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水飞蓟素对实验性肝纤维化的疗效及其作用机制的研究王宇;贾继东;杨寄华;马雪梅;马红;王宝恩【期刊名称】《国际消化病杂志》【年(卷),期】2005(025)004【摘要】目的:观察水飞蓟素(Silymarin,SIL)在胆管阻塞性肝纤维化大鼠模型(bile duct occlusion,BDO)中的抗纤维化疗效.方法:雄性SD大鼠60只,随机分为3组,每组20只,分别为假手术对照组、纤维化模型组、水飞蓟素治疗组(50 mg·kg-1·d-1).制备胆管阻塞性肝纤维化模型.用药6周后,处死大鼠,取肝组织进行病理学观察.测定肝组织羟脯氨酸(HYP)含量.检测Ⅰ型前胶原(procol-Ⅰ)mRNA和组织金属蛋白酶抑制因子Ⅰ(TIMP-1)mRNA表达水平及血清透明质酸、层连蛋白、转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶、胆红素水平.实验结果统计采用SPSS软件进行分析,P＜0.05为差异有显著性意义.结果:与对照组比较,水飞蓟素治疗组的组织学评分(2.50)比模型组(3.38)明显下降(P＜0.01).肝脏HYP减少35%.procol-I mRNA和TIMP-1 mRNA分别下降35%和29%.血清HA降低30%,LN下降17%.以上差异均有统计学意义.结论:水飞蓟素抑制procol-I mRNA、TIMP-1mRNA表达,减少肝组织胶原含量,改善肝纤维化程度.【总页数】4页(P256-259)【作者】王宇;贾继东;杨寄华;马雪梅;马红;王宝恩【作者单位】100050,首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心;100050,首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心;100050,首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心;100050,首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心;100050,首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心;100050,首都医科大学附属北京友谊医院肝病中心【正文语种】中文【中图分类】R5【相关文献】1.水飞蓟宾对大鼠实验性肝纤维化发生发展作用机制的研究 [J], 宋维芳;许瑞龄;王登妮;王明亮;宋彬妤;徐军全2.熊果酸抗实验性大鼠肝纤维化作用机制的研究 [J], 戴颖;朱萱3.瘦素在实验性大鼠肝纤维化发生中的作用机制研究 [J], 农兵;罗和生;梁增文;黄振录4.甘草甜素对幼龄大鼠实验性肝纤维化疗效的研究 [J], 陈绍兵;陈军华;王玉婷;解元元;詹学;朱朝敏;王绍映5.中医药治疗实验性肝纤维化作用机制研究进展 [J], 张杰;徐列明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
水飞蓟的药理学研究进展作者：周长波孟祥来来源：《中国保健营养·中旬刊》2013年第11期【摘要】水飞蓟是一年或二年生菊科草本植物，可生长至1.5m高，别名乳蓟。
种子入药。
原产于西欧和北非。
在古代水飞蓟就被西医和中医用来治疗肝胆病，包括肝炎、肝硬化和黄疸，并用来保护肝脏对抗来自化学或环境的毒素，包括蛇咬、蚊虫叮咬、蘑菇中毒和酒精[1]。
虽然水飞蓟主要的作用是肝病治疗，但在临床上医生已经尝试用它治愈其他的疾病，如降血脂、抗结核、抗炎、抗过敏、抗放射、保护脑组织。
【关键词】水飞蓟；水飞蓟宾；化学成分；药理作用【中图分类号】R975 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）11—0131—03水飞蓟是在治疗肝病的上有很多研究的植物。
其主要的活性成分为植物种子的亲脂类提取物，包括三种黄酮木脂素的同分异构体（水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭），它们通称为水飞蓟素。
其中水飞蓟宾活性最高，含量占水飞蓟素的50%-70%。
水飞蓟素在整个植物中均有发现，但在果实和种子中较为集中。
水飞蓟素作为抗氧化剂能减少自由基的产生和脂质过氧化作用，作为毒素阻断剂通过抑制毒素向肝细胞受体粘合抗纤维化。
水飞蓟素能减小由于醋氨酚、四氯化碳、放射、铁超载、苯肼、酒精、毒鹅膏等造成的动物肝损伤模型。
水飞蓟素已经用于治疗酒精性肝病、急性和慢性病毒性肝炎、毒素引发的肝病。
另外，通过药理实验研究，水飞蓟还具有降血脂、保护心肌、抗炎、抗过敏、保护脑组织的作用。
1 化学成分水飞蓟原料药包含15-30%的脂类，主要是甘油三酯类；30%蛋白质和糖（阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、葡萄糖）；维生素E（0.038%），甾醇类（0.063%）包括胆固醇、菜油甾醇、豆甾醇，黄酮木脂素包括槲皮素、紫杉醇、圣草素、甲氧基木犀草素（表），其中黄酮木脂素类有主要活性。
水飞蓟素主要包括：水飞蓟宾A、B（大约为50-60%），异水飞蓟宾（约5%），水飞蓟亭（约20%），水飞蓟宁（约10%）等。
水飞蓟素对肝纤维化小鼠的保护作用及机制探讨曹力波;李兵;李佐军;黄娟娟;欧阳林旗;黄瀚;刘世坤【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2009(25)6【摘要】目的探讨水飞蓟素抗CCl4和酒精所致肝纤维化的作用和机制.方法 50只♂昆明小鼠随机分为5组,模型组小鼠皮下注射CCl4并饮用酒精制造肝纤维化模型,治疗组以低、中、高3种不同浓度(50、100、200 mg*kg-1)的水飞蓟素灌胃进行干预,正常组小鼠皮下注射等量植物油并用生理盐水灌胃.通过检测血清AST、ALT水平、肝脏病理组织学变化、肝脏组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-肌动蛋白(α-SMA)及Ⅰ型胶原(collagen-Ⅰ) mRNA表达水平观察水飞蓟素的疗效.结果成功建立肝纤维化模型,模型组小鼠血清AST、ALT,肝脏组织TGF-β1、α-SMA及collagen-Ⅰ mRNA表达水平增高,水飞蓟素可降低血清AST、ALT水平,降低肝组织TGF-β1、α-SMA及collagen-Ⅰ mRNA的表达,减轻肝纤维化程度,中剂量(100 mg*kg-1)疗效最好.结论水飞蓟素对酒精和CCl4所致的肝脏损伤有明显保护作用,其机制可能与降低TGF-β1 mRNA的表达、抑制肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)活化有关.【总页数】3页(P794-796)【作者】曹力波;李兵;李佐军;黄娟娟;欧阳林旗;黄瀚;刘世坤【作者单位】中南大学药学院,湖南,长沙,410013;中南大学湘雅三医院药剂科,湖南,长沙,410013;中南大学湘雅三医院药剂科,湖南,长沙,410013;中南大学湘雅三医院药剂科,湖南,长沙,410013;中南大学药学院,湖南,长沙,410013;中南大学湘雅三医院药剂科,湖南,长沙,410013;中南大学药学院,湖南,长沙,410013;中南大学湘雅三医院药剂科,湖南,长沙,410013;中南大学药学院,湖南,长沙,410013;中南大学湘雅三医院药剂科,湖南,长沙,410013;中南大学湘雅三医院药剂科,湖南,长沙,410013【正文语种】中文【中图分类】R-332;R282.71;R329.24;R342.22;R575.202.2【相关文献】1.水飞蓟素对小鼠肝损伤保护作用及机理研究 [J], 黄彩玲;肖柳英;潘竞锵2.拉米夫定和水飞蓟素对酒精刺激的HBV转基因小鼠肝纤维化相关因子的影响[J], 黄娟娟;刘世坤;李佐军;曹力波;欧阳林旗3.水飞蓟素透皮贴对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用 [J], 韩婕;高帅;范玉琛;王凯4.水飞蓟素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的r保护作用及机制探讨 [J], 董建;杨洁;史国辉5.水飞蓟素对哮喘小鼠炎症的保护作用研究 [J],因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
水飞蓟宾对酒精诱导肝纤维化小鼠的保护作用李伟甲【摘要】目的:研究水飞蓟宾对酒精诱导肝纤维化小鼠的保护作用,并探讨其诱导的机制.方法:选取10只雄性、健康SD小鼠作为正常对照组,另取50只雄性小鼠,采用剂量递增方法复制酒精肝纤维化模型.造模成功的的小鼠随机分为四组,分别为模型组,水飞蓟宾低、中、高剂量组.最后一次给药结束后取血清.各组小鼠血清肝纤维化指标透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、谷丙转氨酶(ALT)、羟脯氨酸(Hyp)的测定采用酶联免疫吸附法;用Western blot检测小鼠肝组织WNT蛋白的表达量.结果:与正常组比较,模型组小鼠血清HA、LN、ALT、Hyp水平显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,水飞蓟宾高、中、低剂量组血清中HA、LN、ALT、Hyp的量显著低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);,模型组小鼠肝组织WNT蛋白表达水平高于正常组,差异具有统计学意义(P<0.05).水飞蓟宾低、中、高剂量组小鼠肝组织WNT蛋白表达水平降低较模型组明显,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:水飞蓟宾对酒精诱导肝纤维化有一定的治疗作用,能一定程度上阻断肝纤维化的发展.【期刊名称】《黑龙江医药》【年(卷),期】2018(031)004【总页数】4页(P751-754)【关键词】水飞蓟宾;肝纤维化;酒精性;小鼠【作者】李伟甲【作者单位】河南省医疗器械检验所河南郑州450000【正文语种】中文【中图分类】R285全世界有超过3.5亿人感染慢性乙型肝炎病毒（HBV），其中占绝大部分分布在亚洲。
我国是HBV的高发区，携带者约1.2亿。
有大约3000万慢性乙型肝炎（CHB）患者，其中高达20%可发展为肝硬化，多至5%最终演变为肝癌。
感染HBV可诱发肝脏产生慢性炎症，机体反复修复炎症最终导致了肝纤维化的发生[1]。
而细胞外基质异常沉积和过度增生，破坏了肝脏的微细结构被，诱发肝硬化甚至肝癌等。
“天然的保肝药”—水飞蓟素水飞蓟素是从菊科药用植物水飞蓟种子的种皮中提取出来的植物提取物，呈黄色粉末或结晶状粉末，味苦。
易溶于丙酮、乙酸乙酯、乙醇及甲醇、难溶于氯仿，不溶于水。
主要成分有水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁和水飞蓟亭等黄酮类物质。
来源大约在二十世纪初期，德国的采菇工作者发现一种可以解毒菇之毒的药草，在他们还没有发现这种药草之前，采菇人经常会误采一种长得和一般无毒菇类很像的剧毒菇，误食这种剧毒菇会造成肝衰竭而死亡，后来他们发现一种名为水飞蓟的草药可以解毒菇之毒，甚至事先服用了这种草药后，即使再摄食毒菇也不会中毒，由于这种草药的枝干切开会流出类似白色苦味汁液，所以又被称为“牛奶蓟”或“苦蓟”。
后来德国的传统草药师发现了这种草药不仅可以解菇毒，还可以有效地治疗肝病。
水飞蓟素已经被美国FDA作为营养品和治疗摄入肝脏毒性的药物收录。
功效该物质具有如下功效：保护肝脏细胞免受毒性物质侵害，尤其是酒精及环境污染物(农药、重金属等)入侵损害肝脏；具有强力的抗氧化功能，能保护肝脏细胞免受自由基破坏，效力远胜于维生素E；促进蛋白质的合成，加快制造新的肝脏细胞，或令已受损的肝脏细胞自行修复；具有对脂肪氧合酶、过氧化酶的抑制作用。
临床上用于肝中毒，肝功能障碍的治疗，抗辐射及降血脂作用。
因此被称为“天然的保肝药”。
另外水飞蓟素具有抗辐射、抗衰老、防治动脉硬化、延缓皮肤老化等功效。
该产品广泛用于医药、保健品、化妆品、食品等产品的生产中。
水飞蓟素目前剂型有口服制剂：水飞蓟素片、益肝灵片、水飞蓟宾卵磷脂复合物硬胶囊。
注射剂主要是做成水飞蓟宾衍生物，如:葡-N·甲胺盐。
药理作用水飞蓟素具备数个作用点和作用机制由于其对自由基的捕获能力．水飞蓟素具有抗过氧化活性。
脂类化合物过氧化的病理生理学过程(造成细胞膜的损坏)，可被水飞蓟素阻断或阻止。
并且在已经遭受损伤的肝细胞内．水飞蓟素刺激蛋白质的合成并使磷脂代谢正常化。
大量的研究表明水飞蓟素及水飞蓟宾化合物具有广泛的药理活性主要活性归纳为以下几点：清除活性氧直接清除活性氧，对抗脂质过氧化，维持细胞膜的流动性；保肝作用水飞蓟素对于由四氯化碳、半乳糖胺，醇类和其他肝毒素造成的肝损害具有保护作用；抗肿瘤作用各种活性氧能氧化鸟嘌呤形成8一羚基鸟嘌呤，造成DNA损伤，进而引起肿瘤，应用抗氧化剂，特别是自由基清除剂可以防止这一过程的发生；抗心血管疾病作用用含水飞蓟素提取物的多不饱和脂肪酸和少量饱和脂肪酸食物喂养小鼠，对照于喂养多不饱和脂肪酸和少量饱和脂肪酸食物的小鼠，前者血清中的胆固醇含量明显降低，VLDL毛有所降低，HDL一C增加，说明水飞蓟素提高了抗LDL的能力；保护脑缺血损伤作用通过观察水飞蓟素对脑匀浆液一氧化氮和一氧化氮合成酶的表达量，显示水飞蓟素在显著降低缺血大鼠脑组织中NO、NOS含量的同时，明显缩小了梗死面积。
摘要化合物，是一类二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合而成的复合物。
其主要含有水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟亭及水飞蓟宁等活性成分，其中，以水飞蓟宾活性最强、含量最高。
大量研究显示，水飞蓟素具有清除氧自由基、抗脂质过氧化、抗肝纤维化、保护肝细胞膜等作用，临床广泛用于治疗急、慢性肝炎，肝硬化及肝损伤。
近年来发现其具有除保肝作用之外的降脂及抑制血管内膜增生等抗ＡＳ作用，但对于已形成的ＡＳ斑块进展的影响，鲜有报道。
目的观察水飞蓟素对ＡｐｏＥ．／．小鼠动脉粥样硬化的影响，并探讨其可能的作用机制。
方法１．动物实验：所有ＡｐｏＥ－／．小鼠高脂喂养２周后均以长度３ｍｍ、内径Ｏ．３ｍｍ的缩窄性硅胶管行左颈总动脉套管术制作ＡＳ模型。
手术４周后随机抽取６只小鼠取左颈总动脉标本，以ＨＥ染色行组织病理学观察，以鉴定ＡＳ模型形成情况。
余小鼠随机分为三组（ｎ＝４２）：对照组（Ａ组，ｎ＝１４）、水飞蓟素低剂量组（Ｂ组，ｎ＝１４）与水飞蓟素高剂量组（Ｃ组，ｎ＝１４）。
Ａ组继续给予高脂饮食喂养，Ｂ组给予高脂饮食＋５０ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）水飞蓟素喂养，Ｃ组给予高脂饮食＋２００ｍｇ／（ｋｇ·ｄ）水飞蓟素喂养，直至４周后处死。
２．组织形态学测定：实验终点时取左颈总动脉标本，以ＨＥ染色与油红Ｏ染色行组织形态学观察，采用Ｉｍａｇｅ．ＰｒｏＰｌｕｓ５．０图像分析软件测量斑块面积、纤维帽厚度及脂质含量。
３．血清学检测：实验终点时球后取血，采用本院的Ｐ－８００全自动生化仪测定血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇，硫代巴比妥酸比色法测定血清丙二醛，以及黄嘌呤氧化酶法测定血清超氧化物歧化酶水平。
结果１．给药前ＡｐｏＥ一／．小鼠左颈总动脉套管近心端０．５ｒａｍ处有明显的ＡＳ斑块ＩＩ摘要形成。
２．与Ａ组相比，Ｂ、Ｃ两组斑块面积及脂质含量均减少（Ｐ＜０．０５），纤维帽厚度均增加（Ｐ＜Ｏ．０５），且Ｃ组较Ｂ组作用更显著（Ｐ＜０．０５）。
NLRP3炎症小体在非酒精性脂肪性肝病中作用的研究进展王子媛1，2，郑涛2，陈黎2，郝新才11湖北医药学院药学院，湖北十堰442000；2湖北医药学院附属太和医院摘要：非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是一种无过量饮酒史，以肝实质细胞脂肪变性和脂肪贮积为特征的临床病理综合征。
NAFLD的发病机制尚不完全清楚，普遍认为是“多重打击”所致，但其核心环节是炎症反应。
核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体是胞质内由多种蛋白构成的一种蛋白复合体，可通过激活半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1，释放成熟的IL-1β、IL-18等炎症因子，从而发挥炎症效应。
目前认为，NLRP3炎症小体通过介导炎症反应参与NAFLD的发生、发展，其作用机制仍未完全阐明，可能与NLRP3炎症小体过度激活及其介导的胰岛素抵抗有关。
因此，靶向NLRP3炎症小体将为NAFLD治疗提供新的思路。
关键词：非酒精性脂肪性肝病；核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体；炎症反应；胰岛素抵抗doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2021.10.021中图分类号：R575文献标志码：A文章编号：1002-266X（2021）10-0084-04非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是一种无过量饮酒史，以肝实质细胞脂肪变性和脂肪贮积为特征的临床病理综合征，其疾病谱包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎（NASH）、脂肪性肝纤维化、肝硬化等。
目前，NAFLD已成为全球最常见的慢性肝病［1］。
NAFLD的发病机制尚不完全清楚，普遍认为是“多重打击”所致［2］。
“多重打击”学说认为，NAFLD是在机体发生胰岛素抵抗（IR）的情况下，由细胞氧化应激、肝脂毒性、细胞因子大量释放等多种因素介导，进而引发广泛的炎症反应，最终引起肝细胞坏死和凋亡［3］。
因此，炎症反应在NAFLD的发生、发展过程中具有重要作用。
核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体是胞质内由多种蛋白构成的一种蛋白复合体，可被多种病原体或危险信号激活，引起半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶1（Caspase-1）的自我剪切、活化，进而促使IL-1β、IL-18水解成熟，从而发挥炎症效应［4］。
水飞蓟素治疗脂肪肝的作用机制【关键词】脂肪肝系脂肪肝系指各种原因所致的肝脏脂肪(主要为三酰甘油)蓄积过多、代谢平衡失调的病理态。
临床上常根据饮酒与否，将其分为酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝。
尽管病因不同，二者却具有相似的病理学变化。
目前对脂肪肝的治疗尚缺乏针对性的特效药，主要是祛除原发病因及戒酒、减肥、饮食运动等综合治疗，适当应用降脂保肝药物治疗。
水飞蓟素（silymarin）是菊科草本植物水飞蓟种子中提取的类黄酮的有效活性成分，据现代药理研究水飞蓟素可直接清除自由基、对抗脂质过氧化、促进被损伤肝细胞合成DNA及结构蛋白、免疫调节和抗肝纤维化等药理活性，是经典的肝损伤修复药物，在当前尚缺乏其他有效的治疗脂肪肝药物的情况下，它在这方面的作用令人瞩目。
本文就此进行综述。
1 脂肪肝的形成1.1 酒精性脂肪肝饮酒后，乙醇在胃肠很快被吸收,肝脏是乙醇代谢的唯一器官。
90％的乙醇经过肝脏作用变为乙醛,乙醛再变成乙酸。
酒精性脂肪肝发生的机制可能有以下几个因素的参与［1］。
1.1.1 酒精对肝损害导致脂肪肝的主要原因酒精是通过ADH和ALDH氧化，在此过程中产生大量的尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(NADH)，使NADH与尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)比值高。
这就抑制了线粒体三羧酸循环，使脂肪酸代谢发生障碍，氧化减弱；同时促进脂肪酸合成，从而使脂肪在肝细胞内堆积而发生脂肪变性，最终导致脂肪肝形成，这是酒精对肝损害导致脂肪肝的主要原因。
1.1.2 酒精所致的肝损害中P450 2E1诱导和激活的巨噬细胞是氧自由基的重要来源由于乙醛的毒性大于乙醇，而前者可促进脂质过氧化，产生线粒体损害，使还原型谷胱甘肽(GSH)减少，并增加胶原合成。
乙醛和另一些脂质过氧化产物如丙二醛(MDA)等能形成蛋白加合物，引起免疫反应，损害细胞骨架功能和细胞与间质的相互作用，从而抑制重要的代谢通路。
在慢性酗酒者中，细胞色素P450 2E1能高度诱导ADH。
常用保肝药物的作用机制原理1.甘草酸制剂从中药甘草中提取的甘草酸苷是最强的护肝药物之一。
具有较强的抗炎保护肝细胞及改善肝功能的作用。
药理实验证明，该类药品可阻止CCl4等毒物所致的血清肝酶升高，明显减轻D-氨基半乳糖对肝脏的病理损害，改善受损的肝细胞功能。
并具有类固醇样作用，但无明显皮质激素的不良反应。
可通过控制炎症因子和免疫性因子而发挥抗炎作用。
具有刺激单核、巨噬细胞系统、诱生干扰素γ并增强自然杀伤细胞活性，从而发挥免疫调节功能。
还可抗过敏、抑制钙离子内流等作用。
2.多烯磷脂酰胆碱可进入肝细胞，并以完整的分子与肝细胞膜及细胞器膜相结合，增加膜的完整性、稳定性和流动性，使受损肝功能和酶活性恢复正常，调节肝脏的能量代谢，促进肝细胞的再生，并且将中性脂肪和胆固醇转化成容易代谢的形式。
还有减少氧应激与脂质过氧化，抑制肝细胞凋亡，降低炎症反应和抑制肝星状细胞活化、防治肝纤维化等功能，从多个方面保护肝细胞免受损害。
可用于各种急慢性肝病如病毒性肝炎、酒精性肝病、脂肪肝的治疗，该药可用于妊娠妇女。
3.还原型谷胱甘肽参与体内三羧酸循环及糖代谢，激活多种酶，从而促进糖、脂肪及蛋白质代谢，并能影响细胞的代谢过程，可以减轻组织损伤，促进修复。
此外，GSH 还能保护肝脏的合成，有解毒、灭活激素等功能，并促进胆酸代谢，有利于消化道吸收脂肪及脂溶性维生素。
适时补充外源性GSH可以预防、减轻、终止组织细胞的损伤，改变病理生理过程。
GSH应用于各种肝病的辅助治疗，有助于损伤肝细胞的功能恢复，临床上甚少见其不良反应，为耐受性甚佳的用药品种。
动物实验未见生殖毒性反应，对孕妇影响尚不明确。
4.N-乙酰半胱氨酸能刺激GSH合成，促进解毒以及对氧自由基反应的直接作用，维持细胞内膜性结构的稳定，提高细胞内GSH的生物合成。
促进收缩的微循环血管扩张，有效增加血液对组织氧输送和释放，纠正组织缺氧，防止细胞进一步坏死。
N-乙酰半胱氨酸能保护GSH缺失时的肝损伤，而且能维护缺血再灌注损伤时肝脏的完整性。
水飞蓟素抑制单核细胞来源的巨噬细胞肝脏浸润抗小鼠肝纤维
化作用
研究背景肝纤维化是由多种慢性肝病引起的肝脏炎症和修复失调所导致的,如病毒感染、毒物损伤、代谢紊乱和酒精滥用等,其特征是细胞外基质(extracellular matrix.ECM)过度沉积。
肝脏中的纤维沉积,尤其是I型胶原,
可以保护肝细胞免受各种毒性刺激。
然而,过度的纤维沉积和调节失调会导致肝脏结构破坏、肝功能衰竭和肝硬化。
到目前为止,临床上还没有有效的治疗肝纤维化的药物。
为寻找更好的治疗靶点,近年来对肝纤维化的病理生理机制进行了深入研究。
大量的研究表明,固有免疫,特别是巨噬细胞在肝纤维化中起着关键作用。
肝巨噬细胞可通过多种途径促进肝纤维化,如释放促炎症因子,如肿瘤坏死
因子(TNF)-α、白细胞介素-1β和白细胞介素-6,诱导肝细胞坏死,促纤维化细胞因子,如转化生长因子(TGF)-β1直接激活肝星状细胞(HSC)。
肝脏中巨噬细胞的来源主要有两种:一种是来源于胚胎祖细胞的存活时间长、自我更新的常驻库弗细胞(KF)。
在稳定状态下,肝脏中巨噬细胞数量的平衡主要依赖于KFs细胞的自我更新和增殖。
另一种是在病理状态下从骨髓和外周血中迁移而来的单核细胞。
肝脏损伤后,外周血中的单核细胞大量趋化进入肝脏,并被活化成为巨噬细胞,释放促炎症因子和促纤维化因子,加剧了肝损伤和纤维化。
这些发现表明抑制单核细胞浸润可能是治疗肝纤维化的一个新靶点。
进一步的研究发现,单核细胞主要根据细胞表面分子Ly6C分为两大亚群:经典单核细胞(Ly6Chi单核细胞)和非经典单核细胞(Ly6C]o单核细胞)。
经典的单
核细胞表达高水平的CCR2和Ly6C,并表达低水平的CX3CR1,具有促炎症和促纤维化作用。
而非经典的单核细胞表达高水平的CX3CR1和低水平的CCR2和Ly6C,具有抗炎和抗纤维化作用。
Ly6Chi单核细胞高表达的CCR2受体可与急慢性肝病时升高的趋化蛋白1(MCP-1)结合,导致Ly6Chi单核细胞向肝脏的趋化。
与野生小鼠相比,MCP-1-/-和CCR2-/-小鼠在毒性(四氯化碳,CCL4)和代谢(methionine choline-deficient)两种肝纤维化模型中显示较少的肝纤维化。
药理抑制MCP-1的小鼠也出现类似现象。
因此,通过MCP-1/CCR2轴减少单核细胞浸润已成为肝纤维化治疗的重要靶点。
水飞蓟是菊科药用植物。
水飞蓟素是一种含有水飞蓟全部药用成分的化合物,主要含有水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁和水飞蓟亭。
水飞蓟素作为一种传统的保护肝的药物,具有特殊的疗效和极低的毒性,广泛应用于肝病的治疗。
许多临床和动物研究已经证实水飞蓟素具有保护肝细胞和抗肝纤维化的作用,但潜在机制仍然模糊不清。
因此,本研究旨在研究水飞蓟素是否可以通过抑制Ly6Chi单核细胞的浸润而减轻四氯化碳诱导的肝纤维化。
以此来揭示水飞蓟素的保肝和抗肝纤维化的作用机理,为临床上更好的应用水飞蓟素提供充足的理论支持,且为今后治疗肝纤维化疾病提供新方向。
研究方法本论文分为理论研究和实验研究两部分。
第一部分总结了中西医对肝纤维化的研究进展。
第二部分研究了水飞蓟素抗纤维化的作用机制。
在理论研究部分,完整的叙述了中医先贤对肝纤维化病因病机、辨证和治疗
的观点。
并总结了现代医学,特别是基础研究在肝纤维化的发病机制、病理生理及药物研究进展,为下一步实验研究提供理论基础。
在水飞蓟素抗纤维化实验方面,利用CCl4反复腹腔注射建立小鼠肝纤维化模型,探讨水飞蓟素减少Ly6Chi单核细胞肝脏浸润抑制小鼠肝纤维化作用。
具体方法是用CCl4反复腹腔注射小鼠(C57BL/6),需连续4周,肝纤维化模型建立后,予水飞蓟素灌胃给药。
水飞蓟素的保肝降酶作用主要是通过检测各组小鼠血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶的水平,且通过肝组织病理HE染色法对疗效进行评定。
水飞蓟素的抗肝纤维化功效则是通过Masson染色、Collagen-I免疫组化来评价;除此之外,利用α-SMA免疫组化观察各组小鼠肝星状细胞活化的差异。
利用细胞表面分子CD45、F4/80、CD11b来观察各组小鼠肝脏中白细胞、巨噬细胞和单核细胞浸润的差异。
通过流式细胞术检测单核细胞不同亚类在小鼠肝组织中浸润的区别,同时检测T细胞、DC细胞、NK细胞及B细胞在肝纤维化时在小鼠肝脏浸润水平。
Realtime PCR技术对小鼠肝组织中表达的TNF-α、TGF-β1 mRNA、1L-6及IL-1β水平进行检测。
此外选择免疫组化、RealtimePCR法对小鼠肝组织内表达的MCP-1水平进行检测。
研究结果1.水飞蓟素缓解CCl4注射引起的肝脏炎症和肝纤维化CCl4腹腔反复注射四周后,与空白对照组相比,CCl4组小鼠血清中ALT、AST的水平显著上升。
同时小鼠肝组织病理通过HE染色发现,CCl4组小鼠肝细胞大量变性、凋亡,肝小叶正常结构破坏,见许多白细胞浸润;水飞蓟素组小鼠血清中ALT、AST较CCl4组明显降低,HE染色示肝细胞坏死、肝小叶的破坏明显减少,白细胞浸润亦
Masson染色法结果表明:相比于正常组,CCl4组小鼠肝组织具有更高水平的胶原纤维沉积量,小叶纤维间隔及假小叶形成;Collagen-I免疫组化显示CCl4组小鼠肝组织内Ⅰ型胶原沉积明显增加。
α-SMA免疫组化显示CCl4组小鼠肝脏中肝星状细胞(HSC)活化明显增加。
而水飞蓟素治疗后,小鼠肝组织内的Masson染色和Collagen-I免疫组化明显减少,提示水飞蓟素可以减轻CC14注射引起肝纤维化。
这可能是水飞蓟素抑制HSC的活化来减少胶原的分泌的结果。
2.水飞蓟素抑制Ly6Chi单核细胞浸润及单核细胞相关的促炎和促纤维化细胞因子分泌通过CD45、F4/80、CD11b免疫组化,可以观察到与正常组小鼠相比,CCl4组小鼠肝脏中浸润的CD45+、F4/80+、CD11b+细胞明显增加,提示小鼠肝纤维化期肝脏中白细胞、巨噬细胞和单核细胞数量明显增加。
而水飞蓟素组中CD45+、F4/80+、CD11b+细胞浸润明显减少,提示水飞蓟素可以减少肝纤维化期小鼠肝脏中白细胞、巨噬细胞和单核细胞的浸润。
通过流式细胞术,我们进一步探索了水飞蓟素对单核细胞的不同亚群和其他种类白细胞的在肝纤维化期浸润的作用。
结果发现水飞蓟素可以明显减少肝纤维化期升高的Ly6Chi单核细胞浸润,但对Ly6Clo单核细胞无明显作用,也对其他白细胞亚群如B细胞、T细胞、DC细胞和NK细胞无明显作用。
这些研究结果提示水飞蓟素可能主要是通过影响Ly6Chi单核细胞发挥抗炎抗纤维化作用。
利用PCR检测了 CCl4注射4周后单核细胞相关的促炎和促纤维化的细胞因子变化,结果显示CCl4组小鼠肝脏中IL-1β、TNF-α、IL-6mRNA表达较空白组明显增高,而水飞蓟素灌胃后可以明显降低肝组织内TNF-αmRNA表
与空白组对比,模型组小鼠肝组织内促纤维化细胞因子TGF-β1 mRNA水平较明显增高,而予以水飞蓟素干预后TGF-β1 mRNA表达明显降低。
3.水飞蓟素抑制单核细胞趋化因子分泌通过RT-PCR和免疫组化进一步检测了各组小鼠肝组织内单核细胞趋化因子的的表达量,研究结果表明:相比于对照组,模型组小鼠肝组织内能够表达更高水平的MCP-1 mRNA,而水飞蓟素治疗后的小鼠肝组织内的MCP-1 mRNA表达水平较模型组明显减低,但仍高于空白对照组。
小鼠肝组织MCP-1免疫组化显示MCP-1蛋白表达和mRNA表达趋势一致。
而三组小鼠单核细胞趋化因子的变化趋势与各组小鼠单核细胞浸润趋势一致。
研究结论水飞蓟素具有保肝和抗肝纤维化的作用,但其作用机制却知之甚少。
近年来,对Ly6Chi单核细胞在肝纤维化中的作用已被证实。
因此,本研究旨在探讨水飞蓟素能通过减少Ly6Chi单核细胞浸润减轻肝纤
维化。
在腹腔注射四氯化碳的小鼠肝纤维化模型中,肝脏组织学和病理学分析显示水飞蓟素可显著减轻四氯化碳所致的小鼠肝纤维化和炎症反应,并且水飞蓟素灌胃小鼠表现出Ly6Chi单核细胞浸润较少,而四氯化碳组与水飞蓟素组其他白
细胞亚群无显著性差异。
同时,进一步研究发现,水飞蓟素能显著降低CCl4诱导的肿瘤坏死因子(TNF)-α/转化生长因子(TGF)-β1和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达增加,
减少肝内Ly6Chi单核细胞数量。
总之,我们的研究表明水飞蓟素具有抗肝纤维化的作用,水飞蓟素可能通过抑制MCP-1表达进而抑制Ly6Chi单核细胞肝脏浸润,减少促炎及促纤维化因子的分泌,发挥抗肝脏炎症和纤维化的作用。
