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临床医学检验学主治医师：肠杆菌（强化练习）1、单选在肠杆菌科的细菌鉴定中，选择性培养基的选择主要取决于（）.A.标本种类B.取材时间C.标本量的多少D.临床要求E.细菌的种类正确答案：A参考解析：血尿及穿刺液标本（江南博哥）不需选择培养基，而粪便标本则需接种于肠道选择培养基而排除正常菌群或污染菌的干扰。
2、单选苯丙氨酸脱胺酶试验阳性的细菌是（）.A.枸橼酸杆菌属B.哈夫尼亚菌属C.普罗威登斯菌属D.耶尔森菌属E.爱德华菌属正确答案：C参考解析：苯丙氨酸脱胺酶阳性、氧化酶阴性是变形杆菌属、普罗威登斯菌属、摩根菌属的共同特点.3、单选大肠埃希菌的IMViC试验结果为（）.A.++--B.--++C.+---D.-+--E.+-+-正确答案：A参考解析：大肠埃希菌的吲哚试验阳性、甲基红阳性、VP阴性、枸橼酸盐试验阴性。
4、单选对全部氨基青霉素、一代二代头孢菌素和一代喹诺酮类抗生素呈天然耐药的细菌是（）.A.大肠埃希菌B.恶臭假单胞菌C.粪产碱杆菌D.鲍曼不动杆菌E.铜绿假单胞菌正确答案：D参考解析：鲍曼不动杆菌对全部氨基青霉素、一代二代头孢菌素和一代喹诺酮类抗生素呈天然耐药。
5、单选患伤寒病后，带菌者最常见的带菌部位是（）.A.胆囊B.十二指肠C.胰腺D.肠系膜淋巴结E.直肠正确答案：A参考解析：伤寒沙门菌感染后常见的带菌部位是胆囊。
6、单选肠杆菌科细菌与O特异性血清反应时常不出现凝集反应，可采取的方法有（）.A.增加特异性血清的浓度B.增加用于反应的菌体量C.加热除去细菌表面抗原D.降低反应温度E.更换试剂正确答案：C参考解析：细菌表面抗原存在时能阻断O抗原与相应抗血清的凝集作用，加热60℃，30分钟可消除Vi抗原对O抗原的阻断作用。
7、单选鼠疫耶尔森菌的生物学性状描述正确的是（）.A.25℃动力阴性，37℃动力阳性B.无荚膜、鞭毛、芽孢C.生长迅速，繁殖快D.陈旧培养物上细菌形态呈现多样性E.在液体培养物上细菌形态呈现多形性正确答案：D参考解析：鼠疫耶尔森菌在陈旧培养物上呈明显多样性。
12医学检验医学微生物学阶段练习题2参考答案化脓性球菌一、名词解释1．化脓性球菌：是一类能感染人体并引起化脓性炎症的病原性球菌，包括革兰阳性球菌和革兰阴性球菌。
2、SPA：即葡萄球菌A蛋白，是葡萄球菌细胞壁的一种表面蛋白，能与人及某些哺乳类动物的IgG分子Fc段发生非特异性结合，与吞噬细胞的Fc受体争夺Fc段，从而降低了抗体的调理吞噬作用，起到了协助细菌抗吞噬的作用。
3．血浆凝固酶：由致病性葡萄球菌产生的一种酶，可使液态纤维蛋白变成固态纤维蛋白。
4．抗链球菌溶素O试验：简称抗O试验,是以链球菌溶素O为抗原，检测血清中相应抗体ASO，常用于风湿热的辅助诊断。
5．TSST-1: 即毒性休克综合征毒素-1，由噬菌体Ⅰ群金黄色葡萄球菌产生的一种蛋白质，可增加宿主对内毒素的敏感性，可引起机体多个器官系统的功能紊乱，出现毒性休克综合征（TSS）。
二、填空题1．葡萄球菌链球菌肺炎球菌脑膜炎球菌淋球菌2．血浆凝固酶3．金黄色葡萄球菌4．食物中毒剥脱性皮炎假膜性肠炎毒性休克综合征5．甲型溶血性链球菌乙型溶血性链球菌丙型链球菌6．巧克力色血琼脂平板7. 甲型溶血性链球菌8．葡萄球菌9．透明质酸酶链道酶IO．IgG Fc段11．化脓性感染中毒性疾病变态反应性疾病12．荚膜大叶性肺炎三、选择题A型题 1．C 2．C 3．C 4．A 5．A 6．E 7．A 8．E 9．D 10．D 11．D 12．B 13．C 14．E 15．E 16．BB型题 17.A 18．E 19．A 20．B 21.A 22．E 23．B 24．D 25．A 26．D 27.E 28．B29．C X型题 30．CD 31．ABCD 32．BCDE 33．ABC 34．BD 35．ABDE四、问答题1．金黄色葡萄球菌的致病物质及所致疾病有哪些？金黄色葡萄球菌的致病物质有：血浆凝固酶、杀白细胞素、葡萄球菌溶血素、肠毒素、表皮剥脱毒素、毒性休克综合征毒素（TSST-1）。
2.提高口服免疫效果的措施口服疫苗免疫效果并不十分理想，主要是由于抗原受到胃酸的作用和蛋白酶的水解，使抗原到达后肠部位时，其完整性和免疫部位已被破坏或抗原被消化掉，没有足够的抗原到达后肠(Quentel C等，1997)。
因此，为了使抗原在鱼的前肠不被消化，则发展了许多的包裹材料来保护抗原。
现如今，常用的有海藻酸钠、明胶、聚交酯醣酯聚合物、卤虫、生物被膜等材料。
(1)海藻酸钠。
海藻酸钠是一种天然多糖类化合物，是从褐藻中提取而来的，现已作为包裹药品和细胞的材料，具有药物制剂辅料所需的稳定性、溶解性、黏性和安全性等特性(Chan L W等，2002)，Joosten等(1997)用海藻酸钠包裹溶藻弧菌免疫虹鳟和鲤鱼，其结果显示在鱼体中有抗体产生。
Tian等(2008)用海藻酸钠包裹含有能够表达淋巴囊肿病毒蛋白的质粒进行口服免疫日本牙鲆，检测免疫3～16周牙鲆的抗体效价，表明其效果明显。
Romalde等(2004)认为通过口服海藻酸钠微囊化的疫苗虽然不能作为初次免疫的方法，但对鱼有较好的保护效果。
Altun等(2010)也用海藻酸钠包裹L.garvieae bacterin疫苗口服免疫虹鳟鱼，其结果表明，在免疫30天后的RPS为53%，61天后对鱼体进行二次免疫，120天时其RPS达到61%，效果明显。
李新华等(2007)用海藻酸钠包裹嗜水气单胞菌疫苗口服免疫银鲫，结果表明微胶囊疫苗组血清抗体效价较高，且维持时间长，对口服免疫效果有明显的提升。
(2)聚交酯醣酯聚合物。
目前，聚交酯醣酯聚合物也被应用于鱼类口服疫苗的包裹技术上，它是一种疏水型的聚酯(Tian J Y等，2008)，降解性好且无毒，而且容易生产，价格便宜。
Tian等(2008)利用聚交酯醣酯聚合物包裹LCDV的DNA疫苗免疫日本牙鲆，免疫90天后，在日本牙鲆体内各组织中检测到LCDV的mRNA，而且用ELISA在1～24周均可检测到抗体。
Altun等(2010)分别利用聚交酯醣酯聚合物和海藻酸钠包裹L.garvieae bac-terin免疫虹鳟，聚交酯醣酯聚合物为包裹材料的免疫效果比海藻酸钠为包裹材料的好。
锦鲤溃疡病病原菌的分离及16S rRNA鉴定姜娜;马志宏;李铁梁;邢薇;罗琳【摘要】为寻找引起养殖锦鲤( Orna mental ca rp)病害的致病因子,从北京地区自然患病的锦鲤体内分离疑似致病菌,再将此菌人工感染健康锦鲤,确定致病菌.采用生理生化鉴定与16S rRNA基因序列的系统发育学分析相结合的方法确定该致病菌株的系统发育地位,同时采用琼脂扩散法测定该菌对抗菌类药物的敏感性.试验结果表明,从病鱼体内分离得到革兰氏阴性杆菌CL0901,人工感染健康锦鲤后,能够引起鱼生病甚至死亡,症状与自然发病症状一致.菌株CL0901与Aeromonasveronii ATCC 35624T的16S rRNA基因序列相似性达99.9％,构建系统发育树,并结合形态特征与生理生化测定结果,将该致病菌鉴定为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii).在21种抗菌类药物对该菌的抑菌试验中,左氧氟沙星、诺氟沙星和洛美沙星等10种药物的抑菌效果较好.本研究为进一步防制锦鲤养殖病害提供依据.%The study was carried out to search for the pathogenic factor causing Ornamental carp ulcer disease. A pathoge-netic bacterial strain CL0901 was isolated from naturally infected Ornamental carp (Cyprinus carpio L. ) in Beijing.The strain was identified according to its physiological and biochemical properties, and the sequence analysis of 16S rRNA gene. The drugs sensitivity was detected with Kirby-Bauer's agar diffusion method. Basedon the result of 16S rRNA sequence analysis, the strain CL0901 shares 99. 9% sequence identity with the type strain ATTCC 35624T of Aeromonas veronii. Combining with bacteria observation, physiological and biochemical characteristics, the pathogenetic bacterial strain CL0901 was identified as Aeromonas veronii. Drug sensitive tests showed that isolation wassensitive to Neomycin, Piperacillin, Levofloxacin, Nor-floxacin, Gentamicin, Amikacin, Tazobactam, Pefloxacin, Lomefloxacin and Tobramycin.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2012(039)002【总页数】4页(P174-177)【关键词】锦鲤;溃疡病;生理生化特性;16S rRNA基因;药敏试验【作者】姜娜;马志宏;李铁梁;邢薇;罗琳【作者单位】北京市农林科学院北京市水产科学研究所,北京 100068;北京市农林科学院北京市水产科学研究所,北京 100068;北京市农林科学院北京市水产科学研究所,北京 100068;北京市农林科学院北京市水产科学研究所,北京 100068;北京市农林科学院北京市水产科学研究所,北京 100068【正文语种】中文【中图分类】S943锦鲤（Ornamental carp）又称绯鲤，是一种温水性的淡水观赏鱼，以其健壮的体形、艳丽似锦的色彩、变幻多姿的斑纹而闻名。
浙江医学检验科模拟题2021年(96)(总分97.XX02,考试时间120分钟)A1/A2题型1. 酶免疫技术中将抗原抗体包被后再用下列何种物质进行封闭可以消除非特异性显色导致的本底偏高A. 1%～5%牛血清白蛋白B. 1%～10%牛血清白蛋白C. 10%牛血清白蛋白D. 10%～15%牛血清白蛋白E. 15%～25%牛血清白蛋白2. 酶免疫测定根据抗原抗体反应后是否要分离结合的与游离的酶标记物而分为下述哪几种类型A. 均相异相B. 同相均相C. 异相固相D. 固相均相E. 固相异相3. 免疫测定的基础是A. 免疫原和抗血清的制备B. 沉淀反应C. 凝集反应D. 抗原和抗体的特异性结合反应E. 受体与配体之间的结合4. 微粒子化学发光免疫分析最常用的方法是A. 捕获法B. 竞争法C. 双抗体夹心法D. 间接免疫法E. 以上都包括5. 电化学发光免疫分析(ECLIA)常采用的标记物是A. 吖啶酯B. ALPC. HRPD. 三联吡啶钌E. 三丙胺6. 导致AIDS患者死亡最主要的原因是A. 继发肿瘤B. 吞噬细胞功能缺陷C. 肾功能衰竭D. 慢性肉芽肿E. 机会感染7. 免疫缺陷病按病因可分为A. 原发性免疫缺陷病和继发性免疫缺陷病B. 细胞免疫缺陷和联合免疫缺陷C. T细胞缺陷和B细胞缺陷D. 体液免疫缺陷和细胞免疫缺陷E. 吞噬细胞缺陷和补体缺陷8. AIDS免疫学异常的特征是A. 选择性T细胞缺乏，CD4+／CD8+比值下降B. 迟发性皮肤的过敏反应减弱或丧失C. 血清中IgG升高D. 血清中IgG下降E. 补体检测不出9. 混合淋巴细胞反应可用于A. 体外评价B淋巴细胞的功能B. 体外评价T淋巴细胞的功能C. 体内评价T淋巴细胞的功能D. 体内评价B淋巴细胞的功能E. 测定外周血T淋巴细胞的数目10. 炭粒廓清试验中，能吞噬清除小鼠体内90%炭粒的细胞是A. 小鼠肝脏中的库普弗细胞B. 脾巨噬细胞C. 中性粒细胞D. 尘细胞E. 淋巴细胞11. 关于微量细胞毒试验，下列说法错误的是A. 试验依赖补体介导的细胞毒作用B. 试验无需补体的参与C. 目的细胞伊红染色，着染红色D. 非目的细胞伊红染色，不着色E. 该方法简便易行准确性较高12. 关于生物学检测法哪项不正确A. 刺激细胞增殖B. 维持细胞生长C. 保持细胞活性D. 抑制细胞生长E. 以上均不对13. 细菌感染病人的NBT试验阳性百分率表现为A. 8%B. 明显下降D. 10%E. 9%14. Percoll分层液法常用来分离A. 单核细胞和淋巴细胞B. 白细胞C. T细胞和B细胞D. 红细胞E. 单个核细胞15. 对淋巴细胞亚群测定的临床意义描述错误的是A. 了解机体的免疫状态B. 探讨免疫调节功能的状况C. 是自身免疫疾病和肿瘤发生发展的监控指标D. 了解体液免疫情况E. 诊断免疫缺陷或免疫增生病16. 用Ficoll分层液分离外周血中的单个核细胞其分布由上而下依次为A. 血浆、粒细胞、单个核细胞、红细胞B. 血浆、单个核细胞、红细胞、粒细胞C. 血浆、单个核细胞、粒细胞、红细胞D. 红细胞、粒细胞、单个核细胞、血浆E. 粒细胞、单个核细胞、红细胞、血浆17. 何种细胞表面具有小鼠红细胞受体A. 中性粒细胞B. 巨噬细胞C. T淋巴细胞D. B淋巴细胞E. NK细胞18. 体液中的溶菌酶的主要分泌细胞是A. 中性粒细胞B. 巨噬细胞C. B细胞D. T细胞E. NK细胞19. 酶免疫技术中的酶结合物是指A. 酶标记抗原B. 酶标记抗体C. 酶标记抗原或抗体D. 结合在固相载体上的酶E. 酶与底物的结合20. 检测HBV血清学标志物最常用的方法为A. 免疫荧光法B. ELISAC. 中和试验D. 免疫印迹试验21. 速率散射比浊法测定是在A. 抗原抗体反应的稳定阶段B. 终点比浊C. 抗原抗体反应的第一阶段D. 抗原抗体反应的第二阶段E. 以上均不对22. 速率散射比浊法测定的时间为单位时间内A. 抗原-抗体复合物形成的最长时间段B. 抗原-抗体复合物形成的最快时间段C. 抗原-抗体复合物形成最大量的时间段D. 抗原-抗体复合物形成的最稳定时间段E. 抗原-抗体复合物最初形成的时间段23. 发光物吖啶酯标记的化学发光反应体系应在何种环境中进行A. 酸性B. 碱性C. 中性D. 酸性或中性E. 碱性或中性24. DiGeorge综合征细胞免疫功能缺陷的原因是A. T细胞内在缺陷B. TCR功能缺陷C. B细胞内在缺陷D. 先天性胸腺发育不全E. 树突状细胞内在缺陷25. T细胞分化抗原主要是检测A. CD9B. CD10C. CD3、CD4、CD8D. CD19E. CD2026. 对选择性IgA缺乏症的特点叙述中，错误的是A. 食物过敏症的发病率较高B. 血清中IgA和sIgA均减少C. 常伴有消化道和呼吸道感染D. 自身免疫性疾病的发生率较常人高E. 用丙种球蛋白替代治疗有较好疗效27. 目前最为常用的基因多态性检测方法是A. PCR-SSCPB. PCR-测序C. PCR-RFLPD. 荧光PCRE. 原位PCR28. 下列哪种是NK细胞特有的表面抗原A. CD2B. CD16C. CD56D. CD69E. 以上均不是其特有的表面抗原29. 鉴定T细胞和亚群的酶免疫组化法中APAAP法的原理是A. 底物+APAAP+抗T细胞单克隆抗体+T细胞抗原B. 底物+碱性磷酸酶+兔抗鼠IgG+抗T细胞单克隆抗体+T细胞抗原C. 底物+抗碱性磷酸酶+兔抗鼠IgG+抗T细胞单克隆抗体+T细胞抗原D. 底物+APAAP+兔抗鼠IgG+抗T细胞单克隆抗体+T细胞抗原E. 底物+APAAP+兔抗鼠IgG+T细胞抗原30. CLA主要表达于A. B细胞B. 记忆T细胞C. 巨噬细胞D. 树突状细胞E. 单核细胞31. 通常免疫学实验最常用的细胞群是A. 单核细胞B. 淋巴细胞C. 单核细胞和淋巴细胞D. 中性粒细胞以外的细胞E. 吞噬细胞32. 采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，第二层是A. 淋巴细胞层B. 血浆与血小板层C. 单个核细胞层D. 粒细胞层E. 红细胞层33. 长期保存细胞的温度为A. -196℉B. -85℉C. -196℃D. -85℃E. 20℃34. 测定人NK细胞活性多以哪种作为靶细胞A. K562细胞株B. YAC细胞株C. 致敏的羊红细胞D. CRBCE. 以上都不对35. NBT还原试验中反映中性粒细胞杀菌功能的指标是A. NBT阳性细胞百分率B. 计数中性粒细胞内有浅黄色的NBT颗粒的细胞所占比例C. 计数中性粒细胞内有蓝色的NBT颗粒的细胞的数目D. 计数中性粒细胞内有浅黄色的NBT颗粒的细胞的数目E. 中性粒细胞内有蓝色的NBT颗粒的细胞的数目与中性粒细胞内有浅黄色NBT颗粒的细胞的数目之比36. 关于ELISA的底物OPD的特点哪一条不正确A. 具有致癌性B. 灵敏度高C. 比色方便D. 配成应用液后稳定性好E. 与酶反应后显橙黄色37. 酶免疫技术中最佳工作浓度的选定常采用A. 抗原稀释法B. 抗体稀释法C. 酶标记物稀释法D. 棋盘滴定法E. A+B38. 辣根过氧化物酶的酶活性基团为A. 糖蛋白B. 亚铁血红素C. 活跃糖基D. 醛基E. 羟基39. 定时散射比浊分析中代表待测抗原浓度的信号峰值是指A. 第一次检测的信号值B. 第二次检测的信号值C. 第一次检测的信号值加上第二次检测的信号值D. 第二次检测的信号值减去第一次检测的信号值E. 以上均不对40. 在速率散射比浊分析中，不出现第二峰值信号则提示A. 结果准确B. 被测定抗原量太低，应取上一个稀释浓度C. 第一峰值信号是由全部待测抗原产生D. 第一峰值信号是由部分待测抗原产生E. 第一峰值信号是由全部抗体产生41. 生物传感器中决定传感器的功能与质量的关键元件是A. 生物敏感膜B. 热敏元件C. 光敏管D. 荧光计E. 阻抗计42. 慢性肉芽肿病(CGD)属于哪一类免疫缺陷病A. 原发性B淋巴细胞缺陷病B. 原发性T淋巴细胞缺陷病C. 原发性联合免疫缺陷病D. 原发性吞噬细胞缺陷病E. 原发性补体缺陷病43. 临床除外B细胞免疫缺陷，通常检测的Ig是A. IgG、IgD、IgAB. IgG、IgA、IgEC. IgG、IgD、IgED. IgG、IgA、IgME. IgA、IgD、IgE44. 实验动物新生期摘除胸腺A. 脾脏红髓区T细胞缺乏B. 淋巴结副皮质区T细胞缺乏C. 脾脏白髓区B细胞缺乏D. 淋巴结浅皮质区T细胞缺乏E. 以上均错误45. 标本为组织切片的细胞表面粘附分子最常用的测定方法是A. 酶免疫组织化学方法B. 免疫荧光方法C. 流式细胞仪D. 化学发光免疫测定方法E. 时间分辨荧光免疫测定方法46. B细胞表面可能有的标志性抗原不包括下列哪项A. CD20B. CD2C. CD22D. CD21E. CD1947. E花环分离法分离淋巴细胞时，能形成E花环的细胞是A. 单核细胞和淋巴细胞B. T细胞C. 单个核细胞D. B细胞E. 白细胞48. 参与特异性免疫的免疫细胞是A. 吞噬细胞B. 淋巴细胞C. 单核细胞D. NK细胞E. T细胞、B细胞和APC49. 硝基四氮唑蓝还原试验主要用于检测A. 中性粒细胞趋化能力B. 中性粒细胞胞内杀菌能力C. 中性粒细胞产生胞外酶的能力D. 巨噬细胞吞噬能力E. 巨噬细胞趋化能力50. 不属于人B淋巴细胞膜上的表面标志有A. 膜表面免疫球蛋白分子(SmIg)B. Fc受体C. 补体受体D. 丝裂原受体E. SRBC受体51. 介导体液免疫的细胞是A. T细胞B. B细胞C. 巨噬细胞D. 肥大细胞E. 嗜碱性粒细胞52. 下列关于NK细胞的叙述正确的是A. NK细胞形态具有异质性，所有的LGL细胞均为NK细胞B. 具有非特异杀伤作用，但无MHC限制性C. 对所有肿瘤细胞均有作用D. NK细胞发源于骨髓干细胞，其发育、成熟依赖胸腺微环境E. NK细胞不具有细胞介导的细胞毒作用53. 尼龙毛柱分离法是利用了哪种细胞具有易黏附于尼龙纤维表面的特性A. B细胞B. 单核细胞C. T细胞D. NK细胞E. B细胞和单核细胞54. 关于硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验，下列描述不正确的是A. NBT试剂实际是一种丝裂原B. 细胞在吞噬杀菌过程中耗能剧增，其耗氧量亦随之增加C. 细胞内磷酸己糖旁路代谢活性增强，葡萄糖-6-磷酸酶氧化脱氢D. 加入NBT可接受所脱的氢，使原呈淡黄色的NBT还原成点状或块状颗粒，沉积于胞质内E. 硝基四氮唑蓝是受氢体55. 与双抗体夹心法相比，ELISA间接法的主要优点是A. 有较大的放大作用B. 减少了操作步骤C. 减少了冲洗次数D. 可以用一种酶标抗体检测各种与抗原相应的抗体E. 缩短反应时间56. 不影响酶活性测定的因素为A. 底物浓度B. 样品杯直径C. 温度D. pH值E. 缓冲液的离子强度57. 速率散射比浊分析的抗原过量检测时，不出现第二次速率峰值信号表示A. 被测定抗原量过高，应稀释重测B. 被测定抗原量太低，应取上一个稀释浓度C. 第一次速率峰值信号是由全部的待测抗原产生D. 第一次速率峰值信号不是由部分的待测抗原产生E. 以上均不对58. 在定时散射比浊分析中，如果预反应时间段抗原-抗体复合物的光散射信号超过预设阈值，提示问题是A. 抗原过量（样本过量）B. 抗体过量C. 试剂过期D. 仪器故障E. 以上均错59. 为了保证速率散射测定分析的准确性和精密度，该类型仪器中特有的设计是A. 抗体过量检测系统B. 抗原过量检测系统C. 样本自动稀释系统D. 信号处理及数字转换系统E. 人工智能设计60. 遗传性血管神经性水肿的发生机制是A. C2a产生过少B. C2a产生过多C. C3a产生过少D. C3a产生过多E. C4a产生过多61. 原发性免疫缺陷病中发病比例最高的是A. 原发性B细胞免疫缺陷B. 原发性T细胞免疫缺陷C. 原发性联合免疫缺陷D. 补体系统缺陷E. 吞噬细胞缺陷62. 抵御化脓性细菌感染的非特异性免疫细胞是A. 单核细胞B. 巨噬细胞C. 中性粒细胞D. TCRγδ+细胞E. 肥大细胞63. 目前细胞因子最常用的免疫学测定方法是A. ELISAB. 流式细胞分析法C. 酶联免疫斑点试验(ELISAPOT)D. RIA法E. 免疫印迹法64. 与HIV受体有关的抗原是A. CD3B. CD19C. CD8D. CD4E. CD2065. 淋巴细胞功能体内试验的方法主要是A. 淋巴细胞转化试验B. 淋巴细胞计数C. 对异物排斥反应的能力D. 迟发型超敏反应E. 血清中Ig浓度的检测66. 正常人外周血经PHA刺激后，其T细胞转化率是A. 50%～70%B. 60%～80%C. 30%～50%D. 70%～90%E. 10%～30%67. 关于酶联免疫斑点试验检测B细胞功能的优点，下列哪项不是A. 可检测抗体分泌细胞B. 可检测抗体的分泌量C. 稳定、特异、抗原用量少D. 可同时进行B细胞计数E. 可同时检测不同抗原诱导的不同抗体的分泌68. 细胞介导免疫的效应细胞是A. Tc细胞B. Ts细胞C. Th细胞D. NK细胞E. TD细胞69. 用淋巴细胞分层液(Ficoll)分离外周血时，其中处于最上面的是A. 死细胞层B. 单个核细胞层C. 粒细胞层D. 稀释的血浆层E. 红细胞层70. 由PHA诱导的淋巴细胞转化实验中正常人群的转化率为A. 30%～50%B. 40%～60%C. 50%～70%D. 60%～80%E. 70%～90%71. 下列有关转化的淋巴细胞形态描述中，错误的是A. 细胞变大B. 出现空泡C. 核仁消失D. 染色质疏松E. 胞质扩大72. ABC法中的桥是指A. 生物素B. 亲和素C. 生物素化的抗体D. 与生物素结合的酶E. 三抗73. 下列哪项不是血药浓度免疫学测定的技术A. 化学发光免疫测定B. 免疫电泳法C. 放射免疫法D. 荧光免疫法E. 酶免疫法74. 患者，男性，36岁。
临床微生物学检验技术复习练习试题绪论选择题A 型题（只选一个最佳答案）1.细菌属于原核细胞型微生物的主要依据A 单细胞，结构简单B 原始核，细胞器不完善C 二分裂方式繁殖D 有细胞壁E 对抗生素敏感2.属于非细胞型微生物A 细菌B 病毒C 衣原体D 真菌E 立克次体3．第一架观察微生物的显微镜放大的倍数A 200倍B 266倍C 500倍D 366倍E 1000倍4．不属于原核细胞型微生物的是A 螺旋体B 衣原体C 支原体D 真菌E 放线菌5．首次使用固体培养基的科学家是A 琴纳(Edward Jenner)B 巴斯德 (Louis Pasteur)C 伊凡诺夫斯基(Iwanovsky)D 列文胡克(Leewenhoek)E 郭霍(Robert Koch)6．微生物特点描述哪项错误A 形体小，结构简单B 肉眼看不见的低等生物C 分布广，种类多D 繁殖快，代谢强E 不易发生变异B型题（每题只选一个最佳答案，备选答案可重复被选）A 法国的巴斯德B 德国的郭霍C 俄国的伊凡诺夫斯基D 中国的汤飞凡E 荷兰的列文胡克1.最早观察到细菌2.创用固体培养基分离细菌3.病毒发现起重要贡献的是4.狂犬病疫苗、炭疽病疫苗研制者5．首先证实有机物发酵和腐败是由微生物引起6．首先成功地分离出沙眼衣原体7.结核杆菌、炭疽芽胞杆菌的发现者X型题（选2个以上答案）1.属于原核细胞型微生物A 细菌B 病毒C 衣原体D 真菌E 立克次体2．微生物与人类的关系A 大多数微生物可导致人发病B 微生物可以制造菌肥和杀死害虫，促进农作物生长C 微生物可以产生多种抗生素D 微生物可为基因工程提供必不可少的工具酶和载体系统E 病原微生物可以引起人和动物发病填空题1．微生物的特点：；；；。
2．原核细胞型微生物仅有原始核质，无、；缺乏，只有核糖体。
名词解释：微生物、微生物学问答题1．简要列举微生物学发展史上重大贡献的人物及其发现（或理论）。
2．试述微生物的分类和特点。
第４８卷 第５期２０１２年１０月青岛大学医学院学报ＡＣＴＡ ＡＣＡＤＥＭＩＡＥ ＭＥＤＩＣＩＮＡＥ ＱＩＮＧＤＡＯ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＡＴＩＳＶｏｌ．４８，Ｎｏ．５Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１２［收稿日期］２０１２－０３－２８； ［修订日期］２０１２－０６－０８［作者简介］刘倩（１９８２－），女，硕士，实验师，主要从事细胞免疫学研究。
［通讯作者］陈营（１９６４－），男，博士，副教授，主要从事水产动物微生态学和分子微生物学研究。
鲤鱼肠道黏附受体分离与抗血清制备及体外黏附试验刘倩１，张帜１，陈营２（１ 齐鲁师范学院生物系，山东济南 ２５０２００； ２ 烟台大学化学生物理工学院）［摘要］ 目的 分离并鉴定鲤鱼肠道中与乳杆菌和其他细菌定植相关的黏附受体蛋白。
方法 用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分离鲤鱼肠道中相对分子质量为２６ ２００的蛋白，免疫小鼠制备抗血清，免疫印迹试验检测抗血清对该蛋白结合的特异性。
应用体外黏附模型，测定鲤鱼肠道黏液对乳杆菌新种Ｌ１５、嗜酸乳杆菌和致病性大肠杆菌的黏附作用。
结果 乳杆菌Ｌ１５、嗜酸乳杆菌和大肠杆菌均不同程度地表现为对鲤鱼肠道黏液的黏附，该黏附作用可被抗目的蛋白的抗血清显著抑制。
结论 鲤鱼肠道内相对分子质量为２６ ２００的蛋白质与两株乳酸菌的黏附相关，也是大肠杆菌在鲤鱼肠道内定植的黏附受体。
乳酸菌与大肠杆菌在鲤鱼肠道内可竞争同一受体，乳酸菌也正以此来对病原菌产生定植拮抗作用。
［关键词］ 鲤鱼类；肠；乳杆菌属；细菌黏附［中图分类号］ Ｓ９１７．１ ［文献标志码］ Ａ ［文章编号］ １６７２－４４８８（２０１２）０５－０４２９－０３ＩＳＯＬＡＴＩＯＮ，ＡＮＴＩＳＥＲＵＭ ＰＲＥＰＡＲＡＴＩＯＮ ＡＮＤ ＡＤＨＥＳＩＶＥ ＴＥＳＴＳ ＯＦ ＡＤＨＥＲＥＮＣＥ－ＲＥＬＡＴＥＤ ＲＥＣＥＰＴＯＲＳ ＯＦ ＣＯＭＭＯＮＣＡＲＰ ＩＮＴＥＳＴＩＮＥ ＩＮ ＶＩＴＲＯ ＬＩＵ Ｑｉａｎ，ＺＨＡＮＧ Ｚｈｉ，ＣＨＥＮ Ｙｉｎｇ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｑｉｌｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉ′ｎａｎ２５０２００，Ｃｈｉｎａ）［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｈａｔ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｂａｃｔｅｒｉａｉｎ ｃｏｍｍｏｎ ｃａｒｐ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ２６ ２００ｉｎ ｃｏｍｍｏｎ ｃａｒｐ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｂｙ ＳＤＳ－ＰＡＧＥ．Ａｎｔｉｓｅｒｕｍ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ＢＡＬＢ／ｃ ｍｉｃｅ，ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉｓｅｒｕｍ ｂｉｎｄｉｎｇ ｔｈｅ ａｂｏｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｉｍ－ｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ．Ｕｓｉｎｇ ｉｎ－ｖｉｔｒｏ ａｄｈｅｓｉｖｅ ｍｏｄｅｌ，ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ Ｌ１５，Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ａｎｄ Ｅ．ｃｏｌｉ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｃａｒｐ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ａｄｈｅｓｉｖｅ ｔｅｓｔｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｌ１５，Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ ａｎｄＥ．ｃｏｌｉ ａｌｌ ｃｏｕｌｄ ａｄｈｅｒｅ ｔｏ ｔｈｅ ｃａｒｐ ｍｕｃｕｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ａｎｔｉｓｅｒｕｍ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｗｉｔｈｒｅｌａｔｉｖｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｓｓ ｏｆ ２６ ２００ｉｎ ｃａｒｐ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ ｗａｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ．Ｅ．ｃｏｌｉ ａｎｄ ｂａｃｉｌ－ｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ，ｉｎ ｃａｒｐ ｉｎｔｅｓｔｉｎｅ，ｍａｙ ｃｏｍｐｅｔｅ ａ ｓａｍｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ａｎｄ ｉｔ ｉｓ ｉｎ ｔｈｉｓ ｗａｙ ｔｈａｔ ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ ｐｒｏｄｕｃｅ ｉｔｓ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ ａｃｔｉｏｎ ｏｎｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ．［ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ］ ｃａｒｐｓ；ｉｎｔｅｓｔｉｎｅｓ；Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ；ｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ 黏附是指细菌与黏液或上皮细胞通过生物化学作用产生的特异性粘连，是细菌定植的第一步。
肠道中黏附成分是介导细菌黏附的基础，对黏附成分的研究分析是阐明益生菌对肠道黏附机制的必要条件，并且对消化道微生态环境改善及病原菌生态防治均具有重要指导意义。
自１９７８年ＣＬＡＲＫ创立体外黏附试验模型以来，国内外对细菌黏附进行了大量研究。
该技术多应用于医学及畜牧业方面，而在水产业上应用较少。
本实验室前期研究表明，鲤鱼肠道中与乳酸菌黏附相关的受体是相对分子质量为２６ ２００的蛋白质［１］。
本研究采用凝胶电泳分离蛋白制备抗原，免疫小鼠获得抗血清，利用抗血清进行体外黏附及黏附抑制试验，探讨乳杆菌Ｌ１５、嗜酸乳杆菌ＡＴＣＣ４３５６以及大肠杆菌ＡＴＣＣ２５９２２与该蛋白的黏附关系。
现将结果报告如下。
１ 材料和方法１．１ 实验材料１．１．１ 菌株 乳杆菌Ｌ１５，分离自健康牙鲆肠道；嗜酸乳杆菌ＡＴＣＣ４３５６、大肠杆菌ＡＴＣＣ２５９２２，购自山东大学微生物菌种保藏中心。
１．１．２ 实验动物 鲤鱼，购自当地海鲜市场，体质量５００～８００ｇ，体长３０～４０ｃｍ，健康无外伤。
６周龄雌性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，购自山东大学实验动物中心。
１．２ 实验方法１．２．１ 菌悬液制备 乳酸菌于ＭＲＳ培养液中静置培养，离心收集菌体，于ＰＢＳ缓冲液中调整菌液密度为１０１１／Ｌ。
大肠杆菌于ＬＢ培养基中振荡培养，处理过程与乳酸菌相同。
１．２．２ 鲤鱼肠黏液制备 参照ＲＩＮＫＩＮＥＮ等［２］４３０青 岛 大 学 医 学 院 学 报４８卷的方法并稍加改进。
鲤鱼肠道去除两端各１ｃｍ，平均剪成前中后三段。
用ＰＢＳ缓冲液冲洗后轻轻刮取黏液，离心后取上清。
１．２．３ 黏附受体蛋白免疫抗原的制备 参考时永全等［３］的方法并加以改进：上述肠黏液经凝胶电泳分离，切取目的蛋白条带，加液氮研磨，与等量佐剂均匀混合［４］。
１．２．４ 免疫血清的制备 于ＢＡＬＢ／ｃ雌鼠背部皮下多点注射进行免疫。
首次免疫后第２８天，小鼠眼球取血收集血清。
１．２．５ 抗血清特异性检测 肠黏液经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后进行Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测。
上述抗血清按不同比例稀释，作为一抗，ＤＡＢ显色。
１．２．６ 体外黏附试验 取肠黏液于４８孔培养板内，加入菌悬液孵育，建立体外黏附模型。
血细胞计数板计数０．１ｍｍ３体积黏附的细菌个数。
用牛血清清蛋白作为阴性对照。
另以抗血清封闭肠黏液，同样方法进行黏附抑制试验。
细菌黏附率＝黏附后总菌数／黏附前总菌数×１００％。
１．２．７ 统计学处理 采用ＰＰＭＳ １．５［５］软件进行统计学处理，数据以珔ｘ±ｓ表示，组间比较采用ｔ检验。
２ 结 果２．１ 抗血清的特异性检测鲤鱼肠道中段黏液经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，抗血清以１∶５０、１∶１００、１∶２００比例稀释作Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ。
在不同稀释度下，ＰＶＤＦ膜上均能显示特异的蛋白条带，相对分子质量为２６ ２００。
抗血清稀释度越高，显色越浅。
见图１。
鲤鱼肠道前、中、后三段黏液经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，使用１∶１００比例稀释的抗血清做Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ。
只在鲤鱼肠道前段、中段有特异性显色，肠道后段无特异性显色。
见图２。
２．２ 体外黏附试验３种实验菌株对鲤鱼肠道黏液均有不同程度的黏附作用。
比较菌株对肠道前、中、后三段黏液的黏附作用，发现前段黏液黏附率最高，中段次之，后段最低。
３种实验菌株对牛血清清蛋白的黏附率均较低，菌株间未见显著差异（Ｐ＞０．０５）；各菌株对肠黏液的黏附率均明显高于牛血清清蛋白（ｔ＝１８．８３１～７２．２６１，Ｐ＜０．０１）。
加入抗血清封闭后，Ｌ１５和ＡＴＣＣ４３５６对肠道各段黏液的黏附能力均显著降低（ｔ＝２２．００４～５２．８２７，Ｐ＜０．０１）；抗血清对于大肠杆菌也可见明显的黏附抑制作用（ｔ＝１９．６９１～３０．６１３，Ｐ＜０．０１）。
３种菌株对牛血清清蛋白的黏附作用不受抗血清的影响（Ｐ＞０．０５）。
见表１。
ａ：鲤鱼肠道中段黏液蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ；ｂ：不同稀释度的抗血清对鲤鱼肠道中段黏液蛋白的Ｗｓｅｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测。
Ｍ：Ｍａｒｋｅｒ；①鲤鱼肠道中段黏液；②１∶５０稀释度抗血清；③１∶１００稀释度抗血清；④１∶２００稀释度抗血清。
图１ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测抗血清对鲤鱼肠道中段黏液受体蛋白特异性ａ：鲤鱼肠道各段黏液蛋白ＳＤＳ－ＰＡＧＥ；ｂ：１∶１００稀释度抗血清对鲤鱼肠道各段黏液蛋白的Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测。
Ｍ：Ｍａｒｋｅｒ；①鲤鱼肠道前段黏液；②鲤鱼肠道中段黏液；③鲤鱼肠道后段黏液。
图２ １∶１００抗血清对鲤鱼肠道各段黏液蛋白的Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ－ｔｉｎｇ检测表１ 抗血清对肠黏液细菌黏附率的影响（χ／％，珔ｘ±ｓ） 菌株鲤鱼肠道前段黏液鲤鱼肠道中段黏液鲤鱼肠道后段黏液牛血清清蛋白Ｌ１５ ４０．５２±０．７３ ３４．８７±０．６６ ２８．７２±０．９８ １３．７０±０．８５抗血清＋Ｌ１５ ２０．４８±０．８８ １８．３３±０．６７ １３．８５±０．６４ １２．１２±０．５８ＡＴＣＣ４３５６ ６０．３８±０．９５ ４８．３３±１．０１ ３４．５２±０．７０ １０．９０±０．７１抗血清＋ＡＴＣＣ４３５６ ２２．５０±０．８０ ２０．４２±０．９０ １８．４７±０．７１ １２．１７±０．６８ＡＴＣＣ２５９２２ ３１．４７±１．１２ ２７．９２±０．６８ ２６．１７±０．９２ １１．８７±０．９４抗血清＋ＡＴＣＣ２５９２２ １４．９２±０．９３ １３．７０±０．４３ １２．１８±０．５８ １０．２２±０．９７５期刘倩，等．鲤鱼肠道黏附受体分离与抗血清制备及体外黏附试验４３１３ 讨 论细菌的黏附过程是细菌表面的黏附素和细胞或者黏液中的特异性受体共同完成的，这是其得以在宿主体内生长繁殖并发挥作用的关键。
