超高效液相色谱

超高效液相色谱仪参数1、工作环境：1.1环境温度摄氏4-40度.1.2环境湿度20-80%.1.3电压230V（-10%,+8%）2、性能指标2.1四元梯度系统2.1.1流速范围：涵盖所列范围0.000l-5.0000ml∕min,步进以0.000lml∕min为增量2.1.2流量精度：≤0.075%2.1.3溶剂数量：＞42.1.4最高操作压力：＞60MPa2.1.5泵体类型：微体积（柱塞体积≤10μL）双柱塞往复并联泵2.1.6安全机制：高压、低压报警、漏液报警等2.1.7流速准确度:+1.0%2.1.8梯度混合精度：≤0.1%RSD2.1.9溶剂压缩性补偿：可自动,连续进行2.1.10梯度组成范围：0.0-100.0%,0.1%步进2.1.11真空脱气机：N5通道2.1.12物理双泵头：便于维护，独立控制面板：可脱离工作站独立操作2.2样品管理系统2.2.1样品数量:NIoO位L5∕2ml样品瓶2.2.2进样量设定范围:O.lgL~100μL（标准值），可以增加至≥2000uL2.2.3进样方式：全量进样，环路进样2.2.4进样次数：样品1—99次进样2.2.5进样精度：＜0.3%RSD2.2.6进样线性:＞0.9992.2.7样品污染度：≤0.004%2.2.8控温范围：4-40℃2.2.9控温准确度：±ΓC2.3柱温箱2.3.1温度控制类型：强制空气循环，具有液体及气体传感器2.3.2温度控制范围：室温∙10C~85C2.3.3温度准确度：+ΓC2.3.4可放置色谱柱尺寸及数量：≥100mmx6根；30OmmX3根2.3.5色谱柱最小可用1.7μ粒径2.4二极管阵列检测器2.4.1波长范围：190~800nm2.4.2光源：笊灯和鸨灯2.4.3波长准确度：±1nm2.4.4波长精密度：≤0.1nm2.4.5狭缝宽度1.2nm、8nm2.4.6标准池:光程:10mm,池体积:12pL、耐压:12MPa2.4.7web控制：可进行参数设置，日志管理，消耗品管理2.4.8具有智能峰解卷积、智能动态范围扩展功能2.4.9流通池可温控：25~40℃、步进2.4.10UV截止功能：内置UV截止滤光片（开/关可选）2.4.11IPH值范围1~142.5荧光检测器2.5.1波长范围：200~650nm2.5.2光源：岚灯2.5.3光谱带宽：＜20nm2.5.4波长准确度：±2nm2.5.5波长精度：＜0.2nm256灵敏度：水拉曼峰S/N8000或以上（暗背景）2.5.7标准池：体积12μL,最大耐压2Mpa,选配半微量池：体积3μL,最大压力2MPa3、色谱软件3.1软件和仪器主机为同一品牌产品3.2可以双向连接（仪器控制和数据采集）本厂的各种泵和检测器（例如：紫外、示差、二极管阵列、蒸发光散射、荧光、质谱）3.3原厂源代码级全中文版3.4标配数据库3.5多级操作界面：操作者可根据需要，选择不同操作界面，适合初学使用、常规实验分析和专家级分析。

超高效液相色谱(UPLC)超高效液相色谱技术（ultra performance liquid chcromatography，简称UPLC）是一种综合了小颗粒填料、非常低系统体积(死体积)及快速检测手段等全新的检测技术。

在全面提升HPLC的速度、灵敏度及分离度的同时，保留其原有的实用性及原理。

基于小颗粒技术的UPLC，并非普通HPLC系统改进而成。

它不但需要耐压、稳定的小颗粒填料（可达1.7µm），而且需要耐压的色谱系统(>15,000psi)、最低交叉污染的快速进样器、快速检测器及优化的系统体积等诸多方面的保障，以充分发挥小颗粒技术优势。

这就需要对系统所有硬件和软件的进行全面创新。

世界第一个商品化UPLC产品是Waters ACQUITY UPLC TM超高效液相色谱系统，它于2004年3月投入市场。

图1：填料技术的沿革1．小颗粒填料改善分离的理论与科学基础液相色谱30年的发展史是颗粒技术的发展史。

颗粒大小的改变直接影响到柱效，从而对分离结果产生直接影响。

由上图可知：随着颗粒度的不断降低，色谱分离度不断提高。

事实上，上述规律的理论基础是著名的Van Deemeter方程。

Van Deemeter方程是色谱科学家预测颗粒度变化而引起的色谱变化的根本依据。

Van Deemeter曲线（见图2）预测最佳柱效与相应的流动相流速。

由Van Deemeter方程得知：随着颗粒度减小，相应的理论塔板高度（HETP）也下降，得到的柱效会更高。

还应该注意到1.7 µm颗粒的HETP最小值区域扩大了（见图2），这表明可以在比大颗粒更宽的流量范围内得到最高的柱效，结果可以不损失高分离度的同时来适当提高流动相的流速（分析速度）。

小颗粒填料为色谱分离带来如此的高柱效和速度优势，使得利用小颗粒技术成为色谱科学家梦寐以求的目标。

然而HPLC系统的设计，一直难于发挥出最小颗粒的优点。

小颗粒技术的运用，不但要求仪器在超出目前限度（6000 psi/ 400 bar）的压力下工作，同时要求仪器系统的死体积要更小，以便不影响梯度性能，而且还要检测器能高速检测出峰宽只有几秒的色谱峰。

超高效液相色谱串联质谱法快速测定贝类中3种腹泻性贝类毒素许均图，陈德斌，陈 燕，唐春玲（广州华鑫检测技术有限公司，广东广州 510663）摘 要：建立了应用EMR-Lipid小柱净化结合超高效液相色谱串联质谱法快速测定贝类样品中3种腹泻性贝类毒素的分析方法。

样品用80%乙腈溶液提取，以安捷伦Captival EMR-Lipid小柱净化，经超高效液相色谱串联质谱分析测定，采用大气压电喷雾负离子电离，选择反应监测模式，基质匹配外标法定量。

实验结果表明，3种腹泻性贝类毒素的检出限为0.5～1.0 μg·kg-1，回收率为82.6%～107.1%，相对标准偏差为3.5%～9.9%。

该方法操作简单、灵敏度高、回收率和精密度较好，适合应用于日常贝类样品中腹泻性贝类毒素的监测。

关键词：腹泻性贝类毒素；贝类；超高效液相色谱串联质谱Rapid Determination of Three Diarrhoeal Shellfish Poisons in Shellfish by Ultra-Performance Liquid ChromatographyTandem Mass SpectrometryXU Juntu, CHEN Debin, CHEN Yan, TANG Chunling(Guangzhou Huaxin Testing Technology Co., Ltd., Guangzhou 510663, China) Abstract: A method for rapid determination of three diarrhoeal shellfish poisons in shellfish samples by EMR-Lipid column purification combined with ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry was established. The sample was extracted with 80% acetonitrile solution, purified with Agilent Captiva EMR-Lipid column, analyzed by ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry, ionized by atmospheric pressure electrospray negative ions, selected reaction monitoring mode, and quantified by matrix matching external standard method. The results showed that the detection limits of three diarrhoeal shellfish toxins were 0.5～1.0 μg·kg-1, the recovery was 82.6%～107.1%, and the relative standard deviation was 3.5%～9.9%. The method is suitable for monitoring diarrhoeal shellfish poisons in shellfish samples because of the advantages of simple operation, goodsensitivity and recoveries.Keywords: diarrhoeal shellfish poisons; shellfish; ultra high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry腹泻性贝类毒素（Diarrhetic Shellfish Poisoning，DSP）是由原甲藻属和有毒赤潮藻类鳍藻属的藻类产生的脂溶性多环醚类生物活性毒素[1]。

超高效液相色谱原理：分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关，也与温度、压力有关。

在不同的色谱分离机制中，K有不同的概念：吸附色谱法为吸附系数，离子交换色谱法为选择性系数，凝胶色谱法为渗透参数。

但一般情况可用分配系数来表示。

在条件一定，样品浓度很低时时，K只取决于组分的性质，而与浓度无关。

这只是理想状态下的色谱条件，在这种条件下，得到的色谱峰为正常峰；在许多情况下，随着浓度的增大，K减小，这时色谱峰为拖尾峰；而有时随着溶质浓度增大，K也增大，这时色谱峰为前延峰。

因此，只有尽可能减少进样量，使组分在柱内浓度降低，K恒定时，才能获得正常峰。

超高效液相色谱是目前应用最多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。

超高效液相色谱时，液体待检测物被注入色谱柱，通过压力在固定相中移动，由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同，不同的物质顺序离开色谱柱，通过检测器得到不同的峰信号，最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。

高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围的物质。

由于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环境分析、无机分析等各种领域。

超高效液相色谱主要类型:1.液液分配色谱分离原理：分配色谱法的原理与液液萃取相同，都是分配定律。

2.液固吸附色谱分离原理：液固色谱是基于各组分吸附能力的差异进行混合物分离的，其固定相是固体吸附剂。

3.键合相色谱分离原理：正键合相色谱分离远离：使用的是极性键和固定性，溶质在此类固定相上的分离机理属于分配色谱。

畜禽中瘦肉精分析瘦肉精是盐酸克伦特罗的俗称，将其添加到饲料中可使动物生长速率、饲料转化率和胴体的瘦肉率提高10%以上,并降低其脂肪含量。

超高效液相色谱(UPLC TM)：重新定义液相色谱分离科学的能力随着首次成功地使用小颗粒得到惊人的分离能力而进入了一个新的时空。

这个新的色谱领域，所谓超高效液相色谱（UPLC TM），与传统的HPLC技术相比提供了更高的效率，因而具有更强的分离能力。

作为世界第一个商品化UPLC TM产品的Waters ACQUITY UPLC TM超高效液相色谱系统，利用创新技术进行整体设计，大幅度地改善了液相色谱的分离度、样品通量和灵敏度。

UPLC TM的商品化，是分离科学和技术的巨大进步，液相色谱亦由此进入了全新的时代。

基于1.7 μm小颗粒技术的UPLC TM，与人们熟知的HPLC技术具有相同的分离原理。

不同的是：UPLC TM不仅比传统HPLC具有更高的分离能力，而且结束了人们多年不得不在速度和分离度之间取舍的历史。

使用UPLC TM可以在很宽的线速度、流速和反压下进行高效的分离工作，并获得优异的结果。

小颗粒分离的理论与科学基础图1：填料技术的沿革液相色谱30年的发展史是颗粒技术的发展史。

颗粒度的改变直接影响到柱效，从而对分离结果产品直接影响。

由上图可知：随着颗粒度的不断降低，色谱分离度不断提高。

事实上，上述规律的理论基础是著名的范德米特(van Deemeter)方程――这是全世界所有从事色谱研究的科学家熟知的理论。

由此得到的范德米特(van Deemeter)曲线，亦是色谱科学家预测颗粒度变化而引起的色谱变化的根本依据。

该曲线预测最佳柱效与相应的流动相流速。

由曲线得知：随着颗粒度减小，相应的理论塔板高度（HETP）也下降，得到的柱效会更高。

还应该注意到1.7 μm颗粒的HETP最小值区域扩大了，这表明可以在比大颗粒更宽的流量范围内得到最高的柱效，结果可以不损失高分离度的同时来优化流速（分析速度）。

小颗粒为色谱分离带来如此的高柱效和速度优势，使利用小颗粒技术成为色谱科学家梦寐以求的目标。

然而HPLC系统的设计，一直苦于难于发挥出最小颗粒的优点。