第八章 工业微生物代谢控制育种
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工业微生物育种摘要:本文综述了工业微生物遗传育种的历史地位,介绍了遗传育种的方法和机理,并对其前景进行了展望。
关键词:工业微生物;遗传育种;方法;机理工业微生物育种也就是菌种改良,是运用遗传学原理和技术对某种具有特定生产目的的菌株进行改造,去除不良性质,增加有益新性状,以提高产品的产量和质量的一种育种方法[1],使我们获得所需要的高产、优质和低耗的菌种,其目的是改良菌种的特性,使其符合工业生产的要求。
当前菌种选育的基本内容是根据菌种自然变异而进行的自然选育,以及用人工方法引起菌种变异,再按照工业生产的要求进行筛选来获得新的变种。
工业微生物遗传育种的主要方法有经典的自然选育和诱变育种技术,使菌种发生突变,存优去劣,这是目前普遍采用的方法,容易施行,易见成效;另一条途径是研究目的物的基因结构及基因调控、表达的方式,进行基因重组、转殖,使之高效表达。
工业微生物菌种的选育,不仅可提高目的物的产量,使目的物产量上百上千倍的提高,大大降低生产成本,提高经济效益,而且通过微生物菌种的选育,可简化工艺,减少副产品,提高产品质量,改变有效成分组成,甚至获得活性更高的新成分[2]。
本文主要从工业微生物遗传育种的历史地位、方法与技术、理论机理和发展前景综述了工业微生物育种的研究进展。
1 历史地位工业微生物菌种选育在发酵工业历史有着重要的地位,是决定发酵产品能否具有工业化价值及发酵过程成败与否的关键。
菌种选育技术的广泛应用为我们提供了各种类型的突变菌株,使得在食品工业、医药、农业、环境保护、化工能源、矿产开发等领域产生众多新的产品,促使传统产业的技术改造和新型产业的产生,同时使诸如抗生素、有机酸、维生素、色素、生物碱、激素以及其它生物活性物质等产品的产量成倍甚至成千万倍地增长,并且产品的质量也不断的提高。
如青霉素是于1929 年英国Flemirlg 发现的,当时的利用表面培养只能获得1~2U/ml 青霉素,经过数十载的诱变育种使其产量提高到目前的90000U/ml,以及由最初的纯度20%和得率35%提高到纯度99.9%和得率90%[3],与此同时链霉素、土霉素、金霉素和氯霉素等抗生素也大规模的生产起来;在代谢控制育种的推动下使得产氨基酸、核苷酸、有机酸等次生代谢产物的高产菌株大批投入生产;由基因工程构建的工程菌株使得微生物次生代谢产物生产能力迅速提高,而且生产出微生物本生不能生产的外源蛋白质,如胰岛素、生长激素、单克隆抗体和细胞因子等等。
1)工业微生物:在发酵工艺中已经应用的或者具有潜在应用价值的微生物。
2)用于工业生产的微生物微生物菌种的特征:1.遗传稳定2.多产3.纯种4.生长旺盛5.产生产物时间短6.产物易分离7.抗性强8.能保持较长的良好经济性能9.菌株对诱变剂处理较敏感10.在规定的时间内,菌种必须产生预期数量的目的产物,并保持相对的稳定。
3)自然选育方法:诱变育种、杂交育种、代谢控制育种、基因工程育种。
4)基因突变:是指基因在结构上发生碱基对组成或排列顺序的改变。
特点:自发性、诱发性、独立性、稀有性、遗传性、可逆性、不对应性。
1.同义突变和无义突变2.错义突变3移码突变。
突变的表现型:形态突变型、生化突变型(营养缺陷型)、条件突变型(温度突变型)、抗性突变型、抗原突变型、产量突变型。
突变修复:光修复、切补修复、重组修复、SOS修复、DNA聚合酶的校正作用。
表现延迟:微生物通过自发突变或人工诱变而产生的新基因型,需要经过2个世代以上繁殖复制才能表现出来。
(波动实验)5)诱变剂:凡能诱发生物基因突变,并且突变频率远远超过自发突变率的物理因子或化学物质。
种类:物理诱变剂、化学诱变剂、生物诱变剂。
6)紫外线诱变:光谱范围40~390nm。
有效波长200~300nm。
最有效的波长253.7nm。
相对剂量15w 30cm 紫外线诱变机制:形成嘧啶二聚体。
紫外线诱变的步骤和方法:1.出发菌株的选择2.将菌种培养到最佳生理状态(对数期)约16~24小时。
霉菌和放线菌培养到大部分孢子刚刚萌发3.制备菌悬液4.紫外线照射:紫外灯先预热20分钟稳定光波取单细胞悬液5~6ml于于灭菌培养皿中放在离灯30cm处5.后培养6稀释涂皿。
7)化学诱变剂:是一类能对DNA起作用改变起结构并引起遗传变异的化学物质。
种类:碱基类似物、烷化剂、移码突变剂特点:作用专一性、具有毒性、90%以上是剧毒药品或者致癌物质。
8)碱基类似物:是一类和天然的嘧啶嘌呤等四种碱基分子结构相似的物质。
1.工业微生物育种在发酵工业中的作用如何?其目的是什么?工业微生物育种建立在:(1)遗传和变异(微生物遗传学)的基础之上;(2)物理和化学诱变剂的发现和应用;(3)工业自动化(自动仪表装置和微机)。
工业微生物育种在发酵工业中占有重要地位,是决定该发酵产品能否具有工业化价值及发酵过程成败与否的关键。
2.工业微生物发展经历了哪几个阶段?1)自然选育阶段2)人工诱变选育阶段3)杂交育种阶段4)代谢控制育种阶段5)基因工程育种阶段3.工业微生物育种的核心指标有哪些?1)在遗传上必须是稳定的。
稳定性。
2)易于产生许多营养细胞、孢子或其它繁殖体。
3)必须是纯种,不应带有其他杂菌及噬菌体。
4)种子的生长必须旺盛、迅速。
5)产生所需要的产物时间短。
转化率。
6)比较容易分离提纯。
7)有自身保护机制,抵抗杂菌污染能力强。
8)能保持较长的良好经济性能。
产率。
9)菌株对诱变剂处理较敏感,从而可能选育出高产菌株。
10)在规定的时间内,菌株必须产生预期数量的目的产物,并保持相对地稳定。
4.革兰氏阳性和阴性菌的细胞壁结构有何差异?它们对溶菌酶和青霉素的敏感有何不同?5.缺壁细菌有哪些类型和异同?制备缺壁细菌主要有哪些途径?原生质体:G+菌经溶菌酶或青霉素处理;球状体:G-菌,残留部分细胞壁。
是研究遗传规律和进行原生质体育种的良好实验材料。
L型细菌:自发突变形成细胞壁缺陷菌株;6.原生质体制备时,为什么不同微生物要选择不同的酶?举例说明。
酶在原生质体制备中主要用来酶解细胞壁的,不同的微生物其细胞壁成分及含量可能不同,所以要用不同的酶。
酵母菌的细胞壁主要成分有葡聚糖、甘露聚糖蛋白质、几丁质。
霉菌的细胞壁:主要成分是纤维素、几丁质、葡聚糖等。
藻类的细胞壁:主要成分有纤维素构成结构骨架。
7.基因组、基因、密码子、简并、同义密码子的概念是什么?一、基因组1. 原核生物就是它的整个染色体,原核生物的基因组较小,DNA的含量低,如E.coli的DNA分子质量为2.4×109Da,相当于4.2×106bp,含有3000-4000个基因,SV40病毒仅5个基因。
1.工业微生物育种在发酵工业中的作用如何?其目的是什么?工业微生物育种建立在:(1)遗传和变异(微生物遗传学)的基础之上;(2)物理和化学诱变剂的发现和应用;(3)工业自动化(自动仪表装置和微机)。
工业微生物育种在发酵工业中占有重要地位,是决定该发酵产品能否具有工业化价值及发酵过程成败与否的关键。
2.工业微生物发展经历了哪几个阶段?1)自然选育阶段2)人工诱变选育阶段3)杂交育种阶段4)代谢控制育种阶段5)基因工程育种阶段3.工业微生物育种的核心指标有哪些?1)在遗传上必须是稳定的。
稳定性。
2)易于产生许多营养细胞、孢子或其它繁殖体。
3)必须是纯种,不应带有其他杂菌及噬菌体。
4)种子的生长必须旺盛、迅速。
5)产生所需要的产物时间短。
转化率。
6)比较容易分离提纯。
7)有自身保护机制,抵抗杂菌污染能力强。
8)能保持较长的良好经济性能。
产率。
9)菌株对诱变剂处理较敏感,从而可能选育出高产菌株。
10)在规定的时间内,菌株必须产生预期数量的目的产物,并保持相对地稳定。
4.革兰氏阳性和阴性菌的细胞壁结构有何差异?它们对溶菌酶和青霉素的敏感有何不同?5.缺壁细菌有哪些类型和异同?制备缺壁细菌主要有哪些途径?原生质体:G+菌经溶菌酶或青霉素处理;球状体:G-菌,残留部分细胞壁。
是研究遗传规律和进行原生质体育种的良好实验材料。
L型细菌:自发突变形成细胞壁缺陷菌株;6.原生质体制备时,为什么不同微生物要选择不同的酶?举例说明。
酶在原生质体制备中主要用来酶解细胞壁的,不同的微生物其细胞壁成分及含量可能不同,所以要用不同的酶。
酵母菌的细胞壁主要成分有葡聚糖、甘露聚糖蛋白质、几丁质。
霉菌的细胞壁:主要成分是纤维素、几丁质、葡聚糖等。
藻类的细胞壁:主要成分有纤维素构成结构骨架。
7.基因组、基因、密码子、简并、同义密码子的概念是什么?一、基因组1. 原核生物就是它的整个染色体,原核生物的基因组较小,DNA的含量低,如E.coli的DNA分子质量为2.4×109Da,相当于4.2×106bp,含有3000-4000个基因,SV40病毒仅5个基因。
工业微生物的基因调控和代谢途径研究随着现代科学技术的不断进步,工业微生物的生产应用已经在人类经济生活中扮演着十分重要的角色。
其中,微生物的基因调控和代谢途径研究是推动微生物在工业中应用的主要因素之一。
一、基因调控研究在微生物产业中,基因调控技术已经成为了关键性的技术之一。
利用基因工程技术,人们可以改变微生物在生长和代谢上的特性,进而达到改善微生物工业生产的效率和质量的效果。
1. CRISPR-Cas9CRISPR-Cas9是一种新型的基因编辑技术,因其具有精确性、高效能和低成本等特点而被广泛应用于微生物生产领域。
CRISPR-Cas9技术可以准确地剪切目的基因,并通过对基因重构来改变微生物在代谢和生长方面的特性。
2. 质粒工程质粒工程是基于嵌合技术,通过亲和性纯化和DNA重组等方法来改变自然界中微生物中某些潜在有用的基因或代谢途径的表达。
这种技术可以大大提高微生物生产的效率和质量。
3. RNAiRNAi是一种基因沉默技术,它可以通过转录后基因剪切导致RNA的降解来抑制某些基因的表达。
在工业微生物生产中,RNAi技术被广泛应用于微生物代谢途径的调节方面。
二、代谢途径研究微生物在不同环境中的代谢途径差异可以通过基因调控技术来调节,从而达到工业应用的目的。
微生物代谢途径的研究涉及到微生物的生长、物质代谢和大量有机物生产等方面。
1. 代谢通路分析代谢通路分析主要是通过系统生物学方法来分析和探究微生物物质代谢的途径和规律。
通过对微生物代谢通路的建模和研究,可以发现一些新的代谢途径,或者通过调节特定酶的表达,来改变微生物代谢途径,提高产品产率。
2. 代谢调控代谢调控是指对微生物的代谢通路进行调节,以改变微生物的生长和产物产率。
代谢调控技术通过基因工程技术来改变微生物在代谢途径中的基因表达,或者通过添加新的合成途径来提高微生物的产物产率。
通过代谢调控技术,可以在短时间内快速地改善微生物工业生产的效率和质量。
三、结论基因调控和代谢途径研究是推动微生物在工业中应用的主要因素之一。