下载文档原格式
课题3 血红蛋白的提取和分离一、单项选择题1．使用凝胶色谱法分离蛋白质实验中，相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程，可表示为下图中( )解析：凝胶色谱法是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
相对分子质量较小的蛋白质能进入凝胶内部通道，路程较长，移动速度较慢；相对分子质量大的蛋白质，路程较短，移动速度较快，首先洗脱出来。
答案：B2．使用SDS—聚丙烯酰胺电泳的过程中，不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于( ) A．电荷的多少 B．分子的大小C．肽链的多少 D．分子形状的差异解析：SDS能与各种蛋白质形成蛋白质SDS复合物，SDS所带的负电荷量大大超过蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。
答案：B3．在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是( ) A．防止血红蛋白被氧气氧化B．血红蛋白是一种碱性物质，需磷酸中和C．磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程D．让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和性质解析：磷酸缓冲液的作用是稳定pH，从而维持血红蛋白的结构和性质。
答案：D4．电泳过程中，什么样的分子迁移速度最快？( )A．纤维状、大分子B．纤维状、小分子C．球状、大分子D．球状、小分子答案：D5．用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中，关于蛋白质的叙述，正确的是( ) A．相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质B．相对分子质量较小的蛋白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质C．相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质D．二者根本无法比较答案：A6．蛋白质提取和分离分为哪几步( )A．样品处理、凝胶色谱操作、SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳B．样品处理、凝胶色谱操作、纯化C．样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定D．样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定解析：蛋白质的提取和分离分为样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定四步。
A中凝胶色谱操作及SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳为实验操作过程中的技术。
专题5 DNA和蛋白质技术课题3 血红蛋白的提取和分离一、教学目标（一）知识与技能1、尝试从血液中提取和分离血红蛋白2、了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理（二）过程与方法体验血红蛋白提取和分离的实验的严格要求，注意按照操作提示进行相关步骤（三）情感、态度与价值观初步形成科学的思维方式，发展科学素养和人文精神二、课题重点与难点课题重点：凝胶色谱法的原理和方法。
课题难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。
三、课题背景分析课题背景通过当今生物科学在蛋白质研究领域的进展，说明提取、分离高纯度的蛋白质的重要性和必要性，进而明确地提出课题目的：以血红蛋白为实验材料，学习蛋白质提取和分离的一些基本技术。
可以发挥学生的主动性，让学生介绍当前有关蛋白质研究的新进展，激发学生的学习兴趣，然后指出本课题的学习意义，让学生初步体会分离纯化蛋白质的过程和方法。
四、基础知识分析与教学（一）教学方法：启发式教学（二）教学工具：多媒体课件（三）教学过程引入新课蛋白质是生命活动的主要承担者，是细胞内含量最高的有机化和物。
对蛋白质的研究有助于人们对生命过程的认识和理解。
所以需要从细胞中提取蛋白质进行研究。
怎样提取蛋白质呢？1、进行新课蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。
1．1凝胶色谱法（分配色谱法）：学习内容：1.凝胶色谱法的用途；2.凝胶色谱法分离蛋白质的原理。
凝胶色谱法也称作分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。
凝胶：所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，这些小球体大多数是由多糖类化合物构成的，如葡聚糖或琼脂糖。
教学：在介绍凝胶色谱法的基本原理时，可以结合教科书提供的插图，让学生对凝胶色谱法分离蛋白质的过程有一个直观的认识。
可以通过发动学生查阅资料，让学生了解有关凝胶色谱法的知识，如凝胶的种类、理化性质及凝胶的选择和保存，并结合实验操作，让学生分析实验中的注意事项。
基础知识：凝胶色谱法
1．有关凝胶色谱法和电泳法的说法正确的是：（）
A．它们都是分离蛋白质的重要方法 B、它们的原理相同C、使用凝胶色谱法需要使用缓冲溶液而电泳不需要 D、以上说法都正确
2．凝胶色谱法分离蛋白质时使用的凝胶是交联葡聚糖凝胶(SephadexG—75)，其中G、75的含义分别是（）
A．G表示凝胶的使用量，75表示加75 g水
B．G表示凝胶的交联程度，75表示需加热75 ℃
C．G表示凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围，75表示每克凝胶膨胀时吸水7.5 g D．G表示凝胶的膨胀体积，75表示每克凝胶膨胀后体积可达75 cm3
3．使用凝胶色谱法分离蛋白质时，洗涤红细胞、释放血红蛋白和透析过程中，分别使用下列哪些试剂（）
①蒸馏水②生理盐水③20 mmol/L的磷酸缓冲液④清水⑤柠檬酸钠
A．①③⑤ B．①②③ C．②①③ D．④①③
4．在凝胶色谱法分离蛋白质时，洗涤红细胞、释放血红蛋白和透析过程中，分别使用的试剂的是( )
①清水②20 mmol/L的磷酸缓冲液③生理盐水④蒸馏水
A．②③④ B．③④②
C．②①③ D．④①③
5．血红蛋白释放要使用的物质是( )
①0.9%的生理盐水②甲苯③磷酸缓冲液④蒸馏水
A．①④ B．②④
C．④⑤ D．①③
6．凝胶色谱法分离血红蛋白质的依据是（）
A．根据蛋白质分子的大小
B．根据蛋白质分子质量的大小
C．根据蛋白质所带电荷的多少
D．根据蛋白质溶解度的大小
7．下列对凝胶色谱柱相关操作过程正确的是( )
A．将橡皮塞上部用刀切出锅底状的凹穴
B．将橡皮塞下部用刀切出凹穴
C．插入的玻璃管的上部要超出橡皮塞的凹穴底面
D．将尼龙网剪成与橡皮塞下部一样大小的圆片
8．凝胶常在分离蛋白质时使用，其的种类很多，但都有相同的作用是( )
A．改变蛋白质分子通过凝胶时的路径
B．吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度
C．将酶或细胞固定在凝胶中
D．与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度
9．利用凝胶色谱法分离蛋白质的原理是( )
A．蛋白质分子与凝胶的亲和力的大小
B．蛋白质相对分子质量的大小
C．蛋白质所带电荷的多少
D．蛋白质溶解度的大小
10．下列有关生物技术实验的叙述，正确的是（）
A．制作果酒和制作果醋所需的发酵底物、适宜温度等均相同
B．在植物组织培养过程中，制备的MS培养基需要用酒精消毒
C．用二苯胺鉴定DNA和用斐林试剂检测还原糖时均需要水浴加热
D．用凝胶色谱法分离蛋白质时，与分子量较小的蛋白质相比，血红蛋白移动较慢
参考答案：
1．答案： A
解析：
2．答案： C
解析： G表示凝胶交联程度、膨胀程度及分离范围，75表示凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时吸水7.5 g。
3．答案： C
4．答案： C
解析：在分离蛋白质时，用生理盐水洗涤红细胞，以去除杂蛋白，然后将其加入蒸馏水中使红细胞破裂，释放血红蛋白，透析需用磷酸缓冲液，以维持pH稳定，故选C。
5．答案： B
解析：甲苯作用为溶质，脂类物质也有利于红细胞涨破和血红蛋白的释放，蒸馏水作用是使红细胞吸水涨破，故选B。
6．答案： B
解析：凝胶色谱法分离血红蛋白质的依据是根据蛋白质分子质量的大小
7．答案： A
解析：制作凝胶色谱柱时，先选择合适的橡皮塞打孔，然后将橡皮塞上部用刀切出锅底状
的凹穴，取适宜长度的玻璃管插入橡皮塞孔内，插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面。
将尼龙网剪成与橡皮塞上部一样大小的圆片，覆盖在橡皮塞的凹穴上，再用尼龙纱将橡皮塞上部包好，插入到玻璃管的一端。
8．答案： A
解析：凝胶的种类很多，但所有凝胶均是一些微小的多孔球体，小球内部有许多贯穿的通道，由于不同蛋白质相对分子质量不同，在凝胶中走过的路径不同，因而得以分离。
9．答案： B
解析：凝胶色谱法所用的凝胶实际上是一些微小多孔的球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，相对分子质量小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；相对分子质量较大的蛋白质只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，相对分子质量不同的蛋白质分子因此得以分离。
10．答案： C
解析：试题分析：制作果酒和制作果醋所需的发酵底物、适宜温度等均不相同，A错误；在植物组织培养过程中，制备的MS培养基需要用高压蒸汽灭菌法灭菌，B错误；用二苯胺鉴定DNA和用斐林试剂检测还原糖时均需要水浴加热，C正确；用凝胶色谱法分离蛋白质时，与分子量较小的蛋白质相比，血红蛋白移动路径短，移动较快，D错误。
考点：本题考查生物技术实践的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络的能力。
