柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度

HPLC法测定丙戊酸的血药浓度目的：建立快速柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸（VPA）血药浓度的方法。

方法：选择ω-溴苯乙酮为衍生试剂，环己烷羧酸为内标，Hypersil ODS-C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）为分析柱；流动相为甲醇-水（75∶25，V/V)，检测波长为248 nm，流速为1.0 ml/min。

血样经酸化后以二氯甲烷提取。

结果：内标环己烷羧酸和VPA的保留时间分别为8.0 min和12.8 min，线性范围为25～200 μg/ml，平均回收率为100.61%，日内、日间RSD均小于4.19%。

结论：本法快速、简便、准确，适合临床常规监测需要。

[Abstract] Objective: To establish a rapid pre-column derivatization-high-performance liquid chromatography determination of valproic acid (VPA) plasma method. Methods: ω-bromoacetophenone as a derivative reagent, cyclohexane carboxylic acid as the internal standard, Hypersil ODS-C18 column (250 mm×4.6 mm, 5μm) for the analytical column; mobile phase was methanol-water(75:25, V/V), detection wave length was 248 nm, flow rate was 1.0 ml/min. Blood extracted by dichloromethane after acidification. Results: The internal standard cyclohexane carboxylic acid and VPA respectively, the retention time of 8.0 min and 12.8 min, the linear range of 25-200 μg/ml, the average recovery was 100.61%, days, day RSD were less than 4.19%. Conclusion: The method is rapid, simple, accurate and suitable for routine monitoring of clinical need.[Key words] Pre-column derivatization; High-performance liquid chromatography; Sodium valproate; Blood drug concentration丙戊酸作為癫痫小发作、大发作和肌阵挛的首选药物之一，一直是临床医生常用的抗癫痫药物。

专利名称：一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法
专利类型：发明专利
发明人：代伟,李兰兰,虎亚光,杨涛
申请号：CN202010320591.6
申请日：20200422
公开号：CN111337601A
公开日：
20200626
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法，是将催化剂、丙戊酸衍生化试剂置于密闭玻璃管中，采用一锅煮合成法制备得到的衍生物。

本发明提供的一种用于高效液相色谱仪检测丙戊酸血药浓度的衍生物的制备方法，利用超声化学原理，加速分子运动，促进衍生化反应，提高反应效率，缩短反应时间；采用“一锅煮”的方法，简化衍生化反应后处理步骤，无需蒸干或氮气吹干再加流动相溶解进样，可减少因挥发或氮气吹干导致的衍生化产物的损失；而采用衍生化结束后冰浴冷却吸取下层溶液直接进样，后处理方法简便，同时减少误差，为高效液相色谱法测定丙戊酸血药浓度提供一种高效、快捷、方便的衍生化方法。

申请人：代伟
地址：730050 甘肃省兰州市七里河区七里河北街89号(甘肃省妇幼保健院)
国籍：CN
代理机构：兰州锦知源专利代理事务所(普通合伙)
代理人：勾昌羽
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高效液相色谱法测定丙戊酸血药浓度陈坚方维军吴芳张灯玲丁宗政!上海市松江区中心医院药剂科上海"#$%##&’摘要(目的)建立测定血浆中丙戊酸血药浓度的高效液相色谱法*方法)血浆用正己烷提取+经,-溴苯乙酮衍生后浓集进样+采用.//01234$5柱!$6#7789:%77+6;7&+以甲醇<水!5#<"#&为流动相+环己烷羧酸为内标物+在波长"95=7处测定*结果)丙戊酸的线性范围为$$:>$?$5$:##;@A7/+平均回收率大于B C D+日内和日间E F G H6D*结论)本法快速I简便I 准确+适用于丙戊酸血药浓度测定*’关键词(高效液相色谱法J丙戊酸J血药浓度’中图分类号(E B C$K:%J E B$C’文献标识码(.’文章编号($##C-99#%!"###&#6-#"B%-#>L M N M O P Q R S N Q T RT U V S W X O T Q Y S Y Q Z Q R[M O\P]^_Q‘_X M O U T O P S R Y M W Q a\Q Z Y_O T P S N T‘b O S X_^431=c d e=+f e=@g1d h i=+gif e=@+j k l m!n j o l p k q j r k s tu v l p q l w x+y v l r z v l{y s r z|{l r z}j r k j p~s!o{-k l m+y v l r z v l{"#$%##&’"#$%&"’%("())*+,101-7d=1.e//-+d2e2d,d=01-i7123d@3/1-3+-7e=21/d4i d,23-+7e0+@-e/32 !5674&8)9%:;L$)422/+31<e=12e-1+<2/d2e2d,=e001/1201,e0e=d=01-=e/00e=,e-,8.>?,10120+-!"95=7&e=,4$52+/i7==e0i01,8F1-i70e7//1!#:$7/&=e01<0-e201,=d03"7/e210d2=-31<e=18?e/-/-+d2e2d,d=+-@e=d2/e21-=e0,1-d.1,12e,,d=@d=0+,-1-+7+e210+/31=+=18*31+-@e=d2/e21-=e01.e/+--e01,0+,-2=100i=,1-@"00-1e78&9$A B%$)*31/d=1e-d02+3.e//-+d2e2d,=e0$$:>$C$5$:#;@A7/8*31 -1/e0d.100e=,e-,,1.d e0d+=!E F G&+3d=01--,e2e=,d=0-e-,e23+-.e//-+d2e2d,=e0/10003e=6D8*311<-0-e20d+=-12+.1-2=e07+-103e=B C D8*31,10120d+=/d7d00d=01-i7=1-1#:6;@A7/3+-.e//-+d2e2d,8’;D’B A$(;D)*317103+,d0e22i-e01e=,01=0d0d.1+0i d0e1/13+-031-e/1i0d2,-i@7+=d0+-d=@!*G E&e=, /3e-7e2+F d=10d200i,2+3.e//-+d2e2d,8’G9HI;&L$(3d@3/1-3+-7e=21/d4i d,23-+7e0+@-e/32J.e//-+d2e2d,J01-i72+=21=0-e0d+=丙戊酸!.e//-+d2e2d,&在临床上常用于抗癫治疗+由于药物的剂量和血药浓度间的个体差异很大*因此+在长期用药或增减药物剂量时对体内血药浓度进行监测显得十分必要*由于丙戊酸在紫外区无特征性吸收+故有关丙戊酸的血药浓度测定方法多为气相色谱法或酶免疫法*虽有高效液相色谱法的报道+但都各有不同J$+"K*本法采用,-溴苯乙酮将丙戊酸衍生化+生成苯甲酰甲基丙戊酸+在紫外条件下+用5674法测定血清中丙戊酸的浓度*此法快速I简便I准确+适用于丙戊酸临床血药浓度监测* L材料与方法L:L仪器M N@*E N@>""型高效液相色谱仪J M N@*E N@>>"型可变紫外检测器J M N@*E N@ G96#数据处理系统J5#-"离心沉淀器!上海手术器械厂&J5-B"微型混合器!西巴斯生物技术开发公司&J电热恒温水浴锅!上海医疗器械厂&*L:O药品和试剂丙戊酸标准品!湖南湘中制药有限公司+纯度B B:6D以上&J环己烷羧酸!f/i F e2317d1.P&J,-溴苯乙酮I正己烷I乙腈I硫酸I三乙胺I氨水均为分析纯+甲醇为色谱纯*L:Q色谱条件.//01234$5柱!$6#7789:%77+ 6;7&+流动相为甲醇<水!5#<"#&+检测波长"95 =7+流速$:#7/A7d=+灵敏度#:#6.>f F+进样量"#;/*内标为环己烷羧酸*在本实验条件+两种物质R%B"R中国临床药学杂志45S@T F T c N>E@.7N f47S@S4.765.E E.4U"###年第B卷第6期医生在线的色谱峰分离良好!血浆内源性物质峰无干扰"内标保留时间为#$%&’()!苯甲酰甲基丙戊酸保留时间为*$*+’(),图%-"[#-e __f _g G )g,O J H ’E-h G i )_g G )g,O J H ’E -j f g G k f U lU m n f,o-j p q,o-%%$&%%%$F +rD $&D +N $N &rF $*D F $*D +D $#D N N $F +rD $*%+*$#K rD $*N D $N D %N %$D D%*+$%#r&$&++N $+N r%$N *%$N *表Q 丙戊酸的日内和日间精密度‘7a Q s ?847t >7c7?>0?8@4t >7c<4@=0A 05?59:7;<450=7=0>,d[#-e __f _g G )g ,O J H ’E -u )n U m B _m l h G i )_g G )g,O J H ’E -j p q,o-u )n f U B _m l h G i )_g G )g,O J H ’E -j p q,o-%%$&%%D $N N rD $M %&$*M %D $K #rD $&*&$M *+D $#D +%$N D rF $F &F $M &+%$D +rF $M D F $K M %N %$D D%*N $N D rF $N #%$#+%*N $&+r#$F +F $+KQ $Q 专一性考虑到临床检测及药物动力学研究的干扰情况!选择了几种可能合用的药物进样!结果扑米酮L 地西泮L 苯巴比妥L 苯妥英钠和卡马西平在该色谱条件下均不出峰!可见以上药物对本法测定无干扰"Q $v 临床应用w 病例%x 男!#*l !癫病史F D m "目前用药情况T 丙戊酸钠H 丙戊酸缓释片D $#J !y _!卡马西平片D $%J !n (_"于清晨服药前抽血!在本色谱条件下!测得丙戊酸的谷药浓度为F %$F +O J H ’E!未见有卡马西平的干扰!同时在另一色谱条件下!测得卡马西平的谷药浓度为K $K M O J H ’E "分析两药合用!卡马西平可增加肝脏代谢!导致丙戊酸的谷药浓度低于治疗范围!但由于卡马西平的谷药浓度在治疗范围内!故患者的症状仍得以控制"w 病例F x 女!*l !%m 前诊断为癫"目前用药情况T 丙戊酸钠片D $&J !z (_"于清晨服药前抽血!在本色谱条件下!测得丙戊酸的谷药浓度为M +$*+O JH {*+F {中国临床药学杂志|}u W ~p ~!"#j W e I "h|I u W u |e I $}e j %e |&F D D D 年第+卷第#期医生在线!"#接近治疗范围#经与临床医师沟通#测定结果与临床症状基本相符$%讨论有文献&’(报道血清样品用正戊烷提取#但实际操作中发现#当加入正戊烷进行振荡提取时#极易发生乳化凝固现象#经过反复测试#改用正己烷提取后#克服了上述的缺点#提高了分离效果$在衍生化试剂使用方面#有文献&)#*(报道#用对溴代苯酰甲基澳和+,溴,对,硝基苯乙酮#而本法采用的-,溴苯乙酮则具有价廉.易得的特点#并且为衍生化反应提供了多种选择$国内有报道&’(的检测波长为+/*和+0/1!#但经紫外扫描后我们发现苯甲酰甲基丙戊酸的紫外最大吸收波长应为+*21!$国内外所报道&’#/(的采用荧光检测的高效液相色谱法#虽然检测灵敏度高#但需有荧光检测器#检测条件要求较高#一般医院难以开展$而本法所采用的条件简便.价廉#并且灵敏度.精密度.准确性及专一性均符合测试要求#适用于丙戊酸的临床治疗药物浓度监测$3参考文献4&)(郝润喜#闫彩萍#刘玉玺5高效液相色谱,柱前衍生法测定丙戊酸镁血药浓度5药物分析杂志#)667#)78’9:)7+&+(郁健#王广基#杜春波#等5高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠的含量5中国药科大学学报#)662#+68)9:*/&’(黄希顺#唐敦立5丙戊酸类药物的药理与临床5郑州:河南医科大学出版社#)667#)/*;)/0&*(胡纪原#谢晓梅#洪铭范5等5<=>=?法结合紫外吸收衍生法测定血清丙戊酸浓度5安徽医学#)667#)2809:00&/(<@A B#C@!D A@E#F1G D H C#I J K L5M H N H A!O1@N O G1G P Q@"R A G O S@S O T O1U D!@1V H A D!W X U O Y U,R H A P G A!@1S H"O Z D O T S U A G!@N G Y A@R U X [O N UP"D G A H V S H1S H T H N H S N O G15\O G"=U@A!\D""#)666#++869:67/8+]]],]/,)2收稿9;26+;中国临床药学杂志?<F<=B=>?@><d A?B?A F<F?d A=<d>Ed?C+]]]年第6卷第/期。

HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度柱前衍生化条件的优化胡雪飞;张永军;魏丽红;陈文【摘要】为了研究HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度衍生时的最佳衍生条件,探讨不同衍生条件对血药浓度的影响,本实验采用L9(34)正交实验设计,以衍生试剂浓度、催化剂浓度、衍生温度和衍生时间为考察因素,确定最佳衍生条件.结果显示,A2B2C3D1为最佳衍生条件,即衍生试剂为2.0 mg/mL,催化剂浓度为20%,衍生温度为60℃,衍生时间5 min为最佳衍生条件.不同的衍生条件对测定结果有显著影响(P<0.05),且衍生反应的主次因素为衍生试剂浓度>衍生温度>催化剂浓度>衍生时间.由此可知,优化后的衍生条件方法回收率高,节约时间和成本,简便可行.%In order to optimize the derivatization conditions when the HPLC method was adopted to monitoring the serum concentration of sodium valproate, and investigate the influence of different derivatization conditions on serum concentration of sodium valproate, L9 (34) orthogonal experimental design was used to determine the optimal derivatization conditions, the concentration of derivatization reagent, catalyst concentration, temperature and time was used as study factors. Results showed that A2B2C3D1 combination was the optimal derivation conditions, so the best derivation condition was that the concentration of derivatization reagent was 2.0 mg/mL, the catalyst concentration was 20%, the reaction temperature was 60℃, and time was 5 min. Different derivatization conditions had a significant effect on the determination results (P< 0.05). The primary and secondary factors for the derivatization reaction were derived reagent concentration > derived temperature >catalyst concentration >derivatization time. These findings in our research showed that the optimized derivation condition method had high recovery rate, saves time and cost, and simple and feasible.【期刊名称】《石河子大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2017(035)002【总页数】6页(P176-181)【关键词】衍生条件;丙戊酸钠;血药浓度;正交实验;优化【作者】胡雪飞;张永军;魏丽红;陈文【作者单位】石河子大学药学院,新疆石河子 832002;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子 832002;石河子大学医学院第一附属医院,新疆石河子 832002;石河子大学药学院,新疆石河子 832002【正文语种】中文【中图分类】R927.2丙戊酸（valproic acid，VPA）钠是临床上常用的一线抗癫痫药，是癫痫综合征、大发作、失神性发作、肌阵挛性发作的首选。

柱前衍生化-HPLC法测定患者体内丙戊酸钠的血药浓度杨春兰;方会慧;夏泉;许杜娟;周农【摘要】Aim To determine sodium valproate in patients ' serum by high performance liquid chromatography( HPLC) . Methods Serum sample was extracted with n-Hexane. Cyclohexanecarboxylic acid and 2-Bromoacetophenone were selected as an internal standard and derivative reagent respectively. The analytical column was Symmetry C18 (4. 6 mm × 250 mm ,5 μm) with the temperature at 30℃ . The detection wavelength was 248 nm and the flow rate was 1. 0 ml · min -1. Column temperature 30 ℃ . The mobile phase consisted of methanol-water (82 ∶ 18). Results The linear range of sodium valproate was 12. 5 ～150 mg · L-1 ,The mean recovery was 98. 74％ . The relative standard deviation( RSD) of inter-day for sodium valproate was less than 5％ . Conclusion The method is rapid , accurate.sensitive and suitable for clinical routine monitoring for sodium valproate.%目的建立反相高效液相色谱法测定人血清中丙戊酸钠血药浓度.方法血清用环己烷提取,以环已烷羧酸为内标,2-溴苯乙酮为衍生化试剂,用高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度.采用Symmetr y C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱;流动相为甲醇-水(82:18);检测波长为248 nm;流速为1.0 ml·min-1;柱温:30℃.结果血清中丙戊酸钠线性范围为12.5～150 mg·L-1,平均回收率98.74%,日内RSD<5%.结论该法快速、灵敏、准确,适用于临床常规监测需要.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2011(015)011【总页数】3页(P1352-1354)【关键词】丙戊酸钠;柱前衍生化;高效液相色谱法;血药浓度【作者】杨春兰;方会慧;夏泉;许杜娟;周农【作者单位】安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院药剂科,国家中医药管理局中药化学三级实验室;安徽医科大学第一附属医院神经内科,安徽,合肥,230022【正文语种】中文丙戊酸钠(sodium valproate，VPA)又名二丙基乙酸钠，是治疗癫痫病全身性强直、阵挛性发作的首选药物，对失神发作和肌阵挛性发作效果较好，也可用于治疗部分性发作［1］。

柱前衍生化-HPLC检测丙戊酸钠血清浓度方法验证曲秀梅;雷力力;方芳;李冬;张志国【摘要】@@ 丙戊酸钠为一线广谱抗癫痫药物,因分子结构中没有能够产生紫外光谱吸收的结构,用一般的HPLC法难于直接测定,文献报道多用毛细管气相色谱法、酶联免疫法、荧光偏振免疫法等.目前应用较多的是"柱前衍生化高效液相色谱法检测丙戊酸钠的血清含量",为了开展丙戊酸钠临床血药浓度监测,对文献[1,2]报道的柱前衍生化-高效液相色谱检测方法进行了综合,经过改进的方法检测结果稳定、准确,可以投入临床使用.【期刊名称】《黑龙江医药科学》【年(卷),期】2010(033)005【总页数】2页(P75-76)【关键词】丙戊酸钠;血药浓度;HPLC【作者】曲秀梅;雷力力;方芳;李冬;张志国【作者单位】佳木斯大学附属第一医院,黑龙江,佳木斯,154003【正文语种】中文【中图分类】R927丙戊酸钠为一线广谱抗癫痫药物,因分子结构中没有能够产生紫外光谱吸收的结构,用一般的 HPLC法难于直接测定,文献报道多用毛细管气相色谱法、酶联免疫法、荧光偏振免疫法等。

目前应用较多的是“柱前衍生化高效液相色谱法检测丙戊酸钠的血清含量”,为了开展丙戊酸钠临床血药浓度监测,对文献[1,2]报道的柱前衍生化-高效液相色谱检测方法进行了综合,经过改进的方法检测结果稳定、准确,可以投入临床使用。

1 仪器及试剂P230Ⅱ高效液相色谱仪(大连伊利特分析仪器仪器有限公司);XW-80涡旋混合器(上海精科实业有限公司);岛津AUW220D十万分之一天平。

色谱纯甲醇：天津凯通化学试剂有限公司生产;丙戊酸钠对照品 (湖南省湘中制药有限公司提供,含量：99.8%,批号 090405)环己烷羧酸 (美国 Sigma公司 ,批号：08265PD,);ω-溴苯乙酮(国药集团化学试剂有限公司,批号：20090212);其它试剂均为分析纯。

2 方法及结果2.1 色谱条件色谱柱：Hypersil ODS2C18(4.6mm× 250mm,5μm);柱温：30℃;检测波长：248nm;流动相：甲醇：水 (75：25);流速：1.0mL˙min-1;进样量：15 μL。

高效液相色谱法测定丙戊酸钠的血药浓度胡琳【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2013(22)12【摘要】Objectlve To establish the HPLC method for the serum concentration determination of valproic acid(VPA)and to guide the individualized medication regimen by analying the typical cases.Methods Serum was extracted with hexane.With α-bromoacetophenone as the derivative reagent and cyclohexane carboxylic acid as the internal standard,the Zorbbx SB-C18 column(250 mm×4.6 mm,5 μm) was adopted as the analytical column;the mobile phase was methanol-water(79:21,V/ V),the detection wave length was set at 248 nm,the flow rate was 1.0mL/min.The above mentioned method was used to determine the dozens of cases using sodium valproate.From them,3 typical cases were selected for discussing the influencing factors of the serum sodium valproate concentration and designing the individualized drug administration regimen.Results The retention time of internal standard cyclohexane carboxy acid and VPA was 6.3 min and 9.3 min respectively,the linear range was 12.5-200 μg/mL,the ratio of the sodium valproate peak height and the internal standard peak height showed good linear relation with the concentration(r=0.999 9).The average recovery rate was 99.98％,RSD of intra-day and inter-day was less than 5.66％.At the same time,during theprocess of the practical measurement of serum drug concentrations,it was founded that the same dosage of sodium valproate could produce a larger gap of the blood drug concentration in different individuals.Conclusion This method is rapid,simple,accurate and suitable for serum sodium valproate concentration monitoring.In order to adjust the individualized dosing regimen,the serum sodium valproate concentration monitoring is necessary.%目的建立测定血清中丙戊酸(VPA)血药浓度的高效液相色谱法.方法血清用正己烷提取,α-溴苯乙酮为衍生试剂,环己烷羧酸为内标,采用Zorbbx SBC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱；流动相为甲醇-水(79∶21,V/V),检测波长为248 nm,流速为1.0 mL/min,设计个体化给药方案.结果内标环己烷羧酸和丙戊酸的保留时间分别为6.3 min和9.3 min,质量浓度线性范围为12.5 ～ 200μg/mL(r =0.999 9),平均回收率为99.98％,日内、日间RSD均小于5.66％.结论该法快速、简单、准确性好,适用于临床进行丙戊酸的血药浓度监测.【总页数】3页(P16-18)【作者】胡琳【作者单位】浙江省人民医院,浙江杭州 310014【正文语种】中文【中图分类】R969.1;R969.3;R971+.6【相关文献】1.HPLC法测定患者丙戊酸钠血药浓度 [J], 段自皞;王法财;沈炳香;聂松柳2.均相酶扩大免疫分析法与高效液相色谱法测定癫痫患儿丙戊酸钠血药浓度比较研究 [J], 杨艳;张婉婷;姚晓东;苟小艳3.柱前衍生-高效液相色谱法测定丙戊酸钠血药浓度 [J], 周春华;张志清;李飞高;亢泽坤;李敬瑄;张雪宁4.HPLC法测定丙戊酸钠血药浓度柱前衍生化条件的优化 [J], 胡雪飞;张永军;魏丽红;陈文5.高效液相色谱法同时测定癫痫患儿血清中丙戊酸钠和2-丙基-4-戊烯酸血药浓度[J], 李赛;苏凌璎因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。