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通过LC-MS快速筛选灯笼草中的Micheal反应受体起到抗胰腺癌的作用的有效部位一、项目可行性报告（一）立项的背景和意义。
胰腺癌是恶化性程度较高的消化系统肿瘤之一，近年来已成为我国致癌症病人死亡的第五大恶性肿瘤，然而目前常规的治疗手段疗效十分有限[1]。
将传统中药材用于预防和治疗胰腺癌由于具有一定的临床疗效且副作用较小而备受关注。
因此从中药材中分离得到抗胰腺癌的有效部位对新药的研发具有重要意义。
中药灯笼草为茄科植物Physalis angulata L.的全草，在我省大部分地区均有分布。
《本草纲目拾遗》中记载本品性味苦、酸，性寒；具有清热解毒、利咽、化痰、利尿等作用。
本品在我省民间广泛用于肺热咳嗽、咽喉肿痛、湿热黄疸以及多种肿瘤等的治疗。
体内和体外抗肿瘤研究发现，灯笼草提取物对于乳腺癌、前列腺癌和肝癌等恶性肿瘤的生长具有较好的制作用[2-3]；进一步的机理研究显示灯笼草的抗肿瘤效应可能与其阻滞细胞周期进而诱导细胞凋亡有关[4]，但灯笼草抗肿瘤的有效部位仍有待进一步阐明。
特异性地拮抗Hsp90 功能可以同时抑制肿瘤细胞内多条关键信号通路的活性，有望通过对肿瘤细胞特异性地“多靶点打击”诱导肿瘤细胞凋亡，因此抑制Hsp90 活性成为目前抗肿瘤药物研究新热点[5]。
随着雷公藤红素（celastrol）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）等中药有效成分拮抗Hsp90 介导肿瘤杀伤的作用机理得到详细阐明[6]，提示可以从传统中药中寻找更为安全有效的Hsp90 抑制剂用于肿瘤的治疗。
植物化学研究表明灯笼草的活性部位主要为甾体內酯类、生物碱类和黄酮类，其中甾体內酯类化合物表现出较强的抗肿瘤活性。
此类化合物在其A/B 环上中往往含有α、β－不饱和羰基以及环氧基团，而该类药效基团较易与蛋白质分子中的活性半胱氨酸基团发生氧化反应产生加成产物[7]。
另一方面，研究显示HSP90 及其分子伴侣在蛋白分子结构中含有大量活性半胱氨酸基团，这些半胱氨酸基团容易被氧化形成分子内双键，进而促使HSP90及其辅助分子伴侣失去活性[8]。
CCIE认证介绍 2009-10-20 14:05 蚂蚁 blog.163 我要评论()∙摘要：本文介绍了CCIE考试和CCIE认证方面的知识，希望对大家有用。
∙标签：CCIE认证∙Oracle帮您准确洞察各个物流环节CCIE（Cisco Certified Internetwork Expert）就是Cisco认证互联网专家，是Cisco的最高级技术能力认证，位于Cisco金字塔认证体系中塔尖，也是IT界公认的最权威、最受尊重证书之一，2003年被评为全球十大IT认证榜首，具有IT终极认证的美称。
目前CCIE分为四类，分别是：CCIE-路由和交换；CCIE-通信和服务；CCIE-安全；CCIE-语音。
CCIE考试不需要先获得CCNA/CCNP证书，即可直接参加CCIE认证考试，因此你只要掌握了足够的技术就可以直接参加CCIE考试了。
CCIE考试分为笔试和实验两部分，考生必须先通过笔试后，才有资格参加实验考试，你可以在任何一家Sylvan考试中心注册笔试考试，实验部分考试必须到Cisco公司参加，目前中国有北京和香港两个考场，其中北京开设CCIE-路由和交换，CCIE-安全两类考试；香港开设CCIE-路由和交换；CCIE-通信和服务；CCIE-安全三类考试。
CCIE认证分active和inactive两种状态，Cisco公司为了让CCIE能够跟踪新技术，并保持CCIE的专家水平，从通过 CCIE认证开始，每两年就要进行一次重认证,否则你虽然仍然拥有你的CCIE number,但是你的状态就从active变成inactive，相应的享有在cisco公司赋予的一些权利就没了。
苛刻的认证规则使CCIE成为IT 业界中含金量最高的证书之一，当然也成了最受尊重、最难取得的证书之一。
Cisco公司从1993年开设CCIE考试，截止到2003年7月31日，全球共有CCIE 10144名，其中路由与交换CCIE 9455名，安全CCIE 252名，通信于服务93名，还没有一人通过语音CCIE考试。
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网络工程师思科CCNA、华为HCNA—入门必备目录CONTENTS 01知己知彼篇02 理论基础篇03 协议基础篇04 原理扩展篇05 实验入门篇01网络工程师入门知己知彼篇随着信息产业的迅猛发展，IT行业人才需求量也在逐年扩大。
据国内权威数据统计，未来五年，我国信息化人才总需求量高达1500万—2000万人。
其中“网络工程”、“软件开发”等人才的缺口最为突出。
01较强的动手能力与解决问题的能力02广泛的知识面和持续的学习能力03路由交换是基础，但不能局限于此01网络工程师—职业规划外语能力外语能力项目经验项目经验外语能力项目经验01网络管理员02网络工程师03项目经理、部门经理、CTO 等01厂商认证与考试思科认证华为认证锐捷认证其它认证全球通用的认证体系，含金量比较高，体系完整，注重动手能力，大部分厂商认可思科的认证。
民族企业的骄傲，后起之秀，思科强有力的竞争者。
类似的很多厂商认证，大部分借鉴了思科认证体系的设计，命令行也极其相似，这也是思科认证通用的原因之一。
软考网络工程师等等，与厂商认证不同，偏重于理论，考试费用比较低。
01思科认证体系01常用模拟器Cisco Packet TracerGNS3WEB-IOUeNSP 思科官方的模拟器，主要针对各方向CCNA，部分CCNP，简单实用，但是支持的命令有限制，版本持续更新，功能越来越强大。
比较出名的IOS免费模拟器，也是目前学习思科最常用的模拟器之一。
思科官方模拟器，安装使用相对麻烦一些，适合有一定的基础学员使用。
华为官方模拟器，学习华为首先，版本也在持续更新。
其他模拟器各大厂商一般都有自己的模拟器，也有一些开源的模拟器。
01常用虚拟机（虚拟PC的方法）VMwareVboxvpcs路由器模拟PC 老牌虚拟化厂商，除了常用的虚拟PC，还支持数据中心、云、移动设备等虚拟化。
老牌数据库厂商Oracle出品，使用相对简单。
模拟具有测试功能的PC，一般用于协同其它模拟器使用，比如安装GNS3时，可以安装vpcs来模拟最多9台PC，用于测试。
【背景描述】该企业的具体环境如下：1、企业具有2个办公地点，且相距较远，公司总共大约有200台主机。
2、A办公地点具有的部门较多，例如业务部、财务部、综合部等，为主要的办公场所，因此这部分的交换网络对可用性和可靠性要求较高3、B办公地点只有较少办公人员，但是Int ernet的接入点在这里4、公司只申请到了一个公网IP地址，供企业内网接入使用5、公司内部使用私网地址【网络拓补】【需求分析】∙需求1：采取一定方式分隔广播域。
∙分析1：在交换机上划分VLAN可以实现对广播域的分隔。
划分业务部VLAN10、财务部VLAN20、综合部VLAN30，并分配接口。
∙需求二：核心交换机采用高性能的三层交换机，且采用双核心互为备份的形势，接入层交换机分别通过2条上行链路连接到2台核心交换机，由三层交换机实现VLAN之间的路由。
∙分析二–交换机之间的链路配置为Trunk链路–三层交换机上采用SVI方式（switch virtual interface）实现VLAN之间的路由∙需求三：2台核心交换机之间也采用双链路连接，并提高核心交换机之间的链路带宽∙分析三–在2台三层交换机之间配置端口聚合，以提高带宽∙需求四：接入交换机的access端口上实现对允许的连接数量为4个，以提高网络的安全性∙分析四–采用端口安全的方式实现∙需求五：三层交换机配置路由接口，与RA、RB之间实现全网互通∙分析五–两台三层交换机上配置路由接口，连接A办公地点的路由器RA–RA和RB分别配置接口IP地址–在三层交换机的路由接口和RA，以及RB的内网接口上启用RIP路由协议，实现全网互通∙需求六：RA和B办公地点的路由器RB之间通过广域网链路连接，并提供一定的安全性∙分析六–RA和RB的广域网接口上配置PPP（点到点）协议，并用PAP认证提高安全性∙需求七：RB配置静态路由连接到Internet∙分析七–两台三层交换上配置缺省路由，指向RA–RA上配置缺省路由指向RB–RB上配置缺省路由指向连接到互联网的下一跳地址∙需求八：在RB上用一个公网IP地址实现企业内网到互联网的访问∙分析八–用PAT（网络地址转换）方式，实现企业内网仅用一个公网IP地址到互联网的访问∙需求九：在RB上对内网到外网的访问进行一定控制，要求不允许财务部访问互联网，业务部只能访问WWW和FTP服务，而综合部只能访问WWW服务，其余访问不受控制∙分析九–通过ACL（访问控制列表）实现【配置如下：】【路由器R-B的配置】初次进入路由器R-B时，我们进行如下的基本配置，配置主机名和各端口IP地址，配置信息如下.（两个路由器ping不通，记得设置时钟速率，千万别忘记了哦。
竭诚为您提供优质文档/双击可除网络工程专业综合实践报告篇一：网路工程专业综合实验报告专业综合实验报告课程名称：专业综合实验课题名称：校园网—接入层和汇聚层姓名：班级：带教老师：报告日期：20XX.12.9--20XX.12.13电子信息学院目录一、综合实验的目的和意义 (4)二、综合实验的内容 (5)2.1校园网需求分析...........................................................................52.2校园网规划................................................. ....................................72.3网络技术指导与测试分析................................................. ...........9三、综合实验的步骤与方法.. (17)3.1项目需求分析................................................. ............................173.2制定网络工程项目实施目标方案.............................................17四、综合实验的要点.....................................18五、小组分工...........................................19六、结果分析与实验体会..................................19七、问题.. (20)参考文献 (21)前言通过专业综合实验，使学生在掌握了网络工程专业的理论知识和实践知识的前提下，能够完成从网络设备的选型、配置、设计、施工、组建，到测试、管理、维护、应用、开发等一系列贯穿网络工程全过程所有实验任务。
CCK-8实验操作步骤
lipo2000转染circRNA的siRNA于6孔板，转染浓度为50 nM
1.接种细胞：在6孔板中接种细胞悬液，根据实验需要在37℃培养箱中培养过夜。
2.24h后（第二天）进行siRNA转染
3.配制工作培养基：无胎牛血清、无双抗
4.将250ul的工作培养基与4ul的lipo2000混合，5min
5.取2.5ul的siRNA储存液（20uM）加入250ul工作培养基中
6孔盘体积为1000ul，以50nM。
(1000ul)*(50 nM*10-9)=20 (uM)*10-6 * V(ul) ,得到结果V=2.5 ul
以50 nM siRNA为例，
lipo：4ul/孔*4+250*4=16ul lipo+1000ul 培养基
6.两者溶液混合，室温孵育20分钟。
7.使用工作培养基稀释到每孔1000 uL，加入到6孔盘中，37ºC孵育。
8.4小时后更换100 ul完全培养基（有胎牛血清、无双抗）
9.继续培养24小时。
10.对细胞进行计数，以5000/孔的细胞数量接种细胞至96孔板中，每孔100ul，37℃培养细胞
细胞接种数量：
细胞密度为X*106个/ml, 每盘里面每个样品6个副孔，需要测定5个时间点
需要细胞溶液体积(6*5000)*5/X*106=(150/X) ul →3ml
k8测量
12.每孔加入培养基总体积10%的CCK solution（10ul）。
13.在细胞培养箱中继续培养1小时。
14.用酶标仪测定450 nm处的吸光值。
CCK8的实验步骤、实验分组及检测⽅法毕业季就像在打怪，⼀个不⼩⼼，就会犯错。
就像最近需要提供可以打论⽂制作费的银⾏卡，我明明在备忘录中备注了，还设置了提醒，但是还是忘记了。
今天研究⽣处⽼师找我才想起来。
刚哥说是因为我已经很久没怎么进⾷碳⽔化合物，所以神经紊乱，记忆减退，最主要是会忘事、变笨。
有⽂献报道称长期⽣酮饮⾷会造成神经系统的紊乱，出现失眠、记忆减退、精神衰弱等神经精神症状。
瞬间觉得这个猜测有⼀定的道理，今天早上就开⼼的吃了⼀根⽟⽶。
结果可能是碳⽔戒断现象，吃了可能2个⼩时不到，就困得不⾏，特别想睡觉。
哎，到底是吃还是不吃呢。
后来想通了，既然是类似戒断现象，那就慢慢加量，明天早上吃1/3根。
先给⼤家分享⼀点我这周的⼩⼩体会和收获吧。
我有个师妹，⼈⼩⼩个，但能量还挺⼤的。
在我未正式和她有接触之前，她属于那种懵懵懂懂的⼩⼥⽣，也不是特别清楚⾃⼰在做什么，但有个很⼤的优点，很⼼细，另外执⾏能⼒也还⾏。
在我们成为了伙伴，⼀起⼯作的这⼤半年中，我们⼀起扩了病毒，⼀起养了细胞，⼀起拍了照，⼀起认识了很多新的东西。
她的改变⾮常⼤，实验越做越好，知道去问为什么，知道查询相关⽂献。
我也越来越放⼼她单独做实验。
最近，我发现她有个特别⽜逼的技能，就是可以⽤把肺组织切⽚切得⾮常漂亮，有层次感，可以切到肺上⽪细胞的纵切⾯，可以切到⽓管的纵切⾯和横切⾯，⽽且切得好的概率越来越⼤，什么都不多说，看下图1，2（这还不是最好的，因为我没有那部分数据）。
我问过她，有没有什么诀窍，她也是糊⾥糊涂的。
不过从现在开始，她已经是个实验有⼼⼈，开始注意在每⼀次⽯蜡切⽚的标本脱⽔、固定、切⽚的每⼀个步骤，做好了记录。
希望在不久的将来她可以写个帖⼦跟⼤家分享⽯蜡切⽚的⼿法。
其实我跟很多⼈都讲过我做实验的经验教训，她是⽐较能听进去的那⼀类。
她现在都可以和我⼀起讨论课题了，我甚是欣慰。
我记得我得硕⼠⽼板在我最开始做实验的时候，跟我说过，在我们起步⽐较晚的时候，最开始都是不段模仿、重复，最后才能赶上，然后才有创新，才有超越。
考研常考的经典实验回顾【考研经典实验一】免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP) 是研究蛋白相互作用的常用方法，读懂Co-IP的实验结果是从事生命科学研究的基本要求。
下面这道题主要考察同学们对科技文献的阅读情况以及对Co-IP技术在实际应用中的理解。
Netrin-1是调控神经定向生长的重要因子，DCC 及UNC5H2是其细胞膜受体。
在1999 年Cell杂志发表的一篇论文中(Cell, Vol. 97, .927 - 941, 1999),作者通过Co-IP 技术，研究了netrinl 对DCC及UNC5H2蛋白之间相互作用的影响:将DCC, UNC5H2两种蛋白的表达载体(vector)转入COS-1细胞中进行表达，然后通过Co-IP技术研究二者之间的相互作用。
NPN2A是另外- ~种与netrin-1/DCC/UNC5H2不同家族的受体,其表达载体也同时转入COS-1细胞。
【考研经典实验二】The Wnt planar polarity signaling pathway normallyensures that each wingcell in Drosophilahasasinglehair. 0verexpression of the Frizzled gene from a heat-shock promoter (hs-Fz）causes multiple hairs to grow from many cells(Figure 4A) This phenotype is suppressed if hs-Fz is combined with a heterazygous deletion(DshA/+) of the Dishevelled gene(Figure 4B). Do these results allow you to order the action of Friz zled and Dishevelled in the signaling pathway? If so, what is the order? Explain your reasoning。
实用文档在企业中，要实现所有的员工都能与互联网进行通信，每个人各使用一个公网地址是很不现实的。
一般，企业有1个或几个公网地址，而企业有几十、几百个员工。
要想让所有的员工使用这仅有的几个公网地址与互联网通信该怎么做呢？使用NAT技术！在企业中，一般会有多个部门，像财务部、技术部、工程部等等。
每个部门有每个部门的职责。
像财务部这种重要的部门有些资料是不允许被其他员工知道的。
怎样能清楚的区分不同的部门，以便于管理呢？使用VLAN技术！为了工作方便、增强工作效率，各部门经理必须能相互通信。
但不允许员工之间相互通信。
我们又该怎样做呢？使用ACL技术！今天我们来学习如何使用NAT + VLAN +ACL管理企业网络。
如下是试验环境：环境介绍：企业中只有一个公网地址，172.16.1.1/24企业中共有三个部门工程部、财务部、技术部。
PC1 PC3 PC5 分别为三个部门的部门经理使用。
PC1 的ip地址为192.168.1.2/24PC2 的ip地址为192.168.1.3/24PC3 的ip地址为192.168.2.2/24PC4 的ip地址为192.168.2.3/24PC5 的ip地址为192.168.3.2/24.实用文档192.168.3.3/24地址为PC6 的ip试验目的：使企业中所有的计算机都能通过唯一的公网地址与互联网通信。
NAT通过配置实现每个部门经理之间能够通讯，ACL通过配置VLAN划分各个部门，并配置普通员工之间不能相互通讯。
，知道目的了，让我们开始工作吧！OK间路由，所R2上做基本配置，（由于试验过程中要使用VLAN首先在R1 和进行封装来配置子接口）以需要使用dot1QR1Router>entRouter#confCNTL/Z.line. End with Enter configuration commands, one perr1Router(config)#hosts0/0r1(config)#int255.255.255.0r1(config-if)#ip addr 172.16.1.1shutr1(config-if)#noupchanged state to %LINK-5-CHANGED: Interface Serial0/0, 64000r1(config-if)#clock ratechInterface Serial0/0, protocol %LINEPROTO-5-UPDOWN: Line on ustate to angedr1(config-if)#exitf0/0r1(config)#intaddrr1(config-if)#no ipshutr1(config-if)#nor1(config-if)#exit配置子接口，r1(config)#int f0/0.1dot1配置子接口必须使用 2 r1(config-subif)#encapsulation dot1Q 进行封装Q255.255.255.0192.168.1.1 r1(config-subif)#ip addr shutr1(config-subif)#nor1(config-subif)#exit配置子接口r1(config)#int f0/0.2dot1Q配置子接口必须使用r1(config-subif)#encapsulation dot1Q 3进行封装255.255.255.0addr 192.168.2.1 r1(config-subif)#ipshutr1(config-subif)#nor1(config-subif)#exitr1(config)#int f0/0.3 配置子接口r1(config-subif)#encapsulation dot1Q 4 配置子接口必须使用dot1Q进行封装.实用文档255.255.255.0addr 192.168.3.1 r1(config-subif)#ip就可以啦ipR2的S0/0口上配置因为我们把R2当作公网使用，所以只需要在R2Router>entRouter#confCNTL/Z.with line. End Enter configuration commands, one perr2Router(config)#hosts0/0r2(config)#int255.255.255.0r2(config-if)#ip addr 172.16.1.2shutr2(config-if)#no我们要让企业中的所有员工都能通过唯一的公基本配置完成了，接下来第一步，与互联网相互通信。
ip 172.16.1.1/24 网R125netmask 172.16.1.1 172.16.1.1 r1(config)#ip nat pool internet 5.255.255.0 定义全局地址池r1(config)#access-list 10 permit 192.168.0.0 0.0.255.255通过标准访问控制列表定义内部网络的上网条件r1(config)#ip nat inside source list 10 pool internet overload 建立全局地址池与标准访问控制列表之间的映射关系r1(config)#int s0/0r1(config-if)#ip nat outside 外网接口绑定（要想配置能实现应用必须在内外网接口上绑定）r1(config-if)#exitr1(config)#int f0/0r1(config-if)#ip nat inside 内网接口绑定通过配置VLAN划分各个部门，并配置ACL以实现每个部门经理之间能够通讯，普通员工之间不能相互通讯。
SwSwitch>en.实用文档tSwitch#confCNTL/Z. End with Enter configuration commands, one per line.f0/1Switch(config)#int链路Trunk 配置Switch(config-if)#switchport mode trunk FastEthernetprotocol on Interface %LINEPROTO-5-UPDOWN: Line downchanged state to 0/1,FastEthernetprotocol on Interface %LINEPROTO-5-UPDOWN: Line upchanged state to 0/1,Switch(config-if)#exitVLAN 创建Switch(config)#vlan 22为工程部vlan2Switch(config-vlan)#name gongchengbuSwitch(config-vlan)#exitVLA 创建Switch(config)#vlan 33N为财务部VLAN3 caiwubu Switch(config-vlan)#nameSwitch(config-vlan)#exit4VLAN 创建Switch(config-vlan)#vlan 4为技术部VLAN4jishubu Switch(config-vlan)#name Switch(config-vlan)#exitSwitch(config)#int f0/2手工添加给VLAN 22 vlan Switch(config-if)#switchport access成员Switch(config-if)#exitf0/3Switch(config)#intSwitch(config-if)#switchport access vlan 2Switch(config-if)#exitf0/4Switch(config)#intVLAN 3手工添加给Switch(config-if)#switchport access vlan 3成员Switch(config-if)#exitSwitch(config)#int f0/5Switch(config-if)#switchport access vlan 3Switch(config-if)#exitSwitch(config)#int f0/6Switch(config-if)#switchport access vlan 4 给VLAN 3手工添加成员Switch(config-if)#exitSwitch(config)#int f0/7Switch(config-if)#switchport access vlan 4Switch(config-if)#exit定义访问控制列表.实用文档（在此例定义访问控制列表时要细心，要把最特殊的访问控制列表放在最上面。
中，允许一台特定主机而拒绝一个网段，所以要把拒绝主机放在上面）。
注意：要想一个访问列表能够得到应用，必须在接口绑定。
R10.0.0.0192.168.2.2 r1(config)#access-list 10 permit0.0.0.255192.168.2.0 10 deny r1(config)#access-list0.0.0.0192.168.3.2 10 permit r1(config)#access-list0.0.0.255192.168.3.0 10 deny r1(config)#access-listanypermit r1(config)#access-list 10f0/0.1r1(config)#intout10 r1(config-subif)#ip access-groupr1(config-subif)#exit0.0.0.0permit 192.168.1.2 r1(config)#access-list 11r1(config)#access-list 11 deny 192.168.1.0 0.0.0.255r1(config)#access-list 11 permit 192.168.3.2 0.0.0.0r1(config)#access-list 11 deny 192.168.3.0 0.0.0.255r1(config)#access-list 11 permit anyr1(config)#int f0/0.2r1(config-subif)#ip access-group 11 outr1(config-subif)#exitr1(config)#access-list 12 permit 192.168.1.2 0.0.0.0r1(config)#access-list 12 deny 192.168.1.0 0.0.0.255r1(config)#access-list 12 permit 192.168.2.2 0.0.0.0r1(config)#access-list 12 deny 192.168.2.0 0.0.0.255r1(config)#access-list 12 permit anyr1(config)#int f0/0.3r1(config-subif)#ip access-group 12 outr1(config-subif)#exitOK了，现在通过配置后所有的员工都能与互联网通讯。
