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荧光光谱分析技术概述1荧光光谱分析原理 (1)2荧光分析法 (4)2.1定性分析法 (4)2.2定量分析法 (4)1荧光光谱分析原理光学分析法分为光谱法和非光谱法，光谱法是辐射能与物质组成和结构的相互作用，以光谱的出来为基础，非光谱法不包含物质内能的变化，不涉及能级跃迁，而是辐射方向和物理性质的改变。
光学分析方法分类表1分析法特征具体方法光谱法光的发射原子发射光谱、原子荧光光谱、X射线荧光光谱、分子荧光光谱、分子磷光光谱、化学发光、电子能谱、俄歇电子能谱光的吸收原子吸收光谱、紫外-可见分光光度法、红外光谱、X射线吸收光谱、核磁共振光谱、电子自旋共振光谱、光声光谱光的散射拉曼光谱非光谱法光的散射比浊法、散射浊度法光的折射折射法、干涉法光的衍射X射线衍射、电子衍射光的转动旋光色散法、偏振法、圆二向色法荧光发光机理可按量子理论通俗解释: 光具有波动、粒子二重性, 光波愈短, 其光子能量愈强; 反之波长愈长其能量则弱。
当某些物质受到紫外线或较短波长光照射, 吸收了全部或部分光能量, 使其分子的能级升高而处于亚稳定状态, 当恢复到稳定的基态时, 这些分子就会立即释放多余的能量, 其中一部分化为热量而消失。
但对某些物质而言, 向基态跃迁时是以“光”形式释放, 因为有部分能量被消耗, 所以重新发出的光能量总比吸收的能量要小。
由于能量愈小, 光波愈长, 所以物质所激发的荧光总比照射它的光波要长。
磷光的能量较荧光还要小, 所以它的波长比荧光要长, 寿命可达数小时之久, 这就是两者的区别。
如果物质的分子吸收了紫外和可见区电磁辐射后，它的电子能跃迁至激发态，然后以热能的形式将这一部分能量释放出来，本身又回复到基态如果吸收辐射能后处于电子激发态的分子以发射辐射的方式释放这一部分能量，再发射的波长可以同分子所吸收的波长相同，也可以不同，这一现象称为光致发光。
最常见的两种光致发光现象是荧光和磷光。
这两种光致发光的机理不同，荧光发光过程在激发光停止后10s内停止发光，而磷光则往往能延续10-3s-10s的时间间隔。
荧光分析法测定维生素B2一、实验目的1．学习和掌握荧光光度分析法测定维生素B2的基本原理和方法；2．熟悉荧光分光光度计的结构及使用方法；3. 学习掌握固体及液体试样的荧光测试方法。
二、实验原理当用一种波长的光照射某种物质时，这种物质会在极短的时间内，发射出一种比照射光波长较长的光，这种发射出来的光就叫做荧光。
当照射光停止照射时，荧光也随之很快地消失。
利用某些物质被紫外光照射后所产生的、能够反映出该物质特性的荧光，以进行该物质的定性分析和定量分析，称为荧光分析。
实验证明，荧光通常发生于具有刚性平面的л - 电子共轭体系分子中。
随着л-电子共轭度和分子平面度的增大，荧光也就越容易产生。
因此几乎所有对分析化学有用的荧光体系都含有一个以上的芳香基团，芳环数越多，荧光愈强。
能发荧光的纯无机物很少，通常是利用有机配位体与金属离子形成荧光络合物进行无机离子的分析。
图1．荧光分光光度计的结构原理图荧光分光光度计工作原理（图1）可简述为：光源发出的光束经激发单色器色散，提取所需波长单色光照射于样品上，由样品发出的荧光经发射单色器色散后照射于检测器上，检测器把荧光强度信号转变为电信号并经放大器放大后，由信号显示系统显示或者记录。
荧光光谱包括激发光谱和发射光谱两种。
激发光谱是是指发射单色器波长固定，而激发单色器进行波长扫描所得到的荧光强度随激发光波长变化的曲线。
荧光发射光谱是指激发单色器波长固定，发射单色器进行波长扫描所得到的荧光强度随发射光波长变化的曲线。
一般所说的荧光光谱实际上仅指荧光发射光谱。
这一光谱为分析指出了最佳的发射波长。
荧光定性定量分析与紫外可见吸收光谱法相似。
定性时，是将实验测得样品的荧光激发光谱和荧光发射光谱与标准荧光光谱图进行比较来鉴定样品成分，一般荧光定性的依据是荧光光谱峰的个数、位置、相对强度及轮廓。
定量分析时，一般以激发光谱最大峰值波长为激发光波长，以荧光发射光谱最大峰值波长为发射波长，测量样品的荧光强度。
