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福建畜牧兽医第38卷第6期2016年参考文献:[1]Hommee P,Easterday B.Characteristics of A-Turkey-Wis⁃consin-1966virus[J].Avian Dis,1970,14(1):66-74. [2]陈伯伦,张泽纪,陈伟斌.禽流感研究I.鸡A型禽流感病毒的分离与血清学初步鉴定[J].中国兽医杂志,1994,20(10): 3-5.[3]Sun Y,Liu J.H9N2influenza virus in China:a cause ofcon⁃cern[J].Protein Cell,2015,6(1):18-25.[4]殷震,刘景华.动物病毒学[M].2版.北京:科学出版社,1997:736-767.[5]Liu J H,Okazaki K,Mweene A,et al.Genetic conservation ofhemagglutinin gene of H9influenza virus in chicken popu⁃lation in Mainland China[J].Virus Genes,2004,29(3):329-334.[6]Guo Y J,Krauss S,Senne D A,et al.Characterization of thepathogenicity of members of the newly established H9N2 influenza virus lineages in Asia[J].Virology,2000,267:279-288.[7]Brown I H,Banks J,Manvell R J,et al.Recent epidemiolo⁃gy and ecology of influenza A viruses in avian species in Europe and the Middle East[J].Dev Biol(Basel),2006,124: 45-50.[8]Nili H,Asasi K.Natural cases and an experimental study ofH9N2avian influenza in commercial broilerchickens of Iran [J].Avian Pathol,2002,31(3):247-252.[9]Liu D,Shi W,Shi Y,et al.Origin and diversity of novel avianinfluenza A H7N9viruses causing human infection:phylo⁃genetic,structural,and coalescent analyses[J].Lancet,2013,381 (9881):1926-1932.[10]Guan Y,Shortridge K F,Krauss S,et al.Two lineages ofH9N2influenza virus continue to circulate inland-based poultry in southeastern China[J].Intemational Congress Series,200l,1219:187-193.饲料中玉米赤霉烯酮的危害和脱毒方法研究进展吴先斌福建金新农饲料有限公司福建南平353000摘要玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是一种具有类雌激素活性的霉菌毒素,有较强毒性,给畜牧生产及人类健康造成极大威胁。
玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞的毒性作用梁梓森;许利娜;马勇江;邓衔柏;李英;范小龙;李玉谷;宁章勇【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2009(29)7【摘要】采用台盼蓝计数、流式细胞仪分析等方法，离体研究玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞增殖与细胞周期的影响，结果发现：不同质量浓度（1～25mg／L）玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞的增殖均具有显著抑制作用（P〈0．05），并表现出与剂量和处理时间依赖性关系。
高剂量（10～25mg／L）ZEA使小鼠胸腺上皮细胞细胞周期显著阻滞于G2／M期（P〈0．05），并存在剂量依赖性关系。
这些结果表明，玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞有直接毒害作用。
【总页数】4页(P894-897)【关键词】玉米赤霉烯酮;细胞增殖;细胞周期;胸腺上皮细胞;小鼠【作者】梁梓森;许利娜;马勇江;邓衔柏;李英;范小龙;李玉谷;宁章勇【作者单位】华南农业大学兽医学院【正文语种】中文【中图分类】S852.44【相关文献】1.玉米赤霉烯酮和脱氧血腐镰刀菌烯醇对雌性动物的生殖毒性及作用机制 [J], 高爽;梁珍;邓俊良;杨颜铱;陈芸2.玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺细胞凋亡的影响 [J], 梁梓森;许利娜;马勇江;邓衔柏;范小龙;李玉谷;宁章勇3.玉米赤霉烯酮对小鼠胸腺上皮细胞线粒体的影响 [J], 范小龙;许利娜;剡海阔;邓衔柏;许绮文;梁梓森;马勇江4.呕吐毒素、玉米赤霉烯酮和烟曲霉毒素B1单一及联合致小鼠毒性作用 [J], 张静;朱风华;高晨;陈甫;朱连勤;张婷5.玉米赤霉烯酮与脱氧雪腐镰刀菌烯醇联合染毒对雄性小鼠生殖毒性的影响及茶多酚的缓解作用 [J], 曹利; 吴金节; 王希春; 赵杰; 陈铃霞; 谢昕; 冉梦; 申茂玉; 朱雷; 冯士彬; 李玉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
镰刀菌及玉米赤霉烯酮对家畜繁殖性能的影响及防制
张丁华;王艳丰
【期刊名称】《现代畜牧兽医》
【年(卷),期】2004(000)007
【摘要】2003年9月至2004年4月，我校养殖场饲养的猪、牛、羊等家畜出现繁殖障碍，具体表现为母猪发情期延长，屡配不孕，仔猪初生重小；奶牛发生流产，乳房炎发病率升高；绵羊发情期延长。
经过我们对所用饲料调查及检测，认为是由镰刀菌产生的玉米赤霉烯酮毒素侵害所致。
现笔者对镰刀菌及玉米赤霉烯酮毒素的来源、毒害机理及对家畜繁殖性能的影响及防制作以阐述。
【总页数】2页(P11-12)
【作者】张丁华;王艳丰
【作者单位】河南省农业学校,河南,郑州,451400;河南省农业学校,河南,郑
州,451400
【正文语种】中文
【中图分类】S852.662
【相关文献】
1.脱氧雪腐镰刀菌烯醇与玉米赤霉烯酮联合暴露对r体外培养鸡脾脏淋巴细胞内环境稳态的影响 [J], 任志华;王亚超;邓俊良
2.玉米赤霉烯酮对家畜繁殖性能和人体健康的影响 [J], 单妹;许梓荣;冯建蕾
3.玉米赤霉烯酮对家畜繁殖性能和人体健康的影响 [J], 单妹;许梓荣;冯建蕾
4.玉米赤霉烯酮对家畜繁殖性能和人体健康的影响 [J], 单妹;许梓荣;冯建蕾
5.玉米赤霉烯酮与脱氧雪腐镰刀菌烯醇联合染毒对雄性小鼠生殖毒性的影响及茶多酚的缓解作用 [J], 曹利; 吴金节; 王希春; 赵杰; 陈铃霞; 谢昕; 冉梦; 申茂玉; 朱雷; 冯士彬; 李玉
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玉米赤霉烯酮所致氧化应激的研究进展
王建花;张燚;龙淼
【期刊名称】《畜牧与饲料科学》
【年(卷),期】2015(0)9
【摘要】玉米赤霉烯酮是一种真菌毒素,对动物具有生殖毒性、免疫毒性、细胞毒性、遗传毒性,并有促癌作用,还能引起机体的氧化应激.玉米赤霉烯酮广泛存在于饲料和谷物中,能引起动物慢性中毒、机能异常甚至死亡,对畜牧养殖业危害严重.介绍了玉米赤霉烯酮所致的氧化应激作用及其机制,以期为阐明该作用机制涉及的信号转导通路提供理论依据.
【总页数】3页(P30-32)
【作者】王建花;张燚;龙淼
【作者单位】沈阳农业大学畜牧兽医学院,辽宁沈阳 110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,辽宁沈阳 110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,辽宁沈阳 110866
【正文语种】中文
【中图分类】S859.82
【相关文献】
1.玉米赤霉烯酮对原代大鼠睾丸支持细胞增殖相关基因表达以及氧化应激的影响[J], 徐明龙;郭保平;胡进;牛亚茹;肖成;徐银学
2.玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇对动物毒性的研究进展 [J], 周建川;史东辉;计成
3.粮油作物中玉米赤霉烯酮检测方法研究进展 [J], 刘梅;张晋欣;刘沙沙;马玥
4.中药缓解玉米赤霉烯酮毒性研究进展 [J], 康俊港;李杨;姜国均;刘明超
5.玉米赤霉烯酮脱毒以及植物精油抑菌作用的研究进展 [J], 周英焕;冯雪莲;李留安;焦小丽
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动物营养学报２０１８ꎬ３０(８):３２８５￣３２９２ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ㊀ｄｏｉ:１０.３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００６￣２６７ｘ.２０１８.０８.０４８玉米赤霉烯酮对体外培养鸡脾脏淋巴细胞凋亡的影响李欣虹１㊀郑若愚１㊀辜彦霏１㊀陶思邑１㊀任志华１㊀王亚超２㊀邓俊良１∗(１.四川农业大学动物医学院ꎬ成都６１１１３０ꎻ２.西南科技大学ꎬ绵阳６２１０１０)摘㊀要:本试验旨在研究玉米赤霉烯酮(ＺＥＡ)对体外培养鸡脾脏淋巴细胞凋亡的影响ꎮ选用４０~６０日龄健康的伊莎公鸡ꎬ无菌条件下取脾脏ꎬ制备淋巴细胞悬液ꎮＺＥＡ染毒浓度为０(对照)㊁０.１０㊁０.４０㊁１.６０㊁６.２５和２５.００μｇ/ｍＬꎬ染毒４８ｈ后检测体外培养鸡脾脏淋巴细胞凋亡率㊁坏死率㊁细胞线粒体膜电位㊁细胞内活性氧(ＲＯＳ)含量以及Ｂ淋巴细胞瘤－２(Ｂｃｌ￣２)㊁Ｂｃｌ￣２相关Ｘ蛋白(Ｂａｘ)㊁Ｂａｋ￣１㊁ｐ５３及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶－３(ｃａｓｐａｓｅ￣３)ｍＲＮＡ表达量及细胞培养液上清中上述相应凋亡基因蛋白含量ꎮ结果显示:与对照组比较ꎬＺＥＡ染毒导致鸡脾脏淋巴凋亡率㊁坏死率㊁ＲＯＳ含量㊁细胞培养上清液中ｐ５３㊁Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１及ｃａｓｐａｓｅ￣３的含量以及细胞内ｐ５３㊁Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１及ｃａｓｐａｓｅ￣３的ｍＲＮＡ表达量显著或极显著提高(Ｐ<０.０５或Ｐ<０.０１)ꎬ且随毒素浓度升高而升高ꎻ而ＺＥＡ组细胞线粒体膜电位和上清液Ｂｃｌ￣２含量却极显著低于对照组(Ｐ<０.０１)ꎮ由此可知ꎬＺＥＡ染毒可促进体外培养鸡脾脏淋巴细胞凋亡ꎬ且呈剂量依赖性ꎮ关键词:玉米赤霉烯酮ꎻ鸡脾脏淋巴细胞ꎻ凋亡ꎻ线粒体ꎻ活性氧中图分类号:Ｓ８１６㊀㊀㊀㊀文献标识码:Ａ㊀㊀㊀㊀文章编号:１００６￣２６７Ｘ(２０１８)０８￣３２８５￣０８收稿日期:２０１８－０１－０５基金项目:国家自然科学基金项目(３１４０２２６９)ꎻ四川农业大学２０１８年本科生科研兴趣培养计划项目作者简介:李欣虹(１９９７ )ꎬ女ꎬ四川凉山人ꎬ本科生ꎬ从事动物中毒病理研究ꎮＥ￣ｍａｉｌ:１８７１４２６１７４＠ｑｑ.ｃｏｍ∗通信作者:邓俊良ꎬ教授ꎬ博士生导师ꎬＥ￣ｍａｉｌ:ｄｅｎｇｊｌ２１３＠１２６.ｃｏｍ㊀㊀玉米赤霉烯酮(ＺＥＡ)又称Ｆ￣２毒素ꎬ是由镰刀菌(主要是禾谷镰刀菌ꎬ此外还有三线镰刀菌㊁木贼镰刀菌㊁雪腐镰刀菌以及粉红镰刀菌等)产生的一种类雌激素样霉菌毒素ꎬ在霉变的谷类作物和动物性食品中广泛存在ꎮＺＥＡ可促进细胞凋亡ꎮＫｉｍ等[１]研究发现ꎬＺＥＡ可导致小鼠精细胞严重损害ꎬ出现不同程度的凋亡小体ꎬ且随着作用时间延长和浓度增加而加重ꎬ精原细胞和精母细胞表现更明显ꎮ余增丽等[２]对乳腺癌的ＭＣＦ￣７细胞研究发现ＺＥＡ对细胞的增殖活性是通过调节Ｂ淋巴细胞瘤－２(Ｂｃｌ￣２)基因和Ｂｃｌ￣２相关Ｘ蛋白(Ｂａｘ)基因的表达抑制了细胞凋亡所获得的ꎬ且ＺＥＡ可以显著提高细胞色素Ｐ４５０家族１亚科Ａ多肽１(ＣＹＰ１Ａ１)酶的活性及其ｍＲＮＡ表达ꎮ邓友田等[３]也研究得出ＺＥＡ能够促进Ｂｃ１￣２ｍＲＮＡ和蛋白表达ꎬ而抑制Ｂａｘ的表达ꎬＺＥＡ可提高人乳腺癌细胞系 ＭＣＦ２７细胞增殖活力并促进有丝分裂指数ꎬ并通过对Ｂｃ１￣２和Ｂａｘ表达的调节作用ꎬ抑制雌激素耗尽所诱导的ＭＣＦ２７细胞凋亡ꎮ符达[４]给大鼠饲喂不同剂量的ＺＥＡ发现ꎬＺＥＡ可对大鼠ｐ５３基因第８外显子的构象产生影响ꎬ导致外显子中２个条带上碱基对出现以嘧啶与嘌呤的互换突变为主的突变ꎮ而ｐ５３基因与细胞周期生长的调节㊁细胞转化的调节㊁ＤＮＡ复制及诱导程序性死亡有密切关系ꎬｐ５３基因通过Ｂａｌ￣２家族作用调控细胞凋亡[５]ꎮ在Ｙｕ等[６]关于ＺＥＡ诱导小鼠ＲＡＷ２６４.７巨噬细胞死亡机制的研究中ꎬＺＥＡ染毒处理导致细胞线粒体膜电位的损失及Ｂｃｌ￣２和Ｂａｘ蛋白在线粒体的变化ꎬ细胞质释放细胞色素Ｃ和凋亡诱导因子ꎬ过氧化氢酶抑制ＺＥＡ诱导㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３０卷ＲＡＷ２６４.７细胞减少ꎮ㊀㊀ＺＥＡ作用于免疫系统的主要靶器官是脾脏ꎬ可导致脾脏淋巴细胞凋亡ꎬ进而使机体免疫功能降低ꎮ马勇江等[７]研究ＺＥＡ对离体培养脂多糖活化小鼠脾脏淋巴细胞具有显著促凋亡作用ꎬ且促进强度与其剂量呈依赖性关系ꎮ但目前关于ＺＥＡ对鸡脾脏细胞凋亡方面的研究较少ꎮ因此ꎬ本研究以原代培养鸡脾脏淋巴细胞为模型ꎬ从细胞水平上研究镰刀菌毒素ＺＥＡ染毒对鸡脾脏淋巴细胞的凋亡及其调控基因的影响ꎬ以便阐明ＺＥＡ染毒对鸡脾脏淋巴细胞的影响及其分子机制ꎮ１㊀材料与方法１.１㊀试验材料㊀㊀试验动物:东北农业大学动物医学院动物中心提供的４０~６０日龄健康的伊莎公鸡ꎮ㊀㊀胎牛血清(ＦＢＳ)购自Ｇｉｂｃｏ公司ꎻ４－羟乙基哌嗪乙磺酸(Ｈｅｐｅｓ)㊁ＺＥＡ及无酚红的ＲＰＭＩ１６４０培养基均购自Ｓｉｇｍａ公司ꎻ细胞凋亡检测试剂盒[用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白Ｖ(ＡｎｎｅｘｉｎＶ￣ＦＩＴＣ)和碘化丙啶(ＰＩ)双染]购自ＡＣＴＧｅｎｅ公司ꎻ２ᶄꎬ７ᶄ－二氢二氯荧光黄双乙酸钠(ＤＣＦＨ￣ＤＡ)与罗丹明１２３(Ｒｈ１２３)购自Ｓｉｇｍａ公司ꎻＴｒｉｚｏｌ试剂盒㊁Ｍ￣ＭＬＶ反转录酶㊁ＤＮＡ抽提试剂盒及ＲＮＡ酶均购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司ꎻｒＴａｑ酶等ＰＣＲ反应试剂购自ＴａＫａＲａ(大连)生物公司ꎻ溴化乙锭(ＥＢ)购自Ｓｉｇｍａ公司ꎻ鸡的Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１㊁Ｂｃｌ￣２㊁ｐ５３及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶－３(ｃａｓｐａｓｅ￣３)酶联免疫吸附测定(ＥＬＩＳＡ)检测试剂盒均购自上海生工生物公司ꎮ１.２㊀试验方法１.２.１㊀脾脏淋巴细胞悬液的制备㊁培养及处理㊀㊀在无菌条件下ꎬ将鸡脾脏取出ꎬ放入盛有磷酸盐缓冲液(ＰＢＳ)的培养皿里ꎬ用ＰＢＳ轻轻洗涤脾脏周围的血液残渣ꎬ仔细剥去脾脏周围结缔组织ꎬ将其移入另一个盛有ＰＢＳ并浸泡有２００目网筛的培养皿中ꎬ用镊子将脾脏放在２００目铜网上ꎬ用２０ｍＬ一次性注射器的内芯轻轻研磨ꎬ过滤ꎬ将滤液适当稀释成一定浓度的细胞悬液ꎬ再将细胞悬液移入预先装有鸡淋巴分离液离心管里ꎬ即缓缓以１ʒ１体积比将细胞悬液移入到鸡淋巴分离液上层ꎬ２０００ｒ/ｍｉｎ常温离心１５ｍｉｎꎬ用巴氏吸管移取淋巴细胞ꎬ加入冷的ＰＢＳ洗涤ꎬ１５００ｒ/ｍｉｎ４ħ离心５ｍｉｎꎬ弃去上清液ꎬ加入不含毒素的ＲＰＭＩ１６４０完全培养液(加ＦＢＳ)再洗涤１次ꎬ重悬ꎬ计数ꎬ并用台盼蓝检测细胞活力大于９５％ꎮ㊀㊀前期试验已检测染毒４８ｈ时ꎬＺＥＡ的半抑制浓度(ＩＣ５０)为(２３.９１ʃ４.９６)μｇ/ｍＬꎮ通过ＩＣ５０筛选出ＺＥＡ的作用浓度为对照组０㊁Ｚ１组０.１０μｇ/ｍＬ㊁Ｚ２组０.４０μｇ/ｍＬ㊁Ｚ３组１.６０μｇ/ｍＬ㊁Ｚ４组６.２５μｇ/ｍＬ和Ｚ５组２５.００μｇ/ｍＬ[８]ꎮ１.２.２㊀流式细胞仪测定细胞凋亡率和坏死率㊀㊀染毒培养４８ｈ时ꎬ收集细胞ꎬ１５００ｒ/ｍｉｎ离心３ｍｉｎꎬ用ＰＢＳ洗涤细胞３次ꎮ离心后ꎬ加５００μＬＢｉｎｄｉｎｇＢｕｆｆｅｒ制备细胞悬液ꎬ再加入１０μＬＡｎｎｅｘｉｎＶ￣ＦＩＴＣ和５μＬＰＩꎬ室温避光反应５~１５ｍｉｎꎬ用流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞坏死率ꎬ同时以不加ＡｎｎｅｘｉｎＶ￣ＦＩＴＣ及ＰＩ作为试剂对照ꎮ激发波长为４８８ｎｍꎬＡｎｎｅｘｉｎＶ￣ＦＩＴＣ的绿色荧光通过异硫氰酸荧光素(ＦＩＴＣ)通道(ＦＬ￣１ꎬ５３０ｎｍ)检测ꎬＰＩ的红色荧光通过ＰＩ通道(ＦＬ￣２ꎬ５８５ｎｍ)检测ꎮ每个样品以１００００个细胞计数进行统计ꎬ数据由流式细胞仪的标准计算机程序分析获得ꎮ１.２.３㊀细胞内活性氧(ＲＯＳ)含量的测定㊀㊀染毒培养４８ｈꎬ收集细胞ꎬ１５００ｒ/ｍｉｎ离心３ｍｉｎꎬ后用ＰＢＳ洗涤细胞３次ꎮ选用对细胞内过氧化氢(Ｈ２Ｏ２)特异性结合的荧光染料ＤＣＦＨ￣ＤＡ对细胞内ＲＯＳ进行检测ꎬ用ＰＢＳ悬浮细胞ꎬ加入ＤＣＦＨ￣ＤＡ染液使其终浓度为１００μｍｏｌ/Ｌꎬ混匀ꎬ３７ħ避光孵育３０ｍｉｎꎬＰＢＳ洗涤３次ꎬ在流式细胞仪测定其平均荧光强度(激发波长４８８ｎｍꎬ发射波长５３０ｎｍ)ꎮ１.２.４㊀细胞线粒体膜电位的测定㊀㊀染毒培养４８ｈꎬ收集细胞ꎬ１５００ｒ/ｍｉｎ离心３ｍｉｎꎬ后用ＰＢＳ洗涤细胞２~３次ꎮ选用对线粒体特异性结合的荧光染料罗丹明１２３对线粒体膜电位进行检测ꎬ用ＰＢＳ悬浮细胞ꎬ加入罗丹明１２３染液使其终浓度为５μｇ/ｍＬꎬ混匀ꎬ３７ħ避光孵育３０ｍｉｎꎬＰＢＳ洗涤３次ꎬ在流式细胞仪测定其平均荧光强度(激发波长４８８ｎｍꎬ发射波长５３０ｎｍ)ꎮ１.２.５㊀上清液中Ｂｃ１￣２㊁ｐ５３㊁Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１和ｃａｓｐａｓｅ￣３含量测定(ＥＬＩＳＡ法)㊀㊀染毒培养４８ｈ后ꎬ收集细胞培养上清液ꎬ３０００ｒ/ｍｉｎ离心２０ｍｉｎꎬ吸取上清ꎬ－２０ħ保存备６８２３８期李欣虹等:玉米赤霉烯酮对体外培养鸡脾脏淋巴细胞凋亡的影响用ꎬ按ＥＬＩＳＡ试剂盒说明书测定上清液中Ｂｃ１￣２㊁ｐ５３㊁Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１和ｃａｓｐａｓｅ￣３的含量ꎮ１.２.６㊀细胞内凋亡调控基因Ｂｃ１￣２㊁ｐ５３㊁Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１及ｃａｓｐａｓｅ￣３的ｍＲＮＡ表达测定㊀㊀按ＲＮＡ提取试剂盒说明书操作ꎬ最终获得组织总ＲＮＡꎻ取组织总ＲＮＡ适量ꎬ按ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＲＴ￣ＰＣＲＫｉｔ说明书进行反转录ꎬ将提取的ＲＮＡ转化为ｃＤＮＡꎬｃＤＮＡ保存于－８０ħ备用或立即用于ＰＣＲꎮ根据ＧｅｎＢａｎｋ中发表的鸡的β－肌动蛋白(β￣ａｃｔｉｎ)㊁Ｂｃ１￣２㊁ｐ５３㊁Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１和ｃａｓｐａｓｅ￣３的全基因序列ꎬ应用Ｐｒｉｍｅ５.０软件设计特异的上㊁下游引物ꎬ并经ＧｅｎＢａｎｋＢｌａｓｔ进行同源性检索后由Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司(上海)合成ꎮ引物序列及参数见表１ꎮ表１㊀引物序列及参数Ｔａｂｌｅ１㊀Ｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｓａｎｄｐａｒａｍｅｔｅｒｓ基因Ｇｅｎｅｓ引物序列Ｐｒｉｍｅｒｓｅｑｕｅｎｃｅｓ(５ᶄ ３ᶄ)扩增长度Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｌｅｎｇｔｈ/ｂｐＧｅｎＢａｎｋ登录号ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ.β肌动蛋白β￣ａｃｔｉｎＦ:ＣＡＣＣＡＣＡＧＣＣＧＡＧＡＧＡＧＡＡＡＴＲ:ＴＧＡＣＣＡＴＣＡＧＧＧＡＧＴＴＣＡＴＡＧＣ１３５Ｌ０８１６５Ｂ淋巴细胞瘤－２相关Ｘ蛋白ＢａｘＦ:ＧＴＧＡＴＧＧＣＡＴＧＧＧＡＣＡＴＡＧＣＴＣＲ:ＴＧＧＣＧＴＡＧＡＣＣＴＴＧＣＧＧＡＴＡＡ９０ＸＭ＿４２２０６７.２ｐ５３Ｆ:ＧＡＧＡＴＧＣＴＧＡＡＧＧＡＧＡＴＣＡＡＴＧＡＧＲ:ＧＴＧＧＴＣＡＧＴＣＣＧＡＧＣＣＴＴＴＴ１４５Ｘ１３０５７.１Ｂ淋巴细胞瘤－２Ｂｃｌ￣２Ｆ:ＡＴＣＧＴＣＧＣＣＴＴＣＴＴＣＧＡＧＴＴＲ:ＡＴＣＣＣＡＴＣＣＴＣＣＧＴＴＧＴＣＣＴ１５０Ｚ１１９６１.１Ｂａｋ￣１Ｆ:ＡＴＧＧＡＴＧＣＣＴＧＴＣＴＧＴＣＣＴＧＴＴＣＲ:ＧＣＡＧＡＧＣＡＧＴＣＣＡＡＡＧＡＣＡＣＴＧＡ１０６ＮＭ＿００１０３０９２０.１半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶－３Ｃａｓｐａｓｅ￣３Ｆ:ＡＣＴＣＴＧＧＡＡＴＴＣＴＧＣＣＴＧＡＴＧＡＣＡＲ:ＣＡＴＣＴＧＣＡＴＣＣＧＴＧＣＣＴＧＡ１２９ＮＭ＿２０４７２５.１㊀㊀相关基因ｃＤＮＡ的ＰＣＲ反应体系包括ｃＤＮＡ㊁上游与下游引物㊁高保真酶㊁Ｐｒｅｍｉｘ和ｄｄＨ２Ｏꎬ反应条件为９５ħ预变性３０ｓꎬ按９５ħ变性５ｓꎬ６０ħ退火３４ｓꎬ４０个循环ꎬ４ħ终止反应ꎻ取ＰＣＲ扩增产物于１.５％琼脂糖凝胶电泳２ｈꎬ凝胶成像仪拍照记录ＰＣＲ结果ꎮ１.３㊀数据分析㊀㊀采用ＲＥＳＴ软件(Ｐｆａｆｆｌ)分析毒素处理样品各目的基因ｍＲＮＡ的表达丰度ꎬ应用ＳＰＳＳ１３.０软件对数据进行显著性Ｆ检验及相关性分析ꎻ其中上述各项指标的测定重复３个不同批次的细胞ꎬ每批细胞每个样本重复３次ꎬ数据以平均值ʃ标准差表示ꎬＰ<０.０５为差异显著ꎬＰ<０.０１为差异极显著ꎮ２㊀结㊀果２.１㊀ＺＥＡ对鸡脾脏淋巴细胞凋亡率和坏死率的影响㊀㊀ＺＥＡ对鸡脾脏淋巴细胞凋亡率和坏死率的影响见表２ꎮＺＥＡ染毒时ꎬ细胞凋亡率各组间差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮ细胞坏死率除Ｚ２组和Ｚ３组差异不显著(Ｐ>０.０５)外ꎬ其余各组间差异均极显著(Ｐ<０.０１)ꎮ当ＺＥＡ浓度达到６.２５μｇ/ｍＬ以上ꎬ细胞凋亡和坏死均有所减缓ꎮ㊀㊀除Ｚ５组较Ｚ４组淋巴细胞的凋亡率和坏死率均有所下降外ꎬ其余试验组的细胞凋亡率和坏死率均随ＺＥＡ浓度的升高而升高ꎬ各ＺＥＡ组细胞凋亡率和坏死率均极显著高于对照组(Ｐ<０.０１)ꎻ且同浓度下ꎬ脾脏淋巴细胞的凋亡率均高于坏死率ꎬ表明ＺＥＡ染毒主要导致脾脏淋巴细胞凋亡ꎮ２.２㊀ＺＥＡ对鸡脾脏淋巴细胞内ＲＯＳ含量与线粒体膜电位的影响㊀㊀ＺＥＡ对鸡脾脏淋巴细胞内ＲＯＳ含量与线粒体膜电位的影响见表３ꎮＺＥＡ染毒４８ｈꎬ鸡脾脏淋巴细胞ＲＯＳ含量随毒素浓度的升高而增加ꎬ各ＺＥＡ组ＲＯＳ含量极显著高于对照组(Ｐ<０.０１)ꎻ而线粒体膜电位随毒素浓度的升高而降低(Ｚ３组除外)ꎬ各ＺＥＡ组线粒体膜电位极显著低于对照组(Ｐ<０.０１)ꎮＲＯＳ含量除Ｚ３组与Ｚ４组间差异不显著(Ｐ>０.０５)外ꎬ其余各组间差异显著(Ｐ<７８２３㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３０卷０.０５)ꎻＺＥＡ组间线粒体膜电位差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮ表２㊀ＺＥＡ对鸡脾脏淋巴细胞凋亡率和坏死率的影响Ｔａｂｌｅ２㊀ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＺＥＡｏｎｔｈｅａｐｏｐｔｏｔｉｃｒａｔｅａｎｄｎｅｃｒｏｔｉｃｒａｔｅｏｆｃｈｉｃｋｅｎｓｐｌｅｎｉｃｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ％组别Ｇｒｏｕｐｓ凋亡率Ａｐｏｐｔｏｔｉｃｒａｔｅ坏死率Ｎｅｃｒｏｔｉｃｒａｔｅ对照Ｃｏｎｔｒｏｌ８.４０ʃ０.２０Ｅｆ２.３０ʃ０.０３ＥｅＺ１２４.４０ʃ１.５０Ｄｅ４.１０ʃ０.２０ＤｄＺ２２５.９０ʃ２.４０Ｄｄ４.９０ʃ０.１２Ｃｃ玉米赤霉烯酮ＺＥＡＺ３２９.３０ʃ２.７０Ｃｃ４.９０ʃ０.３０ＣｃＺ４５１.１０ʃ３.４０Ａａ１２.１０ʃ０.８０ＡａＺ５４０.４０ʃ３.００Ｂｂ１０.７０ʃ０.３２Ｂｂ㊀㊀同列数据肩标不同大写字母表示差异极显著(Ｐ<０.０１)ꎬ不同小写字母表示差异显著(Ｐ<０.０５)ꎬ相同小写字母表示差异不显著(Ｐ>０.０５)ꎮ下表同ꎮ㊀㊀Ｉｎｔｈｅｓａｍｅｃｏｌｕｍｎꎬｖａｌｕｅｓｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃａｐｉｔａｌｌｅｔｔｅｒｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓｍｅａｎｅｘｔｒｅｍｅｌｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ(Ｐ<０.０１)ꎬａｎｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｌｅｔｔｅｒｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓｍｅａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ(Ｐ<０.０５)ꎬｗｈｉｌｅｗｉｔｈｔｈｅｓａｍｅｓｍａｌｌｌｅｔｔｅｒｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓｍｅａｎｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ(Ｐ>０.０５).Ｔｈｅｓａｍｅａｓｂｅｌｏｗ.表３㊀ＺＥＡ对鸡脾脏淋巴细胞内ＲＯＳ含量与线粒体膜电位的影响Ｔａｂｌｅ３㊀ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＺＥＡｏｎｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒＲＯＳｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｍｅｍｂｒａｎｅｐｏｔｅｎｔｉａｌｉｎｃｈｉｃｋｅｎｓｐｌｅｎｉｃｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ组别Ｇｒｏｕｐｓ活性氧ＲＯＳ线粒体膜电位Ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｍｅｍｂｒａｎｅｐｏｔｅｎｔｉａｌ对照Ｃｏｎｔｒｏｌ１.４３ʃ０.０３Ｄｅ５.９２ʃ０.０７ＡａＺ１４.０３ʃ０.１２Ｃｄ５.５４ʃ０.１０ＢｂＺ２４.７８ʃ０.１５Ｂｃ４.５８ʃ０.１５Ｄｄ玉米赤霉烯酮ＺＥＡＺ３５.２３ʃ０.１６Ｂｂ５.３２ʃ０.１０ＣｃＺ４５.３１ʃ０.２０Ｂｂ４.０６ʃ０.１０ＥｆＺ５１０.１５ʃ０.３０Ａａ４.１５ʃ０.２０Ｅｅ２.３㊀ＺＥＡ对鸡脾脏淋巴细胞培养上清液中Ｂｃ１￣２㊁ｐ５３㊁Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１和ｃａｓｐａｓｅ￣３含量的影响㊀㊀ＺＥＡ对鸡脾脏淋巴细胞培养上清液中Ｂｃ１￣２㊁ｐ５３㊁Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１和ｃａｓｐａｓｅ￣３含量的影响见表４ꎮ针对Ｂｃｌ￣２含量ꎬ除Ｚ１组与Ｚ２组间差异不显著(Ｐ>０.０５)外ꎬ其余各组间差异均极显著(Ｐ<０.０１)ꎻ针对ｐ５３含量ꎬ各组间均差异显著(Ｐ<０.０５)ꎻ针对Ｂａｘ含量ꎬＺ１组㊁Ｚ２组㊁Ｚ３组和对照组之间差异均不显著(Ｐ>０.０５)ꎬＺ４组和Ｚ５组之间及与上述各组间差异极显著(Ｐ<０.０１)ꎻ针对Ｂａｋ￣１含量ꎬ各组间差异均显著(Ｐ<０.０５)ꎻ针对ｃａｓｐａｓｅ￣３含量ꎬ除Ｚ３组和Ｚ４组间差异不显著(Ｐ>０.０５)外ꎬ其余各组间均差异显著(Ｐ<０.０５)ꎮ㊀㊀由此表明ꎬｐ５３㊁Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１和ｃａｓｐａｓｅ￣３含量随毒素浓度的升高而增加ꎬＢｃｌ￣２含量随毒素浓度的升高而降低ꎬ具有显著的剂量依赖关系ꎮ２.４㊀ＺＥＡ对鸡脾脏淋巴细胞Ｂｃ１￣２㊁ｐ５３㊁Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１和ｃａｓｐａｓｅ￣３ｍＲＮＡ表达的影响㊀㊀ＺＥＡ对鸡脾脏淋巴细胞Ｂｃ１￣２㊁ｐ５３㊁Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１和ｃａｓｐａｓｅ￣３ｍＲＮＡ表达的影响见表５ꎮ针对Ｂｃｌ￣２ｍＲＮＡ表达量ꎬＺ１组㊁Ｚ２组和Ｚ３组间Ｂａｘ/Ｂｃｌ￣２值差异不显著(Ｐ>０.０５)ꎬ但显著高于对照组(Ｐ<０.０５)ꎬＺ４组和Ｚ５组极显著高于其他各组(Ｐ<０.０１)ꎻ针对ｐ５３ｍＲＮＡ表达量ꎬ各ＺＥＡ组极显著高于对照组(Ｐ<０.０１)ꎻ针对ＢａｘｍＲＮＡ表达量ꎬ各组间差异显著(Ｐ<０.０５)ꎻ针对Ｂａｋ￣１ｍＲＮＡ表达量ꎬ除Ｚ２组和Ｚ３组间差异不显著(Ｐ>０.０５)外ꎬ其余各组间差异极显著(Ｐ<０.０１)ꎻ针对ｃａｓｐａｓｅ￣３ｍＲＮＡ表达量ꎬ对照组㊁Ｚ１组㊁Ｚ２组和Ｚ３组间差异不显著(Ｐ>０.０５)ꎬＺ４组和Ｚ５组极显著高于其他各组(Ｐ<０.０１)ꎬ且２组间差异极显著(Ｐ<０.０１)ꎮ㊀㊀由此表明ꎬ除ｃａｓｐａｓｅ￣３ｍＲＮＡ表达量在Ｚ１８８２３８期李欣虹等:玉米赤霉烯酮对体外培养鸡脾脏淋巴细胞凋亡的影响组㊁Ｚ２组和Ｚ３组略小于对照组外ꎬＢａｘ/Ｂｃｌ￣２值以及Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１和ｃａｓｐａｓｅ￣３的ｍＲＮＡ表达量随毒素浓度的升高而增加ꎬ具有显著的剂量依赖关系ꎮ表４㊀ＺＥＡ对鸡脾脏淋巴细胞培养上清液中Ｂｃ１￣２㊁ｐ５３㊁Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１和ｃａｓｐａｓｅ￣３含量的影响Ｔａｂｌｅ４㊀ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＺＥＡｏｎｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆＢｃ１￣２ꎬｐ５３ꎬＢａｘꎬＢａｋ￣１ａｎｄｃａｓｐａｓｅ￣３ｉｎｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔｓｏｆｃｈｉｃｋｅｎｓｐｌｅｎｉｃｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ组别ＧｒｏｕｐｓＢ淋巴细胞瘤－２Ｂｃｌ￣２/(μｇ/Ｌ)ｐ５３/(ｐｇ/Ｌ)Ｂ淋巴细胞瘤－２基因相关Ｘ蛋白Ｂａｘ/(μｇ/ｍＬ)Ｂａｋ￣１/(ｎｇ/Ｌ)半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶－３Ｃａｓｐａｓｅ￣３/(ｐｍｏｌ/Ｌ)对照Ｃｏｎｔｒｏｌ４８.８４ʃ１.５１Ａａ２７０.４６ʃ２０.７２Ｃｆ５.２０ʃ０.０６Ｃｃ１７０.３１ʃ６.７２Ｃｆ１１.１８ʃ１.５２ＣｅＺ１３１.７６ʃ１.４５Ｂｂ２８２.０２ʃ７.５４Ｃｅ５.２１ʃ０.３３Ｃｃ１７９.８１ʃ２.２４Ｃｅ１３.４５ʃ１.４７ＣｄＺ２３０.７３ʃ１.６３Ｂｂ３０７.３６ʃ５.６６Ｃｄ５.３１ʃ０.１５Ｃｃ２１４.６４ʃ５.２２Ｃｄ２１.３４ʃ０.４５Ｂｃ玉米赤霉烯酮ＺＥＡＺ３２５.２１ʃ１.３１Ｃｃ５８８.７８ʃ２３.７１Ｂｃ５.７３ʃ０.２０Ｃｃ３３１.８０ʃ２.２４Ｂｃ２６.７０ʃ０.５３ＡＢｂＺ４２０.１３ʃ１.４２Ｄｄ６３２.８０ʃ１３.２０Ｂｂ８.６７ʃ０.２１Ｂｂ４１０.９６ʃ３.７３Ａｂ２７.２８ʃ０.５０ＡＢｂＺ５１４.７４ʃ１.２７Ｅｅ８１８.１９ʃ１１.３２Ａａ１１.１７ʃ０.４０Ａａ４４７.７２ʃ２６.０３Ａａ３０.９９ʃ０.６０Ａａ表５㊀ＺＥＡ对鸡脾脏淋巴细胞Ｂｃ１￣２㊁ｐ５３㊁Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１和ｃａｓｐａｓｅ￣３ｍＲＮＡ表达的影响Ｔａｂｌｅ５㊀ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＺＥＡｏｎｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢｃ１￣２ꎬｐ５３ꎬＢａｘꎬＢａｋ￣１ａｎｄｃａｓｐａｓｅ￣３ｉｎｃｈｉｃｋｅｎｓｐｌｅｎｉｃｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ组别ＧｒｏｕｐｓＢ淋巴细胞瘤－２基因相关Ｘ蛋白/Ｂ淋巴细胞瘤－２Ｂａｘ/Ｂｃｌ￣２ｐ５３Ｂ淋巴细胞瘤－２基因相关Ｘ蛋白ＢａｘＢａｋ￣１半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶－３Ｃａｓｐａｓｅ￣３对照Ｃｏｎｔｒｏｌ１.００ʃ０.０４Ｄｅ１.００ʃ０.０２Ｃｆ１.００ʃ０.１１Ｃｆ１.０２ʃ０.０８Ｅｅ０.９８ʃ０.０３ＣｃＺ１１.１７ʃ０.０４ＣＤｃｄ１.２３ʃ０.０８Ｂｄ１.２５ʃ０.０１Ｂｅ１.３７ʃ０.０５Ｄｄ０.９６ʃ０.０５ＣｃＺ２１.２１ʃ０.０６ＣＤｃｄ１.４６ʃ０.１０Ａｂ１.４０ʃ０.０３ＡＢｄ１.５２ʃ０.０４Ｃｃ０.９４ʃ０.０５Ｃｃ玉米赤霉烯酮ＺＥＡＺ３１.３１ʃ０.０２Ｃｃ１.３６ʃ０.０９Ｂｃ１.４３ʃ０.０９ＡＢｃ１.５５ʃ０.０５Ｃｃ０.９３ʃ０.０４ＣｃＺ４１.５７ʃ０.０６Ｂｂ１.５２ʃ０.０７Ａａ１.４４ʃ０.１０ＡＢｂ２.１２ʃ０.０５Ｂｂ１.３３ʃ０.０３ＢｂＺ５３.２３ʃ０.１５Ａａ１.３２ʃ０.０３Ｂｄ１.５９ʃ０.０８Ａａ３.１８ʃ０.０４Ａａ３.７３ʃ０.２５Ａａ３㊀讨㊀论㊀㊀本实验室前期研究表明ꎬＺＥＡ在体内试验中可以诱导小鼠肾脏细胞㊁脑细胞和肝脏细胞的凋亡[８－１１]ꎬ在体外试验中可以诱导猪脾脏淋巴细胞凋亡[１２]ꎮ在本试验中ꎬＺＥＡ可以诱导体外培养鸡脾脏淋巴细胞凋亡ꎬ结果和前期试验结果一致ꎮ㊀㊀线粒体在氧化代谢过程中产生大量ＲＯＳꎮ在自由基产生过多或抗氧化防御系统作用减弱时ꎬ机体不能有效清除线粒体内ＲＯＳꎬ造成蓄积ꎬ过量蓄积的ＲＯＳ可氧化线粒体渗透性转运孔上的相应氧化还原敏感位点ꎬ导致线粒体膜电位降低㊁线粒体肿胀和进一步产生ＲＯＳꎬ进而造成线粒体的氧化损伤[１３]ꎮ本研究结果表明ＺＥＡ染毒使鸡脾脏淋巴细胞内ＲＯＳ大量积累ꎬ线粒体膜电位极显著下降ꎬ和上述研究一致ꎮ㊀㊀细胞凋亡的信号传导途径是经过特殊的死亡信号激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶系统来实现的[１４]ꎮｃａｓｐａｓｅ￣３是在多种诱导剂刺激后导致凋亡的关键酶ꎬ它的活化预示着细胞凋亡执行阶段的开始ꎮ正常情况下ꎬ它以酶原形式存在于胞质中ꎬ当细胞接受凋亡刺激时ꎬ它被系列反应激活ꎬ进而诱导细胞发生凋亡[１５－１７]ꎮＺＥＡ可诱导猪卵巢颗粒细胞凋亡依赖半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶凋亡通路[１８]ꎮ本研究结果显示ꎬＺＥＡ能够诱导体外培养鸡脾脏淋巴细胞ｃａｓｐａｓｅ￣３的ｍＲＮＡ表达量增加ꎬ分泌在上清液中的ｃａｓｐａｓｅ￣３蛋白也增加ꎬ且呈剂量效应关系ꎬ和上述试验结果一致ꎮ㊀㊀在细胞凋亡过程中ꎬｐ５３蛋白起着至关重要的作用ꎮｐ５３蛋白主要集中于核仁区ꎬ能与ＤＮＡ特９８２３㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３０卷异结合ꎬ具有明显的细胞转化抑制作用ꎬ对保护细胞基因组ＤＮＡ的完整性具有重要作用ꎮ如果ＤＮＡ受到外来损伤ꎬｐ５３可作为转录因子诱导一系列下游基因的表达ꎬ介导细胞停止在Ｇ期ꎬ使ＤＮＡ有足够的时间得到修复ꎮ如果ＤＮＡ损伤严重ꎬ修复失败㊁并且不可逆则ｐ５３启动凋亡程序诱导细胞凋亡[１９]ꎮＡｙｅｄＢｏｕｓｓｅｍａ等[２０]研究ＺＥＡ对人的肝细胞是激活ｐ５３ꎬ通过ｐ５３途径以剂量依赖方式诱导细胞凋亡ꎮＹｕ等[６]研究ＺＥＡ对ＲＡＷ２６４.７巨噬细胞的毒性作用ꎬ其中ｐ５３的激活起到了关键作用ꎮＢｏｕａｚｉｚ等[２１]研究ＺＥＡ对人的肝癌细胞的毒性ꎬ得出ＺＥＡ引发ｐ５３依赖的凋亡通路致细胞凋亡的分子机制ꎮ本试验结果也表明ＺＥＡ从基因水平改变了鸡脾脏淋巴细胞ｐ５３的表达ꎬ干扰了ｐ５３凋亡通路的调控ꎬ从而诱发鸡脾脏淋巴细胞凋亡ꎮ㊀㊀Ｂｃｌ￣２家族蛋白在调节通过线粒体使细胞凋亡过程中起着至关重要的作用ꎬＢｃｌ￣２蛋白主要分布于线粒体膜㊁核膜及内质网膜上ꎬ参与维持线粒体膜的完整性ꎬ防止细胞色素Ｃ的释放ꎬ阻止凋亡的 内源性激活 ꎬ是细胞的抗凋亡成员[２２]ꎮ当Ｂａｘ形成同源二聚体Ｂａｘ￣Ｂａｘ时ꎬ诱导细胞凋亡ꎬ随着Ｂｃｌ￣２表达量的上升ꎬ越来越多的Ｂａｘ二聚体分开ꎬ与Ｂｃｌ￣２形成比Ｂａｘ￣Ｂａｘ二聚体更稳定的Ｂａｘ￣Ｂｃｌ￣２的异二聚体ꎬ从而中和了Ｂａｘ￣Ｂａｘ二聚体调节细胞凋亡的作用ꎬ即细胞内Ｂａｘ/Ｂｃｌ￣２的值对于决定细胞接受刺激信号后存活与否起关键作用ꎮＢｃｌ￣２过量表达细胞存活ꎬＢａｘ过量表达则细胞凋亡[２３]ꎮＹｕａｎ等[２４]研究得出ＺＥＡ诱导小鼠雄性生殖细胞的凋亡基因Ｂａｘ的ｍＲＮＡ的表达增加ꎬＢｃｌ￣２的ｍＲＮＡ表达减少ꎮＹｕ等[２５]研究ＺＥＡ对人的乳腺癌ＭＣＦ￣７细胞的研究ꎬ发现ＺＥＡ显著抑制细胞凋亡ꎬ存在剂量依赖性ꎬＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和多重ＲＴ￣ＰＣＲ分析显示ꎬ抗凋亡的Ｂｃｌ￣２蛋白和ｍＲＮＡ水平上调ꎬ促凋亡的Ｂａｘ下调ꎬ说明ＺＥＡ具有雌激素活性ꎬ并能促进ＭＣＦ￣７细胞通过细胞周期由Ｇ０/Ｇ１期减少和Ｓ期的显著增加的进展ꎬ通过Ｂｃｌ￣２表达调控抑制细胞凋亡ꎮ本试验结果显示ꎬ在ＺＥＡ对鸡脾脏淋巴细胞作用下ꎬＢａｋ￣１的表达均有所升高ꎬＢａｘ/Ｂｃｌ￣２值也增加ꎬ其蛋白含量也随之增加或减少ꎮ４㊀结㊀论㊀㊀①本试验表明ꎬ随ＺＥＡ浓度升高ꎬ细胞凋亡调控蛋白ｐ５３㊁Ｂａｘ㊁Ｂａｋ￣１和ｃａｓｐａｓｅ￣３的含量升高ꎬＢｃｌ￣２含量却下降ꎻＺＥＡ上调Ｂｃｌ￣２家族基因(Ｂａｘ和Ｂａｋ￣１)㊁ｐ５３基因和ｃａｓｐａｓｅ￣３基因表达ꎬ抑制Ｂｃｌ￣２家族基因中Ｂｃｌ￣２基因表达ꎮ㊀㊀②ＺＥＡ通过激活ｐ５３和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶通路而诱导细胞凋亡增加ꎬ并且凋亡是由氧化应激引起ꎮ参考文献:[１]㊀ＫＩＭＩＨꎬＳＯＮＨＹꎬＣＨＯＳＷꎬｅｔａｌ.Ｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅｉｎ￣ｄｕｃｅｓｍａｌｅｇｅｒｍｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｒａｔｓ[Ｊ].ＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙＬｅｔｔｅｒｓꎬ２００３ꎬ１３８(３):１８５－１９２.[２]㊀余增丽ꎬ张立实ꎬ吴德生.玉米赤霉烯酮对乳腺癌细胞ＭＣＦ￣７增殖和凋亡的影响[Ｊ].中国预防医学杂志ꎬ２００５ꎬ３９(５):３２８－３３１.[３]㊀邓友田ꎬ袁慧.玉米赤霉烯酮毒性机理研究进展[Ｊ].动物医学进展ꎬ２００７ꎬ２８(２):８９－９２. 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玉米赤霉烯酮的遗传毒性研究进展李荣芳;邬静;袁莉芸;伍勇;袁慧【期刊名称】《上海畜牧兽医通讯》【年(卷),期】2009(000)006【摘要】@@ 玉米赤霉烯酮(Zearalenone, ZEA),又称F-2毒素,具有雌激素样作用,是一种常见的环境内分泌干扰物(environmental endocrine disruptors,EED),是由镰刀菌产生的一种霉菌毒素.它广泛存在于霉变的玉米、高粱、小麦等谷类作物和奶类品中,且繁殖快,代谢产物多,残留时间长,给畜牧业带来很大的危害.ZEA具有很强的细胞毒性,对机体的各种脏器具有明显的毒害作用.本文就ZEA的遗传毒性作用机制方面的研究状况进行综述,包括引起染色体变异,诱导DNA损伤与氧化损害,引起基因突变,此外,也有文献报道ZEA可以影响细胞间缝隙连接作用.【总页数】2页(P26-27)【作者】李荣芳;邬静;袁莉芸;伍勇;袁慧【作者单位】湖南农业大学动物医学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学动物医学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学动物医学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学动物医学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学动物医学院,湖南,长沙,410128【正文语种】中文【相关文献】1.玉米赤霉烯酮毒性及其脱毒方法研究进展 [J], 时从来;李金贵2.饲料中玉米赤霉烯酮的污染状况及其毒性研究进展 [J], 张天姝3.玉米赤霉烯酮对母猪的繁殖毒性研究进展 [J], 吴峰洋; 杨新宇; 栗金丽; 陈宝江4.玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇对动物毒性的研究进展 [J], 周建川;史东辉;计成5.中药缓解玉米赤霉烯酮毒性研究进展 [J], 康俊港;李杨;姜国均;刘明超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
玉米赤霉烯酮对BHK细胞毒性作用的研究韩薇;缪德年;赵志辉【摘要】采用多种方法研究了玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEA)染毒对叙利亚仓鼠肾细胞(BHK细胞)的影响.结果表明:ZEA可引起BHK细胞活力显著降低(P＜0.05),至染毒后24 h,40 μg/mL ZEA剂量组细胞活力下降95％.ZEA对BHK细胞DNA的损伤作用也非常明显,40 μg/mL剂量组DNA拖尾率达对照组的80倍.试验中40μg/mL剂量组24 h时检测到DNA ladder条带.ZEA使BHK细胞内SOD 活性显著降低(P＜0.05),细胞培养液中MDA含量则显著升高(P＜0.05).对细胞作用24 h后,最高剂量组(40 μg/mL)细胞培养液中MDA含量与对照组相比升高了5倍,而细胞的抗氧化能力却降至对照组的1/4左右.上述结果表明:ZEA作用于BHK细胞后,细胞活力下降,DNA受到损伤,引发细胞凋亡;并且ZEA引发了BHK细胞过氧化物生成增加,抗氧化能力下降.【期刊名称】《上海农业学报》【年(卷),期】2013(029)006【总页数】5页(P44-48)【关键词】玉米赤霉烯酮;毒性作用;叙利亚仓鼠肾细胞;单细胞凝胶电泳;噻唑蓝;黄嘌呤氧化酶;丙二醛【作者】韩薇;缪德年;赵志辉【作者单位】上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201403;上海市农业科学院畜牧兽医研究所,上海201106;上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所,上海201403【正文语种】中文【中图分类】S858玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEA）是一种霉菌毒素，是由镰刀菌属的三线镰刀菌、禾谷镰刀菌和玉米赤霉菌等产生的一种具有类雌性激素作用的真菌毒素，主要污染玉米、小麦、大麦等农作物和动物饲料［1］。
ZEA为白色晶体，分子式C18H22O5，熔点161～163℃，不溶于水，易溶于乙醚、甲醇等有机溶剂。
ZEA 为2，4-二羟基苯甲酸内脂类化合物，具有雌激素活性。
玉米赤霉烯酮的毒性作用及防治作者：樊彦敏来源：《农业开发与装备》 2018年第10期摘要：温暖潮湿季节，玉米及其他饲料极易发霉变质并产生霉菌毒素，猪的玉米赤霉烯酮中毒（ZEN毒素）主要是由于猪采食感染了禾谷镰刀菌的玉米、小麦等饲料或饲料原料引起的。
临床可引起猪生长发育缓慢、繁殖性能下降以及饲料报酬降低，给养殖场造成严重的经济损失。
霉菌毒素的污染不仅给动物带来危害，而且会通过食物链直接或间接传入人体，对人类健康造成了潜在的威胁。
通过对其致病机理、流行病学调查情况、临床症状的研究，提出治疗方法和防治措施。
关键词：玉米赤霉烯酮；中毒机理；临床症状；防治措施0引言霉菌毒素是某些霉菌产生的有毒次级代谢产物，普遍存在于粮食中，引起粮食腐败变质从而降低其营养价值，霉菌毒素可在谷物田间生长、收获、加工、仓储及运输过程产生。
据国际粮农组织（FAO）预测，全球约有25%的粮食作物会不同程度地受到霉菌产生的霉菌毒素的影响，从而降低或丧失其使用价值。
截止目前，已鉴定出来的霉菌毒素有300多种，受其危害程度的影响，目前的研究主要集中在以下6种：黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮毒素、呕吐毒素、T-2毒素及伏马毒素。
玉米赤霉烯酮毒素（Zearalenone，以下简称ZEN）由于有类似雌激素的作用，从而其污染状况和对动物的危害程度备受国内外科研工作者的关注。
1玉米赤霉烯酮的定义及性质ZEN是由镰刀菌产生的一种类雌激素样霉菌毒素，通常由禾谷镰刀菌产生，三线镰刀菌、木贼镰刀菌、雪腐镰刀菌、粉红镰刀菌等真菌也能产生。
主要污染玉米、大麦、高粱、大米和小米等，大豆及其制品中也可以被检测到，但以玉米的检出率和含量最高。
纯ZEN是一种白色的结晶，不溶于水，能溶于碱性溶液、乙醚、乙醇、甲苯等，熔点为164～165℃。
耐热性较强，120℃下加热未见分解。
因此在对被污染的农产品进行进一步的加工过程中，很难随着加工工艺的改变而受到降解，从而会在动物和动物制品中一直存在下去。
原花青素对玉米赤霉烯酮致小鼠肝脏、肾脏氧化损伤的保护作用韩建鑫;何剑斌;高锋;杨淑华;梁甜甜;董双;张燚;龙淼【摘要】试验旨在研究原花青素(PC)是否对玉米赤霉烯酮(ZEA)中毒的小鼠肝脏及肾脏具有保护作用.选取40只日龄为8～9周、体重约为45 g的健康清洁级雄性昆明系小鼠,随机分为4组,对照组灌喂生理盐水,PC组灌喂100 mg/kg PC,ZEA组灌喂40 mg/kg ZEA,PC+ ZEA组灌喂100 mg/kg PC+40 mg/kg ZEA,眼球采血,颈椎处死后采取肝脏样本.测定肝脏组织中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量及血清中尿酸(UA)、尿素氮(BUN)含量.结果显示,与对照组相比,PC组各项指标差异均不显著(P＞0.05),提示肝脏及肾脏没有明显的氧化损伤;与对照组相比,ZEA组的小鼠组织中谷草转氨酶、谷丙转氨酶及丙二醛含量显著或极显著升高(P＜0.05;P＜0.01),超氧化物歧化酶含量极显著降低(P＜0.01),血清中尿酸、尿素氮含量极显著升高(P＜0.01),提示肝脏及肾脏有严重的氧化损伤;PC+ ZEA组的小鼠各项指标(除超氧化物歧化酶外)均显著或极显著低于ZEA组(P＜0.05;P＜0.01),提示其肝脏及肾脏氧化损伤程度低于ZEA组,PC对ZEA中毒小鼠的肝脏及肾脏氧化损伤有一定的保护作用.【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2016(043)002【总页数】5页(P402-406)【关键词】原花青素;玉米赤霉烯酮;氧化损伤;保护作用【作者】韩建鑫;何剑斌;高锋;杨淑华;梁甜甜;董双;张燚;龙淼【作者单位】沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳110866;沈阳农业大学畜牧兽医学院,沈阳110866【正文语种】中文【中图分类】S816玉米赤霉烯酮(zearalenone，ZEA)又称F-2毒素，由镰刀菌属菌株产生的一种具有雌激素样作用的生物活性真菌毒素。
玉米赤霉烯酮对公猪精液的影响
霉菌毒素对种猪群有影响，最常与母猪群有关，但也会危害公猪的生殖性能。
最近，立陶宛动物科学研究所的研究人员研究了霉菌毒素解毒剂及其对公猪精液的影响。
该饲料添加剂具有广谱活性，可降低霉菌毒素如黄曲霉毒素、赭曲霉毒素、单端孢菌素(T-2毒素、TH-2毒素)、雪腐镰刀菌烯醇、双乙酸基晗草烯醇等的吸收和生物转化，从而降低它们的生物利用率。
在试验中，将体重150-155千克的10月龄立陶宛白公猪分为3组。
对照组喂给无霉菌毒素的饲料，正对照组给以含玉米赤霉烯酮0.57毫克/千克的饲料，第三种试验料则在饲料中按1千克/吨的比率添加解毒剂。
在试验前10天，对公猪饲喂优质的饲料并训练其接受人工采精，评估精液的质量和数量参数。
试验期间，各组公猪分别饲喂各自的饲料32天，每周采精一次。
最后21天为恢复期，所有公猪均只是饲喂优质饲料，再次采集精液。
试验结果表明，在饲喂污染了玉米赤霉烯酮的饲料之后3天，射精量比对照组减少了41%。
但是，公猪在饲喂无污染饲料1周后恢复。
喂以霉菌毒素解毒剂公猪的射精量与对照组的相近。
给以霉菌毒素的未处理公猪每次射精的精子数与对照组相比，在1周内即显著下降。
不过，喂给无污染的饲料时，公猪的精子数在1周内恢复。
另外，玉米赤霉烯酮对精子活力也有影响，但一旦停喂受污染饲料，精子活力在数天以内立即恢复。
饲喂解毒饲料的公猪的精子活力与对照组公猪的精子活力基
本相同。
可见，霉菌毒素对公猪精液有不良影响而解毒剂则可中和毒性的影响。
因此，应尽量避免使用受霉菌毒素污染的饲料饲喂公猪，必要时可在配制公猪日粮时添加适量的霉菌毒素解毒剂。
动物营养学报２０２０，３２（４）：１９４６⁃１９５６ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ㊀ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６⁃２６７ｘ．２０２０．０４．０５５玉米赤霉烯酮与脱氧雪腐镰刀菌烯醇联合染毒对雄性小鼠生殖毒性的影响及茶多酚的缓解作用曹㊀利㊀赵㊀杰㊀陈铃霞㊀谢㊀昕㊀冉㊀梦㊀申茂玉㊀朱㊀雷㊀冯士彬㊀李㊀玉㊀吴金节㊀王希春∗（安徽农业大学动物科技学院，合肥２３００３６）摘㊀要：本试验旨在研究茶多酚对玉米赤霉烯酮（ＺＥＮ）与脱氧雪腐镰刀菌烯醇（ＤＯＮ）联合染毒小鼠生殖毒性损伤的缓解作用㊂选取８周龄雄性昆明小鼠７５只［体重（４０ʃ５）ｇ］，随机分成５组，每组分别灌服生理盐水（对照组）㊁２００ｍｇ／ｋｇ茶多酚（Ⅰ组）㊁１ｍｇ／ｋｇＺＥＮ＋０．５ｍｇ／ｋｇＤＯＮ（Ⅱ组）㊁１００ｍｇ／ｋｇ茶多酚＋１ｍｇ／ｋｇＺＥＮ＋０．５ｍｇ／ｋｇＤＯＮ（Ⅲ组）和２００ｍｇ／ｋｇ茶多酚＋１ｍｇ／ｋｇＺＥＮ＋０．５ｍｇ／ｋｇＤＯＮ（Ⅳ组），每组１５只㊂试验期２８ｄ㊂在试验第１㊁１４㊁２８天，从每组随机抽取５只小鼠称重采样，检测小鼠精子质量㊁睾丸脏器系数㊁睾丸组织标志酶活性㊁血清性激素含量及睾丸组织氧化与抗氧化指标，并制作睾丸组织切片㊂结果表明：１）与对照组相比，Ⅱ组小鼠睾丸脏器系数㊁精子活率及数量㊁血清性激素含量显著降低（Ｐ＜０．０５），睾丸组织碱性磷酸酶（ＡＫＰ）㊁乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）㊁γ－谷氨酰转移酶（γ⁃ＧＧＴ）㊁过氧化氢酶（ＣＡＴ）㊁超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）及谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ⁃Ｐｘ）活性显著降低（Ｐ＜０．０５）；精子畸形率㊁血清丙二醛（ＭＡＤ）含量显著上升（Ｐ＜０．０５）㊂添加茶多酚后，小鼠的睾丸脏器系数㊁精子活率及数量㊁血清性激素含量㊁睾丸组织ＡＫＰ㊁ＬＤＨ㊁γ⁃ＧＧＴ㊁ＣＡＴ㊁ＳＯＤ及ＧＳＨ⁃Ｐｘ活性显著上升（Ｐ＜０．０５），精子畸形率㊁血清ＭＡＤ含量显著降低（Ｐ＜０．０５）㊂随着时间的推移，与第１天相比，Ⅰ组小鼠睾丸组织ＧＳＨ⁃Ｐｘ活性显著升高（Ｐ＜０．０５），Ⅱ组小鼠睾丸脏器系数㊁精子质量㊁睾丸组织标志酶活性㊁血清性激素含量㊁睾丸组织氧化与抗氧化指标均发生显著变化（Ｐ＜０．０５），Ⅲ组小鼠睾丸组织ＣＡＴ及ＧＳＨ⁃Ｐｘ活性显著降低（Ｐ＜０．０５），Ⅳ组小鼠睾丸组织ＣＡＴ活性显著降低（Ｐ＜０．０５）㊂２）睾丸组织病理切片显示染毒组小鼠睾丸生精小管基膜不完整，细胞排列紊乱，数量减少，体积缩小，细胞之间空泡化，管腔内精子数量减少，经茶多酚保护后得到改善㊂综上，茶多酚能有效改善ＺＥＮ与ＤＯＮ联合染毒小鼠精子质量与睾丸组织内标志酶活性，提高血清性激素含量及睾丸组织抗氧化功能，显著降低生殖毒性㊂关键词：茶多酚；玉米赤霉烯酮；脱氧雪腐镰刀菌烯醇；小鼠；生殖毒性中图分类号：Ｓ８１１．３㊀㊀㊀㊀文献标识码：Ａ㊀㊀㊀㊀文章编号：１００６⁃２６７Ｘ（２０２０）０４⁃１９４６⁃１１收稿日期：２０１９－０９－３０基金项目：安徽省生猪产业技术体系资助项目（ＡＨＣＹＪＳＴＸ⁃０５⁃０７）作者简介：曹㊀利（１９９５ ），女，安徽六安人，硕士研究生，研究方向为畜禽中毒病㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：173****7806＠163．com ∗通信作者：王希春，副教授，硕士生导师，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｗａｎｇｘｉｃｈｕｎ＠ａｈａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ㊀㊀霉菌毒素（ｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓ）是一类由丝状真菌所产生的次级代谢产物，能直接经口摄入动物和人体内，也能够通过食用被污染的农产品㊁饲料㊁肉制品及奶制品进入动物和人体内，对免疫系统㊁生殖系统㊁神经系统㊁胃肠道等多种组织器官造成不同程度的危害［１］㊂玉米赤霉烯酮（ｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅ，ＺＥＮ）与脱氧雪腐镰刀菌烯醇（ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ，ＤＯＮ）是目前农产品及饲料中污染率最高的２种４期曹㊀利等：玉米赤霉烯酮与脱氧雪腐镰刀菌烯醇联合染毒对霉菌毒素［２］，均具有较强的氧化毒性［３－４］，而氧化损伤被认为是引起大多数疾病的主要致病机理㊂研究表明，ＺＥＮ具有雌激素效应，过量ＺＥＮ会导致母猪产生 雌激素综合征 ，公猪出现雄激素分泌下降㊁雌性化和性欲下降等症状，ＺＥＮ中毒是导致生猪繁殖障碍的重要因素［５］㊂Ｓｐｒａｎｄｏ等［６］研究指出，ＤＯＮ能致大鼠生殖细胞变性与激素分泌紊乱㊂㊀㊀茶多酚（ｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ，ＴＰ）是由茶叶提取的一种有效活性成分㊂黄烷醇是茶多酚的主要成分，具有基础的抗氧化结构，大量的酚羟基结构能够与自由基直接反应，生成稳定的酚氧自由基，因此茶多酚是一种天然的抗氧化剂㊂其抗氧化性远高于维生素Ｃ㊁维生素Ｅ及人工合成的丁基羟基甲苯（ＢＨＴ）等［７－８］㊂此外，茶多酚还具有增强机体抵抗力㊁延缓衰老㊁抑制细菌生长㊁抑制病毒㊁降血糖和血脂㊁防肿瘤㊁防辐射㊁减少心血管类疾病发生等功能［９－１４］，推测茶多酚也可能是一种有效缓解霉菌毒素毒性的保护剂㊂因此，本试验以昆明小鼠为研究对象，通过测定茶多酚对ＺＥＮ与ＤＯＮ联合染毒小鼠睾丸脏器系数㊁精子质量㊁睾丸组织标志酶活性㊁血清性激素含量㊁睾丸组织氧化与抗氧化功能以及睾丸组织形态学的影响，探讨茶多酚对ＺＥＮ与ＤＯＮ联合毒性的缓解效果，为ＺＥＮ及ＤＯＮ引起雄性动物生殖毒性的防控提供试验依据㊂１㊀材料与方法１．１㊀试验试剂与材料㊀㊀茶多酚购于上海信裕生物科技有限公司；ＺＥＮ标准品（含量ȡ９９％）和ＤＯＮ标准品（含量ȡ９９％）购于美国Ｓｉｇｍａ公司；碱性磷酸酶（ＡＫＰ）㊁酸性磷酸酶（ＡＣＰ）㊁乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）和γ－谷氨酰转移酶（γ⁃ＧＧＴ）的测定试剂盒购于深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司；促卵泡激素（ＦＳＨ）㊁睾酮（Ｔ）㊁黄体生成素（ＬＨ）㊁雌二醇（Ｅ２）㊁丙二醛（ＭＡＤ）㊁过氧化氢酶（ＣＡＴ）㊁超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ⁃Ｐｘ）的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）试剂盒购于南京森贝伽生物科技有限公司；Ｉｎｆｉｎｉｔｅ－Ｍ２００ＰＲＯ酶标仪购于澳大利亚帝肯ＴＥＣＡＮ公司；ＣＸ３１正置光学显微镜购于日本ＯＬＹＭＰＵＳ公司；７１７０Ａ全自动生化分析仪购于日本Ｈａｔａｃｈｉ公司㊂１．２㊀试验动物及分组㊀㊀选取８周龄雄性昆明小鼠７５只［体重（４０ʃ５）ｇ］，随机分成５组，每组分别灌服生理盐水（对照组）㊁２００ｍｇ／ｋｇ茶多酚（Ⅰ组）㊁１ｍｇ／ｋｇＺＥＮ＋０．５ｍｇ／ｋｇＤＯＮ（Ⅱ组）㊁１００ｍｇ／ｋｇ茶多酚＋１ｍｇ／ｋｇＺＥＮ＋０．５ｍｇ／ｋｇＤＯＮ（Ⅲ组）和２００ｍｇ／ｋｇ茶多酚＋１ｍｇ／ｋｇＺＥＮ＋０．５ｍｇ／ｋｇＤＯＮ（Ⅳ组），每组１５只㊂１．３㊀标准品试剂的配制㊀㊀用１ｍＬ二甲基亚砜将１ｍｇＺＥＮ标准品溶于ＺＥＮ的棕色瓶中，配成１ｍｇ／ｍＬ的ＺＥＮ储备液，密封存放于４ħ冰箱内备用㊂ＤＯＮ标准品的配制方法同ＺＥＮ㊂用生理盐水配制成１０㊁２０ｍｇ／ｍＬ的茶多酚的生理盐水溶液，以０．０１ｍＬ／ｇ的量对小鼠进行灌胃㊂１．４㊀试验饲粮及饲养管理㊀㊀基础饲粮组成及营养水平见表１㊂试验小鼠按照分组情况分笼饲养，每笼３只㊂试验期间小鼠自由采食和饮水，饲养温度为２４ ２６ħ，保证周围环境清洁卫生，每３ｄ换１次垫料，保证充足采食㊁饮水，自然光照㊂适应性饲养７ｄ后，从第８天开始试验，各组小鼠按照不同的处理每天早上进行灌胃，连续４周，试验过程中，每天观察记录小鼠的生长状况㊂表１㊀基础饲粮组成及营养水平（风干基础）Ｔａｂｌｅ１㊀Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｎｕｔｒｉｅｎｔｌｅｖｅｌｓｏｆｔｈｅｂａｓａｌｄｉｅｔ（ａｉｒ⁃ｄｒｙｂａｓｉｓ）％项目Ｉｔｅｍｓ含量Ｃｏｎｔｅｎｔ原料Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ玉米Ｃｏｒｎ３９．１２小麦麸Ｗｈｅａｔｂｒａｎ２０．００豆粕Ｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌ１６．００面粉Ｗｈｅａｔｆｌｏｕｒ１５．００鱼粉Ｆｉｓｈｍｅａｌ４．００石粉Ｌｉｍｅｓｔｏｎｅ１．５０豆油Ｓｏｙｂｅａｎｏｉｌ１．３３食盐ＮａＣｌ０．５０磷酸氢钙ＣａＨＰＯ４２．００氯化胆碱Ｃｈｏｌｉｎｅｃｈｌｏｒｉｄｅ０．０５添加剂Ａｄｄｉｃｔｉｖｅ１）０．５０合计Ｔｏｔａｌ１００．００营养水平Ｎｕｔｒｉｅｎｔｌｅｖｅｌｓ２）粗蛋白质ＣＰ１８．００７４９１㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３２卷续表１项目Ｉｔｅｍｓ含量Ｃｏｎｔｅｎｔ粗脂肪ＥＥ４．５０粗灰分Ａｓｈ４．００钙Ｃａ１．２０总磷ＴＰ０．８０赖氨酸Ｌｙｓ０．８２蛋氨酸＋半胱氨酸Ｍｅｔ＋Ｃｙｓ０．５３总能ＧＥ／（ＭＪ／ｋｇ）１４．２１㊀㊀１）添加剂为每千克饲粮提供Ｔｈｅａｄｄｉｃｔｉｖｅｐｒｏｖｉｄｅｄｔｈｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇｐｅｒｋｇｏｆｔｈｅｄｉｅｔ：ＶＡ７０００ＩＵ，ＶＢ１８ｍｇ，ＶＢ２１０ｍｇ，ＶＢ６６ｍｇ，ＶＤ８００ＩＵ，ＶＥ６０ＩＵ，Ｃｕ（ａｓｃｏｐｐｅｒｓｕｌ⁃ｆａｔｅ）１０ｍｇ，Ｆｅ（ａｓｆｅｒｒｏｕｓｓｕｌｆａｔｅ）１００ｍｇ，Ｍｎ（ａｓｍａｎｇａ⁃ｎｅｓｅｓｕｌｆａｔｅ）７５ｍｇ，Ｚｎ（ａｓｚｉｎｃｓｕｌｆａｔｅ）３０ｍｇ，Ｉ（ａｓｐｏｔａｓ⁃ｓｉｕｍｉｏｄｉｄｅ）０．５ｍｇ，Ｓｅ（ａｓｓｏｄｉｕｍｓｅｌｅｎｉｔｅ）０．１ｍｇ，其余玉米粉载体补足ｔｈｅｒｅｓｔｗａｓｃｏｒｎｆｌｏｕｒｃａｒｒｉｅｒ㊂㊀㊀２）营养水平为计算值㊂Ｎｕｔｒｉｅｎｔｌｅｖｅｌｓｗｅｒｅｃａｌｃｕｌａｔｅｄｖａｌｕｅｓ．１．５㊀样品采集与处理㊀㊀分别于试验的第１㊁１４㊁２８天，每组随机选取５只小鼠进行称重和采样㊂采用摘眼球采血法，收集并分离血清分装于灭菌的离心管中，置于－２０ħ冰箱存放㊂采用颈椎脱臼法处死，分离两侧附睾，分别放入１ｍＬ事先预热３７ħ的生理盐水（０．９％）中，剪碎，进行精子活力㊁数量和畸形率检查；分离两侧的睾丸并精确称取脏器重量，将小鼠的一侧睾丸放入４％多聚甲醛溶液中固定，用以制作组织切片，另一侧及时放于液氮中冻存后转移至－８０ħ冰箱中保存，待后续试验使用㊂１．６㊀小鼠睾丸脏器系数测定㊀㊀采用颈椎脱臼法处死小鼠后进行解剖，分离两侧的睾丸，生理盐水漂洗，再用滤纸吸干多余水分之后用精密分析天平称重脏器重量，计算脏器系数㊂脏器系数（％）＝１００ˑ脏器重量（ｇ）／小鼠体重（ｇ）㊂１．７㊀小鼠精子质量测定［１５］㊀㊀将两侧附睾分别放入１ｍＬ事先预热３７ħ的生理盐水（０．９％）中，剪碎，放入３７ħ恒温箱内孵育１５ｍｉｎ，使精子充分游离㊂利用光学显微镜和血球计数板计数活精子数量和总精子数量㊂计算精子活率与精子数量㊂使用伊红染色制作涂片在光学显微镜下计数１０００个精子内畸形精子数量，计算精子畸形率㊂１．８㊀睾丸组织标志酶活性测定㊀㊀从－８０ħ冰箱取出睾丸组织，加入９倍组织块重量预冷（４ħ）过的生理盐水（０．９％），制备出１０％的睾丸组织匀浆，用低温离心机（４ħ）以１００００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ，取上清液㊂检测指标包括ＡＫＰ㊁ＡＣＰ㊁ＬＤＨ和γ⁃ＧＧＴ活性㊂使用全自动生化分析仪检测以上指标，将检测出指标乘以稀释倍数为组织内酶的实际活性㊂１．９㊀血清性激素含量测定㊀㊀将保存于－２０ħ的血清恢复室温，用于检测ＦＳＨ㊁ＬＨ㊁Ｔ和Ｅ２含量㊂严格按照试剂盒说明书步骤进行操作，利用酶标仪在４５０ｎｍ处读取吸光度（ＯＤ）值，计算血清性激素的含量㊂１．１０㊀睾丸组织氧化与抗氧化功能指标测定㊀㊀取睾丸组织上清液，进行ＭＤＡ含量及ＳＯＤ㊁ＧＳＨ⁃Ｐｘ和ＣＡＴ活性检测㊂严格按照试剂盒说明书步骤进行操作，采用酶标仪进行测定，于４５０ｎｍ处读取ＯＤ值，计算睾丸组织内各项氧化与抗氧化指标㊂１．１１㊀睾丸病理组织切片制作㊀㊀将４％多聚甲醛固定的小鼠睾丸组织块用石蜡包埋后用切片机切片，然后进行苏木精－伊红（ＨＥ）染色，封片后使用光学显微镜进行观察㊂１．１２㊀数据统计与分析㊀㊀本试验数据均以平均值ʃ标准差（ ＸʃＳＤ）表示，利用ＳＰＳＳ２０．０统计软件进行方差分析，多重比较采用ＬＳＤ法㊂Ｐ＜０．０５为差异显著㊂２㊀结㊀果２．１㊀小鼠睾丸脏器系数㊀㊀由表２可知，ＤＯＮ与ＺＥＮ联合染毒致小鼠睾丸脏器系数降低㊂试验第１４和２８天，Ⅰ㊁Ⅲ和Ⅳ组小鼠睾丸脏器系数与对照组相比差异不显著（Ｐ＞０．０５），Ⅲ和Ⅳ组小鼠睾丸脏器系数均显著高于Ⅱ组（Ｐ＜０．０５）㊂２．２㊀小鼠精子质量㊀㊀由表３可知，ＤＯＮ与ＺＥＮ联合染毒使小鼠精子活率和精子数量下降，精子畸形率上升㊂随着时间推移，与试验第１天相比，试验第１４和２８天Ⅱ组小鼠精子活率与精子数量显著降低（Ｐ＜０．０５），精子畸形率显著升高（Ｐ＜０．０５）㊂试验第１４和２８天，Ⅰ㊁Ⅲ㊁Ⅳ组小鼠精子活率㊁精子数量８４９１４期曹㊀利等：玉米赤霉烯酮与脱氧雪腐镰刀菌烯醇联合染毒对和精子畸形率与对照组相比差异不显著（Ｐ＞０．０５）；与Ⅱ组相比，Ⅰ㊁Ⅲ㊁Ⅳ组精子活率与精子数量显著升高（Ｐ＜０．０５），精子畸形率显著降低（Ｐ＜０．０５）㊂表２㊀小鼠睾丸脏器系数Ｔａｂｌｅ２㊀Ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒｏｒｇａｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｏｆｍｉｃｅ％天数Ｄａｙｓ组别Ｇｒｏｕｐｓ对照ＣｏｎｔｒｏｌⅠⅡⅢⅣ第１天Ｄａｙ１０．３４６ʃ０．０１３０．３４５ʃ０．０１３０．３４５ʃ０．０１４ａ０．３４６ʃ０．０１２０．３４７ʃ０．０１５第１４天Ｄａｙ１４０．３５２ʃ０．０１６ａ０．３５９ʃ０．０２１ａ０．２９８ʃ０．００８ｂｂ０．３４６ʃ０．０１７ａ０．３５２ʃ０．０１３ａ第２８天Ｄａｙ２８０．３４８ʃ０．０１５ａ０．３５５ʃ０．０１３ａ０．２９２ʃ０．００６ｂｂ０．３４７ʃ０．０１８ａ０．３５３ʃ０．０１６ａ㊀㊀同列数据下标相同字母或无字母表示差异不显著（Ｐ＞０．０５），不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５）㊂同行数据肩标相同字母或无字母表示差异不显著（Ｐ＞０．０５），不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５）㊂下表同㊂㊀㊀Ｉｎｔｈｅｓａｍｅｃｏｌｕｍｎ，ｖａｌｕｅｓｗｉｔｈｔｈｅｓａｍｅｏｒｎｏｓｍａｌｌｌｅｔｔｅｒｓｕｂｓｃｒｉｐｔｓｍｅａｎｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５），ａｎｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｌｅｔｔｅｒｓｕｂｓｃｒｉｐｔｓｍｅａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）．Ｉｎｔｈｅｓａｍｅｒｏｗ，ｖａｌｕｅｓｗｉｔｈｔｈｅｓａｍｅｏｒｎｏｌｅｔｔｅｒｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓｍｅａｎｎｏｓｉｇ⁃ｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５），ａｎｄｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｍａｌｌｌｅｔｔｅｒｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓｍｅａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｓａｍｅａｓｂｅｌｏｗ．表３㊀小鼠精子质量Ｔａｂｌｅ３㊀Ｓｐｅｒｍｑｕａｌｉｔｙｏｆｍｉｃｅ项目Ｉｔｅｍｓ天数Ｄａｙｓ组别Ｇｒｏｕｐｓ对照ＣｏｎｔｒｏｌⅠⅡⅢⅣ精子活率Ｓｐｅｒｍｓｕｒｖｉｖａｌｒａｔｅ／％第１天Ｄａｙ１８３．８ʃ２．３８４．１ʃ２．２８３．３ʃ２．２ａ８２．９ʃ２．１８３．６ʃ２．４第１４天Ｄａｙ１４８４．３ʃ７．５ａ８１．２ʃ９．５ａ６６．０ʃ４．３ｂｂ７９．９ʃ２．９ａ８１．３ʃ３．８ａ第２８天Ｄａｙ２８８５．９ʃ６．０ａ８２．０ʃ５．８ａ６５．３ʃ２．８ｂｂ７９．５ʃ６．５ａ８０．１ʃ２．９ａ精子数量Ｓｐｅｒｍｃｏｕｎｔ／（ˑ１０６个／ｍＬ）第１天Ｄａｙ１１８．５１ʃ１．２１１８．４９ʃ１．２３１８．５２ʃ１．０９ａ１８．５１ʃ１．２３１８．５０ʃ１．２２第１４天Ｄａｙ１４１９．６９ʃ１．３９ａ１９．４０ʃ１．８２ａ１４．４８ʃ１．０１ｂｂ１８．０１ʃ２．０８ａ１８．０２ʃ２．５２ａ第２８天Ｄａｙ２８１９．７９ʃ２．２０ａ１９．３７ʃ３．０３ａ１４．２９ʃ１．９９ｂｂ１８．４１ʃ２．２９ａ１８．８３ʃ２．３４ａ精子畸形率Ｓｐｅｒｍａｂｎｏｒｍａｌｉｔｙｒａｔｅ／％第１天Ｄａｙ１４．４６ʃ１．７１４．４４ʃ１．６９４．４５ʃ１．７３ｂ４．４６ʃ１．７０４．４６ʃ１．７２第１４天Ｄａｙ１４４．２４ʃ０．６７ｂ４．５８ʃ１．４６ｂ１１．８０ʃ１．０７ａａ５．７４ʃ０．９６ｂ４．８４ʃ０．４９ｂ第２８天Ｄａｙ２８４．８３ʃ０．７６ｂ４．３０ʃ０．８２ｂ１１．５０ʃ０．４９ａａ５．４７ʃ０．９０ｂ４．６９ʃ０．９７ｂ２．３㊀小鼠睾丸组织标志酶活性㊀㊀由表４可知，ＤＯＮ与ＺＥＮ联合染毒致小鼠睾丸组织内ＡＫＰ㊁ＬＤＨ和γ⁃ＧＧＴ活性降低㊂试验第１４和２８天，Ⅰ㊁Ⅲ和Ⅳ组小鼠睾丸组织内ＡＫＰ㊁ＬＤＨ和γ⁃ＧＧＴ活性与对照组相比差异不显著（Ｐ＞０．０５），Ⅲ和Ⅳ组小鼠睾丸组织内ＡＫＰ㊁ＬＤＨ和γ⁃ＧＧＴ活性均显著高于Ⅱ组（Ｐ＜０．０５）㊂整个试验期间，各组ＡＣＰ活性变化不显著（Ｐ＞０．０５）㊂２．４㊀小鼠血清性激素含量㊀㊀由表５可知，ＤＯＮ与ＺＥＮ联合染毒致小鼠血清中ＦＳＨ㊁ＬＨ㊁Ｔ和Ｅ２含量降低㊂试验第１４天，Ⅲ和Ⅳ组小鼠血清中ＦＳＨ㊁ＬＨ㊁Ｔ和Ｅ２含量均显著高于Ⅱ组（Ｐ＜０．０５）㊂试验第２８天，血清Ｅ２含量与对照组相比显著降低（Ｐ＜０．０５），Ⅲ和Ⅳ组小鼠血清中ＦＳＨ㊁ＬＨ㊁Ｔ和Ｅ２含量均显著高于Ⅱ组（Ｐ＜０．０５）㊂２．５㊀小鼠睾丸组织氧化与抗氧化指标㊀㊀由表６可知，ＤＯＮ与ＺＥＮ联合染毒致小鼠睾丸组织内ＭＤＡ含量升高㊂试验第１４与２８天，Ⅲ和Ⅳ组小鼠睾丸组织ＭＤＡ含量均显著低于Ⅱ组（Ｐ＜０．０５）㊂与试验第１天相比，在试验第１４与２８天时，Ⅱ和Ⅲ组小鼠睾丸组织ＣＡＴ活性均显著降低（Ｐ＜０．０５）㊂Ⅳ组中，试验第２８天时，小鼠睾丸组织ＣＡＴ活性与试验第１和１４天相比显著降低（Ｐ＜０．０５）㊂试验第１４天时，Ⅱ㊁Ⅲ组小鼠睾丸组织ＣＡＴ活性与对照组相比显著降低（Ｐ＜０．０５），Ⅳ组小鼠睾丸组织ＣＡＴ活性与Ⅱ组相比显著升高（Ｐ＜０．０５）㊂试验第２８天时，Ⅱ㊁Ⅲ㊁Ⅳ组小鼠睾丸组织ＣＡＴ活性与对照组相比显著降低（Ｐ＜０．０５）㊂９４９１㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３２卷表４㊀小鼠睾丸组织标志酶活性Ｔａｂｌｅ４㊀Ｍａｒｋｅｒｅｎｚｙｍｅｓａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎｔｅｓｔｉｃｕｌａｒｔｉｓｓｕｅｏｆｍｉｃｅ项目Ｉｔｅｍｓ天数Ｄａｙｓ组别Ｇｒｏｕｐｓ对照ＣｏｎｔｒｏｌⅠⅡⅢⅣ碱性磷酸酶ＡＫＰ／（Ｕ／ｍＬ）第１天Ｄａｙ１２．８９６ʃ０．０７１２．８９３ʃ０．０７０２．８７３ʃ０．０７２ａ２．８８９ʃ０．０６９２．８７９ʃ０．０７０第１４天Ｄａｙ１４２．９３３ʃ０．０６３ａ２．９５９ʃ０．１１６ａ２．７７４ʃ０．０９６ｂａ２．８４９ʃ０．０４９ａ２．８８１ʃ０．０６０ａ第２８天Ｄａｙ２８２．９１６ʃ０．０９４ａ２．９７８ʃ０．０８８ａ２．７２７ʃ０．０９０ｂｂ２．９３６ʃ０．０９４ａ２．９５１ʃ０．１６０ａ酸性磷酸酶ＡＣＰ／（ｐｇ／ｍＬ）第１天Ｄａｙ１３６９．４０ʃ１２．０３３６９．２０ʃ１１．７９３７０．２０ʃ１２．０５３６８．４０ʃ１１．９８３６８．９０ʃ１２．０１第１４天Ｄａｙ１４３６８．２１ʃ２０．０８３６２．８４ʃ１４．７５３４３．７３ʃ２２．０５３５９．９７ʃ１９．８８３６７．２６ʃ３４．７６第２８天Ｄａｙ２８３６７．４８ʃ１１．２７３６０．０７ʃ１７．０１３４７．５５ʃ２０．３１３５８．２１ʃ４５．３４３６１．３３ʃ２１．８２乳酸脱氢酶ＬＤＨ／（ｐｇ／ｍＬ）第１天Ｄａｙ１１６５３４．０ʃ１７６５．５１６５８７．０ʃ１７５９．３１６５７９．０ʃ１７６７．７ａ１６５２８．０ʃ１７６３．５１６５７７．０ʃ１７６０．２第１４天Ｄａｙ１４１６５０６．７ʃ２１５８．６ａ１６９６５．０ʃ１７６６．４ａ１２３１２．５ʃ１５５７．０ｂｂ１７７２６．３ʃ２２３６．６ａ１６３８０．０ʃ１６６２．７ａ第２８天Ｄａｙ２８１６８５８．８ʃ２２５３．７ａ１６４８３．８ʃ１６３４．５ａ１１６７５．０ʃ１３２８．２ｂｂ１７３８０．０ʃ１９７３．１ａ１７１５０．０ʃ２８５６．８ａγ－谷氨酰转移酶γ⁃ＧＧＴ／（Ｕ／Ｌ）第１天Ｄａｙ１１００．３４ʃ７．８４９９．９５ʃ７．５７１００．２８ʃ７．６５ａ１００．１３ʃ７．８３１００．３６ʃ７．６８第１４天Ｄａｙ１４１０２．４１ʃ８．４２ａ１０１．２３ʃ１０．７６ａ７５．９４ʃ７．７５ｂｂ９５．６８ʃ７．３２ａ９７．３５ʃ１３．０２ａ第２８天Ｄａｙ２８１０３．２０ʃ９．２１ａ１０２．８９ʃ１３．８５ａ７３．９３ʃ７．４６ｂｂ９４．５３ʃ９．９２ａ９８．４６ʃ１０．１０ａ表５㊀小鼠血清性激素含量Ｔａｂｌｅ５㊀Ｓｅｒｕｍｓｅｘｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｍｉｃｅ项目Ｉｔｅｍｓ天数Ｄａｙｓ组别Ｇｒｏｕｐｓ对照ＣｏｎｔｒｏｌⅠⅡⅢⅣ促卵泡激素ＦＳＨ／（ＩＵ／Ｌ）第１天Ｄａｙ１１７．５４ʃ０．８１１７．５５ʃ０．７９１７．５３ʃ０．８３ａ１７．５６ʃ０．８０１７．５２ʃ０．８２第１４天Ｄａｙ１４１７．３４ʃ０．９０ａ１７．３４ʃ１．５２ａ１９．６６ʃ０．９４ｂｂ１６．２０ʃ１．０８ａ１６．７８ʃ１．４４ａ第２８天Ｄａｙ２８１７．４３ʃ１．５０ａ１７．７０ʃ１．５０ａ１８．６１ʃ１．９２ｂｂ１６．８２ʃ１．４３ａ１７．２３ʃ１．９８ａ黄体生成素ＬＨ／（ｎｇ／ｍＬ）第１天Ｄａｙ１２．２５ʃ０．０３２．２６ʃ０．０２２．２３ʃ０．０３ａ２．２４ʃ０．０４２．２５ʃ０．０３第１４天Ｄａｙ１４２．２６ʃ０．０３ａ２．２６ʃ０．０２ａ２．１５ʃ０．０３ｂｂ２．２２ʃ０．０４ａ２．２４ʃ０．０３ａ第２８天Ｄａｙ２８２．２７ʃ０．０４ａ２．２６ʃ０．０３ａ２．０６ʃ０．０４ｂｂ２．２４ʃ０．０３ａ２．２５ʃ０．０２ａ０５９１４期曹㊀利等：玉米赤霉烯酮与脱氧雪腐镰刀菌烯醇联合染毒对 续表５项目Ｉｔｅｍｓ天数Ｄａｙｓ组别Ｇｒｏｕｐｓ对照ＣｏｎｔｒｏｌⅠⅡⅢⅣ睾酮Ｔ／（ｎｍｏｌ／Ｌ）第１天Ｄａｙ１１２５．８ʃ１１．３１２５．７ʃ１１．１１２５．８ʃ１１．２ａ１２５．６ʃ１１．３１２５．９ʃ１１．１第１４天Ｄａｙ１４１２７．９ʃ９．５ａ１２７．８ʃ３．９ａ９６．９ʃ８．９ｂｂ１２０．１ʃ８．９ａ１２２．５ʃ１４．９ａ第２８天Ｄａｙ２８１２６．１ʃ９．１ａ１２９．３ʃ５．６ａ９４．４ʃ４．８ｂｂ１２０．５ʃ８．６ａ１２１．７ʃ６．２ａ雌二醇Ｅ２／（ｎｇ／Ｌ）第１天Ｄａｙ１７１．３５ʃ５．９０７１．２９ʃ５．９０７１．３３ʃ５．７０ａ７１．３１ʃ５．８０７１．３２ʃ５．９０第１４天Ｄａｙ１４７０．６９ʃ９．０９ａ７０．７８ʃ８．１７ａ５３．３３ʃ８．０２ｂｂ６５．６４ʃ８．７７ａ６９．１８ʃ３．２３ａ第２８天Ｄａｙ２８６９．１３ʃ９．８６ａ６５．２４ʃ６．５７ｂ５０．５７ʃ６．５６ｃｂ６７．０９ʃ１２．６８ｂ６６．５０ʃ１３．２３ｂ㊀㊀ＤＯＮ与ＺＥＮ联合染毒致小鼠睾丸组织ＳＯＤ活性降低㊂试验第１４与２８天，Ⅲ和Ⅳ组小鼠睾丸组织ＳＯＤ活性均显著高于Ⅱ组（Ｐ＜０．０５）㊂与试验第１天相比，试验第１４与２８天时，Ⅱ㊁Ⅲ组小鼠睾丸组织ＧＳＨ⁃Ｐｘ活性显著降低（Ｐ＜０．０５）㊂试验第１４天时，与对照组相比，Ⅰ组小鼠睾丸组织ＧＳＨ⁃Ｐｘ活性显著升高（Ｐ＜０．０５），Ⅱ㊁Ⅲ㊁Ⅳ组小鼠睾丸组织ＧＳＨ⁃Ｐｘ活性显著降低（Ｐ＜０．０５）㊂Ⅲ㊁Ⅳ组小鼠睾丸组织ＧＳＨ⁃Ｐｘ活性与Ⅱ组相比显著升高（Ｐ＜０．０５）㊂试验第２８天时，与对照组相比，Ⅰ组小鼠睾丸组织ＧＳＨ⁃Ｐｘ活性显著升高（Ｐ＜０．０５），Ⅱ㊁Ⅲ组小鼠睾丸组织ＧＳＨ⁃Ｐｘ活性显著降低（Ｐ＜０．０５）㊂Ⅲ㊁Ⅳ组小鼠睾丸组织ＧＳＨ⁃Ｐｘ活性与Ⅱ组相比显著升高（Ｐ＜０．０５），Ⅳ组显著高于Ⅲ组（Ｐ＜０．０５）㊂表６ 小鼠睾丸组织氧化与抗氧化指标Ｔａｂｌｅ６㊀Ｏｘｉｄａｔｉｖｅａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｉｎｄｅｘｅｓｉｎｔｅｓｔｉｃｕｌａｒｔｉｓｓｕｅｏｆｍｉｃｅ项目Ｉｔｅｍｓ天数Ｄａｙｓ组别Ｇｒｏｕｐｓ对照ＣｏｎｔｒｏｌⅠⅡⅢⅣ丙二醛ＭＤＡ／（ｎｍｏｌ／Ｌ）第１天Ｄａｙ１５．５７５ʃ０．５８２５．５６９ʃ０．５８０５．５７３ʃ０．５７８ｂ５．５７４ʃ０．５８１５．５７５ʃ０．５７９第１４天Ｄａｙ１４５．６６７ʃ０．１２０ｂ５．４４３ʃ０．５４４ｂ７．１７４ʃ０．５４６ａａ５．６６７ʃ０．３３９ｂ５．５０１ʃ０．６１９ｂ第２８天Ｄａｙ２８５．５１６ʃ０．５１６ｂ５．４９４ʃ１．０２０ｂ７．８６８ʃ０．６１６ａａ５．６３５ʃ０．６０５ｂ５．５４２ʃ０．７８５ｂ过氧化氢酶ＣＡＴ／（ｎｇ／Ｌ）第１天Ｄａｙ１４３４．８２ʃ１１．１１４３４．７９ʃ１１．０５４３３．９８ʃ１１．１３ａ４３４．６５ʃ１１．０３ａ４３４．２１ʃ１１．０９ａ第１４天Ｄａｙ１４４３１．４４ʃ１０．５９ａ４４３．７７ʃ８．７７ａ３３８．８２ʃ１１．１６ｄｂ３８７．９５ʃ１０．５９ｃｂ４１９．８９ʃ７．３３ｂａ第２８天Ｄａｙ２８４３１．４０ʃ１１．３７ａ４４７．９４ʃ１４．９７ａ３３７．１１ʃ１５．５８ｄｂ３９１．２４ʃ１５．３７ｃｂ４１１．００ʃ１３．９６ｂｂ１５９１㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３２卷续表６项目Ｉｔｅｍｓ天数Ｄａｙｓ组别Ｇｒｏｕｐｓ对照ＣｏｎｔｒｏｌⅠⅡⅢⅣ超氧化物歧化酶ＳＯＤ／（ｐｇ／ｍＬ）第１天Ｄａｙ１３５７．４７ʃ１５．６９３５７．６６ʃ１５．５４３５７．３５ʃ１５．７２ａ３５７．７３ʃ１５．５９３５７．４２ʃ１５．６７第１４天Ｄａｙ１４３５８．５５ʃ１０．４４ａ３６３．４８ʃ５．３８ａ２８８．４５ʃ１０．１５ｂｂ３４７．０９ʃ１５．４４ａ３５１．４３ʃ１６．３７ａ第２８天Ｄａｙ２８３５３．１４ʃ１６．２４ａ３６４．６１ʃ８．７９ａ２８７．０６ʃ１７．０８ｂｂ３５０．５７ʃ１９．０２ａ３５１．９８ʃ１４．８９ａ谷胱甘肽过氧化物酶ＧＳＨ⁃Ｐｘ／（ｐｇ／ｍＬ）第１天Ｄａｙ１１２８８．０ʃ４９．５１２８９．０ʃ４９．７ｂ１２９０．０ʃ５０．０ａ１２８７．０ʃ４９．９ａ１２８９．０ʃ４９．８第１４天Ｄａｙ１４１２９８．１ʃ５１．７ｂ１３６２．７ʃ５０．９ａａ１００６．１ʃ１９．７ｄｂ１１７９．２ʃ３１．０ｃｂ１２２３．５ʃ４１．９ｃ第２８天Ｄａｙ２８１２６４．２ʃ５０．４ｂ１３５９．７ʃ５４．９ａａ９４４．４ʃ５２．６ｄｂ１１８１．５ʃ４６．０ｃｂ１２３９．８ʃ５５．６ｂ２．６㊀睾丸组织病理学变化㊀㊀图１为试验第２８天时睾丸组织的病理切片，对照组和Ⅰ组生精小管完整，管内支持细胞和各级生精细胞层次清晰完整，排列井然，管腔内成熟精子清晰可见㊂Ⅱ组生精小管基膜不完整，支持细胞和各级生精细胞排列紊乱无序，细胞减少，精原细胞与支持细胞之间出现空泡，初级精母细胞体积缩小，管腔内精子数量减少㊂茶多酚保护后，各组组织有所改善，Ⅳ组改善最为明显，各级生精细胞排列趋于正常，数量有所增加㊂㊀㊀Ａ：对照组ｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ；Ｂ：Ⅰ组ｇｒｏｕｐⅠ；Ｃ：Ⅱ组ｇｒｏｕｐⅡ；Ｄ：Ⅲ组ｇｒｏｕｐⅢ；Ｅ：Ⅳ组ｇｒｏｕｐⅣ㊂图１㊀睾丸组织病理切片Ｆｉｇ．１㊀Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｓｅｃｔｉｏｎｏｆｍｉｃｅｔｅｓｔｉｓｔｉｓｓｕｅ（１００ˑ）３㊀讨㊀论㊀㊀ＺＥＮ是一种具有类雌激素样作用的霉菌毒素，主要危害动物的生殖系统，ＤＯＮ作为饲料中检出率和检出量最高的霉菌毒素，常与ＺＥＮ共存于饲料中，对动物的生长性能㊁繁殖性能及免疫功能等造成损害，给养殖业造成了不可忽视的损失㊂根据王文祥等［１６］㊁黄菊等［１７］㊁逄健等［１８］试验报道，确定了最佳染毒浓度（ＤＯＮ：０．５ｍｇ／ｋｇ，ＺＥＮ：１ｍｇ／ｋｇ）与茶多酚浓度范围（１００ ２００ｍｇ／ｋｇ），２５９１４期曹㊀利等：玉米赤霉烯酮与脱氧雪腐镰刀菌烯醇联合染毒对通过检测ＤＯＮ与ＺＥＮ联合染毒后小鼠的精子质量㊁睾丸脏器系数㊁睾丸组织标志酶活性㊁血清性激素含量㊁睾丸组织氧化与抗氧化功能以及茶多酚作用后各指标的变化，以研究ＤＯＮ与ＺＥＮ联合染毒对小鼠生殖毒性的影响以及茶多酚的保护作用，为后续研究提供参考依据㊂㊀㊀睾丸作为雄性生殖系统的重要器官，易受温度㊁化学物质及药物的影响，发生功能障碍及形态学变化㊂赵丽华等［１９］研究表明，大鼠砷中毒可使大鼠睾丸质量下降，生精上皮细胞排列紊乱，各级生精细胞减少，精子数量变少，且睾丸间质有充血和渗出㊂本研究中也出现类似的病理组织学变化，可见ＺＥＮ与ＤＯＮ联合染毒对小鼠睾丸造成了严重损伤，而茶多酚对该损伤具有缓解作用㊂在动物试验中，脏器系数是反映器官所受影响的重要指标［２０］，睾丸脏器系数能够综合反映小鼠睾丸受到的毒性损伤作用㊂精子质量直接反映了雄性动物的生殖能力，精子活率与精子畸形率是评测精子质量的重要标准［２１］，研究表明，通过给公猪饲喂含ＺＥＮ的饲粮能影响公猪精子质量，降低精液密度［２２－２３］㊂２．４ｍｇ／ｋｇＤＯＮ通过插胃管的方式作用于大鼠２８ｄ能使其精细胞数量减少［２４］㊂本试验发现，ＺＥＮ与ＤＯＮ联合染毒降低了小鼠的睾丸脏器系数与精子质量，说明ＺＥＮ与ＤＯＮ联合染毒可降低大鼠的性发育水平，而添加茶多酚组小鼠精子质量明显改善，睾丸脏器系数明显升高，且与对照组差异不显著，说明茶多酚在缓解ＺＥＮ与ＤＯＮ联合生殖毒性作用上有良好的效果㊂㊀㊀雄性生殖细胞的发育依赖于其生存的稳定内环境㊁激素以及相关酶类的调节［２５］㊂有研究表明，睾丸组织标志酶在精子发生与成熟过程中起重要作用［２６］㊂ＡＫＰ主要存在于精原细胞及初级精母细胞上，与生精细胞分裂有关，也与精子发育早期阶段提供能量有关［２７］㊂ＡＣＰ分布于睾丸支持细胞的细胞质内，参与生精细胞变性过程，可作为衡量是否存在生精障碍的标志酶之一［２８］㊂ＬＤＨ主要存在于生精细胞的线粒体上，是生精上皮的标志性酶，保证精子有足够的能量成熟［２９］㊂γ⁃ＧＧＴ是睾丸支持细胞的特异性标志酶，它的活性变化与支持细胞的功能息息相关［３０］㊂此外，睾丸的生理功能还依靠Ｅ２㊁Ｔ㊁ＦＳＨ和ＬＨ等性激素来共同调节㊂Ｔ是一种甾体类激素，能够促进精子发生及成熟，刺激睾丸的生长发育，促进雄性动物发育出副性征并保持其正常状态㊂雄性动物睾丸和肾上腺皮质可分泌的少量Ｅ２，主要由Ｔ转化而来，能够在一定程度上调控雄性生殖系统发育㊂ＦＳＨ由腺垂体产生，主要作用于生精小管内的支持细胞，促进精子的产生［３１］㊂此外，腺垂体还分泌了ＬＨ，主要作用于睾丸间质细胞，睾丸间质细胞位于各生精小管之间的间质内，其主要作用是分泌雄激素，雄激素能够促进精子和生殖器官的生长发育㊂ＦＳＨ㊁ＬＨ的含量受对应的促性腺激素释放激素（ＧｎＲＨ）信号㊁Ｔ㊁抑制素等反馈共同调节㊂本试验结果显示，ＺＥＮ与ＤＯＮ联合染毒降低了小鼠睾丸标志酶的活性与血清性激素含量，推测ＺＥＮ与ＤＯＮ可能影响了大鼠精子发生过程中的能量供给与变性过程，引起生精障碍，且导致小鼠性激素调节紊乱㊂经茶多酚保护后睾丸组织酶活性与血清性激素含量得到明显提高，表明茶多酚能够有效缓解ＺＥＮ与ＤＯＮ联合毒性对睾丸组织酶活性和血清性激素含量的影响㊂㊀㊀大量研究显示，镰刀菌具有氧化毒性，通常自由基在机体内的产生与消除处于一种动态平衡之中，当遭受刺激的时候，体内自由基产生过多，氧化速度超出自由基清除的速度，即造成机体氧化损伤［３１］㊂ＭＤＡ是机体一种脂质过氧化产物，其在机体含量高低代表脂质过氧化反应的强弱［３２］㊂ＣＡＴ是一种催化酶，普遍存在于细胞之中，可以促进过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）的分解，从而提高细胞抗氧化防御机制；ＳＯＤ作为一种活性物质，能够催化超阴离子，通过减少机体的有害物质，从而达到抗氧化的效果［３３］㊂ＧＳＨ⁃Ｐｘ是能分解过氧化物的一种酶，它不仅能清除和分解过氧化物，还能够减少其对机体的伤害，这些指标都反映机体的抗氧化能力，都是氧化和抗氧化防御系统的关键指标［３４］㊂本试验结果显示，ＺＥＮ与ＤＯＮ联合攻毒增加了睾丸组织内ＭＡＤ含量，降低了ＳＯＤ㊁ＣＡＴ及ＧＳＨ⁃Ｐｘ的活性，而茶多酚保护组小鼠睾丸组织内的氧化与抗氧化指标与对照组相比差异不显著，这表明茶多酚可以在一定程度上缓解ＺＥＮ与ＤＯＮ联合染毒对小鼠睾丸系统造成的氧化损伤㊂３５９１㊀动㊀物㊀营㊀养㊀学㊀报３２卷４㊀结㊀论㊀㊀试验结果表明，ＺＥＮ与ＤＯＮ联合染毒可致小鼠睾丸脏器系数㊁精子活力和数量下降，精子畸形率增加，血清性激素含量和睾丸组织内标志酶活性降低，抗氧化功能损伤，茶多酚可提高小鼠睾丸脏器系数和精子质量，增加血清性激素含量，增强睾丸生精相关酶活性与抗氧化功能，有效缓解ＺＥＮ与ＤＯＮ联合染毒对雄性小鼠的生殖毒性及氧化损伤㊂参考文献：［１］㊀ＪＵＡＮＣ，ＲＡＩＯＬＡＡ，ＭＡÑＥＳＪ，ｅｔａｌ．ＰｒｅｓｅｎｃｅｏｆｍｙｃｏｔｏｘｉｎｉｎｃｏｍｍｅｒｃｉａｌｉｎｆａｎｔｆｏｒｍｕｌａｓａｎｄｂａｂｙｆｏｏｄｓｆｒｏｍＩｔａｌｉａｎｍａｒｋｅｔ［Ｊ］．ＦｏｏｄＣｏｎｔｒｏｌ，２０１４，３９：２２７－２３６．［２］㊀ＳＭＩＴＨＪＥ，ＳＯＬＯＭＯＮＳＧ，ＬＥＷＩＳＣ，ｅｔａｌ．Ｒｏｌｅｏｆｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓｉｎｈｕｍａｎａｎｄａｎｉｍａｌｎｕｔｒｉｔｉｏｎａｎｄｈｅａｌｔｈ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ＆Ｍｏｔｉｌｉｔｙ，２０１０，３（４）：１８７－１９２．［３］㊀ＡＢＩＤ⁃ＥＳＳＥＦＩＳ，ＯＵＡＮＥＳＺ，ＨＡＳＳＥＮＷ，ｅｔａｌ．Ｃｙ⁃ｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ，ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆＤＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｓｙｎｔｈｅｓｅｓａｎｄｏｘｉｄａｔｉｖｅｄａｍａｇｅｉｎｃｕｌｔｕｒｅｄｃｅｌｌｓｅｘｐｏｓｅｄｔｏｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅ［Ｊ］．ＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙｉｎＶｉｔｒｏ，２００４，１８（４）：４６７－４７４．［４］㊀ＰＥＴＲＯＶＶ，ＱＵＲＥＳＨＩＭＫ，ＨＩＬＬＥＪ，ｅｔａｌ．Ｏｃｃｕｒ⁃ｒｅｎｃｅ，ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈｏｓｔ⁃ｓｅ⁃ｌｅｃｔｉｖｅｐｌａｎｔｍｙｃｏｔｏｘｉｎｓ［Ｊ］．ＦｏｏｄａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＴｏｘｉ⁃ｃｏｌｏｇｙ，２０１８，１１２：２５１－２６４．［５］㊀闫昭明，陈清华，陈凤鸣．玉米赤霉烯酮毒性研究［Ｊ］．动物营养学报，２０１８，３０（９）：３４５３－３４５８．［６］㊀ＳＰＲＡＮＤＯＲＬ，ＣＯＬＬＩＮＳＴＦＸ，ＢＬＡＣＫＴＮ，ｅｔａｌ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌｏｎｓｅｌｅｃｔｅｄｍａｌｅｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｅｎｄｐｏｉｎｔｓ［Ｊ］．ＦｏｏｄａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２００５，４３（４）：６２３－６３５．［７］㊀ＡＨＭＥＤＫＫＭ，ＢＡＲＡＬＭ．Ｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓａｓａｎ⁃ｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ［Ｊ］．ＦｒｅｅＲａｄｉｃａｌｓａｎｄＡｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ，２０１１，１（２）：２－３．［８］㊀石惠宇，闫素梅．维生素Ａ对动物氧化应激的减缓作用机制［Ｊ］．动物营养学报，２０１９，３１（６）：２４５８－２４６４．［９］㊀ＬＡＭＢＥＲＴＪＤ，ＹＡＮＧＣＳ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｃａｎｃｅｒｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎｂｙｔｅａｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ［Ｊ］．ＴｈｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＮｕ⁃ｔｒｉｔｉｏｎ，２００３，１３３（１０）：３２６２Ｓ－３２６７Ｓ．［１０］㊀ＦＲＡＧＡＣＧ，ＣＲＯＦＴＫＤ，ＫＥＮＮＥＤＹＤＯ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓａｎｄｏｔｈｅｒｂｉｏａｃｔｉｖｅｓｏｎｈｕ⁃ｍａｎｈｅａｌｔｈ［Ｊ］．Ｆｏｏｄ＆Ｆｕｎｃｔｉｏｎ，２０１９，１０（２）：５１４－５２８．［１１］㊀ＳＥＮＴＫＯＷＳＫＡＡ，ＰＹＲＺＹＮᶄＳＫＡＫ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｓｅｌｅｎｉｕｍｃｏｍｐｏｕｎｄｓａｎｄｔｈｅｉｒｍｉｘｔｕｒｅｓｗｉｔｈｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙＲｅｐｏｒｔｓ，２０１９，４６（３）：３０１９－３０２４．［１２］㊀王慧敏，朱军莉，陆海霞，等．茶多酚抑制腐败希瓦氏菌机理研究［Ｊ］．茶叶科学，２０１４，３４（２）：１４９－１５５．［１３］㊀李振，陈现伟．茶多酚的免疫调节作用及应用［Ｊ］．中国兽药杂志，２００４，３８（４）：３３－３５．［１４］㊀张劲，彭天英，张令君，等．茶多酚提取技术及其功能化研究进展［Ｊ］．广东化工，２０１９，４６（４）：８６－８７．［１５］㊀元辉雄，庞艳芳，王俊利，等．铝对大鼠精子质量及精子线粒体的影响［Ｊ］．中华男科学杂志，２０１９，２５（７）：５７９－５８５．［１６］㊀王文祥，张文昌，廖惠珍．茶多酚对镉致大鼠精子损伤的保护作用［Ｊ］．福建医科大学学报，２０１１，４５（５）：３１９－３２２，３２６．［１７］㊀黄菊，张光佑，沈伶，等．茶多酚对大鼠卵巢卵泡发育的影响［Ｊ］．汕头大学医学院学报，２０１５，２８（２）：９４－９６．［１８］㊀逄健，孙中义．小剂量玉米赤霉烯酮损害雄性小鼠生殖能力的研究［Ｊ］．第三军医大学学报，２０１７，３９（１２）：１２２５－１２３０．［１９］㊀赵丽华，张爱君．砷中毒对大鼠睾丸组织及精子形态的影响［Ｊ］．中国地方病防治杂志，２０１８，３３（４）：３７０，４４６．［２０］㊀ＩＢＲＡＨＩＭＡ，ＮＡＴＡＲＡＪＡＮＳ，ＧＨＡＦＯＯＲＵＮＩＳＳＡ．Ｄｉｅｔａｒｙｔｒａｎｓ⁃ｆａｔｔｙａｃｉｄｓａｌｔｅｒａｄｉｐｏｃｙｔｅｐｌａｓｍａｍｅｍ⁃ｂｒａｎｅｆａｔｔｙａｃｉｄｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２００５，５４（２）：２４０－２４６．［２１］㊀ＭＯＺＡＦＦＡＲＩＡＮＤ，ＰＩＳＣＨＯＮＴ，ＨＡＮＫＩＮＳＯＮＳＥ，ｅｔａｌ．Ｄｉｅｔａｒｙｉｎｔａｋｅｏｆｔｒａｎｓｆａｔｔｙａｃｉｄｓａｎｄｓｙｓｔｅｍｉｃｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎｉｎｗｏｍｅｎ［Ｊ］．ＴｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ，２００４，７９（４）：６０６－６１２．［２２］㊀ＨＡＳＣＨＥＫＷＭ，ＨＡＬＩＢＵＲＴＯＮＪＣ．Ｆｕｓａｒｉｕｍｍｏ⁃ｎｉｌｉｆｏｒｍｅａｎｄｚｅａｒａｌｅｎｏｎｅｔｏｘｉｃｏｓｅｓｉｎｄｏｍｅｓｔｉｃａｎｉ⁃ｍａｌｓ：ａｒｅｖｉｅｗ［Ｍ］／／ＲＩＣＨＡＲＤＪＬ，ＴＨＵＲＳＴＯＮＪＲ．Ｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｍｙｃｏｔｏｘｉｃｏｓｅｓ．Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ：Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，１９８６：１５６．［２３］㊀刘彩艳．猪玉米赤霉烯酮中毒的临床表现及其治疗［Ｊ］．现代畜牧科技，２０１６（９）：１１４．［２４］㊀凌阿茹．脱氧雪腐镰刀菌烯醇诱导睾丸组织细胞凋４５９１４期曹㊀利等：玉米赤霉烯酮与脱氧雪腐镰刀菌烯醇联合染毒对亡及精子损伤的作用机制研究［Ｃ］／／中国毒理学会第七次全国会员代表大会暨中国毒理学会第六次中青年学者科技论坛论文摘要．北京：中国毒理学会，２０１８：２．［２５］㊀樊友平．精液微量元素锌㊁硒对精子质量的影响［Ｊ］．生殖与避孕，２００５（１）：６３．［２６］㊀王卫杰，李惠，王乐，等．饲料添加剂的蓄积对幼犬睾丸功能相关酶活性的影响［Ｊ］．饲料博览，２０１６（７）：１－３．［２７］㊀张波，徐光翠，刘峰，等．氧乐果对小鼠睾丸特征性酶的影响及茶多酚的拮抗作用［Ｊ］．环境与健康杂志，２００５，２２（５）：３４０－３４２．［２８］㊀ＧＥＮＧＸ，ＳＨＡＯＨ，ＺＨＡＮＧＺＨ，ｅｔａｌ．Ｍａｌａｔｈｉｏｎ⁃ｉｎ⁃ｄｕｃｅｄｔｅｓｔｉｃｕｌａｒｔｏｘｉｃｉｔｙｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｓｐｅｒｍａｔｏ⁃ｇｅｎｉｃａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｉｎｔｅｓｔｉｃｕｌａｒｅｎｚｙｍｅｓａｎｄｈｏｒｍｏｎｅｌｅｖｅｌｓｉｎｍａｌｅＷｉｓｔａｒｒａｔｓ［Ｊ］．Ｅｎｖｉｒｏｎ⁃ｍｅｎｔａｌＴｏｘ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玉米赤霉烯酮的毒性雷灼贵（华南理工大学轻工与食品学院，广东广州510640）摘要：真菌毒素广泛存在于世界各地的谷物及其副产物当中。
玉米赤霉烯酮(Zearalenone, 简称为ZEN)作为镰刀霉毒素的代表,是一种具强烈致畸作用的生殖系统毒素,对肝脏肾脏均有强烈毒害作用，也是影响食物安全的重要因素之一。
主要对玉米赤霉烯酮的毒素来源、中毒机理、中毒表现以及防治措施进行论述，其中重点对中毒机理进行综述。
关键词：玉米赤霉烯酮；毒性；雌激素；中毒机理The toxicity of zearalenoneLEI Zhuogui(School of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology，Guangzhou 510640, Gaungdong, China)Abstract：Mycotoxin widely exist in the grain and its by-products all over the world. Zearalenone(ZEN), as the representative of the fusarium toxin, is a teratogenic, mutagenic and carcinogenic mycotoxin, is strong toxic effect on kidney and liver and is also one of the important factors that affect food safety. This pape mainly elaborates the sources, poisoning mechanism, poisoning manifestations as well as the prevention and control measures of Zearalenone, besides,the poisoning mechanism were especially discussed.Key words：zearalenone；toxicity；estrogen；mechanism of toxication引言食品安全已成为世界各国普遍关注的焦点问题,它不仅涉及到贸易壁垒中的技术问题,而且涉及到从农场到餐桌的食物链安全保障问题。
玉米赤霉烯酮的限量标准## 玉米赤霉烯酮的限量标准玉米赤霉烯酮（Zearalenone，简称ZEA）是一种由镰刀菌属（Fusarium）产生的毒素，主要存在于玉米等谷物中。
其对动物和人类健康可能造成严重危害，因此，各国制定了相应的限量标准来确保食品安全。
本文将就玉米赤霉烯酮的限量标准进行详细探讨。
### 玉米赤霉烯酮的毒性及影响玉米赤霉烯酮在动物体内具有雌激素样作用，可能导致动物性别发育异常、生殖系统疾病等问题。
对人体健康的主要影响包括内分泌干扰、生殖系统疾病以及可能的致癌作用。
因此，对玉米及其制品中玉米赤霉烯酮含量的监测和限量是十分重要的。
### 国际限量标准国际上，各个国家和地区对玉米赤霉烯酮的限量标准略有差异，但大体上都遵循国际食品法典委员会（Codex Alimentarius Commission，简称Codex）制定的标准。
Codex关于玉米赤霉烯酮的限量标准为：- 玉米及其制品：500 μg/kg（即0.5 mg/kg）这一标准是在对食品安全和人体健康进行全面评估的基础上确定的，旨在保护消费者免受玉米赤霉烯酮的不良影响。
### 国内限量标准中国大陆地区对玉米赤霉烯酮的限量标准也有明确规定，主要参考了国际标准并结合国内实际情况。
根据中国国家标准《食品安全国家标准粮食及其制品中玉米赤霉烯酮的限量》（GB 2761-2017）的规定，玉米及其制品中玉米赤霉烯酮的限量标准为：- 玉米：60 μg/kg- 玉米制品：60 μg/kg### 监测与控制为了确保食品安全，各国都建立了玉米赤霉烯酮的监测体系，对进口和国内生产的玉米及其制品进行定期监测，并对超出限量的产品采取相应的控制措施，如下架、销毁等，以保障消费者权益。
### 结语玉米赤霉烯酮作为一种潜在的食品安全风险，其限量标准的制定和执行对于保障人民群众的健康至关重要。
各国在制定限量标准时都充分考虑了国内外的科学研究成果和食品安全监测数据，以确保标准的科学性和可操作性。
玉米赤霉烯酮猪卵巢颗粒细胞的毒害及其解毒贺军宇;袁慧;李芳【期刊名称】《中国兽医杂志》【年(卷),期】2007(043)010【摘要】玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEA），又称F-2毒素，是由镰刀菌产生的一种真菌毒素，也是一种植物雌激素，化学名为6-（10羟基-6氧基一十一-碳烯基）β-雷锁酸内酯。
F-2毒素对畜禽的主要毒副作用表现为雌激素中毒，引起猪和牛的不孕和流产。
近年来，养殖业中F-2毒素中毒现象发生频繁，如何对其进行有效的防治已成为研究热点，但尚未见有关F-2毒素对猪卵巢颗粒细胞毒害及其解毒的报道。
本文采用体外细胞培养方法，研究F-2毒素对卵巢颗粒细胞的毒害作用，并探索维生素E对F-2毒素的解毒功效。
【总页数】2页(P19-20)【作者】贺军宇;袁慧;李芳【作者单位】湖南省第二人民医院干细胞研究室,湖南,长沙,417007;湖南农业大学动物医学院,湖南,长沙,410128;湖南农业大学动物医学院,湖南,长沙,410128;长沙市雅礼寄宿制中学,湖南,长沙,410007【正文语种】中文【中图分类】S856.9【相关文献】1.玉米赤霉烯酮对动物的毒害作用 [J], 姜淑贞;邹杨2.玉米赤霉烯酮的毒害及脱毒技术的研究进展 [J], 王金昌;涂祖新;王小红;杨一兵3.玉米赤霉烯酮毒害作用研究进展 [J], 赵建华;邹杨;姜淑贞4.褪黑素抑制玉米赤霉烯酮诱导的猪卵巢颗粒细胞凋亡 [J], 周佳伟;吴俊静;乔木;王孝忠;刘贵生;梅书棋;彭先文5.咖啡酸对玉米赤霉烯酮诱导小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的保护作用 [J], 裴亚萍;赵瑾;孙娜;孙盼盼;孙耀贵;范阔海;尹伟;李宏全因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
附图１－１溶剂组附图ｌ－２染毒组
附图２－ｌ溶剂组精子计数附图２－２低剂量组精子计数
附图２－３染毒中剂量组精子计数附图２－４染毒高剂量组精子计数
附图３－１对照组睾丸４Ｘ１０倍附图３－２对照组睾丸２０Ｘ１０倍
上皮细胞层次减少，无成熟精子附图３．３中剂量睾丸４×１０倍问质增生上皮细胞排列紊乱附图３．５高剂量组睾丸２０×１０倍
上皮细胞排列紊乱，管腔脱落细胞
附图３－４中剂量睾丸１０×１０倍
蛋白液体渗出．上皮层次减少
附图３－６高剂量组睾丸２０×１０倍
细胞膜不完整，核膜消失
附图４－１对照组精母细胞（５０００×）附图４＿２染毒组精母细胞（５０００×）
３７
山东省医学科学院硕士研究生毕业论文
核膜肿胀。
溶解
附图４－３对照组问质细胞（５０００Ｘ）附图４－４染毒组间质细胞（５０００×）
线粒体肿胀，核不完整
附图４—５对照组支持细胞（５０００Ｘ）附图４－６染毒组支持细胞（５０００Ｘ）
附图４－７对照组精子（５０００×）泡质出现空泡，核周间隙和细胞间隙增宽
附图４．８染毒组支持细胞（５０００Ｘ）。
董双，何剑斌，张燚，等．玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用．［J］．畜牧与兽医，2016，48（6）：25－29Dong S，He J B，Long M，et al．Toxic effects of zearalenone on male reproductive system in mice［J］．Animal Husbandry＆Veterinary Medicine，2016，48（6）：25－29玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统的毒性作用董双，何剑斌*，张燚，龙淼*（沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳110866）摘要：为探讨玉米赤霉烯酮（ZEA）对雄性生殖系统的毒性作用，本试验选取清洁级昆明系雄性小鼠93只，随机分成5组：25mg/kg、50mg/ kg、75mg/kg ZEA处理组、溶剂对照组（DMSO）、空白对照组（生理盐水），进行腹腔注射染毒，每天1次，连续5d，于末次染毒后第2天摘眼球采血并脱颈处死动物，分离睾丸和附睾，测定脏器系数、精子密度和活力，睾丸酶的活力水平以及血清睾酮和雌激素的浓度。
结果显示，与对照组相比，玉米赤霉烯酮显著地降低小鼠的体重和精液品质，睾丸乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）的活力随着染毒剂量的增加显著升高（P＜0.01，P＜0.05），血清睾酮和雌激素浓度随染毒剂量的增加显著下降（P＜0.01，P＜0.05）。
该结果提示，玉米赤霉烯酮对雄性小鼠生殖系统具有严重的损伤作用，影响生精功能。
关键词：玉米赤霉烯酮；睾丸；附睾；精液品质中图分类号：S856.9文献标志码：A文章编号：0529－5130（2016）06－0025－05Toxic effects of zearalenone on male reproductive system in miceDONG Shuang，HE Jian－bin，LONG Miao，ZHANG Yi（College of Animal Science and Veterinary Medicine，Shenyang Agricultural University，Shenyang110866，China）Abstract：To examine toxic effects of zearalenone（ZEA）on male reproductive system，93clean grade adult male Kunming mice were ran-domly divided into5groups and exposed to intraperitoneal injection of ZEA at25，50and75mg/kg body weight，DMSO and normal saline solution，respectively for5days．The mice were sacrified at the6th day after eyeball blood sampling．The testis and epididymis viscera inde-xes，semen quality，testis enzyme activity and serum concentrations of testosterone and estrogen were assessed．The results showed that com-pared with the control group，ZEA significantly decreased the body weight，semen quality，increased the testis enzyme activity and decreased serum concentrations of testosterone and estrogen（P＜0.01，P＜0.05）．In conclusion，ZEA can hurt male reproductive system and affect the spermatogenic function．Key words：zearalenone；testis；epididymis；semen quality；testosterone玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEA）是由镰刀菌属的霉菌，如黄色镰孢霉、禾谷镰孢霉、轮枝镰孢霉产生的类雌激素作用的次级代谢产物，是一种大环β－二羟基苯甲酸内酯类［1－2］。
这种霉菌毒素存在于各类农作物中，如收割前后的小麦、大麦、玉米、高粱等，以及农产品加工阶段，进而污染世界范围内的人类食物和动物饲料，给全球带来巨大的经济损失。
ZEA不仅具有肝肾毒性、遗传毒性、免疫毒性，还收稿日期：2015－06－30基金项目：中国博士后科研基金项目（2014M551125）；国家自然科学基金项目（31201961、31302152）作者简介：董双（1989－），女，硕士生，研究方向：临床兽医学*通信作者：何剑斌（1969－），男，硕士生导师，教授，研究方向：临床兽医学，E－mail：hejianbin69@；龙淼（1978－），男，讲师，博士，研究方向：动物营养代谢病及中毒病，E－mail：longjlau@ 由于其能够与17β－雌二醇竞争性结合雌激素受体（EＲ），具有雌激素效应，干扰机体的内分泌系统，产生生殖毒性，进而影响动物的正常生理活动，引起靶器官、靶组织甚至机体的多个系统发生病变［3－5］，对人类和动物的健康危害极大。
ZEA作为一种外源性内分泌干扰物，其生殖毒性是当今科研领域的一大研究热点。
有研究显示，ZEA对机体的生殖系统损害极大［6］。
研究表明玉米赤霉烯酮呈剂量依赖性方式诱导猪卵巢颗粒细胞发生细胞凋亡和细胞坏死，从而减少细胞的增殖［7］，还能够引起断奶仔猪发生氧化损伤和炎症反应［8］，并且玉米赤霉烯酮还使断奶雌鼠的初情期提前，并干扰雌鼠的早期妊娠［9］。
ZEA不仅影响雌性动物的繁殖机能，还损害雄性动物的生殖系统，能够引起大鼠的睾丸萎缩，并诱导生精细胞发生凋亡［10］，睾丸间质细胞发生凋亡和细胞自噬［11］，且抑制睾酮的分泌［12］，从而影响精子的生成，导致潜在的生殖问题。
国内外学者做了大量的体内体外试验，以期揭示出ZEA生殖毒性的作用机制，然而，关于ZEA对雄性生殖毒性的研究相对较少。
因此，我们通过检测小鼠睾丸和附睾脏器系数、精液品质、睾丸关键性酶活力的水平以及血清睾酮和雌激素的质量浓度，就ZEA对雄性生殖系统的毒性作用进行初步研究，为进一步探讨其毒性作用机制提供有力参考。
1材料与方法1.1试验动物健康清洁级的昆明系雄性小鼠95只，8周龄，体重为40－45g，购自辽宁长生生物技术有限公司。
小鼠食用同种灭菌饲料，自由饮水和采食，定期添加饲料和饮用水，并更换垫料和清洁粪便，每天光照12h，适应性饲养1周，无异常后进行试验。
1.2药品和试剂ZEA和二甲基亚砜（DMSO）均购自美国Sigma 公司。
乳酸脱氢酶（LDH）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
血清睾酮和雌二醇放射性免疫试剂盒购自北京北方生物技术研究所。
1.3分组和染毒将93只雄性昆明小鼠随机分成5组，第1组为空白对照组10只；第2组为溶剂对照组10只，腹腔注射DMSO和生理盐水的混合液；第3组25只、第4组25只和第5组25只为ZEA处理组，分别腹腔注射25mg/kg、50mg/kg、75mg/kgZEA。
每天1次，连续染毒5d，根据体重增减染毒剂量。
1.4样本采集于末次染毒后第2天，对小鼠进行摘眼球采血与脱颈处死，分离两侧睾丸和附睾，并称重。
每组取4只小鼠的左侧睾丸放入4%中性甲醛溶液中固定，其余睾丸经液氮冻存后，转移至－80ħ超低温冰箱中保存。
双侧附睾需立即放入2mL37ħ预热的生理盐水中，进行精子计数和活力检查。
小鼠的血液室温下静置1h，3000r/min离心15min后收集血清于－20ħ保存。
1.5小鼠的行为观察和睾丸与附睾的脏器指数每天观察动物的采食、饮水、行为活动、毛色、尿液和粪便等有无异常，染毒前后各测定体重一次，以观察ZEA对小鼠生长状况的影响。
于末次染毒后剖检那一天称量小鼠的体重，脱颈处死后，分离睾丸和附睾并称重，计算脏器系数。
脏器指数（%）=脏器重量（g）/小鼠体重（g）ˑ100。
1.6精液品质的检测精子活力的检测：采取两侧附睾，立即置于2 mL37ħ预热的生理盐水中剪碎，吸管吹打混匀，制备成精子悬液，置于37ħ水浴锅中孵育20min后，取1滴悬液置于37ħ预热的清洁的血细胞计数板上，盖上盖玻片，在高倍镜下连续计数200个精子，精子活力分级依照WHO对精子的分级标准，分为：Ⅰ快速直线的向前运动；Ⅱ慢速或迟钝的直线或非直线向前运动；Ⅲ不向前的运动；Ⅳ不活动。
整个操作和观察在室温下进行，并在10min内结束。
精子活动度（%）=（Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ）/（Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ）ˑ100%。
精子计数：将余下的精子悬液置于60ħ水浴中处死精子。
吸取一滴精子悬液于血细胞计数板的计数池内，按照红细胞计数法，计数5个中方格内的精子总数，记为n a，按下列公式计算精子总数N a（106/ mL）=naˑ100000。
精子畸形的观察：取精子悬液一滴，用2%伊红染色5min，制成精液涂片，晾干后，甲醇固定，晾干后高倍镜下观察畸形精子。
1.7睾丸标志酶的活力检测取－80ħ冰箱保存的睾丸，每组5个，严格按照试剂盒说明书配制试剂并制备组织匀浆液，按要求检测LDH、AKP、ACP的活力。
1.8血清睾酮和雌二醇的浓度从－20ħ冰箱中取出血清，恢复至室温后，严格按照试剂盒说明操作，制作标准曲线，检测血清睾酮和雌二醇的浓度，由中国医科大学实验室协助完成。
1.9统计学处理采用SPSS17.0软件进行数据分析，实验数据以均数ʃ标准误表示，P＜0.05具有统计学意义。
2结果2.1行为观察和成活率在染毒期间，空白对照组和溶剂对照组的小鼠采食和饮水正常，尿液和粪便正常，毛色光滑，活动灵敏；而ZEA处理组的小鼠反应迟钝，少动，精神不振，毛色光泽度降低，较少采食和饮水，有的表现为肌肉震颤，走路不稳，严重者在染毒第4天死亡。
各组动物死亡情况如表1所示。
表1各试验组小鼠死亡情况组别动物数/只死亡动物数/只空白对照组100溶剂对照组100低剂量组251中剂量组258高剂量组2510如表2所示，每组随机抽取5只小鼠，各试验组小鼠在染毒5d前后的体重变化。
在连续染毒5d后，ZEA各处理组小鼠的体重均下降，但中剂量组（50 mg/kg）体重下降不明显，低剂量（25mg/kg ZEA）和高剂量（75mg/kg ZEA）组的小鼠体重与空白对照组相比，明显降低（P＜0.05），尤其是高剂量组（P＜0.01）。
