万象的组织培养和植株再生(摘编)

组织培养与植物再生实验报告1. 引言植物再生是指在无性生殖条件下，从植物体的一部分或细胞中再生一个整个植株的过程。

这一过程在植物繁殖、基因工程和设备运维方面具有广泛的应用。

本次实验旨在探究植物组织培养与植物再生之间的关系，并提供实验数据以支持相关研究。

2. 实验目的本实验的目的是通过培养不同植物组织和观察其再生能力，研究植物组织培养与植物再生之间的关系。

具体目标包括：2.1 理解组织培养的基本原理和过程；2.2 掌握植物再生的条件和影响因素；2.3 分析实验数据，探讨不同植物组织的再生能力差异。

3. 实验材料和方法3.1 材料：- 高级培养基：包括培养基激素、无机盐和糖等；- 植物组织：本实验使用茎段和叶片组织；- 物理设备：无菌操作台、培养箱等。

3.2 方法：3.2.1 杀菌处理：将高级培养基倒入试管中，加热到沸腾，使其杀菌。

待培养基冷却至适宜温度后，取出备用。

3.2.2 取材：从健康植物中取茎段和叶片样本，洗净并除去表面的污垢。

3.2.3 组织处理：将茎段和叶片分别切割成等长的小段。

将茎段的末端切割成V字形，并在叶片的基部切割成悬垂状。

将处理后的组织分别置于培养基中，观察是否发生再生。

3.2.4 无菌培养：将处理好的组织放置于装有高级培养基的离心管中，进行无菌培养。

保持适宜温度和光照条件，观察培养过程中是否发生再生现象。

4. 实验结果与讨论经过一段时间的培养，我们观察到茎段和叶片组织的再生能力有所不同。

茎段组织表现出较高的再生能力，众多小芽发芽并逐渐生长成植株；而叶片组织的再生能力较弱，只有少数小芽发芽并生长。

4.1 茎段组织再生能力茎段组织再生能力较强的原因可能与其内含的植物生长素较高有关。

植物生长素是一类具有激素功能的有机物质，能够调节植物生长和发育。

茎段中富含生长素，可以促进再生过程中的细胞分裂和分化，从而实现更快的再生速率。

4.2 叶片组织再生能力相比之下，叶片组织的再生能力较弱。

这可能是由于叶片中植物生长素含量较低所致。

园　艺　学　报　2004,31(5):679～681Acta Horticulturae Sinica铺散诸葛菜的组织培养及植株再生吴　俊　祁星华　王　轶　罗　勤　王茂华　杨　毅　李旭锋3　谭仲明(四川大学生命科学学院,成都610064)摘　要:以铺散诸葛菜的叶柄及叶片为外植体,研究了不同的再生方式。

在62BA和NAA配合使用的MS培养基上,叶柄和叶片外植体有高的成芽率,具有强的器官再生能力。

在2042D与62BA、NAA结合的培养基上,叶柄和叶片有较高的愈伤组织诱导率,在含62BA的培养基上也易于分化。

叶柄、叶片再生的芽和经愈伤组织分化而得来的芽快速繁殖后,在生根培养基上形成完整植株。

研究表明铺散诸葛菜具有极强的器官分化能力。

关键词:铺散诸葛菜;叶柄;叶片;器官发生;植株再生中图分类号:S63 文献标识码:A 文章编号:05132353X(2004)0520679203In Vitro Culture and Plant R egeneration of Orychophragmus dif f ususWu J un,Qi Xinghua,Wang Y i,Luo Qin,Wang Maohua,Y ang Y i,Li Xufeng3,and Tan Zhongming (College of L if e Science,S ichuan U niversity,Chengdu610064,China)Abstract:The different ways of regeneration of leaves and petioles in vitro were studied in O2 rychophragm us dif f usus Z.M.Tan et J.M.Xu.On the MS medium with62BA and NAA,the leaves and petioles gave the high regeneration rate.When they were cultured on the MS medium with2042D,62BA and NAA,they gave the high induction rate of the calli.The calli were differentiated easily on the medium with62 BA.The embryonic plants were reproduced rapidly in the same plete plants were induced on the rooting medium.This study showed O.dif f usus has apparent regeneration capacity.K ey w ords:O rychophragm us dif f usus;Petiole;Leaf;Organogenesis;Plant regeneration1　目的、材料及方法铺散诸葛菜〔O rychophragm us dif f usus Z.M.Tan et J.M.Xu(2n=20,22)〕为诸葛菜属的新分类群〔1〕,与该属其他植物不同的特点是它的茎从基部多分枝,铺散,叶全部大头羽状分裂,顶裂片心形或肾形,长角果较短,5～7cm。

组织培养再生的步骤一、接种组织培养的接种是指将灭过菌的材料，在无菌的情况下，切成小块，放入培养基的过程。

科研、生产部门的接种工作，多在无菌室或超净工作台上进行，中学可制作接种箱，在箱内进行接种。

接种的方法步骤如下：1、在无菌室或接种箱中放好接种时所需要的酒精灯、贮存70%酒精和棉球的广口瓶、各种镊子、接种针、解剖刀、手术剪、火柴、培养基等。

2、在无菌室或接种箱内用紫外灯灭菌（无菌室照射20～50分钟，接种箱照射15分钟）。

3、放入已灭菌的接种材料（用培养皿盛取）。

同时，操作人员用酒精棉球擦手，并对接种工具用酒精灯火焰烧灼。

4、用手术刀片将材料切割成若干片段，并迅速接种入培养基中。

接种时，锥形瓶（或试管）应斜向火焰，在酒精灯火焰附近操作。

5、材料接种好后，将锥形瓶瓶口在酒精灯火焰上转动烧一遍，盖好瓶盖，注明材料名称及接种日期。

材料接种后，应置于26～28℃的培养室中进行培养。

二、植株诱导本阶段是组织培养中最重要的一环。

在培养基中植物激素的作用下，外植体通过三条途径迅速增殖，这就是侧芽增殖、诱导不定芽的形成和诱导胚状体的形成。

1、侧芽增殖种子植物的每个叶腋中通常都存在着腋芽，在一定条件下可以使它生长。

现在知道顶端优势抑制侧芽生长，可被外源的细胞分裂素打破，所以在利用侧芽增殖这条途径时，培养基中几乎都要加入细胞分裂素（有时也加入少量生长素）。

由于细胞分裂素的持续作用，侧芽不断分化和生长，逐渐形成芽丛。

如果反复切割和转移到新的培养基上继代培养，就可在短期内得到大量的芽。

侧芽增殖的主要优点是能保持遗传的稳定性，因为茎尖的细胞常是均一的二倍体细胞，它不易受培养条件的影响而发生变异，也易于保持嵌合体的性状。

目前已有近百种植物可以用这种方法进行繁殖，如草毒、苹果、葡萄、唐菖蒲、非洲菊、月季、甜菜和凤梨等。

关于培养基中加入细胞分裂素的浓度，是0.1～10.0毫克/升，一般为1.0～2.0毫克/升。

在几种细胞分裂素中用的最多的是6-苄基嘌呤，其次是激动素和异戎基腺苷，玉米素用的很少。

烟草的组织培养与植株再生作者：梁程李一鹏来源：《读天下》2017年第10期摘要：在MS培养基上，接种烟草无菌苗的叶片，分别放在光照和黑暗条件下诱导愈伤组织，接种于MS分化培养基上，在光照下分化再生植株。

结果表明：光照和植物生长调节剂对植物愈伤组织的诱导和植株再生产生影响。

关键词：烟草；愈伤组织；植株再生一、实验目的1. 掌握植物组织培养的方法和要点。

2. 学习培养基配制方法、步骤及叶片培养环节中，外植体灭菌、接种、培养观察等技术环节。

3. 了解外植体脱分化及再生过程。

二、材料与器材1. 植物材料：烟草叶片。

2. 实验药品：MS培养基、蔗糖、琼脂、升汞、NAA、6-BA、NaOH。

3. 仪器设备：高压灭菌锅、光照培养箱、天平、pH计、超经工作台、酒精灯。

4. 器械及用具：镊子、手术刀、记号笔等。

5. 玻璃器皿：培养瓶、量筒、容量瓶等。

三、实验步骤（一） MS培养基母液配制大量元素配成50倍母液，使用时每1L培养基需要从母液中取20mL。

配制母液时应做到分别称量，充分溶解，在混合次序上应最后加入Ca2+，混合时要边加边混合。

微量元素配成100倍母液，使用时每配制1L培养基从母液中取10mL，配制时应注意充分溶解后再依次混合。

铁盐单独配制，与其他元素混合易造成沉淀。

一般采用螯合铁，即FeSO4与EDTA钠盐的混合物，一般扩大100倍。

EDTA钠盐须用温水溶解，然后与FeSO4液混合，在75℃～80℃之间让其螯合1h。

使用螯合铁的目的是避免沉淀，并使培养基能缓慢不断地供应Fe2+。

有机物质可配成100倍浓缩液，使用时每1L培养基加10mL。

（本次实验采用培养基粉末代替较为方便）（二）培养基的配制取1000mL烧杯，先加入500mL的蒸馏水，然后根据培养基成分及用量，吸取各种母液加入烧杯，称取蔗糖（一般用量3%）、琼脂（一般6～8g/L），按需要的浓度加入植物激素，加水至800mL，加热使琼脂融化，定容到1000mL，用1NNaOH或HCl调pH至5.8。

植物器官和组织培养的基本程序离体的植物器官和组织在人工培养条件下，通过不同的器官发生途径，形成体细胞胚或茎芽，进一步再生成完整植株。

因此，植物器官和组织培养的基本程序包括：无菌外植体的获得、初代培养物的建立、形态发生、植株再生以及培养产物的观察记载。

一、无菌外植体的获得从自然界和室内采集的植物器官和组织材料携带有各种微生物，这些污染源一旦进入培养容器中，造成培养基和培养材料污染，实验无法进行。

所以，污染是组织培养的一大障碍。

利用各种灭菌剂可以进行外植体的灭菌，但不同植物或同一植物不同器官和组织的带菌程度不同，所用灭菌剂的种类、浓度及灭菌方法也不尽相同。

(一)茎尖、茎段、叶片的灭菌灭菌前外植体用清水冲洗，茸毛较多的外植体用皂液洗涤后再用清水冲洗、用吸水纸吸干表面水分；将外植体浸泡在0.1%～0.2%的氯化汞溶液中2～10min，或先在70%～75%酒精中浸数秒，然后在10%次氯酸钙溶液中浸泡10～20min。

或先在70%～75%酒精中浸泡数秒，再在2%次氯酸钠溶液中浸泡15～30min进行灭菌；灭菌后倒掉灭菌液，无菌水冲洗外植体3～5次，置外植体于无菌滤纸上吸干表面水分，适当分割后接种。

(二)根、块茎、鳞茎的灭菌这类材料生长在土中，灭菌较困难，且挖取时易受损伤。

所以灭菌前应仔细清洗，对凹凸不平及鳞片缝隙处，需用软刷清洗，并切除损伤部位。

灭菌时应增加灭菌时间或增大灭菌剂浓度，如将外植体浸泡在0.1%～0.2%氯化汞溶液中5～12min，或在70%～75%酒精中浸数秒，然后用6%～10%次氯酸钠溶液浸5～20min进行灭菌。

灭菌后的操作步骤同上。

(三)花蕾的灭菌未开放花蕾中的花药为花被包裹，处于无菌状态，所以采摘后可直接灭菌。

灭菌时先在70%～75%酒精中浸蘸10～30s，然后在0.1%氯化汞溶液中浸泡3～10min或在1%次氯酸钠溶液中浸泡10～20min。

灭菌后的处理同上。

(四)果实、种子的灭菌这类材料有的表皮具有茸毛或蜡质。