ELISA原理示意图详解(1)
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ELISA基本原理和方法课件
ELISA应用领域和案例
医学领域
• 肿瘤标志物检测 • 感染病及免疫状态检测
食品领域
环境领域
• 动物和植物源性污染物检测 • 农药残留等检测
• 有毒物质或污染物检测 • 水质和空气质量检测
ELISA常见问题
Q：为什么ELISA的专一性很高？
A：ELISA利用特异性抗体来检测特定的生物分子， 因此具有高度的专一性和灵敏度。
数据处理
数据处理需要使用软件进行标准 曲线拟合和未知样品度计算， 以获得可靠的实验结果。
ELISA优缺点与发展方向
1 优点
灵敏度高、特异性强、多 样性和可靠性好、适用范 围广。
2 缺点
容易受到技术和环境因素 的影响，需要严格操作和 质量控制。
3 发展方向
ELISA在新型技术、新型仪 器和新型试剂的推广应用 方面有很大的发展潜力， 如基于CRISPR-Cas9技术的 特异性检测方法。
Q：ELISA的数据分析是什么？
A：ELISA的数据分析是标准曲线的绘制和未知样 品浓度的计算，其中包括线性回归、拐点法、 ABA法等。
Q：ELISA与其他免疫分析方法的比较？
A：ELISA具有广泛的应用范围、快速的检测时间、 低成本和高灵敏度等优点，但同时也存在一些 限制和缺点。
Q：ELISA试剂盒的选择？
2
检测过程
检测过程需要选择合适的ELISA试剂盒和标准曲线，以获得准确的测定结果。
3
数据处理
数据处理包括标准曲线的绘制和未知样品浓度的计算，需要注意统计学方法和误 差分析。
ELISA检测过程详解
前处理
前处理步骤包括样品的收集、稀 释、净化等，需要遵循标准化的 程序和实验操作规范。
ELISA完整详解
ELISA完整详解(一)原理ELISA是以免疫学反应为基础，将抗原、牽9体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。
由于抗原、抗体的反应在一种固相载体──聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。
在实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。
即:用于检测抗体的间接法(图a)、用于检测抗原的双抗体夹心法(图b)以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。
比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
(二)操作步骤方法一用于检测未知抗原的双抗体夹心法:1.包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。
在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。
次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。
(简称洗涤，下同)。
2.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。
然后洗涤。
(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。
3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。
37℃孵育0.5～1小时，洗涤。
4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。
5.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。
也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于4 50nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D 值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
方法二用于检测未知抗体的间接法：用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。
ELISA原理与应用-很详细PPT课件
它具有高灵敏度、高特异性和可定量等优点，广泛应用于生物医学研究、临床诊 断、食品安全等领域。
ELISA的原理
酶联免疫吸附测定的基本原理是抗原 -抗体反应，即利用抗原与抗体之间 的特异性结合，实现对目标分子的检 测。
随后加入酶标记的抗体或抗原，与固 相载体上的抗原或抗体发生特异性结 合，形成酶标记的抗原-抗体复合物。
Elisa技术简介
简要介绍Elisa技术的原理、特点、 分类和应用范围，让读者对Elisa技 术有一个初步的了解。
结合图表和图片，形象生动地展示 Elisa技术的操作流程和实验设计，便 于读者理解和记忆。
02
Elisa原理
酶联免疫吸附测定（ELISA）的定义
酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种基于抗原-抗体反应的检测技术，通过酶标记的 方法，将抗原或抗体结合到固相载体上，实现对目标分子的定量或定性检测。
标准化问题
不同实验室间Elisa检测结果 的标准化问题尚未完全解决，
导致结果可比性不高。
对操作人员要求高
虽然Elisa技术操作简便，但 对操作人员的专业知识和技能
要求较高。
06
Elisa技术的发展趋势和未来展望
技术创新和改进
自动化技术
提高检测的自动化程度，减少人 工操作，提高检测效率。
纳米技术
利用纳米材料提高检测的灵敏度 和特异性，实现更精确的检测。
食品安全检测
食品中微生物检测
检测食品中的细菌、病毒和寄生虫等微生物，确保食品的安全性。
食品中农药残留检测
检测食品中农药残留量，控制食品中的农药污染。
食品添加剂检测
检测食品中的添加剂种类和含量，保证食品的质量和安全。
环境监测
水质监测
ELISA的原理
酶联免疫吸附测定的基本原理是抗原 -抗体反应，即利用抗原与抗体之间 的特异性结合，实现对目标分子的检 测。
随后加入酶标记的抗体或抗原，与固 相载体上的抗原或抗体发生特异性结 合，形成酶标记的抗原-抗体复合物。
Elisa技术简介
简要介绍Elisa技术的原理、特点、 分类和应用范围，让读者对Elisa技 术有一个初步的了解。
结合图表和图片，形象生动地展示 Elisa技术的操作流程和实验设计，便 于读者理解和记忆。
02
Elisa原理
酶联免疫吸附测定（ELISA）的定义
酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种基于抗原-抗体反应的检测技术，通过酶标记的 方法，将抗原或抗体结合到固相载体上，实现对目标分子的定量或定性检测。
标准化问题
不同实验室间Elisa检测结果 的标准化问题尚未完全解决，
导致结果可比性不高。
对操作人员要求高
虽然Elisa技术操作简便，但 对操作人员的专业知识和技能
要求较高。
06
Elisa技术的发展趋势和未来展望
技术创新和改进
自动化技术
提高检测的自动化程度，减少人 工操作，提高检测效率。
纳米技术
利用纳米材料提高检测的灵敏度 和特异性，实现更精确的检测。
食品安全检测
食品中微生物检测
检测食品中的细菌、病毒和寄生虫等微生物，确保食品的安全性。
食品中农药残留检测
检测食品中农药残留量，控制食品中的农药污染。
食品添加剂检测
检测食品中的添加剂种类和含量，保证食品的质量和安全。
环境监测
水质监测
elisa检测方法的原理（酶联免疫吸附试验）
elisa检测方法的原理（酶联免疫吸附试验）【实验原理】酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）的基本原理是：由于抗原、抗体的反应在一种固相载体——聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去游离的反应物，从而保证实验结果的特异性与稳定性，且最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。
由于酶的催化效率很高，从而使该测定方法具有高敏感度。
具体的方法较多，有用于检测抗体的间接法（图8-1）、用于检测抗原的双抗体夹心法（图8-2）以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。
比较常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
图8-1 ELISA间接法图8-2 ELISA双抗体夹心法【材料与仪器】1. 包被缓冲液（pH9.6的0.05mol／L碳酸盐缓冲液）、洗涤缓冲液（pH7.4的0.15mol／LPBS）、底物缓冲液（pH5.0柠檬酸－磷酸氢二钠）、终止液2mol／LH2SO4、抗原、抗体及酶标记抗体、正常人血清和阳性对照血清、TMB。
2. 聚苯乙烯塑料板（简称酶标板）40孔或96孔、ELISA检测仪、50μl、100μl微量加样器、塑料滴头、小毛巾、洗涤瓶、小烧杯、玻璃棒、试管、吸管、量筒等。
3.4℃冰箱、37℃孵育箱。
【实验方法】一、ELISA间接法间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为：利用酶标记的抗抗体检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。
1. 包被固相抗原：用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。
次日弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3min，除去未结合的抗原及杂质。
2.加待检标本：加一定稀释度的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被的反应孔中，置37℃孵育1h，用洗涤缓冲液洗3次，每次3min，除去未结合的抗体及杂质。
ELISA实验 ppt课件
1.4 免疫测定在临床检验中的应用
由于各种抗原成份，包括小分子的半抗原，均可用以制备 特异性的抗血清或单克隆抗体，利用此抗体作为试剂就可 检测标本中相应的抗原，因此免疫测定的应用范围极广。
2 ELISA的类型
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方 法中有三个必要的试剂： （1）固相的抗原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent ）； （2）酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）； （3）酶反应的底物。
4 对照设定
阳性对照品(positive control)和阴性对照品(negative control)是检验试验有效性的控制品，同时也作为判断结果 的对照。
阳性对照品的基本组成应尽量与检测标本的组成相一致，多以含 蛋白保护剂的缓冲液为基质。
加入的量应与试剂的敏感度相称； 在测定中得到的吸光值与受检标本吸光值比较，可以估计标本物 质的量。
1.1.2 特异性
抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之 间。化学结构和空间构型互补关系，具有高度的特异性。
测定某一特定的物质，而不需先分离待检物。
1.1.3 最适比例
1.1.4 敏感性
化学比色法的敏感度为mg/ml水平 酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml 免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿 标记的免疫敏感度可提高数千倍，达ng/ml水平 例如，HBsAg，其敏感度可达0.1ng/ml。
ELISA的试剂准备A
固相载体 聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋 白质抗原吸附其上后仍保留原来的免疫学活性。
聚氯乙烯。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯乙烯高，但 空白值也略高。
ELISA的原理PPT课件
➢ 竞争法（Competitive ELISA) ：
• 将已知抗体或抗原吸附于固相载体，酶标记抗原或抗体
• 检测液相me-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)
-
7
酶联免疫吸附试验 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)
-
15
试剂的准备 1.放冰箱内保存的试剂、在使用前应先恢复到室温。 2.仔细检查试剂各组分是否变质。 3.保存试剂的冰箱应定期检查其贮存温度（正常为28℃），并尽量避免冰箱频繁开关。 4.试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 5. ELISA 中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应 为新鲜的和高质量的。
2.分类：
✓ 放射免疫测定法：131I，32P
✓ 免疫荧光技术：FITC异硫氰酸荧光素，PE藻红蛋白
✓ 免疫酶测定法：HRP辣根过氧化物酶，AP碱性磷酸酶
-
4
免疫酶测定法
(Enzyme Immuno Assay,EIA)
• 用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。
– 辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶(AP)
-
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加样:
在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底
物。
1． 严格按照说明书要求，按规定的量和顺序进行。
2． 使用的微量加样器应注意保养并定期校正。
3． 加样前应使溶液充分混匀，并将液体加在孔底，避免加在孔壁上部，注
意不可出现气泡。加样前要看移液器的液面是否平齐。
4． 加样时避免样本溅出，如有样本溅出孔外时，应用吸水纸轻轻拭干，并
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14
标本的采取和保存
（3）冰冻保存的标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。
ELISA原理示意图详解ppt课件
将特异性抗体与固相载体结合 加入待测抗原与抗体结合
洗涤去除未结合的抗原
双抗体夹心法ELISA原理示意图
01
加入酶标记的二抗与另 一特异性抗体结合，形 成双抗体夹心结构
02
洗涤去除未结合的酶标 二抗
03
加入底物，酶催化底物 生成有色产物
04
通过比色或分光光度法 测定吸光度，计算抗原 含量
04 ELISA实验数据 分析与解读
发展历程
自1971年Engvall和Perlmann首次 报道以来，ELISA技术得到了迅速 发展和广泛应用。
免疫学基础与抗原抗体反应
免疫学基础
免疫系统能够识别和清除外来抗原，维持机体内环境稳定。
抗原抗体反应
抗原与抗体特异性结合形成免疫复合物，引发一系列免疫反应。
ELISA技术分类及应用领域
技术分类
靠性。
数据分析策略及软件工具介绍
描述性统计分析
方差分析（ANOVA）
对数据进行初步的描述性统计分析，如计算 平均值、标准差、变异系数等，以了解数据 的分布和离散程度。
用于比较不同组别之间的差异显著性，如比 较不同浓度标准品或不同处理组之间的吸光 度值差异。
回归分析
软件工具
通过建立数学模型，探究自变量（如标准品 浓度）和因变量（如吸光度值）之间的线性 或非线性关系。
ELISA原理示意图详解ppt 课件
目录
• ELISA基本原理与概述 • ELISA实验步骤与操作规范 • ELISA原理示意图详解 • ELISA实验数据分析与解读 • ELISA技术应用案例分享 • ELISA技术挑战与发展趋势
01 ELISA基本原理 与概述
ELISA定义及发展历程
定义
洗涤去除未结合的抗原
双抗体夹心法ELISA原理示意图
01
加入酶标记的二抗与另 一特异性抗体结合，形 成双抗体夹心结构
02
洗涤去除未结合的酶标 二抗
03
加入底物，酶催化底物 生成有色产物
04
通过比色或分光光度法 测定吸光度，计算抗原 含量
04 ELISA实验数据 分析与解读
发展历程
自1971年Engvall和Perlmann首次 报道以来，ELISA技术得到了迅速 发展和广泛应用。
免疫学基础与抗原抗体反应
免疫学基础
免疫系统能够识别和清除外来抗原，维持机体内环境稳定。
抗原抗体反应
抗原与抗体特异性结合形成免疫复合物，引发一系列免疫反应。
ELISA技术分类及应用领域
技术分类
靠性。
数据分析策略及软件工具介绍
描述性统计分析
方差分析（ANOVA）
对数据进行初步的描述性统计分析，如计算 平均值、标准差、变异系数等，以了解数据 的分布和离散程度。
用于比较不同组别之间的差异显著性，如比 较不同浓度标准品或不同处理组之间的吸光 度值差异。
回归分析
软件工具
通过建立数学模型，探究自变量（如标准品 浓度）和因变量（如吸光度值）之间的线性 或非线性关系。
ELISA原理示意图详解ppt 课件
目录
• ELISA基本原理与概述 • ELISA实验步骤与操作规范 • ELISA原理示意图详解 • ELISA实验数据分析与解读 • ELISA技术应用案例分享 • ELISA技术挑战与发展趋势
01 ELISA基本原理 与概述
ELISA定义及发展历程
定义
ELISA的原理PPT课件
洗涤
洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验 的成败。
ELSIA洗涤：达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。 清除残留在板孔中游离的物质，以及非特异性地吸附的干扰物 质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的，而在洗涤时又应把这种
非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。
可以说在ELISA操作中，洗涤是最主要的关键技术。
酶联免疫吸附试验
(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)
1.定义 2.分类
用酶标记抗原或抗体检测液体（血液、细胞液） 中未知抗体或抗原的方法。
➢ 间接法（Indirect ELISA）：
• 将已知抗原吸附于固相载体，酶标记二抗 • 检测液相中未知抗体
➢ 双抗体夹心法（Sandwich ELISA)：
Please Criticize And Guide The Shortcomings
讲师：XXXXXX XX年XX月XX日
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体）按不同的步骤与固相载体表面的抗原（或抗体） 起反应。
④用洗涤的方法去除未结合的酶标抗原（或抗体），最 后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成 一定的比例。
⑤加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物。 ⑥产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据
颜色反应的深浅来定性或定量分析。
免疫标记
显色
HRP的底物
DH2+ H2O2 E D+ 2H2O
上式中， DH2为供氢体， H2O2为受氢体。
DH2一般为无色化合物，经酶作用后成为有色的产物。 DH2如：邻苯二胺(OPD)、四甲基联苯胺(TMB)和ABTS 。
ELISA介绍 PPT课件
ELISA 知识简介
原理
类型 试剂 准备
对照 标本 结果
1. ELISA的原理 2. ELISA的类型 3. 试剂准备：免疫吸附剂
结合物 酶底物的准备 4. 对照设定 5. 标本的采取和保存 6. 结果判断
原理
类型
试剂 准备
ELISA （Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay），是 在1971年建立的一种测定方法，称为酶联免疫吸附测定.
原理 2.2.4 竞争法测抗体
类型
试剂 准备
对照 标本 结果
当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化 抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体 和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越 多，结合在固相上的酶标抗体越少，因此阳性反应呈色浅于 阴性反应。
原理 2.2.5 竞争法测抗原
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 可设计出各种不同类型的检测方法。
双抗体夹心法 测抗原
双抗原夹心法 测抗体
间接法
测抗体
竞争法
测抗体、测抗原
捕获包被法 测抗体
原理 2.2.1 双抗体夹心法测抗原
类型
试剂 准备
对照 标本 结果
此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原（二价或二价 以上），例如HBsAg、HBeAg、AFP等。只要获得针对受检 抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合 物而建立此法。但不适用于测定半抗原及小分子单价抗 原，因其不能形成两位点夹心。
结果 的酶标记抗原为其缺点。
原理
类型 试剂 准备
对照 标本
2.2.6 捕获包被法测IgM抗体
IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。间接法ELISA一般仅适用 于检测总抗体或IgG抗体。如果抗原包被的间接法直接测定IgM抗体， 因标本中一般同时存在较高浓度的IgG抗体，后者将竞争结合固相 抗原而使一部分IgM抗体不能结合到固相上。因此如用抗人IgM作 为二抗，间接测定IgM抗体，必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处 理，以除去IgG的干扰。在临床检测中测定IgM抗体时多采用捕获包 被法，用抗人IgM抗体包被固相，以捕获血清标本中的IgM （其中 包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM），然后加入抗 原，此抗原仅与特异性IgM 相结合。
原理
类型 试剂 准备
对照 标本 结果
1. ELISA的原理 2. ELISA的类型 3. 试剂准备：免疫吸附剂
结合物 酶底物的准备 4. 对照设定 5. 标本的采取和保存 6. 结果判断
原理
类型
试剂 准备
ELISA （Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay），是 在1971年建立的一种测定方法，称为酶联免疫吸附测定.
原理 2.2.4 竞争法测抗体
类型
试剂 准备
对照 标本 结果
当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化 抗原时，可用此法检测特异性抗体。其原理为标本中的抗体 和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越 多，结合在固相上的酶标抗体越少，因此阳性反应呈色浅于 阴性反应。
原理 2.2.5 竞争法测抗原
ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。 可设计出各种不同类型的检测方法。
双抗体夹心法 测抗原
双抗原夹心法 测抗体
间接法
测抗体
竞争法
测抗体、测抗原
捕获包被法 测抗体
原理 2.2.1 双抗体夹心法测抗原
类型
试剂 准备
对照 标本 结果
此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原（二价或二价 以上），例如HBsAg、HBeAg、AFP等。只要获得针对受检 抗原的异性抗体，就可用于包被固相载体和制备酶结合 物而建立此法。但不适用于测定半抗原及小分子单价抗 原，因其不能形成两位点夹心。
结果 的酶标记抗原为其缺点。
原理
类型 试剂 准备
对照 标本
2.2.6 捕获包被法测IgM抗体
IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。间接法ELISA一般仅适用 于检测总抗体或IgG抗体。如果抗原包被的间接法直接测定IgM抗体， 因标本中一般同时存在较高浓度的IgG抗体，后者将竞争结合固相 抗原而使一部分IgM抗体不能结合到固相上。因此如用抗人IgM作 为二抗，间接测定IgM抗体，必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处 理，以除去IgG的干扰。在临床检测中测定IgM抗体时多采用捕获包 被法，用抗人IgM抗体包被固相，以捕获血清标本中的IgM （其中 包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM），然后加入抗 原，此抗原仅与特异性IgM 相结合。
ELISA原理和分类(附图解)
一、ELISＡ旳原理ELIＳA旳基础是抗原或抗体旳固相化及抗原或抗体旳酶标记。
结合在固相载体表面旳抗原或抗体仍保持其免疫学活性, 酶标记旳抗原或抗体既保存其免疫学活性, 又保存酶旳活性。
在测定期,受检标本(测定其中旳抗体或抗原）与固相载体表面旳抗原或抗体起反映。
用洗涤旳措施使固相载体上形成旳抗原抗体复合物与液体中旳其他物质分开。
再加入酶标记旳抗原或抗体, 也通过反映而结合在固相载体上。
此时固相上旳酶量与标本中受检物质旳量呈一定旳比例。
加入酶反映旳底物后,底物被酶催化成为有色产物, 产物旳量与标本中受检物质旳量直接有关,故可根据呈色旳深浅进行定性或定量分析。
由于酶旳催化效率很高,间接地放大了免疫反映旳成果,使测定措施达到很高旳敏感度。
二、EＬISA旳类型ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。
在这种测定措施中有三个必要旳试剂:(1)固相旳抗原或抗体,即＂免疫吸附剂＂（immunoｓorbｅnｔ)；（2)酶标记旳抗原或抗体, 称为“酶联物”、“结合物”（conｊugate）；（3)酶反映旳底物。
根据试剂旳来源和标本旳状况以及检测旳具体条件,可设计出多种不同类型旳检测措施。
用于临床检查旳ELＩS Ａ重要有如下几种类型:（一）双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用旳措施,操作环节如下:(1）将特异性抗体与固相载体联结,形成固相抗体。
洗涤除去未结合旳抗体及杂质。
（2) 加受检标本,保温反映。
标本中旳抗原与固相抗体结合,形成固相抗原抗体复合物。
洗涤除去其他未结合物质。
(3) 加酶标抗体,保温反映。
固相免疫复合物上旳抗原与酶标抗体结合。
彻底洗涤未结合旳酶标抗体。
此时固相载体上带有旳酶量与标本中受检抗原旳量有关。
(4) 加底物显色。
固相上旳酶催化底物成为有色产物。
通过比色,测知标本中抗原旳量。
在临床检查中, 此法合用于检查多种蛋白质等大分子抗原, 例如HBｓＡｇ、HBeAg、ＡFＰ、ｈＣG等。
只要获得针对受检抗原旳异性抗体, 就可用于包被固相载体和制备酶结合物而建立此法。