5.1细胞增殖(1)

植物快速繁殖技术植物快速繁殖就是应用组织培养技术，快速繁殖名优特新品种，使其在较短时间内繁衍较多的植株；快速繁衍珍稀濒危植物，使物种得以保存.快速繁殖是当前植物细胞工程中应用最广泛，又最有效的方法之一。

除了一部分豆类作物外,种子是不会传递病毒的.植物病毒是通过无性繁殖传递的，而快速繁殖是建立在无性繁殖的基础上，病毒在母体内逐代积累，危害越来越严重.目前在生产上尚无特效药物可彻底除去病毒，而快速繁殖却可以，因此，快速繁殖脱毒显得非常重要。

一、植物快速繁殖的途径和方法以植物的根、茎、叶柄和花等片段以及孢子作为外植体，或者切取茎尖、腋芽进行离体培养，可以直接诱导器官分化，产生芽、根，也可以诱导改变原有的分化状态，脱分化形成愈伤组织，再经过不同的细胞分化途径重建形成不同的器官，直到完整植株。

(P86L.1~L.16)植物快速繁殖的类型与方式可归纳如下表：快速繁殖中茎尖培养脱毒无病毒苗的获得:（一）材料的培养和灭菌为了获得无菌的茎尖,应把供试植株种在无菌的盆土中,放在温室栽培。

浇水要浇在土中,不要浇在叶片上。

如材料取自田间,可切取插条，在实验室内进行溶液培养。

由这些插条的腋芽长成的枝条，其污染程度比直接从田间植株取来的枝条少得多。

自外，定期喷施内吸杀菌剂（如0.1％多菌灵和0.1％链霉素）也十分有效.（二）茎类剥离取幼苗茎尖2~3cm小段，剥去可见的大叶，放在烧杯内用自来水冲洗1h左右，移入无菌室进行严格消毒.先用95%酒精快速浸泡一下，再放入5%的漂白粉溶液内消毒7~10min(也可用市场上出售的次氯酸钠溶液稀释为5％）,然后用无菌水冲洗3~4次，在双筒解剖镜下一手用细镊子将茎芽按住，另一手用解剖针仔细地将幼叶剥去，最后露出圆滑的生长点，用注的针头侧刃或自制的解剖针，仔细地切取带有1~2个叶原基的生长点，随即接种到试管培养基上进行培养。

这样外植体（生长锥带1～2个原叶基）的培养，严格来说，应称为分生组织培养。

细胞增殖检测方法细胞增殖检测通常是检测分裂中的细胞数量或者细胞群体发生的变化。

目前细胞增殖检测主要分为五类：DNA合成检测、代谢活性检测、细胞数量检测、细胞增殖相关抗原检测和ATP 浓度检测。

在这些方法中作何选择，主要取决于所研究的细胞类型和研究方案。

1.DNA合成检测这是目前实验室中检测细胞增殖最准确可靠的方式。

该法是将放射性标记的3H-胸腺嘧啶与细胞一同孵育，这样新增殖细胞的DNA中就会掺入放射性标记，经洗脱后可用闪烁计数器检测。

该方法耗时长，而且有个明显的弊端就，即使用和处理放射性物质既麻烦又不安全。

不过，可以使用5-溴-2-脱氧尿苷BrdU来进行类似实验，因为BrdU也同样可以掺入到新合成的DNA中。

但这样就需要进行额外的实验步骤，先孵育特异性BrdU单抗和带标记的二抗，然后再进行比色法、化学发光检测或荧光信号检测等步骤。

该方法的优点就是不再需要放射性物质。

BrdU标记很适合免疫组化IHC、免疫细胞化学IC、细胞内ELISA、流式细胞分析和高通量筛选。

2.代谢活性检测检测细胞群体的代谢活性也可以反映细胞增殖的情况。

在细胞增殖过程中脱氢酶的活性会增加，因此其底物四唑盐或Alamar Blue在代谢活跃的细胞环境中会逐渐减少，形成能够改变培养基颜色的甲臜染料。

可以通过低配置或高配置的分光光度计和酶标仪来读取含染料培养基的吸光度，从而衡量细胞的代谢活性，检测细胞增殖的情况。

四种最常见的四唑盐是：MTT、XTT、MTS和WST1。

MTT在标准的细胞培养基中是不溶的，而且其生成的甲臜晶体需要溶解在DMSO或者异丙醇中。

因此，MTT主要作为终点检测方法。

其他三种盐与Alamar Blue一样，都是可溶且无毒。

它们可以作为连续监控手段来跟踪细胞增殖的动态改变。

其中XTT的效率较低，需要添加额外的因子；WST1更灵敏有效，与其他盐相比能够更快显色；Alamar Blue的灵敏度也很高，只要微孔板的孔中有100个细胞就能够检测到。

人教版教学教案细胞的基本结构全章复习第一章：细胞的概念与功能1.1 细胞的定义：细胞是生物体结构和功能的基本单位。

1.2 细胞的特点：细胞的结构和功能相适应，具有自主生长、自主繁殖、自主代谢的能力。

1.3 细胞的功能：细胞是生物体内各种生物化学反应的场所，是生物体生长发育、繁殖和适应环境的基础。

第二章：细胞膜的结构与功能2.1 细胞膜的组成：主要由磷脂、蛋白质和糖类组成。

2.2 细胞膜的结构：具有流动性，磷脂双分子层作为基本支架，蛋白质和糖类分布其中。

2.3 细胞膜的功能：维持细胞内外环境的稳定，控制物质进出，进行细胞间的信息交流。

第三章：细胞质的组成与功能3.1 细胞质的组成：细胞质包括细胞质基质和细胞器。

3.2 细胞质基质的功能：为细胞提供溶解氧、营养物质和代谢产物，维持细胞内环境稳定。

3.3 细胞器的功能：线粒体、内质网、高尔基体、核糖体等细胞器各自承担着能量供应、蛋白质合成、修饰和运输等重要功能。

第四章：细胞核的结构与功能4.1 细胞核的组成：核膜、染色质、核仁和核孔。

4.2 细胞核的功能：细胞核是遗传信息库，是遗传物质复制和转录的场所，控制着生物的遗传和代谢。

第五章：细胞增殖与细胞分化5.1 细胞增殖的方式：无丝分裂、有丝分裂和减数分裂。

5.2 细胞分化的概念：细胞在发育过程中，由一个或多个细胞增殖产生的后代，在形态、结构和生理功能上发生差异性的过程。

5.3 细胞分化的意义：细胞分化形成多种细胞类型，完成生物体的生长发育和各种生理功能。

第六章：原核细胞与真核细胞的比较6.1 原核细胞的特点：细胞较小，无以核膜为界限的细胞核，染色质直接分布在细胞质中，有细胞壁，无生物膜系统。

6.2 真核细胞的特点：细胞较大，有以核膜为界限的细胞核，细胞壁主要成分是纤维素和果胶（植物细胞）或无细胞壁（动物细胞和真菌细胞），具有复杂的生物膜系统。

6.3 原核细胞与真核细胞的异同：两者在细胞大小、细胞核的结构、细胞壁的成分、生物膜系统、DNA存储形式、增殖方式和可遗传变异方式等方面存在差异。

第1页 第2页5.1 细胞增殖（第1课时）编制：程方艳 审核：张统省 校对：王曼【学习目标】说出细胞的生长和增殖具有周期性；观察细胞的有丝分裂，说出细胞各时期的主要特征。

【自学质疑】一、细胞周期1．细胞增殖的方式、特点及意义是什么？ 2．细胞周期(1)起止点：从一次 结束开始，到 为止。

(2)时期划分： 和 。

二、有丝分裂 1．发生范围： 进行分裂的主要形式。

2．细胞在分裂间期进行了哪些准备活动？ 3. 细胞分裂是一个连续的过程，但是我们可以人为地将其划分成几个阶段？在这些阶段内发生了哪些物质变化？ 【质疑讨论】1．填写下列表格中有丝分裂各时期细胞核中染色体、染色单体、DNA 含量的变化：(假定没有进入细胞周期的细胞中有2N 条染色体)2．上面的表格内染色体数、DNA 分子数、染色单体数的变化用坐标曲线表示出来。

【矫正反馈】1．右图表示细胞有丝分裂一个细胞周期所用的时间，下列说法正确的是 ( )①甲一乙的过程表示分裂间期 ②乙一甲的过程表示分裂期③一个细胞周期是指甲一甲的全过程 ④一个细胞周期是指乙一乙的全过程 A ．①②③ B ．①②④ C ．③ D ．④2．下图①～⑤表示一个细胞有丝分裂过程中染色体变化的不同情况。

在整个细胞周期中，染色体变化的顺序应该是()A ．①④⑤③②B ．②③①④⑤C ．①⑤④③②D ．⑤④③②①3．一种动物体细胞中的染色体数为24，则该动物体内一个处于有丝分裂前期的细胞，其DNA 分子数和染色体数分别为 ( ) A ．12、48 B ．24、48 C ．24、24 D ．48、244．细胞在进行正常的有丝分裂过程中，染色体、染色单体、DNA 分子三者的数量比是1：2：2，该细胞所处的时期是 ( ) A ．前期或后期 B ．中期或末期 C ．前期或中期 D ．后期或末期5．(多选)在细胞有丝分裂过程中，DNA 分子数目和染色体数目不同的时期是 ( ) A ．间期 B ．前期 C ．中期 D ．后期 6．(多选)在细胞周期中，与染色体平均分配有关的是 ( ) A 着丝粒分裂 B ．染色体复制 C ．纺锤丝收缩 D ．细胞膜缢裂 7．请根据图所示的细胞周期模式图回答下列问题： (1)依次写出D 、E 两个时期的名称 。

实验---观察植物细胞的有丝分裂-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1实验观察植物细胞的有丝分裂一、学习目标1．观察植物细胞有丝分裂的过程，识别有丝分裂的不同时期。

2．初步掌握制作洋葱根尖有丝分裂装片的技术。

3．初步掌握绘制生物图的方法。

二、实验原理高等植物体的分生区细胞能进行有丝分裂，有丝分裂的细胞周期分为间期和分裂期（包括前期、中期、后期、末期四个时期），要用高倍显微镜观察这个过程，根据各个时期内染色体的变化情况，识别该细胞处于有丝分裂的哪个时期。

细胞核内的染色体容易被碱性染料（如：龙胆紫）染色，便于观察。

三、材料用具洋葱，显微镜等；质量分数为15%的盐酸，体积分数为95%的酒精溶液，质量浓度为0.01g/mL或0.02g/mL的龙胆紫溶液。

或洋葱根尖、蚕豆根尖、蛔虫受精卵等的永久装片。

四、实验程序洋葱根尖细胞培养：实验课前3-4d培养（温暖、常换水），待根长到5cm 取材：取根尖2-3mm解离液：质量分数为15%的HCl溶液和95%的酒精溶液按1∶1体积比的比例混合解离解离时间：3-5min解离目的：使组织中的细胞互相分离开解离程度：根尖酥软漂洗液：清水装片的制作漂洗漂洗时间：10 min漂洗目的：洗去组织中的解离液，有利于染色染色液：0.01g/ml或0.02g/ml的龙胆紫（醋酸洋红）溶液染色染色时间：3-5min染色目的：使染色体（或染色质）着色，便于观察。

制片：镊子尖把根尖弄碎，盖上盖玻片，复加一块载玻片用拇指轻压（使细胞分散开）先低倍镜：据细胞特点找到分生区（细胞呈正方形，排列紧密，有的细胞观察正在分裂）后高倍镜：先找中期细胞，后找前、后、末期细胞（绝在多数细胞处于间期，少数处于分裂期。

因为间期时长远大于分裂期。

）五、注意事项（1）实验所选取的洋葱应避免选用新采收的，因为新采收的洋葱处于休眠状态，不易生根。

（2）细胞分裂各期常常在几个视野中才能找出。

5.1 细胞增殖（第2课时）编制：程方艳审核：张统省校对：王曼【学习目标】初步掌握制作洋葱根尖有丝分裂装片的技术，观察植物细胞有丝分裂的过程，识别有丝分裂的不同时期；描述细胞的无丝分裂。

【自学质疑】1．概述该洋葱根尖有丝分裂装片的制作过程；2．思考并讨论：该实验所用相关溶液的作用和目的盐酸和酒精的作用是什么？清水漂洗的目的是什么？龙胆紫的作用是什么？3．举例说明什么是无丝分裂，其有何特点？【质疑讨论】动植物细胞有丝分裂过程有何异同点？有丝分裂的意义是什么？【矫正反馈】1．下列关于高等植物和高等动物细胞有丝分裂的叙述中，正确的是( )A．二者细胞质的分裂方式相同B．纺锤体的形成和消失的方式相同C．纺锤体形成的方式相同，消失的方式不同D．在分裂期的末期，高尔基体的作用不同2．在植物细胞中，与染色体运动和细胞板形成有关的细胞器是( )A．叶绿体和线粒体B．中心体和高尔基体C．线粒体和高尔基体D．内质网和核糖体3下图表示的是四种植物细胞的细胞周期(按顺时针方向)，其中说法正确的是()A．图中的b→a→b表示细胞增殖过程的一个细胞周期B．甲图中的b→a与丙图中的b→a所用的时间可能相同C．从a→b，由于DNA分子的复制使染色体数目增加一倍D．观察植物细胞有丝分裂的实验材料最好是选择植物甲4．在观察植物细胞有丝分裂的实验中，制作装片的正确顺序是( )A．固定一解离一染色一压片B．解离一漂洗一染色—压片C．漂洗一解离一染色一压片D．解离一染色一漂洗—压片5．某细胞中染色体数为2N，下图属于有丝分裂中期和后期的依次是()A．①②B．②③C．④②D．④③6．图所示为有丝分裂过程中染色体的运动，图中的曲线A表示染色体的着丝点与纺锤丝的相应的极之间的平均距离。

(1)细胞分裂的后期开始于( )A．0 minB．0和10 min之间的某一时刻C．10 minD．10 min以后(2)曲线B代表( )A．细胞分裂中期染色体之间的距离B．中心体之间的距离C．染色体和染色单体之间的距离D．细胞分裂后期子染色体之间的距离7．以下是几位同学进行细胞分裂实验操作的情况。

淋巴细胞增殖试验的标准操作规程（编号：035）
1、目的及适用范围
该SOP用来规范MTT法检测淋巴细胞转化效率的操作。

2、主要仪器
CO2细胞培养箱、普通光学显微镜。

超净工作台（生物安全级别）、电动吸引器、移液器、细胞计数器
3、试剂及配制方法
RPIM-1640培养基、淋巴细胞分离液、MTT噻唑蓝（5mg/mL用PBS，pH=7.4配制后，过滤除菌）
4、相关器皿的预处理
玻璃制品和金属制品高压灭菌
5、操作步骤
5.1分离小鼠脾细胞
5.1.1 断颈处死小鼠，浸入75%的乙醇中浸泡1-2min。

5.1.2 在超净台中用大头针固定，小心剪开小鼠的腹部外皮，再剪开小鼠的腹腔，用镊子取出小鼠脾脏。

注意无菌操作。

5.1.3 在60mm培养皿中放入4-5mL淋巴细胞分离液，用镊子把尼龙网固定在皿上。

然后用注射器活塞轻轻研磨小鼠脾脏，使得分散的单细胞透过尼龙网进入淋巴细胞分离液中。

5.1.4 把悬有脾脏细胞的分离液转移到离心管中，然后覆盖上大约1mL的1640培养基。

5.1.5 800g离心30min。

离心结束后淋巴细胞会漂浮上来，在1640覆盖层下面聚集。

5.1.6 吸出淋巴细胞层，加入10mL 1640培养基洗涤一次，250g离心10min。

倾倒上清液，加入3-5mL含5%FBS的1640培养基重悬，细胞计数。

5.2接种细胞：用含10％FBS1640培养基配成单个细胞悬液，以每孔（1~8）×105个细胞/孔接种到96孔板，每孔体积200μL；
5.3培养细胞：同一般培养条件，培养1～2d（可根据试验目的和要求决定培养时间）；
70。

细胞生物学教案(完整版)第一章：细胞的概念与功能1.1 细胞的概念解释细胞是生命的基本单位强调细胞是所有生物的结构和功能的基础1.2 细胞的功能描述细胞的代谢、生长、分裂和遗传等功能探讨细胞如何维持生命活动第二章：细胞膜与细胞器2.1 细胞膜介绍细胞膜的结构和成分解释细胞膜的功能，如物质交换、信号传递等2.2 细胞器介绍细胞器的种类和功能，如线粒体、内质网、高尔基体等探讨细胞器在细胞内的相互作用和协调第三章：细胞增殖与细胞周期3.1 细胞增殖解释细胞增殖的方式，如无丝分裂、有丝分裂和减数分裂等探讨细胞增殖在生物体生长和发育中的作用3.2 细胞周期介绍细胞周期的概念和阶段，如G1期、S期、G2期和M期等解释细胞周期调控机制，如CDKs、Cycs等第四章：细胞分化与细胞凋亡4.1 细胞分化解释细胞分化的概念和机制探讨细胞分化在多细胞生物发育中的作用4.2 细胞凋亡介绍细胞凋亡的概念和机制强调细胞凋亡在生物体正常发育和免疫应答中的重要性第五章：细胞遗传与DNA复制5.1 细胞遗传解释染色体、DNA和基因的概念探讨细胞遗传信息的传递和表达5.2 DNA复制介绍DNA复制的过程和机制强调DNA复制的准确性和调控机制第六章：细胞代谢与能量转换6.1 细胞代谢介绍细胞代谢的概念和类型，包括糖类、脂质、蛋白质代谢等解释代谢途径如糖解作用、三羧酸循环和电子传递链等6.2 能量转换探讨细胞内能量转换的过程，包括ATP的合成与水解描述线粒体和叶绿体在能量转换中的作用第七章：细胞信号传递与细胞骨架7.1 细胞信号传递解释细胞信号传递的基本原理和途径，包括受体、第二信使和基因表达调控等探讨细胞信号传递在细胞生长、分化和凋亡中的作用7.2 细胞骨架介绍细胞骨架的概念和组成，包括微管、中间纤维和微丝等解释细胞骨架在细胞形态维持、运动和分裂中的功能第八章：细胞周期调控与癌症8.1 细胞周期调控探讨细胞周期调控机制，包括CDKs、Cycs、cyclins 和tumor suppressor genes 等解释细胞周期调控在正常细胞分裂和防止癌症发生中的重要性8.2 癌症介绍癌症的概念、类型和发生机制强调癌症的严重性和当前的癌症治疗方法第九章：干细胞与组织工程9.1 干细胞解释干细胞的概念、类型和特点，包括胚胎干细胞、成体干细胞和诱导多能干细胞等探讨干细胞在组织修复、疾病治疗和再生医学中的潜力9.2 组织工程介绍组织工程的概念、原理和应用强调组织工程在修复损伤组织和器官、定制医学中的重要性第十章：细胞生物学研究技术10.1 显微技术描述显微镜的原理和类型，如光学显微镜、电子显微镜和荧光显微镜等解释显微技术在细胞生物学研究中的应用10.2 分子生物学技术介绍分子生物学技术，如PCR、基因克隆、基因编辑等强调分子生物学技术在细胞生物学研究和疾病诊断中的重要性重点和难点解析一、细胞的概念与功能：理解细胞作为生命基本单位的重要性，以及细胞的功能多样性。

细胞的增殖细胞的增殖是生物体内细胞数量增加的过程。

细胞增殖是细胞生命周期的一个重要阶段，对于生物的生长、发育以及组织修复具有至关重要的作用。

在生命体内，细胞增殖的调控是由多种生物学过程紧密协调进行的。

细胞增殖的基本过程细胞增殖包含有丝分裂和无丝分裂两种方式。

有丝分裂是指细胞在分裂过程中有明显的纺锤体形成，包括有丝分裂期（前期、中期、后期）和有丝分裂后期。

有丝分裂的过程中，细胞核准备、染色体复制、染色体对分离、细胞质分裂等步骤依次进行，最终形成两个功能和遗传物质相同的子细胞。

而无丝分裂是指细胞在分裂时没有明显的纺锤体形成，包括裂解期和质体分裂期两个阶段。

在无丝分裂过程中，细胞的质体逐渐收缩，最终形成两个独立的细胞。

细胞增殖的调控机制细胞增殖的调控受到复杂的信号通路和调控因子影响。

在正常生理状态下，细胞增殖受到生长因子、细胞周期调控蛋白、细胞凋亡调节等多种因素的调节。

当细胞接收到适当的生长因子刺激时，会启动细胞周期并促使细胞增殖。

而在组织修复或生长发育过程中，细胞增殖也需要受到精细的调控，以确保细胞数量和功能的平衡。

细胞增殖与疾病细胞增殖异常会导致一系列疾病的发生。

比如，癌症的发生往往是由于细胞增殖受到异常调控，导致细胞无限制地增殖和扩散。

因此，研究细胞增殖的调控机制对于理解疾病的发生和防治具有重要意义。

同时，许多药物的作用机制也是通过影响细胞增殖来发挥治疗作用。

总结细胞的增殖是生命体内一项重要的生物学过程，对于生物的生长、发育和组织修复具有重要作用。

了解细胞增殖的基本过程、调控机制以及与疾病的关系，有助于深入理解生命的奥秘，并为医学研究和临床治疗提供重要的参考。

以上是关于细胞的增殖的相关介绍，希望对您有所帮助。