普通光学显微镜的使用

实验三-普通光学显微镜的使用方法及细菌的革兰氏染色法实验三普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色、革兰氏染色法生科15.2 周罡201500181104【实验目的】1.复习光学显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。

2.学习并掌握油镜的原理和使用方法。

3.掌握利用显微镜观察不同微生物的基本技能，了解球菌、杆菌、放线菌、酵母、真菌在光学显微镜下的基本形态特征。

4.学习并掌握微生物的制片及简单染色的基本要求。

5.学习并掌握革兰氏染色法。

6.了解革兰氏染色原理。

7.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。

【实验原理】（一）普通显微镜的基本原理1.基本原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来昂达成像，故又称为复式显微镜。

它们包括机械部分和光学部分两部分。

机械部分包括镜座、镜臂、镜筒、载物台、物镜转换器、粗调节螺旋、细调节螺旋、标本夹等。

光学部分包括接目镜、接物镜、反光镜、光圈（虹采）、聚光镜（集光器）等。

显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。

所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。

要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。

显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。

2.油镜微生物学使用的显微镜的物镜通常有低倍镜（10×）、高倍镜（40×）和油镜（100×），油镜是三者中放大倍数最大的，油镜的焦距和工作距离最短，油镜与其他物镜不同的是载玻片与物镜之间隔的不是一层空气（干燥系），而是一层油脂，称为“油浸系”。

生物学：普通光学显微镜的使用方法普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。

机械部分镜座：是显微镜的底座，用以支持整个镜体。

镜柱：是镜座上面直立的部分，用以连接镜座和镜臂。

镜臂：一端连于镜柱，一端连于镜筒，是取放显微镜时手握部位。

镜筒：连在镜臂的前上方，镜筒上端装有目镜，下端装有物镜转换器。

物镜转换器(旋转器)：接于棱镜壳的下方，可自由转动，盘上有3-4个圆孔，是安装物镜部位，转动转换器，可以调换不同倍数的物镜，当听到碰叩声时，方可进行观察，此时物镜光轴恰好对准通光孔中心，光路接通。

镜台(载物台)：在镜筒下方，形状有方、圆两种，用以放置玻片标本，中央有一通光孔，我们所用的显微镜其镜台上装有玻片标本推进器(推片器)，推进器左侧有弹簧夹，用以夹持玻片标本，镜台下有推进器调节轮，可使玻片标本作左右、前后方向的移动。

调节器：是装在镜柱上的大小两种螺旋，调节时使镜台作上下方向的移动。

粗调节器(粗螺旋)：大螺旋称粗调节器，移动时可使镜台作快速和较大辐度的升降，所以能迅速调节物镜和标本之间的距离使物象呈现于视野中，通常在使用低倍镜时，先用粗调节器迅速找到物象。

照明部分装在镜台下方，包括反光镜，集光器。

反光镜：装在镜座上面，可向任意方向转动，它有平、凹两面，其作用是将光源光线反射到聚光器上，再经通光孔照明标本，凹面镜聚光作用强，适于光线较弱的时候使用，平面镜聚光作用弱，适于光线较强时使用。

集光器(聚光器)位于镜台下方的集光器架上，由聚光镜和光圈组成，其作用是把光线集中到所要观察的标本上。

聚光镜：由一片或数片透镜组成，起汇聚光线的作用，加强对标本的照明，并使光线射入物镜内，镜柱旁有一调节螺旋，转动它可升降聚光器，以调节视野中光亮度的强弱。

光学部分目镜：装在镜筒的上端，通常备有2-3个，上面刻有5*、10*或15*符号以表示其放大倍数，一般装的是10*的目镜。

物镜：装在镜筒下端的旋转器上，一般有3-4个物镜，其中最短的刻有“10*”符号的为低倍镜，较长的刻有“40*”符号的为高倍镜，最长的刻有“100*”符号的为油镜，此外，在高倍镜和油镜上还常加有一圈不同颜色的线，以示区别。

普通光学显微镜的操作步骤
普通光学显微镜是一种常见的显微镜，用于观察细胞、组织和微生物等微小物体。

以下是普通光学显微镜的操作步骤：
1. 准备样本：将要观察的样本制备成适当的厚度和形状，以便在显微镜下观察。

2. 打开显微镜：打开显微镜的电源，调节光源的亮度和位置，以便获得最佳的观察效果。

3. 调节目镜和物镜：将目镜和物镜调节到适当的位置，以便获得清晰的图像。

4. 调节焦距：通过旋转物镜或调节焦距螺旋，使样本清晰地呈现在视野中。

5. 观察样本：将样本放在载物台上，通过移动载物台或调节焦距，观察样本的不同部位。

6. 记录观察结果：在观察过程中，可以使用相机或纸笔记录观察结果。

7. 关闭显微镜：观察完毕后，关闭显微镜的电源，将目镜和物镜放回原位。

需要注意的是，在操作显微镜时，要保持显微镜的清洁和干燥，避免样本污染和显微镜损坏。

同时，要注意安全，避免直接观察强光源和使用不当的工具。

光学显微镜的使用方法
光学显微镜是一种常用的实验室仪器，用于观察微小物体的细节和结构。

以下是光学显微镜的使用方法：
1. 调节光源：打开显微镜的照明系统，确保其能够提供足够的光源。

一般来说，可通过旋转光源的控制盘来调节光的强弱。

2. 调节目镜管和物镜：将目镜管从显微镜顶端的架子上拉起，并将物镜旋转至最低放大倍数。

将顶端的一片玻片或载玻片放置在物镜下方。

3. 调节工作台：用显微镜的粗动调节按钮将工作台调整至与物镜的焦点位置相距较远，然后再利用细动调节按钮缓慢地将工作台移至物镜的焦点处。

4. 将试样放置在载玻片上：将待观察的样品或样本放置在载玻片上，并用夹片固定住。

5. 定位和对焦：将载玻片放置在显微镜的工作台上，并利用粗动调节按钮将载玻片移动至显微镜的中心位置。

然后，通过细动调节按钮逐渐调整焦距，直到图像清晰可见。

6. 观察和调整：开始观察样品，如果图像不够清晰，可以通过细动调节按钮微调焦距直至满意的清晰度。

7. 调整放大倍数：如果需要调整放大倍数，可通过转动物镜切换旋钮或更换不同倍数的物镜。

8. 完成观察：观察完毕后，将物镜旋转至最低放大倍数，移开载玻片，并关闭显微镜的照明系统。

使用光学显微镜需要注意保持仪器的清洁，并小心操作，避免损坏。

观察时应遵循安全规范，尤其是当使用高倍物镜时，应避免光线直接照射眼睛。

实验一光学显微镜的使用与微生物观察第一节普通光学显微镜的使用一、实验目的1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。

2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。

3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。

二、基本原理（一）普通光学显微镜的构造普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。

1、机械系统机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。

（1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。

（2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。

（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。

镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。

镜筒长度一般固定，通常是160mm。

有些显微镜的镜筒长度可以调节。

（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。

为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。

转动物镜转换器可以选用合适的物镜。

转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。

（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。

载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；有标本移动器，转动螺旋可以使标本前后和左右移动。

有些标本移动器上刻有标尺，可指示标本的位置，便于重复观察。

（6）调节器：调节器又称调焦装置，由粗调螺旋和细调螺旋组成，用于调节物镜与标本间的距离，使物像更清晰。

粗调螺旋转动一圈可使镜筒升降约10mm，细调螺旋转动一圈可使镜筒升降约0.1mm。

图1-1 普通光学显微镜的构造1. 镜座2. 镜臂3. 镜筒4. 转换器5. 载物台6. 压片夹7. 标本移动器8. 粗调螺旋9. 细调螺旋10. 目镜11. 物镜12. 虹彩光阑（光圈） 13. 聚光器 14. 反光镜2、光学系统光学系统包括目镜、物镜、聚光器、反光镜等。

（1）目镜：它的功能是把物镜放大的物像再次放大。

一、光学显微镜的组成结构光学显微镜包括光学系统和机械装置两大部分，而数码显微镜还包括数码摄像系统，现分述如下：（一）机械装置1．机架显微镜的主体部分，包括底座和弯臂。

2．目镜筒位于机架上方，靠圆形燕尾槽与机架固定，目镜插在其上。

根据有否摄像功能，可分为双目镜筒和三目镜筒；根据瞳距的调节方式不同，可分为铰链式和平移式。

3．物镜转换器它是一个旋转圆盘，上有3～5个孔，分别装有低倍或高倍物镜镜头。

转动物镜转换器就可让不同倍率的物镜进入工作光路。

4．载物台是放置玻片的平台，其中央具有通光孔。

台上有一个弹性的标本夹，用来夹住载玻片。

右下方有移动手柄，使载物台面可在XY双方向进行移动。

5．调焦机构利用调焦手轮可以驱动调焦机构，使载物台作粗调和微调的升降运动，从而使被观察物体对焦清晰成像。

6．聚光器调节机构聚光器安装在其上，调节螺旋可以使聚光器升降，用以调节光线的强弱。

（二）光学系统1．目镜它是插在目镜筒顶部的镜头，由一组透镜组成，可以使物镜成倍地分辨、放大物像，例如10X、15X等。

按照所能看到的视场大小，目镜可分为视场较小的普通目镜，和视场较大的大视场目镜(或称广角目镜)两类。

较高档显微镜的目镜上还装有视度调节机构，操作者可以方便快捷地对左右眼分别进行视度调整；此外，在这些目镜上可以加装测量分划板，测量分划板的象总能清晰地调焦在标本的焦面上；并且，为了防止目镜被取走以及减少运输中被损坏的可能性，这些目镜可以被锁定。

2．物镜它安装在转换器的孔上，也是由一组透镜组成的，能够把物体清晰地放大。

物镜上刻有放大倍数，主要有10X、40X、60X、100X等。

高倍物镜中多采用浸液物镜，即在物镜的下表面和标本片的上表面之间填充折射率为1.5左右的液体（如杉木油），它能显著的提高显微观察的分辨率。

3．光源有卤素灯、钨丝灯、汞灯、荧光灯、金属卤化物灯等。

4．聚光器包括聚光镜、孔径光阑。

聚光镜由透镜组成，它可以集中透射过来的光线，使更多的光能集中到被观察的部位。

【高中生物】普通光学显微镜的使用方法（一）显微镜的主要构造普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。

1.机械部分（1）镜座：是显微镜的底座，用以支持整个镜体。

（2）镜柱：就是镜座上面四肢的部分，用来相连接镜座和镜臂。

（3）镜臂：一端连于镜柱，一端连于镜筒，是取放显微镜时手握部位。

（4）镜筒：连在镜臂的前上方，镜筒上端装有目镜，下端装有物镜转换器。

（5）物镜转换器(旋转器)：接于棱镜壳的下方，可自由转动，盘上有3－4个圆孔，是安装物镜部位，转动转换器，可以调换不同倍数的物镜，当听到碰叩声时，方可进行观察，此时物镜光轴恰好对准通光孔中心，光路接通。

（6）镜台(载物台)：在镜筒下方，形状有方、圆两种，用来置放玻片标本，中央存有一通光孔，我们所用的显微镜其镜台上装有玻片标本推进器(推片器)，推进器左侧存有弹簧夹，用来滚轮玻片标本，镜台下存有推进器调节轮，可以并使玻片标本并作左右、前后方向的移动。

（7）调节器：是装在镜柱上的大小两种螺旋，调节时使镜台作上下方向的移动。

①细调节器(细螺旋)：小螺旋表示细调节器，移动时可以并使镜台并作快速和很大辐度的滑行，所以能够快速调节物镜和标本之间的距离并使物象呈现出于视野中，通常在采用低倍镜时，先用细调节器快速找出物象。

②细调节器(细螺旋)：小螺旋称细调节器，移动时可使镜台缓慢地升降，多在运用高倍镜时使用，从而得到更清晰的物象，并借以观察标本的不同层次和不同深度的结构。

2．照明设备部分装在镜台下方，包括反光镜，集光器。

（1）反光镜：上装在镜座上面，可以向任一方向旋转，它存有元显恭、凹陷两面，其促进作用就是将光源光线散射至聚光器上，再经通在光孔照明设备标本，凹面镜聚光促进作用弱，适合光线较差的时候采用，平面镜聚光促进作用强，适合光线较强时采用。

（2）集光器(聚光器)位于镜台下方的集光器架上，由聚光镜和光圈组成，其作用是把光线集中到所要观察的标本上。

普通光学显微镜的使用方法
一、使用准备
1.先保证显微镜光源的稳定，一般每次使用之前，都要打开显微镜的
光源，使得光源经过调整后能够产生稳定高亮的光束，确保达到最佳观察
效果。

2.确定所要观察的物体，同时也要把物体放置在合适的位置上。

3.确定适用的物镜，物镜选择的理想状态是：它的倍数越高，偏差越小，图像越清晰。

若物镜的视场和偏差都符合要求，则可选择。

4.确定适用的水镜，确定水镜的特点是可以改善物镜的偏差，提高图
像的清晰度，使视野更清晰。

二、使用方法
1.调节放大倍率：当使用显微镜观察固定的物体时，首先需要确定观
察所需倍率，应先调节物镜，调节转轮来进行倍率的放大，然后才能找到
最佳的视觉体验。

2.调节物镜与水镜之间的距离：对于固定倍率，需要改变物镜与水镜
之间的距离，可以改变物镜的焦距，来调整图像的清晰度，使视野更清晰。

3.选择观察物体：将想要观察的物体放置在观察台上，将显微镜放置
在合适的位置，使其物射线垂直射向物体，这样可以使观察物体的清晰度
最大化。

4.调整聚焦：聚焦是非常重要的，只有当物镜聚焦在正确的位置才能
清晰的观察对象，因此在观察之前。

光学显微镜的使用方法（一)对光(1)镜检时身体要正对实验台，采取端正的姿态，调整两个目镜之间的距离与观测者瞳距相符，两眼自然睁开，同时左手调节焦距，使物像清晰并移动标本视野，右手记录、绘图。

将低倍物镜转至镜筒下方与镜筒成一直线。

镜检时载物台不可倾斜，因为当载物台倾斜时，液体或油易流出，既损坏了标本，又污染载物台，也影响检查结果。

(2)利用自然光源镜检时，最好用朝北的光源，不宜采用直射阳光；利用人工光源时，用日光灯的光源。

转动底部光源或拨动反光镜，调节视野亮度。

反光镜有平、凹两面，光源强时用平面，较暗时用凹面，需要强光时，将聚光器提高，光圈放大；需要弱光时，将聚光器降低，或光圈适当缩小。

(3)将待观察的标本置载物台上，载物台上有固定的装置固定标本(见图3)。

通过载物台调节旋钮将标本移至镜筒下方。

转动粗准焦螺旋使镜筒下降至物镜镜接近标本。

于转动粗准焦螺旋的同时，需俯身在镜旁仔细观察物镜与标本之间的距离。

(4)调节目镜之间距离，双眼分别于左、右目镜中观察，待双眼视野重合，同时左手转动粗准焦螺旋，使镜筒徐徐上升以调节焦距，使视野内的物像看到时即停，再调细准焦螺旋，至标本清晰为止。

(二)物镜的使用显微镜一般具有三个物镜，即低倍、高倍及油镜，固定于物镜转换盘孔中。

观察标本时，使用低倍物镜，此时，视野，标本较易查出，但放大倍数较小(一般放大100倍),较小的物体不易观察其结构。

高倍物镜放大的倍数(一般放大400倍),能观察微小的物体或结构。

油镜放大倍数可达1000倍，用来观察细菌。

(三)低倍、高倍、油镜头的识别(1)标明放大倍数10×、40 ×、100 x，或10/0.25、40/0.65、100/1.30。

(2)低倍镜最短，高倍镜较长，油镜最长。

(3)镜头前面的镜孔低倍镜最大，高倍镜，油镜最小。

(4)油镜头上常刻有黑色环圈，或“Oil"或“油”字(四)低倍镜换高倍镜的使用方法(1)光线对好后，捻转载物台调节旋钮寻找需要观察的标本。