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分子生药学实验教学大纲（精）
分子生药学实验教学大纲
一、实验课程名称：分子生药学Molecular Pharmacognosy
二、课程编码：1002151
三、课程性质：必修
四、学时学分：36学时，2.0学分
五、适用专业：生物药学
六、本实验课的配套教材、讲义与指导书：
《分子生药学》黄璐琦,北京医科大学出版社
《基因工程》吴乃虎，科学出版社
《分子生物学》孙乃恩等编,南京大学出版社
《中国生物化学与分子生物学报》
七、实验课的任务、性质与目的:
实验是教学过程中的重要环节。
其目的是把课堂教学中所获得的理论知识加以验证和巩固。
实验主要结合课堂讲授的内容进行，研究遗传物质DNA的异同及其表达与生药真伪优劣的关系，保证品质评价。
通过对实验中实物的观察、辨别和验证，从而使同学们将所学的理论知识和实践联系起来。
建立一个既与理论课有一定互补作用，又具有相对独立性的实验体系，力求在培养学生动手能力的同时，理论联系实际地培养学生的独立思考、综合分析能力，科学思维能力和创新意识，全面提高学生的综合素质。
八、实验课的基本理论
九、实验方式与基本要求
校内课堂实验
规范使用PCR仪、低温离心机、电泳仪、凝胶成像系统等一切实验仪器，保持实验台和室内的整洁，实验报告须在实验室作完并交给老师。
十、考核方式与评分方式
实验内容占卷面考试内容的15%。
十一、实验项目设置与内容提要。
实验九当归、川芎、柴胡、白芷、小茴香、马钱子等鉴别一、目的要求(一) 掌握当归、川芎、柴胡、小茴香、马钱子的性状显微特征。
(二) 掌握白芷、连翘的主要性状特征。
二、仪器用品、药品：酒精灯、三角架、试管、滤纸、甲醇、二甲氨基苯甲醛的甲醇溶液(1：30)、磷酸、l％钒酸铵硫酸溶液、浓硝酸。
当归、柴胡、川芎、白芷、小茴香、秦皮、连翘、防风、马钱子的药材及饮片。
当归、川芎、柴胡、小茴香、马钱子的横切片。
当归、柴胡的粉末。
三、实验内容与方法：(一) 性状鉴定：1、当归Radix Angelicae Sinnesis：根头及主根粗短，略呈圆柱形，支根扭曲，表面黄棕色，有横向椭圆形皮孔。
顶端有残留的叶鞘及茎基，质柔软，断面黄白色或黄棕色，皮部厚，有棕色油点，形成层环棕色，木部色较淡。
有浓郁香气，味甘辛微苦。
2、柴胡Radix Bupleuri：根呈圆柱形或圆锥形，常有分枝，表面淡棕色或棕色，近根头部有横皱纹，下部有不规则纵皱纹并有细小支根痕及皮孔，根头部多有残留茎基。
质坚韧。
断面片状纤维性、皮部淡棕色木质部淡黄白色。
气微芳香，味微苦。
3、川芎Rhizoma Chuanxiong：结节状团块，注意隆起的轮节，瘤状根痕，断面颜色和特征，气浓香而特异，味苦辛。
4、小茴香Fructus Foeniculi：药材呈长椭圆形，似稻谷状。
表面黄绿至淡黄色，分清柱基和果柄。
再取浸泡材料，轻轻将二分果分开，可见各由一细小的分果柄连在果柄上。
分果长椭园形，背面具5条纵棱，腹面稍平，用刀将分果横切，可见断面边缘波状，中心为灰白色的胚乳和胚。
中果皮内二棱脊间可见棕色油管断面，腹面有2个。
气特异，味微甜辛。
5、马钱子Semen strychni：扁园形、扭扣状；表面密生匍匐的银灰色丝状毛茸，自中心向四周放射；底面中心有一稍突起的圆点状种脐，种脐与边缘小突起状种孔间常有一条棱线。
纵剖面可见淡黄白色角质肥厚的胚乳。
近种孔处子叶两枚，心形，掌状脉5~7条。
10药学—-生药学实验教学大纲实验一显微标本片的制作及生药的水分含量测定一、实验目的1.掌握粉末制片法的步骤。
2.熟悉烘干法测定生药中水分含量。
二、实验材料、仪器及试剂水合氯醛液、甘油、苯酚1、醋酸、3%过氧化氢或次氯酸钠溶液三、实验内容与方法●粉末制片法1.蒸馏水装片法专门适用于观察淀粉粒.挑取粉末适量,置载玻片中央，然后滴加蒸馏水1-2滴。
用牙签或解剖针拌匀，将镊子夹一洁净盖玻片沿液面从左至右轻轻放下,多余试液用滤纸条吸去，保持装片洁净，即得。
2.水合氯醛法挑取适量粉末置载玻片上，滴加水合氯醛液1—2滴，置酒精灯上加热,待液体渗入粉末内部，渐成透明状，试液因加热而渐渐挥干，再滴加水合氯醛液1—2滴,加热，透化，防止沸腾。
然后滴加稀甘油1-2滴，用解剖针将粉末混匀,用镊子夹干净盖玻片沿液面从左至右轻轻放下，液体受压而延展，充满盖玻片下方。
多余的试液用滤纸条吸去，保持装片洁净，即得。
切忌用滤纸条在盖玻片上擦拭，补加液体时应在空隙的相对边缘加入，以防气泡产生。
颜色很深的粉末，可先进行脱色处理.取待检粉末少许置小烧杯中或载玻片上，加少许3％过氧化氢溶液或次氯酸钠溶液，待颜色变浅后，除去液体。
或取粉末置烧杯中,加入适量水合氯醛在酒精灯上加热,除去液体，滴加稀甘油1-2滴，即得供观察用。
●烘干法测定丹参中水分含量1.原理：供试品在100-105℃下连续干燥,挥发尽其中的水分,根据减失的重量,即可计算出供试品中的含水量（％).2.方法：取丹参供试品5g，平铺于干燥恒重（W0）的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm,精密称定重量W1，求出供试品重量Ws,打开瓶盖，置恒温干燥箱中，在100-105℃下连续干燥5h,将瓶盖盖好，移至干燥器中，冷却30分钟，精密称定重量，再在上述温度下干燥1h,冷却，称重至连续两次称重的差异不超过5mg为止（W2).3.计算:水分含量=（W1—W2）/Ws4.结果判定将计算结果与药品标准的含水量限度（《13％）比较,若低于或等于限度则符合规定，否则不符合规定。
实验十五全草类生药一一麻黄一、实验目的和要求：1、掌握麻黄的生药性状特征。
2、掌握麻黄横切面组织特征与粉末显微特征。
二、实验材料草麻黄、中麻黄、木贼麻黄原植物标本、生药及组织切片、粉末。
三、实验内容及步骤：1、性状鉴别取麻黄生药，观察其性状、注意其形状、节间长度、鳞叶状况、色泽、质地、气味等特征。
2、显微鉴定(1)镜检草麻黄茎横切片，自内向外注意观察下列组织特征；①表皮一列薄壁细胞组成，外壁厚，被角质层，两棱脊间有下陷气孔。
②皮层宽广，外侧具下皮纤维束，内侧有散在的纤维束。
③中柱鞘纤维束新月形，位于韧皮部外侧。
④维管束8-10个，束内形成层明显，形成环类圆形。
⑤髓薄壁细胞壁非木化，含红棕色块状物，偶有环髓纤维。
⑥内含物皮层细胞及纤维壁含草酸钙沙晶（或方晶）注：中麻黄，维管束12-15个，形成层环类三角形；髓薄壁细胞微木化，环髓纤维多，木贼麻黄，维管束8-10个，形成层环类圆形，髓薄壁细胞壁木化，无环髓纤维。
（2）取麻黄粉末透化后装片，镜检注意下列特征：①气孔特异、长圆形，保卫细胞侧面观呈电话筒状。
②皮层纤维细长，壁厚，壁上嵌有砂晶纤维。
③棕色块多见。
3、理化鉴定（1）粉末微量升华，得细微针状或颗粒状结晶。
（2）取麻黄酸性水浸液各ImL分别置2试管中，一管加碘化铀钾试液1滴，产生黄色沉淀；另管加碘化汞钾试液1滴，不产生沉淀（生物碱）。
（3）取酸性水浸液，碱化后用乙醛萃取，挥去乙酸，残渣用酸水溶解，加0.5%的硫酸铜试液数滴后加10%的氢氧化钠溶液至显紫色（铜铝盐），再加乙醛数毫升振摇后放置，酸层显紫色，水层显蓝色（I-麻黄碱双缩胭反应）。
四、作业1、描述麻黄的性状特征。
2、绘麻黄茎横切面简图及粉末显微特征图。
五、思考题：如何从性状、显微特征上区别三种麻黄？。
生药学实验指导内蒙古医学院药学院生药学教研室二00五年六月目录实验一生药中常见化学成分的理化鉴定(一) (2)实验二生药中常见化学成分的理化鉴定(二) (3)实验三根类生药黄芪 (5)实验四根类生药甘草 (6)实验五根类生药百部 (7)实验六根茎类生药黄连 (8)实验七根茎类生药大黄 (9)实验八根茎类生药半夏 (10)实验九茎木类生药关木通 (11)实验十皮类生药肉桂 (12)实验十一皮类生药黄柏 (13)实验十二叶类生药大青叶 (14)实验十三花类生药金银花 (15)实验十四果实类生药小茴香 (16)实验十五种子类生药马钱子 (17)实验十六全草类生药麻黄 (18)实验十七菌类生药茯苓 (19)实验十八动物及矿物类生药 (20)附录1．常用试剂配制法 (21)2．常用商品酸碱浓度表 (25)3层离法常用显色剂 (26)4．显微镜测量法 (27)5．绘图注意事项 (27)一、实验注意事项：1．根据教学进程，温习与本次实验有关的课堂讲授内容。
2．仔细阅读本次实验的内容，要求弄懂实验的原理与方法。
3．准备好各种自备的实验用品，如铅笔、橡皮、直尺、报告纸等。
二、实验过程中的几点要求：1．遵守实验室规则，保持实验室安静。
2．实验认真，观察仔细，观察应当与思考结合起来，应当手、眼、脑三者并用。
3．由于实验时间有限，实验时应当善于安排自己的工作，注意力应当集中在主要问题上，不要用过多时间去钻研细小的次要问题，一时解决不了的次要问题，可留课外时间去解决o4．在实验过程中，应当随时注意观察到的现象，测量或称量的数据，计算结果等写在报告纸上，养成能随时作出准确、清淅、整齐的记录而不需要重抄的良好习惯。
5．实验进行过程中，必须注意听取教师的指导。
6．实验桌前应随时保持整洁，非实验必要物品一律不许放在桌面或桌架上。
7．纸屑、废物应放人污物缸内，不得乱丢地上，污物缸内不得倒入液体。
三、实验完毕时的几点要求:1．按照教师指定时间完成实验报告。
生药学实验讲义漯河医学高等专科学校1目录实验室守则3 实验一 生药中常见的化学成分的理化鉴定（一）4 实验二 生药中常见的化学成分的理化鉴定(二) 5 实验三 根类生药6 实验四 根茎类生药7 实验五 皮类生药8 实验六 茎木类生药9 实验七 植物细胞基本结构10 实验八 植物的组织11 实验九 根的组织构造12 实验十 双子叶植物茎的初生构造和次生构造单子叶植物、裸子植物茎的构造13 实验十一 叶的构造14 实验十二 花的组织构造15 实验十三 果实的内部组织构造16 实验十四 种子的内部组织构造17 实验十五 菌类、裸子植物的性状显微鉴定18 实验十六 双子叶植物根及根茎类生药的显微及显微理化鉴定 19 实验十七 单子叶植物根及根茎类生药的显微及显微理化鉴定20 实验十八 皮类生药的显微及显微理化鉴定21 实验十九 花类生药的显微及显微理化鉴定22 实验二十 果实种子类生药的显微及显微理化鉴定23 实验二十一 全草及其他类类生药的显微及显微理化鉴定24 实验二十二 动物类和矿物类生药的性状鉴别 25 实验二十三 户外见习26 实验二十四 附院药房见习27 附录一 常用试剂配置法28 附录二 层离法常用显色剂29 附录三 显微镜测量法30 附录五 显微镜的构造与使用31 附录六 生物绘图322实验室守则一、实验注意事项：1．根据教学进程，温习与本次实验有关的课堂讲授内容。
2．仔细阅读本次实验的内容，要求弄懂实验的原理与方法。
3．准备好各种自备的实验用品，如铅笔、橡皮、直尺、报告纸等。
二、实验过程中的几点要求：1．遵守实验室规则，保持实验室安静。
2．实验认真，观察仔细，观察应当与思考结合起来，应当手、眼、脑三者并用。
3．由于实验时间有限，实验时应当善于安排自己的工作，注意力应当集中在主要问题上，不要用过多时间去钻研细小的次要问题，一时解决不了的次要问题，可留课外时间去解决o4．在实验过程中，应当随时注意观察到的现象，测量或称量的数据，计算结果等写在报告纸上，养成能随时作出准确、清淅、整齐的记录而不需要重抄的良好习惯。
5．实验进行过程中，必须注意听取教师的指导。
6．实验桌前应随时保持整洁，非实验必要物品一律不许放在桌面或桌架上。
7．纸屑、废物应放人污物缸内，不得乱丢地上，污物缸内不得倒入液体。
3三、实验完毕时的几点要求:1．按照教师指定时间完成实验报告。
2．把实验用仪器、用品等收拾干净，放在指定位置。
发放给个人保管的可放抽屉或柜内。
3．临时借用物品应及时归还。
4．值日生负责最后清扫实验室卫生，并及时清除污物缸内的废弃物。
5．实验结束后，检查门、窗、水、电，保证无安全隐患后方可离开实验室。
实验一生药中常见化学成分的理化鉴定（一）一、实验目的要求：1．了解化学检出法在药材鉴定中的应用。
2．熟悉药材鉴定中常用的理化鉴定方法。
3．掌握生物碱，羟基蒽醌的理化性质和定性检识反应。
二、实验主要材料、仪器及试剂：马钱子、黄柏(苦参 ) 黄连、大黄、秦皮、黄连乙醇液。
水浴锅、荧光灯、蒸发皿、锥形瓶、试管、微量升华装置。
碘化铋钾试液、碘化汞钾试液、碘一碘化钾试液、浓硝酸、浓硫酸、 5％ NaOH 、 HCl 、乙醚、氨水。
三、实验内容：1．显微化学反应法：(1)将药材的切片或粉未置载玻片上，滴加适当试液，加盖玻片在显微镜下观察产生的颜色或结晶等，作为鉴别特征。
’①取干燥马钱子的胚乳部分作徒手切片，加l％硫矾酸试剂l 滴，镜检，观察结果。
②另取一切片，加浓硝酸l 滴，镜检，观察结果。
（2）取药材粗粉加适当试剂浸出，将浸出液滴于载玻片上，滴加适当试剂，加盖玻片，镜检观察反应结果。
取黄连乙醇液 1 滴，加浓 HN0 3 1 滴，镜检，观察结果。
(3)取药材的切片或粉末滴加适当试剂，直接观察皇现的种种颜色作为鉴别特征。
取大黄饮片，加 5％ NaOH l~2 滴，出现什么颜色 ?再加稀 HCl 1~2 滴，又出现什么颜色 ?2．微量升华法：是利用药材中所含的某些成分，在一定温度下能升华的性质，获得升华物，在显微镜下观察其形状，颜色及化学反应，作为鉴别特征。
具体方法：取金属片，安放在有圆孔(直径约 2cm)的石棉板上，金属片上放一小金属圈(高度约0.8cm) ，4对准石棉板上的圆孔，圈内加药材粉末一薄层，圈上放一载玻片，在石棉板下圆孔处用酒精灯徐徐加热 (火焰距板约 4cm)数分钟，至粉末开始变焦，并有气化物发生，去火待冷，则有结晶状升华物附着于覆盖的载片上，将载玻片取下反转，在显微镜下观察结晶形状，并可加化学试液，观察其变化。
取大黄粉未，进行如上操作，观察反应结果。
3．荧光分析法：将药材切片或粉末或提取液等，在荧光灯下观察荧光，有些药材不产生荧光，如以酸碱处理或其他化学方法处理后，可使其中某些成分在荧光灯下产生荧光，以便鉴别。
如取黄连饮片、浙贝母粉末或秦皮水浸液，在紫外灯下观察荧光颜色。
．‘4．层析法：‘分为纸层析、柱层析、薄层层析等(略)。
’5．化学定性检查：药材中的化学成分可利用其能与某些试剂产生特殊的颜色、沉淀反应来进行鉴别。
(1)生物碱的检出：沉淀反应取黄连，马钱子，黄柏(苦参 )粉未各2g，分别盛入锥形瓶中，各加水l 5ml ，浓 HCl O ． 5ml ， 60℃水浴上温浸30 分钟，时时振摇，取滤液备用。
各取 2ml 滤液于试管中，分别加下列试液2— 3 滴，观察有何现象？碘化铋钾试液碘化汞钾试液碘一碘化钾试液黄连马钱子黄柏 (苦参 )(2)羟基功醌的检出：Bomtr ǎger 反应取大黄粉未0.2g，置试管中加入5％NaOH 试液 4ml ，在小火上煮沸，取滤液加HCl 呈酸性后，再加乙醚5ml ，振摇，分取醚层，于醚层中加入等量氨试液，振摇，观察反应现象。
四、作业：简要记录各反应的实验步骤和结果。
五、思考题：1．显微化学反应法有几种操作方法?2．微量升华法用于生药鉴别有何特点?3．含何类成分的生药常会产生荧光?4．生物碱常甩的沉淀试剂有哪些?Borntr ?ger 反应过程的原理是什么?实验二生药中常见化学成分的理化鉴定(二 )一、实验目的要求：．掌握香豆精类，强心苷类、皂苷类、鞣质类、氰苷类、黄酮类的理化性质和定性检识反应。
二、实验主要材料、仪器及试剂：秦皮、桔梗、穿山龙、五倍子、儿茶、苦杏仁、洋地黄叶、黄芩(槐米水浴锅蒸发皿锥形瓶盐酸羟胺甲醇液、l0％氢氧化钾甲醇液、乙醚、氯仿、盐酸、l ％三氯化铁乙醇液、2％红血球悬浮液、1％盐酸奎宁试液、明胶液、铁铵矾试液、三氯化铁试液、冰醋酸、浓硫酸、镁粉。
三、实验内容：1．化学定性检查(1)香豆精类的检出：异羟肟酸铁反应取秦皮粗粉0.2g，置具塞试管中，加乙醚3ml ，浸渍 5~10 分钟，时加振摇，放置，吸取上清液 (或滤过 )于试管中加新配制的盐酸羟胺甲醇溶液2~3 滴， l 0％氢氧化钾甲醇溶液2~3 滴，水浴温热 1~2 分钟，冷后加 l 0％盐酸，使 pH 为 3~4 ，再加 l％三氯化铁乙醇溶液 1~2 滴，两液混合面或溶液应显什么颜色 ?5（ 2)强心苷的检出：三氯化铁一冰醋酸反应 取洋地黄叶粉末 0.5g ，加水 5ml ，水浴加热 20 分钟，滤液加 3mlCHCl 3，振 摇萃取后，再加乙醚 3ml ，待分层，用吸管吸取取下层，将 CHCl 3 层转于蒸发皿中蒸干，放冷，加冰醋酸 lml 使残渣溶解，移人试管中，加三氯化铁溶液 1 滴，并沿管壁缓缓注入浓 H 2S04 l5~20 滴，观察上层液及界面的颜色变化。
(3) 皂苷的检出： ①泡沫反应 取桔梗粉末 0.2g ，加水 5ml ，加热煮沸，过滤，滤液在试管中强烈振摇，注意是否产生大量持久性泡沫。
②溶血试验 取穿山龙的 l ％生理盐水溶液 lml 和 l ％生理盐水 lml ，分别置试管中，各加 2％红血球 悬浮液 0.3ml ，摇匀后放置，注意观察哪支试管溶液变清而透明。
(示溶血现象 ) （ 4)鞣质的检出： 显色及沉淀反应 取五倍子，儿茶粉末各 0.5g ，分别置于锥形瓶中，加 25ml 水，水浴加热，过滤备用。
各取滤液 2ml ，分别加下列试剂，观察反应现象。
1％盐酸奎宁试液 明胶液 铁铵矾试液、 五倍子 儿茶 (5)氰苷类的检出：苦味酸钠反应 取苦杏仁一粒捣碎， 用水湿润置试管中， 试管中悬挂用 NaHC0 3 饱和溶液湿润的苦 味酸试纸一条，用软木塞塞紧，置 40— 50○C 水浴中，观察试纸颜色变化。
(6)黄酮苷的检出： 盐酸镁粉反应 取黄芩 (槐米 )粉末约 0.2g ，加乙醇 5ml ，水浴温热约 5 分钟，滤过，取滤液 2ml ， 加镁粉少量，混匀，滴加盐酸数滴，注意有气泡产生，同时观察呈现什么颜色。
四、作业： 简要记录各反应的实验步骤和结果。
五、思考题：1、香豆精苷，强心苷，氰苷，黄酮苷及鞣质的反应机理是什么？2、黄酮类成分遇盐酸一镁粉是否都显红色 ?如不显红色是否可以否定黄酮成分的存在?实验三 根类生药黄芪 Rabix Astragali 、甘草 Radix Clycyrrbizae 一、实验目的：l 、掌握黄芪、甘草生药性状。
2、掌握黄芪、甘草粉末显微特征。
二、实验主要仪器及试剂： 显微镜、临时装片用具、蒸馏水、水合氯醛溶液、白瓷板、蒸发皿、蒸馏水、 80％硫酸。
三、实验材料： ． 蒙古黄芪 Astragalis membranaceus Bgc ．Var ．mongholieus(Bgc ．)Hsiao 粉末、甘草 clycyrrbiza uralensisFisch. 粉末。
四、实验内容及步骤：1、镜检黄芪粉末，分别以蒸馏水和水合氯醛试液装片，注意以下特征：①纤维众多，成束，细长，直径 9~36μｍ，壁厚，非木化，孔沟不明显。
另取黄芪生药，刮取少量纤维 (粉末 )，透化后装片，注意纤维的先端常纵裂成扫帚状。
②导管主为具缘纹孔导管，纹孔呈椭圆形，类方类或斜方形。
6③木栓细胞表面观呈多角形或类方形。
④淀粉粒单粒类圆形、椭圆形或类肾形，直径3~13μｍ，复粒由2~4 分粒组成。
2、镜检甘草粉末分别以蒸馏水和水合氯醛试液装片，注意以下特征：①纤维众多，成束或散离，细长，直径6~14μｍ，壁厚，木化或非木化，孔沟不明显；晶鞘纤维易察见，草酸钙方晶类双锥形，长方形或类方形，含晶细胞的壁增厚，微木化或非木化。
②导管主为具缘纹孔导管，多破碎，纹孔椭圆形或略呈斜方形，对列或互列，有的导管旁可见小型具缘纹孔管胞。
．③木栓细胞棕红色，壁薄，微木化，表面观呈多角形。
④淀粉粒众多，单粒椭圆形、卵形或类球形，直径3~16μｍ，脐点点状或短缝状。
复粒稀少，由2分粒组成。
此外，尚有少数黄棕色或红棕色的色素块。
五、作业：1、绘黄芪粉末特征图，示纤维，导管，木栓细胞与淀粉粒。
