β - 木糖苷酶(β - xylosidase )测定试剂盒说明书
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β-淀粉酶(β-AL)活性检测试剂盒说明书(DNS显色法)可见分光光度法UPLC-MS-417150T/24S试剂名称规格保存条件试剂一液体65mL×1瓶常温保存试剂二液体18mL×2瓶2-8℃保存试剂三粉剂×2支2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制:1、试剂一:若有黄色晶体析出,需加热溶解后再用;2、试剂二:临用前取1支试剂三加入到1瓶试剂二中,置于常温水中并加热至煮沸,期间不断搅拌粉剂至溶解,用不完的试剂2-8℃保存4周;3、标准品:10mg无水葡萄糖。
临用前加入1mL蒸馏水配制成10mg/mL的标准溶液,2-8℃保存两周。
淀粉酶负责水解淀粉,主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶。
β-淀粉酶(EC3.2.1.2)从淀粉的非还原端切开α-1,4糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖。
还原糖还原3,5-二硝基水杨酸生成棕红色物质。
α-淀粉酶不耐酸,β-淀粉酶不耐热。
根据上述特性,钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力。
Starchα-AL Reducing SugarReducing Sugar+3,5-dinitrosalicylic acid3-Amino-5-Nitrosalicylate(540nm)注意:实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
可见分光光度计、水浴锅、离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器和蒸馏水。
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)称取约0.1g样本,加入0.8mL蒸馏水,研磨匀浆;将匀浆倒入离心管中,提取液在室温下放置提取15min,每5min振荡1次,使其充分提取;6000g,常温离心10min,取上清液加蒸馏水定容至10mL,摇匀,即淀粉酶原液。
吸取上述淀粉酶原液1mL,加入4mL蒸馏水,摇匀,即为淀粉酶稀释液,用于(α+β)淀粉酶总活力的测定。
小鼠β半乳糖苷酶(βGAL)ELISA试剂盒使用说明书本本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中β半乳糖苷酶(βGAL)的含量。
试验原理:βGAL试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知βGAL浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将βGAL和生物素标记的抗体同时温育。
小鼠β半乳糖苷酶ELISA试剂盒洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中βGAL的浓度呈比例关系。
试剂盒组成:自备材料蒸馏水。
加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。
安全性避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发,避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
避免用手接触,有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
小鼠β葡糖苷酶(β-glucosidase)ELISA试剂盒使用说明书本本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中β葡糖苷酶(β-glucosidase)的含量。
试验原理:β-glucosidase试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知β-glucosidase浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将β-glucosidase和生物素标记的抗体同时温育。
小鼠β葡糖苷酶ELISA试剂盒洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中β-glucosidase的浓度呈比例关系。
试剂盒组成:自备材料蒸馏水。
加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。
安全性避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发,避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
避免用手接触,有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
小鼠β葡萄糖醛酸苷酶(βGD)ELISA试剂盒使用说明书本本试剂仅供研究使用标本:血清或血浆本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中β葡萄糖醛酸苷酶(βGD)的含量。
试验原理:βGD试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知βGD浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将βGD和生物素标记的抗体同时温育。
小鼠β葡萄糖醛酸苷酶ELISA试剂盒洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。
再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中βGD的浓度呈比例关系。
试剂盒组成:自备材料蒸馏水。
加样器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
振荡器及磁力搅拌器等。
安全性避免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。
稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前使用。
使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
使用干净的塑料容器配置洗涤液。
使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
底物A应挥发,避免长时间打开盖子。
底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。
避免用手接触,有毒。
实验完成后应立即读取OD值。
加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
样品收集、处理及保存方法血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。
使用不含热原和内毒素的试管。
收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂是一种旨在使用化学方法,快速有效地裂解动物细胞,通过高速离心,获得澄清细胞裂解悬液,在β-半乳糖苷酶反应体系里,以人工合成的二恶二酮类化合物作为发光底物,水解所产生的发光产物,通过发光探测仪(Luminometer)测定其相对冷光单位(RLU)的变化,以此进行测算酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
广泛应用于基因组学、蛋白质组学和其它分子生物学研究。
其适用于转基因后的活体细胞外源性以及衰老细胞内源性半乳糖苷酶活性分析。
产品即到即用,性能稳定,参数优化,操作简便、高度敏感。
技术背景大肠杆菌的标志基因Lac Z编码β-半乳糖苷酶(β-galactosidase ;β-gal),在其催化作用下,半乳糖可从乳糖的水解作用中得到。
β-半乳糖苷酶非常稳定,对蛋白水解降解作用抗性强,且容易测试。
因此β-半乳糖苷酶成为目前最常用的报告基因,以评价载体转染的效果。
在衰老细胞内,显示β-半乳糖苷酶活性。
甲氧基二恶二酮氯代金刚烷苯基吡喃半乳糖苷(3- (4-methoxyspiro [1, 2-dioxetane-3, 2'- (5'-chloro) tricyclo [3.3.1.13,7]-decan]-4-yl-phenyl -ß-D-galacto pyranoside),是一种二恶二酮(dioxetane)类发光底物,以替代乳糖,在β-半乳糖苷酶(pH7.8)的催化下,去糖基化后,产生二恶二酮,进而在多聚苯甲基乙烷乙烯基苯甲氯化铵和荧光素钠(poly (benzyldimethylvinylbenzyl) ammonium chloride and sodium fluorescein)的启动反应作用下,同时pH调整到12,由此二恶二酮分解,发出冷光,在冷光仪(475nm波长)下,检测发光信号,来测定β-半乳糖苷酶的活性。
β-羟丁酸测定试剂盒(β-羟丁酸脱氢酶法)适用范围:本试剂用于体外定量测定人血清中β-羟丁酸(β-HB)的含量。
1.1 产品型号/规格试剂1:1×8mL、试剂2:1×2mL;试剂1:1×16mL、试剂2:1×4mL;试剂1:1×20mL、试剂2:1×5mL;试剂1:1×32mL、试剂2:1×8mL;试剂1:1×40mL、试剂2:1×10mL;试剂1:2×40mL、试剂2:2×10mL;试剂1:4×40mL、试剂2:4×10mL;试剂1:2×40mL、试剂2:1×20mL;试剂1:4×40mL、试剂2:2×20mL;试剂1:8×40mL、试剂2:8×10mL;试剂1:1×80mL、试剂2:1×20mL;试剂1:2×80mL、试剂2:2×20mL;试剂1:4×80mL、试剂2:4×20mL;试剂1:8×80mL、试剂2:8×20mL;试剂1:1×60mL、试剂2:1×15mL;试剂1:2×60mL、试剂2:2×15mL;试剂1:3×60mL、试剂2:3×15mL;试剂1:8×50mL、试剂2:2×50mL;试剂1:6×70mL、试剂2:3×35mL;试剂1:5×40mL、试剂2:1×50mL;试剂1:4×50mL、试剂2:1×50mL;试剂1:3×60mL、试剂2:1×45mL;试剂1:8×20mL、试剂2:8×5mL;试剂1:1×20L、试剂2:1×5L;试剂1:1×10L、试剂2:1×2.5L;试剂1:1×4L、试剂2:1×1L;试剂1:1×1L、试剂2:1×250mL。
β-半乳糖苷酶(β-gal)ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T0.8 pg/ml -35pg/ml使用目的:本试剂盒用于测定微生物样本中β-半乳糖苷酶(β-gal)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中β-半乳糖苷酶(β-gal)水平。
用纯化的β-半乳糖苷酶(β-gal)体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入β-半乳糖苷酶(β-gal),再与HRP标记的β-半乳糖苷酶(β-gal)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的β-半乳糖苷酶(β-gal)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中β-半乳糖苷酶(β-gal)浓度。
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒使用说明产品简介:β-半乳糖苷酶染色试剂盒(β-Galactosidase Staining Kit)是一种基于衰老时SA-β-Gal(senescence-associatedβ-galactosidase)活性水平上调而对衰老细胞或组织进行染色检测的试剂盒。
在普通的光学显微镜下就可以观测到细胞或组织的衰老情况。
绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力,在不能分裂后就进入衰老状态。
此时细胞仍然是存活的,但细胞的基因和蛋白的表达谱发生了很大改变。
衰老细胞不能在一些常规的刺激下再诱导细胞分裂,并且衰老细胞的细胞周期分布也比较特殊,不同于一些损伤诱导的细胞休眠,也不同于细胞生长接触抑制的情况。
衰老细胞通常体积变会大,表达pH 6.0时有高酶活性的β-半乳糖苷酶。
细胞衰老也被认为是生物体抑制肿瘤的一种方式,同时也是生物体老化(aging)的一种潜在原因。
本试剂盒可以用于培养细胞的衰老检测,也可以用于组织切片的衰老检测。
β-半乳糖苷酶染色试剂盒以X-Gal为底物,在衰老特异性的β-半乳糖苷酶催化下会生成深蓝色产物,光学显微镜下很容易观察到变成蓝色的表达β-半乳糖苷酶的细胞或组织。
本试剂盒仅染色衰老细胞,对衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞等不会染色。
对于组织切片或组织块,可以检测的样品数量视样品的大小而定,对于普通的切片也至少足够检测100个样品,使用6孔板测定,足够测定100个样品。
产品组成:试剂(C):β-半乳糖苷酶染色液A1ml4℃避光试剂(D):β-半乳糖苷酶染色液B1ml4℃避光试剂(E):β-半乳糖苷酶染色液C100ml4℃避光使用说明书1份自备材料:1、PBS或HBSS2、细胞培养器皿3、显微镜操作步骤(仅供参考):(一)贴壁细胞染色:1、对于6孔板中培养的细胞,吸除细胞培养液,用PBS或HBSS洗涤1次,加入1ml β-半乳糖苷酶染色固定液,室温固定15min。
β-半乳糖苷酶(β-gal)ELISA试剂盒使用方法本试剂盒仅供研究使用。
检测范围:96T0.8 pg/ml -35pg/ml使用目的:本试剂盒用于测定微生物样本中β-半乳糖苷酶(β-gal)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中β-半乳糖苷酶(β-gal)水平。
用纯化的β-半乳糖苷酶(β-gal)体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入β-半乳糖苷酶(β-gal),再与HRP标记的β-半乳糖苷酶(β-gal)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的β-半乳糖苷酶(β-gal)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中β-半乳糖苷酶(β-gal)浓度。
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。
加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
货号:QS2620 规格:50管/24样β-木糖苷酶(β-xylosidase)测定试剂盒说明书
可见分光光度法
注意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体,是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶,产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。
另外,β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业,比传统的漂白法环保,具有广泛的应用价值。
测定原理:
β-木糖苷酶催化对硝基苯酚-β-D-木糖苷产生对硝基苯酚,对硝基苯酚在405nm处有特征吸收峰,测定405nm光吸收增加速率,可计算β-木糖苷酶活性。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体2mL×1瓶,4℃避光保存。
试剂二:液体20mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加
入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃,离心20min,取上清待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500
万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3.液体:直接检测。
β-木糖苷酶活性计算公式:
标准曲线:y=13.226x+0.0011,R2=0.9998;x为标准品浓度(μmol/mL),y为吸光值ΔA。
1、按蛋白浓度计算
酶活定义:45℃,pH7.4时每毫克蛋白1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
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β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mg prot)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反总÷(V样×Cpr)
÷T×1000
= 11.34×(ΔA -0.0011)÷ Cpr
2、按样本质量计算:
酶活定义:45℃,pH7.4时每克样品1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T×1000= 11.34×(ΔA-0.0011)÷W
3. 按细胞数量计算:
酶活定义:45℃,pH7.4时每104个细胞1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反总÷V样×V样总÷细胞数量(万个)÷T×1000=11.34×(ΔA-0.0011) ÷ 细胞数量(万个)
(4)按液体体积计算
酶活定义:45℃,pH7.4时每毫升液体1min内催化产生1 nmol对硝基苯酚为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性(nmol/min/ mL)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V反总÷V样÷T×1000
=11.34×(ΔA-0.0011)
V样总:加入提取液体积,1mL; V反总:反应总体积,0.6mL;V样:反应中样品体积,0.2mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W:样品质量,g;T:反应时间,20min;1000:1μmol/mL=1000nmol/mL ΔA控制在0.01-2范围内,若ΔA大于2,可适当减小样本量。
标准曲线线性范围为:0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。
第2页,共2页。