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一、测定溶液中物质的含量可见或紫外分光光度法都可用于测定溶液中物质的含量。
测定标准溶液（浓度已知的溶液）和未知液（浓度待测定的溶液）的吸光度，进行比较，由于所用吸收池的厚度是一样的。
也可以先测出不同浓度的标准液的吸光度，绘制标准曲线，在选定的浓度范围内标准曲线应该是一条直线，然后测定出未知液的吸光度，即可从标准曲线上查到其相对应的浓度。
含量测定时所用波长通常要选择被测物质的最大吸收波长，这样做有两个好处：⑴灵敏度大，物质在含量上的稍许变化将引起较大的吸光度差异；⑵可以避免其它物质的干扰。
二、用紫外光谱鉴定化合物使用分光光度计可以绘制吸收光谱曲线。
方法是用各种波长不同的单色光分别通过某一浓度的溶液，测定此溶液对每一种单色光的吸光度，然后以波长为横座标，以吸光度为纵座标绘制吸光度──波长曲线，此曲线即吸收光谱曲线。
各种物质有它自己一定的吸收光谱曲线，因此用吸收光谱曲线图可以进行物质种类的鉴定。
当一种未知物质的吸收光谱曲线和某一已知物质的吸收光谱曲线开关一样时，则很可能它们是同一物质。
一定物质在不同浓度时，其吸收光谱曲线中，峰值的大小不同，但形状相似，即吸收高峰和低峰的波长是一定不变的。
紫外线吸收是由不饱和的结构造成的，含有双键的化合物表现出吸收峰。
紫外吸收光谱比较简单，同一种物质的紫外吸收光谱应完全一致，但具有相同吸收光谱的化合物其结构不一定相同。
除了特殊情况外，单独依靠紫外吸收光谱决定一个未知物结构，必须与其它方法配合。
紫外吸收光谱分析主要用于已知物质的定量分析和纯度分析。
选几个体积梯度，然后稀释成相同的体积，得到了不同浓度C的几个标准溶液样组，用紫外分光光度计分别测得相应的吸光度A1、A2、A3……，然后要以浓度为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制曲线。
当然有时候根据实际需要，也会有小小的变动。
配制标准溶液，用紫外可见分光光度计测量，得到浓度与吸光度的曲线，并且利用线性拟合得到回归方程，直接利用Origin的线性拟合功能得到的方程往往截距不等于零，即方程的形式为y=A+Bx。
紫外吸收光谱法鉴定未知样及测定苯酚的含量一、实验目的1、掌握紫外光谱法进行物质定性、定量分析的基本原理；2、学习UV-1700型紫外--可见分光光度计的使用方法。
二、实验原理含有苯环和共轭双键的有机化合物在紫外区有特征吸收。
物质结构不同对紫外及可见光的吸收具有选择性。
其中，最大吸收波长λ、摩尔吸收系数ε及吸收曲线的形状不同是进行物质定性分析的依据。
本实验通过比较最大吸收波长和最大吸收波长与其所对应的吸光度的比值的一致性来鉴定化合物，我们首先从文献上查得这3种物质的紫外紫外吸收光谱数据，现如下表所列。
在紫外分光光度计上分别作3种物质水溶液（试液）的吸收光谱曲线，再由曲线上找出λmax与其对应的吸光度的比值，与表上所列数据进行对照，再比较λmax及吸光度比值是否一致，即可判断是何种物质。
由于在λmax处吸光度A有最大值，在此波长下A随浓度的变化最为明显，方法的灵敏度最大，故在紫外分光光度计上作苯酚水溶液（试液）的吸收光谱曲线，再由曲线上找出λmax，据此对物质进行定量分析。
用紫外分光光度计进行定量分析时，若被分析物质浓度太低或太高，可使透光率的读数扩展10倍或缩小10倍，有利于低浓度或高浓度的分析，其方法原理是依据朗伯-比耳定律：A=εbc。
三、仪器与试剂（1）仪器：UV-1700型紫外-可见分光光度计；1cm石英吸收池2个；50mL 比色管5支；5mL、10mL移液管各1支；25mL容量瓶6个；100mL、250mL烧杯各1个；吸耳球2个。
（2）试剂：苯酚标准溶液：100mg/L；待测苯酚样品溶液（未知浓度）样品溶液：A液、B液、C液（浓度为3×10-3mol/L）四、实验内容与步骤1、定性分析(1)分析溶液的配制用移液管准确移取1mL未知液B液于25mL容量瓶中，用去离子水稀释至25mL刻度，摇匀。
取5个25mL的容量瓶，用移液管分别准确加入1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL浓度为100mg/L的苯酚标准溶液，用去离子水稀释至25mL刻度，摇匀。
6种方法测定蛋白质含量一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。
含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。
经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。
若以甘氨酸为例，其反应式如下：nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1)2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2)(nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3)反应（1）、(2)在凯氏瓶完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。
为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。
收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。
实验和计算方法这里从略。
计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。
如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。
二、双缩脲法（biuret法）（一）实验原理双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
测定围为1-10mg蛋白质。
干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
主要的缺点是灵敏度差。
因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
（二）试剂与器材1. 试剂：（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。
紫外分光光度法测定未知物1.仪器1.1紫外分光光度计（UV-1801型）；配石英比色皿（1cm）2个1.2容量瓶（100mL）：10个；容量瓶（250mL）1个1.3吸量管（10mL、5mL）：各1支1.4移液管（20mL、25mL、50mL）：各1支2.试剂2.1标准溶液（1mg/mL）：维生素C、水杨酸、苯甲酸、山梨酸、邻二氮菲分别配成1mg/mL的标准溶液，作为储备液。
2.2未知液：浓度约为（40~60ug/mL）。
（其必为给出的五种物质之一）3.实验操作3.1比色皿配套性检查石英比色皿装蒸馏水，以一只比色皿为参比，在测定波长下调节透射比为100%，测定其余比色皿的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用。
3.2未知物的定性分析将五种标准储备液均稀释成10ug/mL的试液（配制方法由选手自定）。
以蒸馏水为参比，于波长200~350nm范围内扫描五种溶液，绘制吸收曲线，根据所得到的吸收曲线对照标准谱图，确定被测物质的名称，并依据吸收曲线确定测定波长。
五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参五种标准物质溶液的吸收曲线参考考考考附图附图附图附图。
3.3未知物定量分析根据未知液吸收曲线上测定波长处的吸光度，确定未知液的稀释倍数，并配制待测溶液3份，进行平行测定。
推荐方法3.3.1维生素C含量的测定：准确吸取1m g/mL的维生素C标准储备液50.00mL，在250mL容量瓶中定容（此溶液的浓度为200u g/mL）。
再分别准确移取1、2、4、6、8、10mL上述溶液，在100mL容量瓶中定容（浓度分别为2、4、8、12、16、20 ug/mL）。
准确移取20.00mL维生素C未知液，在100mL容量瓶中定容，于最大吸收波长处分别测定以上溶液的吸光度。
紫外分光光度法测定未知样含量(含方案、公式、标准误吸收光谱图)1.仪器1.1紫外可见分光光度计(T6型)；1.2石英吸收池(1cm)：2只；1.3比色管（50mL）10支；1.4吸量管5mL：2支。
2.试剂2.1苯甲酸标准溶液(0.1mg/mL)；2.2未知液：浓度约为40～60ug/mL。
3.实验操作3.1吸收曲线的绘制3.1.1标准苯甲酸吸收曲线绘制在一支50mL比色管中由2.1配制成浓度为0～10ug/mL范围内的溶液，以水定容，并摇匀。
于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔5 nm测定一次测定吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔1 nm测定一次吸光度，绘制吸收曲线，从曲线上确定苯甲酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。
附图：苯甲酸的吸收曲线。
3.1.2标准水杨酸吸收曲线绘制在一支50mL比色管中由2.1配制成浓度为0～10ug/mL范围内的溶液，以水定容，并摇匀。
于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔5 nm测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长附近，间隔1 nm测定一次吸光度，绘制吸收曲线，从曲线上确定水杨酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。
附图：水杨酸吸收曲线。
3.1.3未知液吸收曲线的绘制准确吸取含苯甲酸的未知液若干体积（5mL）于一支50mL比色管中，以水定容并摇匀。
以蒸馏水为参比，于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔5 nm测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔1 nm测定一次吸光度，绘制吸收曲线。
（观察3.1.1和3.1.2各自所得吸收曲线有什么相同之处？这说明了什么问题？对于一个未知样品如何利用分光光度法进行定性？）附图：未知液的吸收曲线。
3.2吸收池配套性检查石英吸收池装蒸馏水，于定量测定波长处，以一个吸收池为参比，测定并记录另一吸收池的吸光度（其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，否则更换）作为校正值。
紫外分光光度法检验含量药典标准在制药领域中，药品的质量是至关重要的。
为了确保药品的安全性、有效性和合规性，各国都颁布了严格的药典标准。
其中，紫外分光光度法就是一种常用的药典标准检验方法之一。
紫外分光光度法是一种用于测定有机物质和某些无机物质的含量和浓度的分析方法。
它利用物质在紫外光下特定波长的吸收特性，通过测定物质对紫外光的吸收程度来间接确定其含量。
这种方法准确、快速，且操作简单，因此被广泛应用于药品、食品、环境监测等领域。
在药物质量控制中，紫外分光光度法常常被用来检验药品中某种成分的含量。
对于一些具有紫外吸收特性的化合物，如植物提取物、维生素和某些药物原料药，紫外分光光度法可以准确测定其含量，并根据药典标准来评估其质量。
当使用紫外分光光度法来检验含量药典标准时，需要严格按照药典规定的方法和条件进行操作。
需要准备好标准曲线和样品溶液，确保在检验中能够得到准确的测定结果。
需要选择合适的波长进行检测，通常是在目标化合物的最大吸收波长处进行测定。
根据药典规定的计算公式，计算出样品中目标成分的含量，并与标准要求进行对比。
在实际操作中，需要特别注意的是样品的预处理和处理过程。
在测定植物提取物中某种成分的含量时，可能需要进行提取和过滤等前处理步骤，以确保样品中的目标成分得以完全释放和准确测定。
紫外分光光度法检验含量药典标准时，还需要考虑到干扰物质的影响。
一些样品可能同时含有多种吸收紫外光的成分，这就需要通过适当的方法来处理干扰物质，以确保测定结果的准确性和可靠性。
在药物质量控制领域，紫外分光光度法作为一种常用的分析方法，对于检验含量药典标准起着至关重要的作用。
严格按照规定的方法和条件进行操作，并特别注意样品的预处理和干扰物质的影响，可以确保测定结果的准确性和可靠性，从而保证药品的质量和安全性。
对于我个人而言，深入了解紫外分光光度法对药物质量控制的意义和应用，不仅可以加深对药品质量的认识，还有助于我在相关领域的学习和研究。
紫外分光光度法测定未知样含量
(含方案、公式、标准误吸收光谱图)
1.仪器
1.1紫外可见分光光度计(T6型)；
1.2石英吸收池(1cm)：2只；
1.3比色管（50mL）10支；
1.4吸量管5mL：2支。
2.试剂
2.1苯甲酸标准溶液(0.1mg/mL)；
2.2未知液：浓度约为40～60ug/mL。
3.实验操作
3.1吸收曲线的绘制
3.1.1标准苯甲酸吸收曲线绘制
在一支50mL比色管中由2.1配制成浓度为0～10ug/mL范围内的溶液，以水定容，并摇匀。
于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔5 nm测定一次测定吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔1 nm测定一次吸光度，绘制吸收曲线，从曲线上确定苯甲酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。
附图：苯甲酸的吸收曲线。
3.1.2标准水杨酸吸收曲线绘制
在一支50mL比色管中由2.1配制成浓度为0～10ug/mL范围内的溶液，以水定容，并摇匀。
于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔5 nm测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长附近，间隔1 nm测定一次吸光度，绘制吸收曲线，从曲线上确定水杨酸的最大吸收波长（作为定量测定波长）。
附图：水杨酸吸收曲线。
3.1.3未知液吸收曲线的绘制
准确吸取含苯甲酸的未知液若干体积（5mL）于一支50mL比色管中，以水定容并摇匀。
以蒸馏水为参比，于波长200～350nm范围内每间隔10nm测定一次吸光度，在最大吸收波长附近间隔5 nm测定一次吸光度，再次根据最大吸收波长，附近间隔1 nm测定一次吸光度，绘制吸收曲线。
（观察3.1.1和3.1.2各自所得吸收曲线有什么相同之处？这说明了什么问题？对于一个未知样品如何利用分光光度法进行定性？）附图：未知液的吸收曲线。
3.2吸收池配套性检查
石英吸收池装蒸馏水，于定量测定波长处，以一个吸收池为参比，测定并记录另一吸收池的吸光度（其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，否则更换）作为校正值。
3.3校准曲线的绘制及未知样含量的测定
准确移取与未知样相同的物质的标准溶液若干体积于50mL比色管中，以水定容，制成一系列相同体积不同浓度的标准溶液（0～10ug/mL），在最大吸收波长处，以水为参比，测定各自吸光度。
由实验数据计算回归方程及相关系数，以浓度（ρ/ ug·mL-1）为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标绘制校准曲线。
在相同条件下，测定样品稀释液（配制方法同3.1.2）的吸光度，代入回归方程计算出样品稀释液的浓度。
试样平行测定三份。
4.结果计算
根据未知液的稀释倍数，求出未知溶液中水杨酸的含量。
【相关计算及公式】
1.校准曲线
由试验点经最小二乘法对试验数据进行回归计算，得出一元一次线性回归方程，并计算出该方程的相关系数。
然后在坐标纸上画出该回归方程的直线。
回归方程为：
;
/)()(;
/))((;
/)()(其中：2
2
22
2
2
∑∑∑∑∑∑∑∑∑∑-=
-=
-=--=-=
-=-==
+=n y y
y y L n y x xy y y x x L n x x x x L x b y a L L b bx
a y i
yy i i xy i xx xx
xy
2.相关系数
yy
xx xy L L L =
γ
3.相对标准偏差：按照未知稀释液的A 校正计算相对标准偏差RSD
%1001)(%1002
⨯--=⨯=
∑x
n x x
x
S
RSD i
4.未知稀释液含量：稀释后未知溶液中待测组分的浓度应由回归方程计算而得。
=-=-=
=b a
A b a y x 1111ρ =-=-==b a
A b a y x 222
2ρ =-=-==b a
A b a y x 333
3ρ 则：=++=
=3
3
21x x x x ρ 5.未知溶液中待测组分的含量：根据未知液的稀释倍数，可求出未知溶液中待测组分的含量。
附图1 维生素C吸收曲线
3
附图2 苯甲酸吸收曲线
4
附图3 水杨酸吸收曲线
5。
