PAGE凝胶快速银染试剂盒使用说明

关键词：413字
1、快速银染4.8%
2、SDS-PAGE胶2.1%
DHS凝胶染色仪操作说明
利用自动凝胶染色仪可以一次快速银染4块SDS-PAGE胶，可用于1D凝胶或2D凝胶的染色。

1、设定染色程序：
A．时间，试剂加入顺序按照实际染色要求设定。

B．设定试剂体积和进/排液管路，相应进液排液管路放置好对应的试剂和容器。

进液量最大可以满足4块40cm*35cm胶同时银染，以达到快速银染的效果。

C．请注意在染小块SDS-PAGE胶时使用隔板把染色池分割成小块，并降低摇动频率，防止SDS-PAGE胶互相碰撞产生碎胶堵塞排液孔。

一般速度设定在10rpm。

2、放入凝胶
快速银染多块凝胶时，需用硅胶垫隔开每块凝胶，保证每块凝胶之间有间隙。

合上染色池盖。

3、点击‘run program’开始运行。

4、等待程序自动完成后取出凝胶。

如果染色过程中需要停止当前步骤，点击‘stop’按键，
按照屏幕提示继续此步骤、跳过此步骤或停止整个染色程序。

5、取出凝胶保存，回收染液。

至此整个快速银染的实验过程结束。

常用快速银染程序时间为：染色4-5mins，双蒸水冲洗30s，显色2-3mins，双蒸水冲洗30s。

附：DHS自动凝胶染色仪预设的DNA银染程序：。

蛋白快速银染试剂盒操作步骤及注意事项蛋白快速银染试剂盒操作步骤及注意事项货号：G0180规格：20T有效期：6个月有效。

产品内容：试剂(A):Silver Stain Sensitizer(500×)2×1ml RT试剂(B):Silver Stain(100×)10ml RT避光试剂(C):Silver Stain Developer(5×)2×100ml RT避光试剂(D):Silver Stain Stop Buffer(10×)100ml RT产品说明：蛋白快速银染试剂盒(Protein Fast Silver Stain Kit)是一种快速的可用于SDS-PAGE 或非变性PAGE等蛋白银染染色的试剂盒，该试剂盒含有增敏步骤，可明显降低背景。

其优点还在于：1、操作简单、快速；2、可用于2D凝胶的银染，并可进行后续的质谱检测；3、目的条带清晰；4、不含甲醇。

Protein Fast Silver Stain Kit与Protein Silver Stain Kit 相比，前者操作速度更快，当检测灵敏度可能低于后者，尤其是在检测小分子量蛋白质的时候。

本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

自备材料：1、水平摇床或侧摆摇床2、去离子水(超纯)3、乙醇、冰乙酸操作步骤(仅供参考)：1、准备工作：以下操作以8.5×5.5cm、厚度为1.0mm的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶液为准，一般用量是25ml，对于凝胶体积较大的，各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。

整个银染过程应在摇床上进行，摇床转速控制在60～70rpm。

提前配制固定液，即按无水乙醇:冰乙酸:去离子水=5:1:4的比例配制。

提前配制洗涤液，即按无水乙醇:去离子水=1:4的比例配制。

2、水洗：电泳结束后，取凝胶放入去离子水中清洗2次，每次5min。

3、固定：取凝胶放入50～100ml固定液中，在摇床上室温摇动15～20min，重复固定步骤1次。

产品货号：S6171S, S6171产品规格：10 gels, 125 gels储存条件：A-D组分4℃保存，E组分-20℃保存，有效期见外包装。

产品组分产品介绍PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒（10%）采用预混液形式的配方，制胶时只需加入改良型促凝剂即可，方便快捷。

上层胶为彩色（紫色）凝胶，便于点样。

本产品制备的凝胶也可用于非变性PAGE胶电泳实验。

本试剂盒配备改良型促凝剂，无TEMED刺激性气味，稳定性好、催化效果佳，制备一块或多块凝胶仅需二十分钟左右。

为方便取用，已开盖的改良型促凝剂可置于4℃保存至少3个月。

制胶数量（125 gels）：125块（0.75 mm）；＞90块（1.00 mm）；＞60块（1.50 mm）实验步骤1. 根据需要制备的凝胶厚度，取等体积下层胶溶液和下层胶缓冲液，混匀；加入相应体积的改良型促凝剂，混匀。

2. 立即将配制好的下层胶注入玻璃板内，使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长0.5 cm即可，加入适量水或无水乙醇液封，待下层胶凝固，约10-15 min（当液封溶液和胶之间可见明显分界线时，说明胶已凝固），倒去上层溶液。

注：1）溶液配制体积是过量的，可留少许于管中，便于观察凝胶状态；2）室温较低时，凝固速度较慢，需适当延长凝胶时间。

3. 根据需要制备的凝胶厚度，取等体积上层胶溶液和彩色上层胶缓冲液，混匀；加入相应体积的改良型促凝剂，混匀。

4. 立即将配制好的上层胶注入玻璃板中，插入梳子，待上层胶凝固（5-10 min）拔出梳子。

凝胶配制如下：注：1）尽量使用新鲜配制的电泳缓冲液；2）推荐电泳条件：150V，约50 min 或200 V，约35 min。

注意事项1. 本产品制备的上层凝胶对样品没有浓缩效应，类似于预制胶，与传统PAGE胶相比，蛋白条带分离效果更好，小分子蛋白（比如10 kDa）也可以清晰地分离开，且蛋白条带更窄更锐利。

2. 改良型促凝剂的用量可根据个人习惯和经验调整，加入较多的促凝剂可以加速凝胶，反之亦然。

PH0331|SDS-PAGE凝胶制备试剂盒(SDS-PAGE Gel Kit)Catalog No：PH0331Size：☐30~50gels Storage：Store@RT◆简介我们生产的SDS-PAGE凝胶配制试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。

SDS-PAGE凝胶配制试剂盒可用于配制SDS-PAGE凝胶，也可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。

本试剂盒约可配制30-50块常规大小的PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶)。

◆组分名称规格保存条件30%丙烯酰胺(29:1)100ml4℃（避光）1M Tris-HCl,pH8.8100ml RT1M Tris-HCl,pH6.815ml RT过硫酸铵干粉0.5g RT10%SDS5ml RTTEMED0.5ml4℃度（避光）◆保存Tris-HCl,pH8.8、SDS、Ammonnium persulfate(过硫酸铵)和Tris-HCl,pH6.8室温保存。

30%Acr-Bis(29:1)和TEMED4℃避光保存。

过硫酸铵配制成10%溶液后，分装成小管-20℃保存，通常半年内有效。

◆使用参考一，取5支1.5ml离心管，将过硫酸铵干粉分装成100mg/支，标记好备用。

二，凝胶制备：1，取一支称好的100mg过硫酸铵干粉，加入1ml蒸馏水，混匀，此配好的10%过硫酸铵溶液2－8度可保存一周。

洗干净电泳玻璃板，夹好。

2，根据目标蛋白分子量大小，选取凝胶浓度，按下附表配制。

先配分离胶，再配浓缩胶。

(可根据用量自行等比加减)【注意】1，TEMED和10%过硫酸铵最后加，在加入前需混匀前面所加试剂。

10%过硫酸铵在4℃有效期为一周(-20℃三个月)，TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。

在常温下胶30分钟内可以凝固，如温度过低，可放37℃温箱凝固。

灌完分离胶后，轻轻的加1ml ddH2O封上层，胶凝固后可见到分界线。

文件号: QC-SOP-102 Page 1 of 4 Version: A/0 Print Date:题目：SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳---银染实验流程目的：为了使员工迅速掌握SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳---银染实验而编写的操作过程。

范围：成员负责部门：QC Quality Assurance Department姓名签字日期起草人：批准人：QA：生效日期：文件号: QC-SOP-102 Page 2 of 4Version: A/0 Print Date:1.概要1.1 本操作流程用来描述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳---银染的标准操作步骤。

2. 适用范围2.1本流程适用于操作人员进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳---银染实验的操作过程。

2.2 本流程适用于在普通实验室中进行操作。

3. 责权3.1质量保证部门有责任确保操作人员接受过该流程相关实验技术及操作的培训。

3.2质量保证部门有责任确保该流程操作完全按照以下规范进行。

3.3质量保证部门有责任定期检查修订本流程。

4. 材料准备4.1 试剂和溶液4.1.1 SDS丙烯酰胺凝胶电泳所需的溶液见SOP-QC-100 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳实验流程4.1.2 固定液30ml甲醇，12ml乙酸，50ml水，50 µl甲醛（100ml）4.1.3 漂洗液35%乙醇的水溶液4.1.4 致敏液0.02%硫代硫酸钠的水溶液4.1.5 银染液0.2%硝酸银的水溶液4.1.6 显色液6g碳酸钠，50µl甲醛，2ml致敏液，加水定容到100ml4.1.7 终止液38ml甲醇，12ml乙酸，加水定容到100ml4.1.8 保存液1%乙酸的水溶液4.1.9 分子量标准蛋白标准分子量参照物使用Fermentas公司的PageRuler（10KD~170KD）4.1.10 蛋白样品待分离的蛋白样品可为纯化的蛋白，也可为细胞裂解液。

4.2 设备：4.2.1 蛋白电泳仪公司BIO-RAD 电源型号PowerPac Universal4.2.2 单道可调式移液器公司Eppendorf文件号: QC-SOP-102 Page 3 of 4Version: A/0 Print Date:4.2.3电子天平公司Acculab4.3 耗材：吸头（T-20，T-200，T-1000，T-5000）烧杯( 50mL，三个)Eppendof离心管玻璃表面皿（2个）5. 相关文件5.1 SOP-PUB-EQU-009 PH计（PB-10型）的操作使用以及清洁保养5.2 SOP-PUB-EQU-010 Acculab电子天平操作、清洁与校准5.3 SOP-PUB-EQU-013 单道可调式移液器（Thermo/Gilson）的操作、清洁与校准5.4 SOP-QC-100 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳实验流程6. 操作步骤6.1. 参照SOP-QC-100 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳实验流程，通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质。

SDS-PAGE配胶试剂盒使用说明书Cat.No：Lot No：原理：本技术中，待分离的样品在有SDS-PAGE和还原剂的存在下通过加热而变性并被去污剂所包被。

SDS可使蛋白质带上大量的负电荷，其带电荷的多少正好与多肽的长度成正比。

聚丙烯酰胺凝胶上样后，在高电压的作用下，蛋白组分向正极（阳极）迁移。

由于所有的蛋白所带的负电荷与其分子大小成正比，因而蛋白就仅仅根据其分子量的大小不同而被分离—凝胶的分子筛效应。

蛋白质的分子量就可以通过与标准蛋白的凝胶迁移率进行比对而得到。

凝胶电泳后，特定的凝胶条带可以通过染色而观察到，并且可通过被动扩散或电洗脱从凝胶上进行回收。

两种最常用的染色方法是考马斯亮蓝法和银染法，这两种方法的蛋白条带检测灵敏度可分别达到50ng和5ng。

由于考马斯亮蓝法使用简便，并可以对收集的蛋白带作进一步分析，因而较为常用。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳应用范围：1）蛋白质纯度的分析；2）蛋白质分子量的测定；3）蛋白质浓度的测定；4）蛋白质水解的分析；5）免疫沉淀蛋白的鉴定；6）免疫印迹的第一步；7）蛋白质修饰的鉴定；8）分离和浓缩用于产生抗体的抗体的抗原；9）分离放射性标记的蛋白质。

试剂盒组成：1．30%预制聚丙烯酰胺胶（4℃保存）200ml2．1.5M TrisCl（PH=8.8）200ml3．1.0M TrisCl（PH=6.8）50ml4．10%SDS 30ml5．10%过硫酸铵（4℃保存）30ml6．去离子水250ml7．TEMED（4℃闭光保存！）1ml8．5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液250 ml9．考马斯亮蓝染色剂50ml10. 考马斯亮蓝脱色剂250ml5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液用时以去离子水1：4稀释，配成1×-甘氨酸电泳缓冲液工作液。

凝胶的配制：（1）将玻璃板安装固定好切误把玻璃弄坏（2）进行分离胶的配制（3）加入TEMED后立即混匀内容物倒入到固定好的玻璃板中，同时留出灌注浓缩胶所需空间（梳子的齿长再加0.5cm）再在胶液面上小心注入一层水（约2—3mm高）以排除气泡和阻止氧气进入凝胶溶液。

PAGE 电泳过程及银染电泳过程1. 将玻璃板装入电泳槽，拧紧。

2. 做封口胶：称量2.5g琼脂，溶于125ml纯净水，放入微波炉大约2min，至冒大泡为止取出。

3. 用10ml的针管将琼脂打入电泳槽底部，左右晃一下使其密封好，待凝。

4. 一个槽的（8％）凝胶的配制：Acr:Bis(30%) 10ml5×TBE 0.75mlddH2O 20ml10%AP 400ulTEMED 20ul500ml Acri:Bis(30%)配制：丙烯酰胺（冷冻）142.5g甲叉丙烯双酰胺（冷冻）7.5g1000ml的5×TBE的配制：Tris 54g硼酸28gEDTA 3.72g 40ml的10%AP的配制：AP 4g配好后用枪头迅速搅动，倒入玻璃槽中，插梳子，待凝。

（动作要快）5. 从4℃冰箱中取出溴酚蓝缓冲液以及PCR产物，用排枪加入2ul 溴酚蓝缓冲液，1000rpm离心5s并编号使其在点样时与电泳仪上的编号一致。

溴酚蓝缓冲液的配制：溴酚蓝0.25g二甲苯青0.25gddH2O 60ml在磁力搅拌器上边加热边剧烈搅拌1至2h冷却蔗糖40g100ml中容量瓶中定容6. 凝胶20分钟后，将电泳槽装好，倒入1×TBE缓冲液，,准备点样。

1×TBE缓冲液用5×TBE稀释。

1000ml 5×TBE 加4000ml ddH2O7. 保证电泳槽奇数号码朝外，将PCR产物序号与电泳槽序号一一对应，开始点样，点样量为1.2ul，点完一个电泳槽后插上电线300V开始跑电泳大约跑25min。

继续点其它的电泳槽。

8. 全部点完后利用跑电泳的时间配溶液。

（1）固定液（小盘）：ddH2O 600ml无水乙醇40ml10%冰乙酸30ml（2）AgNO3溶液：AgNO3 1gddH2O 500ml（3）NaOH溶液：NaOH 9gddH2O 500ml（4）甲醛：甲醛6ml9. 电泳结束，拔下电源，全部跑完后关闭电泳仪电源。

Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒使用说明货号：P1320规格：25块/50块/100块PAGE凝胶产品内容：25T50T100T保存条件49.5%T3%C15ml30ml60ml2-8℃，避光49.5%T6%C50ml100ml200ml2-8℃，避光凝胶缓冲液70ml140ml280ml2-8℃50%甘油30ml60ml120ml室温APS0.25g0.5g 1.0g室温TEMED400ul750ul 1.5ml室温，避光说明书一份一份一份本产品所提供的APS（过硫酸铵）为固体粉末，使用前加入双蒸水溶解即配制成10%APS 溶液（0.5g APS5ml双蒸水），将溶液分装后置于-20℃保存，通常半年内有效。

溶液在使用中可放置4℃保存两周。

产品简介：常规的Tris-SDS-PAGE电泳的只能分辨大分子蛋白，对于相对分子量小的，尤其是10kD以下的蛋白分辨率极低。

而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分离分子量在1-10kD的蛋白及多肽，成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。

本产品包括Tricine-SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂，只需自备蒸馏水，即可制备高质量各种浓度的凝胶，方便、快捷，电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。

注意事项：1、10%APS配制后分装-20度保存。

APS溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换，使用-20度保存的10%APS。

2、在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。

3、在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作，加水时速度不能太快。

4、丙烯酰胺具有神经毒性，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

5、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

配胶说明：分离胶夹层胶浓缩胶20%/4.5ml16.5%/4.5ml15.5%/4.5ml10%/2ml4%/2ml 49.5%T3%C///0.407ml0.160ml 49.5%T6%C 1.82ml 1.50ml 1.395ml//凝胶缓冲液 1.50ml 1.50ml 1.50ml0.667ml0.496ml 50%甘油0.96ml0.96ml0.96ml//ddH2O0.22ml0.54ml0.645m0.926ml 1.344ml 10%APS40µl40µl40µl20µ|20µ| TEMED5µl5µl5µl3µl3µl根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，凝胶浓度配方参考附表。

蛋白凝胶银染试剂盒使用说明书产品编号：SK6020储存条件：RT，保质期1年。

产品内容：产品内容SK6020-25TA液（增敏浓缩液200×）5mlB液（银染浓缩液100×）10mlC液（显色浓缩液5×）2×100mlD液（添加液）5ml说明书1份产品说明：本试剂盒采用高灵敏度的银染染料，可应用于变性胶及非变性胶的蛋白染色，具有目的条带清晰、背景低、操作时间可灵活控制的优点。

另外，本试剂盒增加了一步短时敏化作用步骤，可明显降低背景及提升目的条带的亮度。

使用说明：（需自备无水乙醇、冰醋酸）以下操作步骤中各溶液的用量以大小为8.5×5.5cm、厚度为1.0mm的凝胶为例，以凝胶全部浸没到溶液为准，置于摇床上操作，一般用量25ml。

对于大型凝胶，各溶液的配制量需按凝胶体积的比例放大。

注：实验前准备50ml固定液（冰醋酸：乙醇：超纯水=1:4:6）、50ml洗脱液（10%乙醇）和50ml 终止液（5%的冰醋酸）。

1．水洗：电泳完成后，用超纯水洗胶2次，每次洗涤5分钟。

2．固定：用25ml固定液固定凝胶2次，每次固定15分钟。

3．洗脱：用洗脱液洗胶2次，每次洗涤5分钟。

4．水洗：用超纯水洗胶2次，每次洗涤5分钟。

5．增敏：将上一步洗好的凝胶置于增敏液中，室温下准确孵育1分钟后用超纯水洗胶3次，每次洗涤20秒。

增敏液的配制：取A液125μl加入到25ml超纯水中，混匀。

6．银染：弃去超纯水，将凝胶置于银染工作液中孵育30分钟。

银染液的配制：取B液250μl、D液50µl 加超纯水至25ml，混匀。

7．水洗：用超纯水快速洗胶2次，每次洗涤准确控制为20秒。

8．显影：立即将洗好的凝胶浸没在显影液中，室温孵育2-3分钟，直至蛋白条带显示清晰。

显影液的配制：取C液5ml、D液30µl加超纯水至25ml，混匀。

注意：显影30秒内，蛋白条带开始显现，继续显影至2-3分钟。