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酶联免疫吸附测定实验报告酶联免疫吸附测定实验报告酶联免疫吸附测定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析生物样本中特定分子的存在。
本实验旨在通过ELISA技术，对特定抗原在样本中的含量进行测定，并了解其原理及应用。
一、实验原理ELISA技术是一种基于免疫反应的实验方法，其原理主要包括固相吸附、特异性结合、酶标记和显色反应。
首先，在微孔板中固定特异性抗体，形成固相吸附。
然后，加入待测样本，样本中的目标抗原与固相抗体结合。
接着，加入酶标记的二抗与目标抗原结合，形成特异性结合。
最后，通过添加显色底物，酶催化反应产生可见的颜色变化，从而定量分析目标抗原的含量。
二、实验步骤1. 准备样本和试剂：收集待测样本，如血清、尿液或细胞培养上清液，并准备好ELISA试剂盒中的各种试剂。
2. 板洗涤：将微孔板放入洗板机中，加入洗板缓冲液，进行洗涤步骤，以去除未结合的物质。
3. 固相吸附：将特异性抗体加入微孔板孔中，孵育一段时间，使其与固相吸附。
4. 样本孵育：将待测样本加入各孔中，与固相抗体结合，在恒温条件下孵育。
5. 二抗结合：加入酶标记的二抗，与目标抗原结合形成特异性结合。
6. 洗涤：再次进行洗板步骤，去除未结合的物质。
7. 底物反应：加入显色底物，酶催化反应产生可见的颜色变化。
8. 反应终止：加入终止液，停止酶催化反应。
9. 测定吸光度：使用酶标仪测定各孔的吸光度值。
10. 数据分析：根据吸光度值，绘制标准曲线，通过比较待测样本的吸光度值，计算出目标抗原的浓度。
三、实验结果通过ELISA实验，我们成功测定了待测样本中目标抗原的含量。
根据标准曲线，我们计算出了各样本中目标抗原的浓度。
这些结果将有助于我们了解样本中特定分子的水平，从而进一步研究其生物学功能和相关疾病的发生机制。
四、实验应用ELISA技术具有广泛的应用领域，包括生物医学研究、临床诊断、药物开发等。
酶联免疫吸附实验报告导言酶联免疫吸附实验是一种用于检测抗原或抗体的常用方法，其原理是利用酶的特异性活性，使其与试验物发生特异性反应，并通过测定酶反应产生的信号来确定目标物的存在与否。
本实验报告将介绍使用酶联免疫吸附实验来检测抗原的方法和结果。
实验材料与方法材料：实验所需材料包括试剂盒、检测板、洗涤缓冲液、标准物质、底物试剂等。
方法：首先准备样本和标准溶液，按照试剂盒说明书的指导加入相应试剂，进行酶联免疫吸附实验。
实验过程中需要进行洗板步骤、底物反应、反应终止等操作。
实验结果与分析通过此次实验，我们成功检测到了目标抗原。
比如，我们可以观察到在某个特定波长下，底物反应产生了显著的吸光度值。
这是因为被检测的抗原与特异性抗体反应，在酶反应的作用下，产生了底物反应所需的物质，从而使底物反应溶液的颜色发生变化。
结论通过本次实验我们证实了酶联免疫吸附实验可以用于检测抗原。
这种方法具有灵敏度高、准确度高的特点，广泛用于医学、生物学以及生化领域的研究中。
酶联免疫吸附实验可以快速、简单地检测大量样本，并得到可靠的结果。
展望虽然酶联免疫吸附实验在目前的医学研究中被广泛使用，但仍有一些改进的空间。
例如，我们可以进一步优化实验条件，提高实验的灵敏度和准确度。
此外，我们也可以将酶联免疫吸附实验与其他技术手段相结合，进一步扩展其应用领域。
结语本实验报告介绍了酶联免疫吸附实验的方法、结果和意义。
这是一种常用的检测方法，可用于确定抗原的存在和浓度。
酶联免疫吸附实验不仅在医学研究中起着重要作用，也在生物学和生物化学研究中发挥着重要作用。
通过不断改进和创新，酶联免疫吸附实验有望在未来更广泛地应用于科学研究和临床实践中。
ELISA实验报告（酶联免疫吸附测定）结果ELISA实验报告-森贝伽⽣物实验技术中⼼前⾔酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表⾯，并保持其免疫活性。
②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，⼜保留酶的活性。
在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表⾯的抗原或抗体起反应。
⽤洗涤的⽅法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成⼀定的⽐例。
加⼊酶反应的底物后，底物被酶催化变为有⾊产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜⾊反应的深浅刊物定性或定量分析。
ELISA可⽤于测定抗原，也可⽤于测定抗体。
该法适于测定细胞培养上清、⾎清、⾎浆及组织液中的样本，⼲扰⼩可以测到每毫升纳克⽔平的细胞因⼦（或受体）的⽔平。
材料与⽅法1材料1.1主要试剂ELISA检测试剂盒(From：森贝伽⽣物/SenBeiJia)1.2主要仪器及耗材酶标仪：芬兰（Labsystems Multiskan MS）公司产品洗板机：芬兰（Thermo Labsystems）公司产品离⼼机：微量⾼速离⼼机（国产）移液器：吉尔森P型移液器(Pipetman)产品培养箱：隔⽔式恒温培养箱（国产）产品其他所需耗材均为国产。
2⽅法2.1实验过程（1）标准品的稀释与加样：标准品按照说明书稀释好五个梯度，各个梯度每孔加样量都为50µL；（2）加样：分别设空⽩孔、待测样品孔。
在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40µL，然后再加待测样品10µL。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀；（3）温育：⽤封板膜封板后置37℃温育30min；（4）配液洗涤：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液⽤蒸馏⽔30（48T的20倍）倍稀释后备⽤；⼩⼼揭掉封板膜，弃去液体，甩⼲，每孔加满洗涤液，静置30sec 后弃去，如此重复5次，拍⼲；（5）加酶：每孔加⼊酶标试剂50µL，空⽩孔除外；（6）温育：⽤封板膜封板后置37℃温育30min；（7）洗涤：⼩⼼揭掉封板膜，弃去液体，甩⼲，每孔加满洗涤液，静置30sec 后弃去，如此重复5次，拍⼲；（8）显⾊：每孔先加⼊显⾊剂A50µL，再加⼊显⾊剂B50µL，轻轻震荡混匀，37℃避光显⾊15min；（9）终⽌：每孔加终⽌液50µL，终⽌反应；（10）测定：以空⽩空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
酶联免疫吸附试验实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测目标蛋白或抗原的存在与浓度，以及对特定抗体的识别和结合情况。
通过本实验，我们可以了解到酶联免疫吸附试验的原理和操作步骤，以及在生物医学研究和临床诊断中的应用。
二、实验原理。
酶联免疫吸附试验是一种利用酶和抗体的特异性结合来检测抗原或抗体的方法。
其原理是将待检测的抗原或抗体吸附在微孔板表面，然后加入特异性抗体，并通过酶标记的二抗或底物来检测特异性结合的信号。
当待测物与特异性抗体结合后，通过底物的酶反应产生可定量的颜色反应，从而测定待测物的浓度。
三、实验材料和方法。
1. 实验材料，微孔板、待测抗原或抗体、特异性抗体、酶标记的二抗、底物溶液等。
2. 实验步骤，将待测抗原或抗体加入微孔板孔中，加入特异性抗体，洗涤孔板，加入酶标记的二抗，再次洗涤孔板，加入底物溶液，停止反应，测定吸光度。
四、实验结果。
通过本次实验，我们成功检测出待测物的存在与浓度，并观察到特异性抗体与待测物的结合情况。
根据实验结果，我们可以得出待测物的浓度，并进一步分析其在生物学过程中的作用和意义。
五、实验结论。
酶联免疫吸附试验是一种高度敏感和特异性的实验方法，广泛应用于生物医学研究和临床诊断领域。
通过本次实验，我们深入了解了酶联免疫吸附试验的原理和操作步骤，掌握了实验技术和数据分析方法，为今后的科研工作和临床诊断提供了重要的参考和支持。
六、实验展望。
酶联免疫吸附试验作为一种重要的生物学实验方法，具有广阔的应用前景。
今后，我们将进一步深入研究酶联免疫吸附试验的原理和技术，开展更多的实验和应用，为生物医学研究和临床诊断提供更多的支持和帮助。
七、参考文献。
1. Smith, J. et al. (2010). Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Methods Mol Biol, 588, 89-94.2. Green, N. M. (2015). Avidin and streptavidin. Methods Enzymol, 184, 51-67.以上就是本次酶联免疫吸附试验的实验报告，谢谢阅读。
酶联免疫吸附实验报告酶联免疫吸附实验报告酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）是一种常用的生物化学技术，用于检测和定量分析特定抗原或抗体的存在。
该实验结合了免疫学和酶学的原理，通过酶的催化作用来实现对目标物的检测。
本报告将介绍酶联免疫吸附实验的基本原理、操作步骤以及结果分析。
一、实验原理酶联免疫吸附实验的原理基于免疫学的特异性识别和酶学的催化作用。
实验中，首先将待测物（抗原或抗体）与特异性的抗体或抗原结合，形成抗原-抗体复合物。
然后，将该复合物与与酶标记的抗体或抗原结合，形成二抗或二抗原复合物。
最后，通过添加底物，利用酶的催化作用产生可测量的信号，从而确定待测物的存在或浓度。
二、实验步骤1. 准备样品和试剂：收集待测物样品，并准备所需的试剂，如抗体、底物等。
2. 预处理样品：根据待测物的性质，进行必要的样品预处理，如稀释、去除干扰物等。
3. 涂布固相支持物：将特异性抗体或抗原溶液均匀涂布在固相支持物（如酶标板）上，使其吸附。
4. 孵育：将待测物样品加入酶标板中，与固相支持物上的抗体或抗原结合，形成复合物。
然后加入酶标记的抗体或抗原，形成二抗或二抗原复合物。
孵育一段时间，以便复合物的形成。
5. 洗涤：将酶标板反复洗涤，去除未结合的物质。
6. 底物反应：加入适当的底物，使底物与酶发生反应，产生可测量的信号。
底物的选择与酶的选择有关，常用的底物有TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）等。
7. 反应停止：通过添加反应停止剂，停止底物的反应，并使产生的信号停止发展。
8. 读取结果：使用酶标仪或其他适当的仪器，测量底物反应产生的信号的强度。
根据标准曲线或对照样品，确定待测物的浓度或存在与否。
三、结果分析根据实验结果，可以定量测定待测物的浓度或判断其存在与否。
一般来说，酶标仪测得的信号强度与待测物的浓度成正比，可以通过标准曲线来确定待测物的浓度。
酶联免疫吸附试验结果酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA），是一种广泛应用于生命科学中的试验技术，主要用于检测生物体内特定蛋白质和抗体的存在和数量。
本文将根据不同类别，介绍ELISA试验结果的分析。
一、直接ELISA试验结果分析直接ELISA试验是指将已知抗原沉淀于微孔板上，再加入待检测物，之后加入特定抗体进行检测的试验方法。
当待检测物含有对应的抗原，则抗原和特定抗体结合，形成固定的复合物。
此时，待检测物在微孔板中残留，被进一步检测。
如果待检测物中含有特定抗体，则会与预先添加的抗原结合。
根据特定抗体标记的物质进行检测。
直接ELISA试验结果为同轴柱，并且呈现梯度性图谱。
二、间接ELISA试验结果分析间接ELISA试验是指使用抗原沉淀于微孔板上，加入待检测物，并再次加入特定抗体进行检测的试验方法。
在该试验中，患者血清或其他样品中含有抗体，抗体与固定的抗原结合，形成复合物。
之后添加特定抗体，间接ELISA试验的结果为同轴柱，并且呈现梯度性的图谱。
三、竞争ELISA试验结果分析竞争ELISA试验是对样品中的特定物质进行检测的试验方法。
在试管中，抗体与已知抗原结合后，特定抗体标记的物质被加入竞争ELISA反应体系中。
如果合适的特定抗体分子与抗原分子竞争结合，则可抑制特定抗体分子与标记物结合，标记物的含量随之减少。
竞争ELISA试验结果为逆向梯度性的图谱，表示抑制率和特定物质的含量呈反比。
四、间接竞争ELISA试验结果分析间接竞争ELISA试验是对患者中特定物质的抗体进行检测的试验方法。
在该试验中，已知抗原沉淀于微孔板上，加入患者样品，之后加入特定抗体。
如果患者样品中含有特定抗体，将与特定抗体竞争结合，导致标记物与它竞争结合量的减少。
间接竞争ELISA试验结果为逆向梯度性的图谱，表示抑制率和特定物质的含量呈反比。
总之，酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种基于特异性分子识别原理的分析方法，具有操作简单、稳定可靠、敏感度高等特点。
酶联免疫吸附实验实验报告一、实验目的酶联免疫吸附实验（ELISA）是一种常用的免疫学检测技术，本实验旨在通过实际操作，掌握 ELISA 的基本原理、操作步骤和结果分析方法，检测样本中特定抗原或抗体的含量。
二、实验原理ELISA 的基本原理是将抗原或抗体固定在固相载体（如聚苯乙烯微量反应板）表面，然后加入待测样品，使其与固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。
接着，加入酶标记的第二抗体（或抗原），形成抗原抗体酶标抗体复合物。
最后，加入底物，通过酶催化底物显色，根据显色的程度来定量或定性分析待测样品中抗原或抗体的含量。
三、实验材料与设备1、材料待测样品：＿____标准品：＿____包被抗体：＿____酶标抗体：＿____底物溶液：＿____洗涤液：＿____终止液：＿____2、设备酶标仪微量移液器恒温培养箱聚苯乙烯微量反应板四、实验步骤1、包被将包被抗体用包被缓冲液稀释至适当浓度，加入聚苯乙烯微量反应板的孔中，每孔100 μL，4℃过夜。
2、封闭次日，弃去孔内液体，用洗涤液洗涤 3 次，每次 3 分钟。
然后每孔加入200 μL 封闭液，37℃孵育 1 小时。
3、加样弃去封闭液，洗涤 3 次。
将待测样品和标准品用稀释液稀释至适当浓度，分别加入孔中，每孔100 μL，37℃孵育 1 小时。
4、加酶标抗体弃去孔内液体，洗涤 3 次。
每孔加入100 μL 酶标抗体，37℃孵育 1 小时。
5、显色弃去孔内液体，洗涤 3 次。
每孔加入100 μL 底物溶液，37℃避光孵育 15 30 分钟，直至显色明显。
6、终止反应每孔加入50 μL 终止液，终止反应。
7、测定吸光度使用酶标仪在 450 nm 波长处测定各孔的吸光度值。
五、实验结果1、标准曲线的绘制以标准品的浓度为横坐标，对应的吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、待测样品浓度的计算根据待测样品的吸光度值，在标准曲线上查出其对应的浓度。
六、结果分析1、准确性分析将测定结果与已知标准值进行比较，计算相对误差，评估实验的准确性。
酶联免疫吸附试验实验报告酶联免疫吸附试验实验报告酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）是一种常用的生物化学实验技术，用于检测和定量分析抗原或抗体的存在与浓度。
本实验旨在通过ELISA技术，检测和定量分析一种特定抗原在不同样本中的浓度变化。
实验材料和方法：1. 样本制备：收集不同来源的样本，如血清、尿液等，并进行离心分离获得上清液。
2. 酶标板涂覆：将待测抗原溶液加入酶标板孔中，保持一定的温度和时间，使抗原均匀地附着在酶标板表面。
3. 阻断：加入阻断液，封闭未被抗原占据的酶标板孔，避免非特异性结合。
4. 抗体结合：加入特异性抗体，与抗原结合形成抗原-抗体复合物。
5. 酶标记抗体结合：加入酶标记抗体，与抗原-抗体复合物结合，形成二抗夹心复合物。
6. 显色反应：加入底物，使酶标记抗体催化底物发生颜色变化。
7. 反应停止：加入停止液，终止显色反应。
8. 测定吸光度：使用酶标仪测定酶标板孔中的吸光度。
实验结果：根据测定吸光度值，我们可以得到不同样本中抗原的浓度变化。
通过比较不同样本的吸光度值，可以了解抗原在不同条件下的表达情况以及不同样本中抗原的相对浓度。
实验讨论：ELISA技术在生物医学领域具有广泛的应用，尤其在疾病诊断和药物研发方面起到了重要的作用。
通过ELISA技术，可以检测和定量分析目标抗原的存在与浓度，从而判断疾病的发生与发展，为临床诊断提供依据。
在本次实验中，我们选择了特定抗原作为目标，通过ELISA技术对其进行检测和定量分析。
实验结果显示，不同样本中抗原的浓度存在差异，这可能与样本来源、处理方法等因素有关。
通过进一步的研究和分析，可以进一步探究这些差异的原因，并为临床诊断和治疗提供更准确的依据。
此外，ELISA技术还可以用于药物研发过程中的药物筛选和药效评价。
通过检测药物对特定抗原的影响，可以评估药物的疗效和安全性，为新药的研发提供重要的参考依据。
ELISA实验报告实验目的：本实验旨在通过ELISA（酶联免疫吸附试验）技术来检测细胞培养上清液中的蛋白质含量，从而了解该细胞株的蛋白质表达水平，进一步研究相关的细胞分子机制。
实验原理：酶联免疫吸附试验是一种常用的免疫学实验方法，通过特异性抗体与待测物结合来实现对特定蛋白质的检测。
该实验主要分为三个步骤：包被抗原、特异性抗体结合和酶底物显色。
实验材料：1.待测细胞上清液2.包被抗原3.特异性抗体4.酶标记的二抗5.酶底物6.缓冲液7.清洗缓冲液8.吸光度测定仪实验步骤：1.包被抗原的处理：将抗原溶液加入微孔板孔中，使其均匀附着在孔壁上。
然后将孔中的液体弃去，用清洗缓冲液进行孔的清洗。
2.探针的结合：将待测样品加入已经包被抗原的孔中，使其与抗原结合。
然后将孔中的液体弃去，用清洗缓冲液进行孔的清洗。
3.酶标记的二抗结合：将酶标记的二抗加入已经含有特异性抗体的孔中，使其与特异性抗体结合。
然后将孔中的液体弃去，用清洗缓冲液进行孔的清洗。
4.酶底物加入：将酶底物加入到孔中，使其在酶的作用下发生显色反应。
5.吸光度测定：使用吸光度测定仪读取吸光度值，根据吸光度值可以推断待测样品中蛋白质的含量。
实验结果：经过ELISA实验，我们得到了待测细胞上清液中蛋白质的含量。
根据吸光度值和标准曲线的对照，我们可以计算出待测样品中蛋白质的浓度。
实验结论：实验分析：本次实验利用ELISA技术成功检测了待测细胞上清液中的蛋白质含量。
该方法具有高灵敏度、高特异性、操作简单等优点，可以在生物医学、生物工程等领域广泛应用。
但需要注意的是，ELISA实验在操作过程中需要严格控制实验条件，避免交叉污染和误差的产生。
实验改进：为了进一步提高实验的准确性和可靠性，可以进行以下改进：1.增加重复次数，提高数据的可靠性和稳定性；2.使用更加准确的仪器和试剂；3.对实验流程进行优化，减少操作的差异性。
总结：本次实验通过ELISA技术成功检测了待测细胞上清液中的蛋白质含量，得出了蛋白质表达水平较高的结论。
elisa酶联免疫吸附实验报告一．实验目的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。
借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。
待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。
二．实验原理用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。
常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。
由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化作用使颜色加深，无法准确地定量。
辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。
酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。
氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以 mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。
高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4。
用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。
ELISA的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
酶联免疫吸附测定蛋白浓度
作者姓名
（北京科技大学化学与生物工程学院生物科学与技术系，北京，100083）
[摘要]酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay，ElISA）是目前常用的免疫学检测方法之一，它不仅可以检测抗体，还可以检测抗原。
具有敏感性高、特异性强、方法简便、容易观察结果、便于大规模检测的特点，应用范围和程度可与放射免疫分析法相比拟。
本实验研究酶联免疫吸附的测量准确度及线性，实验过程中应注意的问题及ELISA技术的应用实例及研究进展。
[关键词] 酶联免疫吸附；HRP；分光光度法
酶联免疫吸附测定指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。
基本原理是首先使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。
然后使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
最后利用酶促反应产生的荧光产物测定吸光度值。
利用洗涤的方法，固相载体上形成的抗原抗体复合物与初始加入的包被物浓度或者抗原抗体特异性有关，故最后结合在固相载体上的酶量与样品浓度成一定的比例。
故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。
由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。
酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/mL。
常见的ELISA方法有直接法，间接法，双抗夹心法，竞争法等，分别用于不同应用情形及检测需要。
80年代后，随着生物素-亲合素系统（BAS）作用被发现，这一亲和作用被结合应用到ELISA技术上，大大提高了后者反应的灵敏性与专一性。
同时，ELISA技术的研究进展还包括对灵敏度的提高。
碱性礴酸酶(AP)一双底物系统并不直接催化有色物质生成，而是使NADP 脱磷酸，生成NAD，NAD进入由醇脱氢酶和黄递酶催化的氧化还原循环，导致深色物质生成。
辣根过氧化物酶(HRP)一增强发光显示系统也在原先的方法上有所改进，用纳米金作为底物可使方法灵敏度高上百倍。
ELISA技术在医学中有广泛的应用，如肿瘤学，细菌学，病毒学的检测，在机理研究方面，免疫病理学，内分泌学，血液学的研究中都会用到ELISA技术检测特定分子的存在及含量差别。
1 材料和方法
1.1 材料
鼠抗氯霉素（CAP）单克隆抗体。
氯霉素-牛血清交联蛋白。
牛奶样品。
HRP-羊抗鼠Ig。
包被液：0.05mol/L pH9.6 碳酸缓冲液（Na2CO3 0.159 克，NaHCO3 0.294克，蒸馏水稀释至100 mL）。
洗涤及稀释液：0.01mol/L pH7.4 PBST 溶液（NaCl8g，KH2PO40.2g，Na2HPO4·12H2O 2.9g，1mL吐温20，0.5mL。
蒸馏水加至1000mL）。
TMB：A 液（TMB20mg，DMSO 10mL，超纯水90mL），B液（一水合柠檬酸2.1g，十二水合磷酸氢二钠7.11g，0.75%过氧化氢尿素0.64mL，加超纯水至100mL），用时将A、B液按1：1比例混合。
终止液：2mol/LH2SO4。
1.2 方法
（1）包被抗原：
用CB包被液将抗原作稀释，使终浓度为0.5ug/ml，每孔加100 微升，37℃孵育两小时。
（2）洗涤：
倒尽板孔中液体，加200微升洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽。
（3）封闭：
用稀释液将BSA 稀释成浓度为100ug/ml溶液，每孔加150 微升，37℃放置1小时。
（4）洗涤：
同步骤2。
倒尽板孔中液体，加200微升洗涤液，静放三分钟，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽。
（5）加样：
如下图加样图所示，用稀释液将氯霉素标准品稀释成1.9 ng/mL 至159 ng/mL 溶液，每孔50 微升。
同时作稀释液对照。
同样依照加样图加入被测样，每孔50微升。
图一加样图
（6）加入一抗：
向各孔中加入50 微升抗体，37℃放置 1 小时。
（7）洗涤同2。
（8）加二抗（用稀释液按1:10000 稀释）, 每孔100 微升, 放置37℃1 小时。
（9）洗涤同2。
（10）加底物：
底物溶液加100 微升，室温暗处10--15 分钟。
（11）加终止液：
每孔加入50微升2mol/L H2SO4。
（12）观察结果：
用酶联免疫检测仪记录450nm吸光度读数。
2 结论
450nm下吸光度测量结果如下：（对应加样图顺序）
图二吸光度测量结果
将测得的吸光度值按照公式换算成结合率B/B0(%)：
B/B0(%)＝(OD-Blank)/(OD0- Blank)×100%
其中，OD 为给定样品的吸光度值；OD0为标准蛋白为零时的吸光度值；Blank为空白对照的吸光度值。
以抑制结合率B/B0(%)为纵坐标，浓度的对数值Log10 (CAP)为横坐标作标准曲线。
表一数据处理表
根据第一二列所得吸光度数据的平均值作为标准曲线所用吸光度值，绘制标准曲
线如下：
图三标准曲线
鉴于浓度5.9ng/mL组（即标准曲线第二数据点）远偏离正常水平，删除该数据点后得到新的标准曲线如下：
图四清除可疑点后标准曲线
公式给出如下：
y = -22.061x + 93.594，R² = 0.9308。
取平均值，得到待测样品S1及S2的吸光度值分别为0.4377及0.3370，B/B0值分别为：0.7498与0.5511。
代入标准曲线公式计算得二者的氯霉素浓度对应值为6.982ng/mL与55.498ng/mL。
3 讨论
3.1实验结果中第二数据点的偏差可能是由操作过程失误导致的，比如可能用手触碰96孔板底面透光面，或在倒去板内液体时不慎将液体甩入其他孔。
3.2两待测样品吸光度均在标准曲线标准品吸光度值范围内，可以根据标准曲线推测样品氯霉素浓度值。
在标准曲线中，若删除数据点5，即最后一个数据点（159,0.26），则标准曲线R2值可达到0.9813，因此我们得出标准曲线定量最精确的区间应当在吸光度0.372~0.5645范围内。
3.3ELISA作为一种简便而准确的定量或半定量检测手段，可以在很多场合应用于对目标分子理化性质（主要是抗原结合性）的测量。
但是，同时ELISA也有一些缺点。
在实验中，最适条件的摸索往往需要花费大量时间，同时检测结果也可能出现假阳性或者假阴性。
只有熟练掌握这种方法技能后其优势才能被体现。
参考文献：
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