2019版高考生物一轮复习生物技术实践导学案35无菌操作技术苏教版20

第三单元细胞的能量供应和利用
第一讲发酵食品加工的基本方法
(2)据制作果酒和果醋的发酵装置填
空：
①装置中a为充气口，用于向装置内通
气；b为排气口，用于排出
料口，用于取样检测。

(2)判断正误：
①制作腐乳的菌种只有毛霉(×) ②腐乳制作主要利用了毛霉等微生物产生的蛋白酶和脂肪酶(√)
(2)实验流程及影响因素：
命题点1 1．(2017·南通三模)下列有关果酒、果醋、腐乳制作的叙述，正确的是( ) A ．制作果酒、果醋的菌种属于真核生物，制作腐乳的菌种属于原核生物 B ．制作果酒、腐乳在无氧条件下进行，制作果醋需在有氧条件下进行 C ．制作果酒、果醋主要利用的是胞内酶，制作腐乳主要利用的是胞外酶 D ．制作果酒、果醋的过程需保持菌种活性，制作腐乳的过程不需要。

第1讲无菌操作技术[考纲展示] 1.微生物的分离和培养 2.某种微生物数量的测定 3.培养基对微生物的选择作用考点一| 微生物的分离和培养1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能——灭菌①分类：实验室常用高温处理达到灭菌效果，包括干热灭菌和湿热灭菌。

②作用：微生物分离和培养的基础。

③关键：防止外来杂菌的入侵。

(2)配制培养基①培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养物质。

②分类：按化学性质的不同分为天然培养基和合成培养基。

(3)接种微生物①接种：指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。

②接种方法和常用工具(连线)接种方法常用工具Ⅰ.涂布平板接种a．接种针Ⅱ.穿刺接种 b．接种环Ⅲ.斜面接种 c．玻璃涂布器Ⅳ.平板划线接种答案：Ⅰ－c Ⅱ－a Ⅲ－b Ⅳ－b2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。

(2)斜面接种和培养大肠杆菌①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。

②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37_℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。

(3)平板划线分离和培养大肠杆菌①平板的作用：培养、分离细菌等微生物。

②平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。

[思考回答]1．微生物接种的核心是什么？提示：防止杂菌污染，保证培养物的纯度。

2．如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析接种的具体方法。

(1)获得图A和图B效果的接种方法分别是什么？提示：图A效果是稀释涂布平板法，图B效果是平板划线法。

(2)某同学在用A方法纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是什么？为了防止杂菌污染，有同学建议加入抗生素，你觉得可以吗？并说明理由。

1．涵盖范围本单元包括选修1全部内容——无菌操作技术实践、发酵技术实践、酶的应用技术实践和生物化学与分子生物技术实践。

2．考查内容及形式(1)微生物的培养与应用多以简答题形式考查。

(2)酶的应用，常与必修1中酶的本质、特性等知识有机结合考查。

(3)植物的组织培养技术常与植物有效成分提取相结合考查。

(4)发酵技术实践应用多以简答题形式考查。

(5)酶的应用、生物化学与分子生物学技术多以选择题形式考查。

3．复习指导(1)复习线索①以转基因——微生物培养——酶生产——酶应用为线索，系统复习微生物的分离与培养、酶的应用技术实践。

②以技术手段、技术流程为主线，复习发酵、组织培养、有效成分及DNA、蛋白质等有关知识。

(2)复习方法①列表比较法——DNA、蛋白质的分离。

②实践联系——发酵技术、植物有效成分提取技术。

③实验联系——植物组织培养、微生物培养实验过程。

第40讲无菌操作技术实践[考纲要求] 1.微生物的分离和培养。

2.某种微生物数量的测定。

3.培养基对微生物的选择利用。

4.植物的组织培养。

考点一微生物培养基的配制、无菌操作和接种技术[重要程度：★★☆☆☆]1．培养基的定义及分类(1)概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。

(2)营养成分：碳源、氮源、水、无机盐等。

(3)分类：按所含化学成分，培养基可分为天然培养基和固体培养基。

2．无菌操作与接种技术(1)灭菌和消毒①灭菌是指采用强烈的物理学或化学方法使物体内外所有的微生物永远丧失生长和繁殖能力的方法。

②消毒：用较为温和的物理学方法或化学方法杀灭物体上绝大多数微生物的方法。

(2)灭菌的方法：干热灭菌或湿热灭菌(如高压蒸汽灭菌等)。

(3)无菌操作——微生物接种技术的关键①培养基、试管、培养皿、接种器械在接种前都需要灭菌。

②操作人员及操作环境要求消毒。

(4)3．培养基的配制(1)配制原则：为所培养微生物的生长和繁殖或积累代谢产物提供所需的营养基质。

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第一讲无菌操作技术实践［课时作业］单独成册1．微生物强化采油（MEOR）是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度，降低石油粘度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术.以下是人们筛选、纯化和培养该类微生物的实验操作。

请回答下列问题:(1）土壤是微生物的大本营，该类微生物应取自__________的土壤。

(2）筛选和纯化该类微生物时，除考虑微生物生长所需的营养外,还要考虑微生物生长所需的温度、________以及是否需要O2等。

倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置,其主要原因是____________________________________________。

(3）在平板划线接种时，为保证每次划线都不能有杂菌污染，则每次划线前都要________________，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线__________。

接种后还应密封培养的原因是__________，培养一段时间后在培养基上形成降油圈,此时选取__________就可获得可能的高效菌株。

在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在__________条件下进行。

解析：(1)筛选、纯化降解石油的微生物，应取长期被石油污染的土壤.(2）微生物的培养需要满足微生物生长的营养条件以及温度、pH和气体情况等.平板倒置可防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染。

第34讲微生物的培养和利用考试说明 1.微生物的分离和培养(实验与探究能力)。

2.某种微生物数量的测定(实验与探究能力)。

3.培养基对微生物的选择作用(实验与探究能力)。

4.微生物在其他方面的应用(实验与探究能力)。

点一微生物的实验室培养1.培养基(1)概念:人们按照微生物对的不同需求,配制出供其生长繁殖的。

(2)营养成分:水、、、无机盐四类营养物质,另外还需要满足微生物生长对、特殊营养物质以及的要求。

(3)类型: 培养基含凝固剂, 培养基不含凝固剂。

2.无菌技术(1)目的:获得。

(2)关键:防止的入侵。

(3)无菌技术的主要方法及适用对象(连线)措施操作对象主要方法a消毒b.灭菌Ⅰ.培养基Ⅱ.接种环Ⅲ.操作者双手Ⅳ.培养皿Ⅴ.无菌室Ⅵ.牛奶①灼烧灭菌②干热灭菌③巴氏消毒④紫外线消毒⑤化学消毒⑥高压蒸汽灭菌3.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(1)步骤:计算→→溶化→→倒平板。

(2)倒平板的过程①在火焰旁右手拿锥形瓶,左手。

②右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口迅速通过。

③左手将培养皿打开一条缝隙,右手将培养基倒入培养皿,左手立刻盖上。

④待平板冷却凝固后,将平板放置,使皿盖在下、皿底在上。

4.纯化大肠杆菌(1)原理:在培养基上将细菌稀释或分散成细胞,使其长成单个的菌落,这个菌落就是纯化的细菌菌落。

图11-34-1(2)平板划线法(图11-34-1中):通过接种环在琼脂固体培养基表面的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

(3)稀释涂布平板法(图11-34-1中):将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到的表面,进行培养。

当稀释倍数足够高时,即可获得单个细菌形成的。

5.菌种的保藏(1)对于频繁使用的菌种,可以采用法。

(2)对于需要长期保存的菌种,可以采用法。

1.消毒和灭菌的区别2.两种纯化细菌的方法的比较3.平板划线操作3个易错点(1)灼烧接种环之后,要冷却后再进行接种,以免温度太高杀死菌种。

第39讲无菌操作技术实践[考纲要求] 1.微生物的分离和培养。

2.某种微生物数量的测定。

3.培养基对微生物的选择作用。

考点一微生物的分离和培养1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能①干热灭菌法是指将准备灭菌的物品放在干热灭菌箱内，在160～170 ℃下加热1～2 h以达到灭菌的目的。

②湿热灭菌法常采用高压蒸汽灭菌锅进行，其使用包括加水、装锅、加热排气、保温保压、出锅等步骤。

(2)培养基的配制①培养基的概念：是为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。

②营养组成：一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐等最基本的物质。

此外，根据拟培养的微生物的不同需要，有时还要加入维生素等特殊的营养物质，并要调节培养基中pH使之满足微生物生长的需要。

③种类：天然培养基和合成培养基，前者的主要优点是取材便利、营养丰富、配制简便，缺点是营养成分难以控制、实验结果的重复性较差；后者的优点是化学成分及其含量明确，实验的可重复性好，缺点是配制繁琐、成本较高。

(3)微生物的接种①接种：是指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。

②常用的工具有玻璃涂布器、接种针、接种环等，在涂布平板接种时要用玻璃涂布器，穿刺接种时要用接种针，在斜面接种或在固体培养基平板上进行划线接种时要用接种环。

2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。

(2)斜面接种和培养大肠杆菌①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。

②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37 ℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。

(3)平板划线分离和培养大肠杆菌①平板制作的方法及注意事项a．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。

b．甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。

第1课时发酵工程的培养基与无菌技术课标要求 1.概述培养基的类型及用途。

2.阐明无菌技术的操作方法。

3.概述利用平板划线法和稀释涂布平板法，进行微生物分离和纯化。

考点一发酵工程的培养基培养基(1)概念：主要是指为人工培养微生物等而制备的，适合微生物等生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。

(2)类型①按成分分类培养基种类成分优点缺点用途天然培养基动植物组织或微生物细胞以及它们的提取物或粗消化物取材便利、营养丰富、配制简便营养成分难以控制，实验结果的重复性较差工业化生产合成培养基准确称量的高纯度化学试剂加蒸馏水化学成分明确，实验可重复性好配制过程繁琐，成本较高研究与育种②按物理状态分类培养基种类特点用途液体培养基不含凝固剂，呈液体状态工业生产固体培养基或半固体培养基含凝固剂(如琼脂)，呈固体或半固体状态微生物的分离、鉴定，活菌计数，菌种保藏③按用途分类：基础培养基和特殊培养基特殊培养基种类选择培养基鉴别培养基加富培养基用途将某种或某类微生物从混杂的微生物中分离出来快速分类鉴定不同微生物，也用于分离和筛选产生某种代谢产物的菌种用于培养营养要求比较苛刻的异养微生物。

可增加所需微生物的数量(3)成分成分含义作用来源碳源提供碳元素的物质构成生物体的细胞的物质和一些代谢产物，有些也是异养生物的能源物质无机碳源：CO2、NaHCO3等；有机碳源：糖类、牛肉膏等氮源提供氮元素的物质合成蛋白质、核酸等物质无机氮源：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机氮源：蛋白胨等无机盐为微生物提供除碳、氮之外的各种重要元素，包括大量元素和微量元素为微生物提供无机营养，调节培养基的pH等无机化合物：KH2PO4、K2HPO4、NaCl等水生物体含量最高的无机化合物良好的溶剂，参与化学反应等培养基、代谢产物考向培养基配制及其作用1．(多选)现有两种固体培养基，已知其配制时所加的成分和含量如下表，假设用这两种培养基分别去分离土壤中的两种微生物，甲、乙适合分离的微生物是()成分KH2PO4MgSO4·7H2ONaClCaSO4·2H2OCaCO3葡萄糖纯淀粉甲培养基0.02% 0.02% 0.02% 0.01% 0.5% 0.5% 2% 乙培养基0.02% 0.02% 0.02% 0.01% 0.5% －－A．甲培养基适于分离自养型自生固氮菌B．甲培养基适于分离异养型自生固氮菌C．乙培养基适于分离自养型自生固氮菌D．乙培养基适于分离异养型自生固氮菌答案BC解析甲培养基中含有的葡萄糖和淀粉是有机物，可以作为碳源和能源，适用于异养微生物生长，由此推出该培养基适于分离异养型的自生固氮菌，A错误，B正确；乙培养基中不含有机碳源，不含氮源，可用来分离培养自养型的自生固氮菌，C正确，D错误。

第1讲无菌操作技术考点一| 微生物的分离和培养(对应学生用书第227页)[识记—基础梳理]1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能——灭菌①分类：实验室常用高温处理达到灭菌效果，包括干热灭菌和湿热灭菌。

②作用：微生物分离和培养的基础。

③关键：防止外来杂菌的入侵。

(2)配制培养基①培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养物质。

②分类：按化学性质的不同分为天然培养基和合成培养基。

(3)接种微生物①接种：指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。

②接种方法和常用工具(连线)接种方法常用工具Ⅰ.涂布平板接种 a．接种针Ⅱ.穿刺接种 b．接种环Ⅲ.斜面接种 c．玻璃涂布器Ⅳ.平板划线接种[答案]Ⅰ－c Ⅱ－a Ⅲ－b Ⅳ－b2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。

(2)斜面接种和培养大肠杆菌①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。

②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37_℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。

(3)平板划线分离和培养大肠杆菌①平板的作用：培养、分离细菌等微生物。

②平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。

[理解—深化探究]1．微生物的培养基(1)培养基的成分图一图二(1)图一为倒平板操作过程。

操作时要待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近进行。

温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。

平板冷却凝固后需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。

(2)图二为系列稀释操作。

注意移液管需要经过灭菌。

操作时，试管口和移液管应在离酒精灯火焰1～2 cm处。

4．微生物纯化培养过程结果分析(1)B区域出现了单个菌落，产生每个菌落的最初细菌数目是1。

第35讲生物技术在其他方面的应用考试说明 1.从生物材料中提取某些特定的成分(实验与探究能力)。

2.蛋白质的提取与分离(实验与探究能力)。

3.酶活力测定的一般原理和方法(实验与探究能力)。

4.酶在食品制造和洗涤等方面的应用(实验与探究能力)。

5.制备和应用固相化酶(实验与探究能力)。

考点一植物有效成分的提取1.植物芳香油的提取(1)植物芳香油的主要化学成分是萜类化合物及其衍生物,特点是强,易溶于溶剂。

(2)提取方法: 、压榨和等。

(3)玫瑰精油的提取图11-35-1(4)橘皮精油的提取图11-35-22.胡萝卜素的提取(1)方法: 法。

(2)萃取剂的选择:萃取胡萝卜素的有机溶剂应该具有较高的沸点,能够充分溶解,并且不与水混溶。

(3)影响萃取的因素①主要因素: 和使用量。

②次要因素:原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等。

(4)提取装置的设计①加热方式:采用加热,避免加热。

②防止挥发的装置:安装装置。

(5)实验流程胡萝卜干燥过滤胡萝卜素(6)胡萝卜素的鉴定: 法。

1.植物芳香油提取方法的比较提取蒸馏法压榨法萃取法方法实验原理利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来通过机械加压,压榨出果皮中的芳香油使芳香油溶解在有机溶剂中,蒸发溶剂后就可获得芳香油适用范围适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取适用范围广,要求原料的颗粒要尽可能细小,能充分浸泡在有机溶液中优点简单易行,便于分离生产成本低,易保持原料原有的结构和功能出油率高,易分离局限性水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题分离较为困难,出油率相对较低使用的有机溶剂处理不当会影响芳香油的质量易错提醒用萃取法提取植物有效成分应注意的问题(1)萃取温度和时间都会影响萃取的效果,萃取效率在一定范围内,与萃取温度呈正相关,通常采用加热的方法提高萃取效率。

(2)萃取温度过高会影响植物有效成分的品质,因此萃取时应严格控制温度,适当延长萃取时间。