲酸和山梨酸在调味酱中的含量°材料与方法材料与试剂。

苯甲酸标准品、山梨酸标准品：纯度99%;甲醇（色谱纯）；乙酸按（色谱纯）；超纯水；10%亚铁氰化钾；22%乙酸锌。

仪器与设备。

超高效液相色谱仪：Waters UPLC :配有紫外检测器；涡旋振荡器；高速冷冻离心机。

标准工作曲线H制。

准确称取0_1 g(精确至0.0001 g )苯甲酸和山梨酸标准品于100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配成1.0mg/mL的标准储备液。

分别移取浓度为1.0m g/m L的苯甲酸和山梨酸标准储备液0.20m L、0.5m L、lm L、2m L、5m L，至lO O m L容量瓶中，用水稀释成浓度分另丨』为2.〇u g/m L、5.〇M g/m L、lO.O u g/m L、20.0 M g/m L、50.0 M g/m L的混合标准工作溶液。