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第三单元细胞的能量供应和利用
第一讲发酵食品加工的基本方法
(2)据制作果酒和果醋的发酵装置填
空：
①装置中a为充气口，用于向装置内通
气；b为排气口，用于排出
料口，用于取样检测。
(2)判断正误：
①制作腐乳的菌种只有毛霉(×) ②腐乳制作主要利用了毛霉等微生物产生的蛋白酶和脂肪酶(√)
(2)实验流程及影响因素：
命题点1 1．(2017·南通三模)下列有关果酒、果醋、腐乳制作的叙述，正确的是( ) A ．制作果酒、果醋的菌种属于真核生物，制作腐乳的菌种属于原核生物 B ．制作果酒、腐乳在无氧条件下进行，制作果醋需在有氧条件下进行 C ．制作果酒、果醋主要利用的是胞内酶，制作腐乳主要利用的是胞外酶 D ．制作果酒、果醋的过程需保持菌种活性，制作腐乳的过程不需要。
第1讲无菌操作技术[考纲展示] 1.微生物的分离和培养 2.某种微生物数量的测定 3.培养基对微生物的选择作用考点一| 微生物的分离和培养1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能——灭菌①分类：实验室常用高温处理达到灭菌效果，包括干热灭菌和湿热灭菌。
②作用：微生物分离和培养的基础。
③关键：防止外来杂菌的入侵。
(2)配制培养基①培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养物质。
②分类：按化学性质的不同分为天然培养基和合成培养基。
(3)接种微生物①接种：指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
②接种方法和常用工具(连线)接种方法常用工具Ⅰ.涂布平板接种a．接种针Ⅱ.穿刺接种 b．接种环Ⅲ.斜面接种 c．玻璃涂布器Ⅳ.平板划线接种答案：Ⅰ－c Ⅱ－a Ⅲ－b Ⅳ－b2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。
(2)斜面接种和培养大肠杆菌①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。
②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37_℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。
(3)平板划线分离和培养大肠杆菌①平板的作用：培养、分离细菌等微生物。
②平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。
[思考回答]1．微生物接种的核心是什么？提示：防止杂菌污染，保证培养物的纯度。
2．如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请分析接种的具体方法。
(1)获得图A和图B效果的接种方法分别是什么？提示：图A效果是稀释涂布平板法，图B效果是平板划线法。
(2)某同学在用A方法纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是什么？为了防止杂菌污染，有同学建议加入抗生素，你觉得可以吗？并说明理由。
1．涵盖范围本单元包括选修1全部内容——无菌操作技术实践、发酵技术实践、酶的应用技术实践和生物化学与分子生物技术实践。
2．考查内容及形式(1)微生物的培养与应用多以简答题形式考查。
(2)酶的应用，常与必修1中酶的本质、特性等知识有机结合考查。
(3)植物的组织培养技术常与植物有效成分提取相结合考查。
(4)发酵技术实践应用多以简答题形式考查。
(5)酶的应用、生物化学与分子生物学技术多以选择题形式考查。
3．复习指导(1)复习线索①以转基因——微生物培养——酶生产——酶应用为线索，系统复习微生物的分离与培养、酶的应用技术实践。
②以技术手段、技术流程为主线，复习发酵、组织培养、有效成分及DNA、蛋白质等有关知识。
(2)复习方法①列表比较法——DNA、蛋白质的分离。
②实践联系——发酵技术、植物有效成分提取技术。
③实验联系——植物组织培养、微生物培养实验过程。
第40讲无菌操作技术实践[考纲要求] 1.微生物的分离和培养。
2.某种微生物数量的测定。
3.培养基对微生物的选择利用。
4.植物的组织培养。
考点一微生物培养基的配制、无菌操作和接种技术[重要程度：★★☆☆☆]1．培养基的定义及分类(1)概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。
(2)营养成分：碳源、氮源、水、无机盐等。
(3)分类：按所含化学成分，培养基可分为天然培养基和固体培养基。
2．无菌操作与接种技术(1)灭菌和消毒①灭菌是指采用强烈的物理学或化学方法使物体内外所有的微生物永远丧失生长和繁殖能力的方法。
②消毒：用较为温和的物理学方法或化学方法杀灭物体上绝大多数微生物的方法。
(2)灭菌的方法：干热灭菌或湿热灭菌(如高压蒸汽灭菌等)。
(3)无菌操作——微生物接种技术的关键①培养基、试管、培养皿、接种器械在接种前都需要灭菌。
②操作人员及操作环境要求消毒。
(4)3．培养基的配制(1)配制原则：为所培养微生物的生长和繁殖或积累代谢产物提供所需的营养基质。
2019版高考生物一轮复习第十二单元生物技术实践第一讲无菌操作技术实践练习苏教版编辑整理：尊敬的读者朋友们：这里是精品文档编辑中心，本文档内容是由我和我的同事精心编辑整理后发布的，发布之前我们对文中内容进行仔细校对，但是难免会有疏漏的地方，但是任然希望（2019版高考生物一轮复习第十二单元生物技术实践第一讲无菌操作技术实践练习苏教版）的内容能够给您的工作和学习带来便利。
同时也真诚的希望收到您的建议和反馈，这将是我们进步的源泉，前进的动力。
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第一讲无菌操作技术实践［课时作业］单独成册1．微生物强化采油（MEOR）是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度，降低石油粘度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术.以下是人们筛选、纯化和培养该类微生物的实验操作。
请回答下列问题:(1）土壤是微生物的大本营，该类微生物应取自__________的土壤。
(2）筛选和纯化该类微生物时，除考虑微生物生长所需的营养外,还要考虑微生物生长所需的温度、________以及是否需要O2等。
倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置,其主要原因是____________________________________________。
(3）在平板划线接种时，为保证每次划线都不能有杂菌污染，则每次划线前都要________________，平板划线结束后，最后一次划的线不能与第一次划的线__________。
接种后还应密封培养的原因是__________，培养一段时间后在培养基上形成降油圈,此时选取__________就可获得可能的高效菌株。
在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在__________条件下进行。
解析：(1)筛选、纯化降解石油的微生物，应取长期被石油污染的土壤.(2）微生物的培养需要满足微生物生长的营养条件以及温度、pH和气体情况等.平板倒置可防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染。
第34讲微生物的培养和利用考试说明 1.微生物的分离和培养(实验与探究能力)。
2.某种微生物数量的测定(实验与探究能力)。
3.培养基对微生物的选择作用(实验与探究能力)。
4.微生物在其他方面的应用(实验与探究能力)。
点一微生物的实验室培养1.培养基(1)概念:人们按照微生物对的不同需求,配制出供其生长繁殖的。
(2)营养成分:水、、、无机盐四类营养物质,另外还需要满足微生物生长对、特殊营养物质以及的要求。
(3)类型: 培养基含凝固剂, 培养基不含凝固剂。
2.无菌技术(1)目的:获得。
(2)关键:防止的入侵。
(3)无菌技术的主要方法及适用对象(连线)措施操作对象主要方法a消毒b.灭菌Ⅰ.培养基Ⅱ.接种环Ⅲ.操作者双手Ⅳ.培养皿Ⅴ.无菌室Ⅵ.牛奶①灼烧灭菌②干热灭菌③巴氏消毒④紫外线消毒⑤化学消毒⑥高压蒸汽灭菌3.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(1)步骤:计算→→溶化→→倒平板。
(2)倒平板的过程①在火焰旁右手拿锥形瓶,左手。
②右手拿锥形瓶,使锥形瓶的瓶口迅速通过。
③左手将培养皿打开一条缝隙,右手将培养基倒入培养皿,左手立刻盖上。
④待平板冷却凝固后,将平板放置,使皿盖在下、皿底在上。
4.纯化大肠杆菌(1)原理:在培养基上将细菌稀释或分散成细胞,使其长成单个的菌落,这个菌落就是纯化的细菌菌落。
图11-34-1(2)平板划线法(图11-34-1中):通过接种环在琼脂固体培养基表面的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
(3)稀释涂布平板法(图11-34-1中):将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到的表面,进行培养。
当稀释倍数足够高时,即可获得单个细菌形成的。
5.菌种的保藏(1)对于频繁使用的菌种,可以采用法。
(2)对于需要长期保存的菌种,可以采用法。
1.消毒和灭菌的区别2.两种纯化细菌的方法的比较3.平板划线操作3个易错点(1)灼烧接种环之后,要冷却后再进行接种,以免温度太高杀死菌种。
第39讲无菌操作技术实践[考纲要求] 1.微生物的分离和培养。
2.某种微生物数量的测定。
3.培养基对微生物的选择作用。
考点一微生物的分离和培养1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能①干热灭菌法是指将准备灭菌的物品放在干热灭菌箱内，在160～170 ℃下加热1～2 h以达到灭菌的目的。
②湿热灭菌法常采用高压蒸汽灭菌锅进行，其使用包括加水、装锅、加热排气、保温保压、出锅等步骤。
(2)培养基的配制①培养基的概念：是为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。
②营养组成：一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐等最基本的物质。
此外，根据拟培养的微生物的不同需要，有时还要加入维生素等特殊的营养物质，并要调节培养基中pH使之满足微生物生长的需要。
③种类：天然培养基和合成培养基，前者的主要优点是取材便利、营养丰富、配制简便，缺点是营养成分难以控制、实验结果的重复性较差；后者的优点是化学成分及其含量明确，实验的可重复性好，缺点是配制繁琐、成本较高。
(3)微生物的接种①接种：是指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
②常用的工具有玻璃涂布器、接种针、接种环等，在涂布平板接种时要用玻璃涂布器，穿刺接种时要用接种针，在斜面接种或在固体培养基平板上进行划线接种时要用接种环。
2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。
(2)斜面接种和培养大肠杆菌①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。
②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37 ℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。
(3)平板划线分离和培养大肠杆菌①平板制作的方法及注意事项a．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。
b．甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。
第1课时发酵工程的培养基与无菌技术课标要求 1.概述培养基的类型及用途。
2.阐明无菌技术的操作方法。
3.概述利用平板划线法和稀释涂布平板法，进行微生物分离和纯化。
考点一发酵工程的培养基培养基(1)概念：主要是指为人工培养微生物等而制备的，适合微生物等生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。
(2)类型①按成分分类培养基种类成分优点缺点用途天然培养基动植物组织或微生物细胞以及它们的提取物或粗消化物取材便利、营养丰富、配制简便营养成分难以控制，实验结果的重复性较差工业化生产合成培养基准确称量的高纯度化学试剂加蒸馏水化学成分明确，实验可重复性好配制过程繁琐，成本较高研究与育种②按物理状态分类培养基种类特点用途液体培养基不含凝固剂，呈液体状态工业生产固体培养基或半固体培养基含凝固剂(如琼脂)，呈固体或半固体状态微生物的分离、鉴定，活菌计数，菌种保藏③按用途分类：基础培养基和特殊培养基特殊培养基种类选择培养基鉴别培养基加富培养基用途将某种或某类微生物从混杂的微生物中分离出来快速分类鉴定不同微生物，也用于分离和筛选产生某种代谢产物的菌种用于培养营养要求比较苛刻的异养微生物。
可增加所需微生物的数量(3)成分成分含义作用来源碳源提供碳元素的物质构成生物体的细胞的物质和一些代谢产物，有些也是异养生物的能源物质无机碳源：CO2、NaHCO3等；有机碳源：糖类、牛肉膏等氮源提供氮元素的物质合成蛋白质、核酸等物质无机氮源：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机氮源：蛋白胨等无机盐为微生物提供除碳、氮之外的各种重要元素，包括大量元素和微量元素为微生物提供无机营养，调节培养基的pH等无机化合物：KH2PO4、K2HPO4、NaCl等水生物体含量最高的无机化合物良好的溶剂，参与化学反应等培养基、代谢产物考向培养基配制及其作用1．(多选)现有两种固体培养基，已知其配制时所加的成分和含量如下表，假设用这两种培养基分别去分离土壤中的两种微生物，甲、乙适合分离的微生物是()成分KH2PO4MgSO4·7H2ONaClCaSO4·2H2OCaCO3葡萄糖纯淀粉甲培养基0.02% 0.02% 0.02% 0.01% 0.5% 0.5% 2% 乙培养基0.02% 0.02% 0.02% 0.01% 0.5% －－A．甲培养基适于分离自养型自生固氮菌B．甲培养基适于分离异养型自生固氮菌C．乙培养基适于分离自养型自生固氮菌D．乙培养基适于分离异养型自生固氮菌答案BC解析甲培养基中含有的葡萄糖和淀粉是有机物，可以作为碳源和能源，适用于异养微生物生长，由此推出该培养基适于分离异养型的自生固氮菌，A错误，B正确；乙培养基中不含有机碳源，不含氮源，可用来分离培养自养型的自生固氮菌，C正确，D错误。
第1讲无菌操作技术考点一| 微生物的分离和培养(对应学生用书第227页)[识记—基础梳理]1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能——灭菌①分类：实验室常用高温处理达到灭菌效果，包括干热灭菌和湿热灭菌。
②作用：微生物分离和培养的基础。
③关键：防止外来杂菌的入侵。
(2)配制培养基①培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养物质。
②分类：按化学性质的不同分为天然培养基和合成培养基。
(3)接种微生物①接种：指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
②接种方法和常用工具(连线)接种方法常用工具Ⅰ.涂布平板接种 a．接种针Ⅱ.穿刺接种 b．接种环Ⅲ.斜面接种 c．玻璃涂布器Ⅳ.平板划线接种[答案]Ⅰ－c Ⅱ－a Ⅲ－b Ⅳ－b2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。
(2)斜面接种和培养大肠杆菌①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。
②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37_℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。
(3)平板划线分离和培养大肠杆菌①平板的作用：培养、分离细菌等微生物。
②平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。
[理解—深化探究]1．微生物的培养基(1)培养基的成分图一图二(1)图一为倒平板操作过程。
操作时要待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近进行。
温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
平板冷却凝固后需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。
(2)图二为系列稀释操作。
注意移液管需要经过灭菌。
操作时，试管口和移液管应在离酒精灯火焰1～2 cm处。
4．微生物纯化培养过程结果分析(1)B区域出现了单个菌落，产生每个菌落的最初细菌数目是1。
第35讲生物技术在其他方面的应用考试说明 1.从生物材料中提取某些特定的成分(实验与探究能力)。
2.蛋白质的提取与分离(实验与探究能力)。
3.酶活力测定的一般原理和方法(实验与探究能力)。
4.酶在食品制造和洗涤等方面的应用(实验与探究能力)。
5.制备和应用固相化酶(实验与探究能力)。
考点一植物有效成分的提取1.植物芳香油的提取(1)植物芳香油的主要化学成分是萜类化合物及其衍生物,特点是强,易溶于溶剂。
(2)提取方法: 、压榨和等。
(3)玫瑰精油的提取图11-35-1(4)橘皮精油的提取图11-35-22.胡萝卜素的提取(1)方法: 法。
(2)萃取剂的选择:萃取胡萝卜素的有机溶剂应该具有较高的沸点,能够充分溶解,并且不与水混溶。
(3)影响萃取的因素①主要因素: 和使用量。
②次要因素:原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等。
(4)提取装置的设计①加热方式:采用加热,避免加热。
②防止挥发的装置:安装装置。
(5)实验流程胡萝卜干燥过滤胡萝卜素(6)胡萝卜素的鉴定: 法。
1.植物芳香油提取方法的比较提取蒸馏法压榨法萃取法方法实验原理利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来通过机械加压,压榨出果皮中的芳香油使芳香油溶解在有机溶剂中,蒸发溶剂后就可获得芳香油适用范围适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取适用范围广,要求原料的颗粒要尽可能细小,能充分浸泡在有机溶液中优点简单易行,便于分离生产成本低,易保持原料原有的结构和功能出油率高,易分离局限性水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题分离较为困难,出油率相对较低使用的有机溶剂处理不当会影响芳香油的质量易错提醒用萃取法提取植物有效成分应注意的问题(1)萃取温度和时间都会影响萃取的效果,萃取效率在一定范围内,与萃取温度呈正相关,通常采用加热的方法提高萃取效率。
(2)萃取温度过高会影响植物有效成分的品质,因此萃取时应严格控制温度,适当延长萃取时间。
本套资源目录2019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践第1节微生物的分离和培养学案苏教版选修12019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践第2节分离特定的微生物并测定其数量学案苏教版选修12019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践第3节植物组织培养技术学案苏教版选修12019_2020学年高中生物第1章无菌操作技术实践素能提升课学案苏教版选修1第一节微生物的分离和培养[学习目标] 1.简述高压蒸汽灭菌锅的使用方法及注意事项。
(重点) 2.掌握制备细菌培养基的方法。
(重点) 3.学会利用无菌操作技术接种与培养大肠杆菌。
(难点)知识点一| 培养基及接种操作一、高压蒸汽灭菌锅1．实验室常采用的灭菌方法实验室常利用高温处理达到灭菌效果，包括采用干热灭菌或湿热灭菌等方法。
2．高压蒸汽灭菌锅的使用使用步骤包括：加水―→装锅―→加热排气―→保温保压―→出锅等。
二、配制培养基1．培养基的概念为人工培养微生物而制备的，适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。
2．培养基的类型3．培养基的成分各种培养基的配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等最基本的物质。
三、接种微生物1．接种的概念指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
2．不同接种工具的使用(1)穿刺接种要用接种针。
(2)斜面划线接种或平板划线接种要用到接种环。
(3)涂布平板接种要用到玻璃涂布器。
[合作探讨]探讨1：高压蒸汽灭菌锅是依赖高压灭菌吗？提示：不是，是通过高压来提高湿热的温度灭菌的。
探讨2：在固体培养基中加入的琼脂能为微生物提供营养吗？为什么？提示：不能。
微生物不能分解琼脂。
探讨3：为什么要对培养基、接种环、实验空间、一些液体等进行消毒或灭菌处理？提示：培养某种微生物的目的是获得数量较多的、单一的该种微生物，如果不进行消毒或灭菌，则会出现其他一些杂菌，影响微生物的纯度。
[思维升华]1．消毒与灭菌的区别条件结果常用的方法消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体上绝大多数微生物(包括病原微生物和有害微生物的营养细胞)煮沸消毒法(如100 ℃下5～6min可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢)、巴氏消毒法、化学药剂消毒法灭菌强烈的物理学或化学方法杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子干热灭菌、高压蒸汽灭菌、灼烧灭菌营养物质定义作用主要来源碳源能提供所需碳元素的物质构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO2、NaHCO3等；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等氮源能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白品现黑色，并带有金属光泽)1．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法可分别用于杀灭哪些部位的杂菌( )A．接种针、手、培养基B．高压锅、手、接种针C．培养基、手、接种针D．接种针、手、高压锅C [培养基通常用高压蒸汽灭菌，常用酒精擦拭对手进行消毒，接种环、接种针等用火焰灼烧的方法进行灭菌。
选考部分生物技术实践第1讲传统发酵技术的应用———————突破点(一) 果酒和果醋的制作——(对应学生用书P194)————[基础回顾]1．制作原理类型菌种反应果酒酵母菌阶段1：有氧条件下，酵母菌通过有氧呼吸大量繁殖，其反应式为：C6H12O6＋6O2――→酶6CO2＋6H2O阶段2：无氧条件下，酵母菌通过无氧呼吸产生酒精，其反应式为：C6H12O6――→酶2C2H5OH＋2CO2果醋醋酸菌氧气、糖源充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸，其反应式为：C6H12O6＋2O2――→酶2CH3COOH＋2CO2＋2H2O缺少糖源、氧气充足时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸，其反应式为：C2H5OH＋O2――→酶CH3COOH＋H2O2．实验设计与操作[典题领悟](2016·全国卷Ⅱ)苹果醋是以苹果汁为原料经发酵而成的。
回答下列问题：(1)酵母菌的呼吸代谢途径如图所示。
图中过程①和②是苹果醋生产的第一阶段，在酵母菌细胞的______________中进行，其产物乙醇与________________试剂反应呈现灰绿色，这一反应可用于乙醇的检验；过程③在酵母菌细胞的________________中进行。
与无氧条件相比，在有氧条件下，酵母菌的增殖速度__________。
(2)第二阶段是在醋酸杆菌的作用下将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程，根据醋酸杆菌的呼吸作用类型，该过程需要在____________条件下才能完成。
(3)在生产过程中，第一阶段和第二阶段的发酵温度不同，第一阶段的温度__________(填“低于”或“高于”)第二阶段的。
(4)醋酸杆菌属于__________核生物，其细胞结构中______(填“含有”或“不含有”)线粒体。
解析：(1)图中过程①和②是酵母菌进行无氧呼吸产生乙醇的过程，无氧呼吸的场所是细胞质基质。
乙醇可用酸性重铬酸钾试剂检测，颜色由橙色变为灰绿色。
过程③为有氧呼吸的第二和第三阶段，场所为线粒体。
课时分层集训训(三十六)A组基础达标1．(2018·河北模拟考试)如图为果酒和果醋的制作流程，回答问题：【导学号：41780167】(1)从自然菌样中筛选较理想的醋酸杆菌进行纯化培养，通常采用__________接种方法。
(2)果酒的制作离不开酵母菌，在酵母菌的酒精发酵过程中，通常将温度控制在__________。
由果酒转变成果醋的制作时，需要改变的环境条件是__________和温度控制在__________。
果汁发酵后是否有酒精产生，可用__________来检测，在酸性条件下呈现__________色证明有酒精产生。
(3)若在果汁中含有醋酸菌，在果酒发酵旺盛时，醋酸菌能否将果汁中的糖发酵为醋酸？说明理由。
________________________________________________________________________________________________________。
[解析](1)从自然菌样中筛选较理想的醋酸杆菌进行纯化培养，通常采用平板划线接种方法。
(2)果酒的制作离不开酵母菌，在酵母菌的酒精发酵过程中，通常将温度控制在18～25 ℃，由果酒转变成果醋的制作时，需要改变的环境条件是持续通入氧气并将温度控制在30～35 ℃。
果汁发酵后是否有酒精产生，可用重铬酸钾来检测，在酸性条件下呈现灰绿色证明有酒精产生。
(3)如果果汁中已含有醋酸菌，在果酒发酵旺盛时，醋酸菌不能将果汁中的糖发酵为醋酸，因为果酒发酵是在缺氧环境中进行的，而醋酸菌是嗜氧菌，果酒发酵时的缺氧环境能抑制醋酸菌生长。
[答案](1)平板划线(2)18～25 ℃通入氧气30～35 ℃重铬酸钾灰绿(3)不能。
因为果酒发酵时的缺氧环境能抑制醋酸菌生长，且醋酸菌发酵条件是氧气充足2．(2014·海南高考)已知泡菜中亚硝酸盐含量与泡制时间有关。
为了测定不同泡制天数泡菜中亚硝酸盐的含量，某同学设计了一个实验，实验材料、试剂及用具包括：刻度移液管、比色管、不同浓度的亚硝酸钠标准溶液、亚硝酸盐的显色剂、不同泡制天数的泡菜滤液等。
课时分层集训训 ( 三十五 )( 建议用时： 45 分钟 )A 组基础达标1． ( 2018·广东惠州模拟) 日前微博传言手机细菌比马桶多。
如图，央视和北京卫视经过实验展现检查结果。
回答以下有关问题：(1)该实验需制备培育基，培育基一般都含有水、碳源、______________。
(2)据图，两电视台均采纳 ____________ 法接种，该方法需要 ________( 多项选择 ) 。
A．接种环 B ．酒精灯C．移液管D．涂布器E．无菌水(3)经过察看菌落的 ________，可知手机屏幕和马桶按钮都存在多种微生物。
两电视台实验操作均正确且完整一致，但报导结果截然相反，你以为原由是：__________________________ 。
(4) 按图操作取样面积，实验员测定某手机屏幕的细菌数目，将 10 mL菌悬液进行梯度稀释，分别取0.1 mL 稀释倍数为102的样品液接种到三个培育基上，培育一段时间后，统计菌落数分别为48、 50、52，则该手机屏幕的细菌数为________个 / 平方厘米。
该实验比较组该如何设置______________________ 。
[分析](1) 微生物培育基的成分一般包含水、碳源、氮源和无机盐。
(2) 依据图形剖析，该实验的接种方法为稀释涂布平板法，该方法用到的工拥有酒精灯、移液管、涂布器、无菌水等。
(3) 不一样的菌落形态、大小不一样，图示两个电视台检查的手机屏幕和马桶按钮都有多种形态的菌落，即存在多种微生物。
两电视台实验操作均正确且完整一致，但报导结果截然相反，可能是因为手机的取样和马桶的取样都不同样。
(4)依据供给的数据进行计算，某手机屏幕的细菌数＝(48 ＋ 50＋52) ÷3×10 2÷ 0.1 × 10÷(5 ×5) ＝2×10 4( 个 /平方厘米 ) 。
[答案] (1)氮源和无机盐(2)稀释涂布平板BCDE(3)形态、大小手机的取样和马桶的取样都不同样( 4)2 ×10 4取培育基涂布0.1 mL 无菌水进行培育2.如图是某细菌纯化培育过程中划线接种的培育结果。
第39讲无菌操作技术实践[考纲要求] 1.微生物的分离和培养。
2.某种微生物数量的测定。
3.培养基对微生物的选择作用。
考点一微生物的分离和培养1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能①干热灭菌法是指将准备灭菌的物品放在干热灭菌箱内，在160～170 ℃下加热1～2 h以达到灭菌的目的。
②湿热灭菌法常采用高压蒸汽灭菌锅进行，其使用包括加水、装锅、加热排气、保温保压、出锅等步骤。
(2)培养基的配制①培养基的概念：是为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。
②营养组成：一般都含有水、碳源(提供碳元素的物质)、氮源(提供氮元素的物质)和无机盐等最基本的物质。
此外，根据拟培养的微生物的不同需要，有时还要加入维生素等特殊的营养物质，并要调节培养基中pH使之满足微生物生长的需要。
③种类：天然培养基和合成培养基，前者的主要优点是取材便利、营养丰富、配制简便，缺点是营养成分难以控制、实验结果的重复性较差；后者的优点是化学成分及其含量明确，实验的可重复性好，缺点是配制繁琐、成本较高。
(3)微生物的接种①接种：是指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
②常用的工具有玻璃涂布器、接种针、接种环等，在涂布平板接种时要用玻璃涂布器，穿刺接种时要用接种针，在斜面接种或在固体培养基平板上进行划线接种时要用接种环。
2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。
(2)斜面接种和培养大肠杆菌①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。
②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37 ℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。
(3)平板划线分离和培养大肠杆菌①平板制作的方法及注意事项a ．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。
b ．甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。
第1讲无菌操作技术考点一| 微生物的分离和培养(对应学生用书第227页)[识记—基础梳理]1．相关技能、技术和方法(1)无菌操作的技能——灭菌①分类：实验室常用高温处理达到灭菌效果，包括干热灭菌和湿热灭菌。
②作用：微生物分离和培养的基础。
③关键：防止外来杂菌的入侵。
(2)配制培养基①培养基概念：为人工培养微生物而制备的适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养物质。
②分类：按化学性质的不同分为天然培养基和合成培养基。
(3)接种微生物①接种：指在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。
②接种方法和常用工具(连线)接种方法常用工具Ⅰ.涂布平板接种 a．接种针Ⅱ.穿刺接种 b．接种环Ⅲ.斜面接种 c．玻璃涂布器Ⅳ.平板划线接种[答案]Ⅰ－c Ⅱ－a Ⅲ－b Ⅳ－b2．大肠杆菌的接种与分离培养(1)配制牛肉膏蛋白胨培养基其操作步骤：配制培养基→调节pH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面。
(2)斜面接种和培养大肠杆菌①主要目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种等。
②主要步骤：准备接种→接种环灭菌→试管口灭菌→挑取少许菌种→划线接种→在37_℃恒温箱中培养大肠杆菌24 h→将增殖的菌种放置在冰箱的冷藏室中(4 ℃)保存。
(3)平板划线分离和培养大肠杆菌①平板的作用：培养、分离细菌等微生物。
②平板划线法是指用带有微生物的接种环在平板培养基表面通过分区划线而纯化分离微生物的一种方法。
[理解—深化探究]1．微生物的培养基(1)培养基的成分2.无菌技术图一图二(1)图一为倒平板操作过程。
操作时要待培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近进行。
温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
平板冷却凝固后需倒置，这样既可使培养基表面的水分更好地挥发，又防止皿盖上的水珠落入培养基，造成培养基污染。
(2)图二为系列稀释操作。
注意移液管需要经过灭菌。
操作时，试管口和移液管应在离酒精灯火焰1～2 cm 处。
4．微生物纯化培养过程结果分析(1)B 区域出现了单个菌落，产生每个菌落的最初细菌数目是1。
课时分层集训训(三十五)(建议用时：45分钟)A组基础达标1．(2018·广东惠州模拟)日前微博传言手机细菌比马桶多。
如图，央视和北京卫视通过实验展示调查结果。
回答下列相关问题：(1)该实验需制备培养基，培养基一般都含有水、碳源、______________。
(2)据图，两电视台均采用____________法接种，该方法需要________(多选)。
A．接种环 B．酒精灯C．移液管D．涂布器E．无菌水(3)通过观察菌落的________，可知手机屏幕和马桶按钮都存在多种微生物。
两电视台实验操作均正确且完全一致，但报道结果截然不同，你认为原因是：__________________________。
(4)按图操作取样面积，实验员测定某手机屏幕的细菌数量，将10 mL菌悬液进行梯度稀释，分别取0.1 mL稀释倍数为102的样品液接种到三个培养基上，培养一段时间后，统计菌落数分别为48、50、52，则该手机屏幕的细菌数为________个/平方厘米。
该实验对照组该如何设置______________________。
[解析](1)微生物培养基的成分一般包括水、碳源、氮源和无机盐。
(2)根据图形分析，该实验的接种方法为稀释涂布平板法，该方法用到的工具有酒精灯、移液管、涂布器、无菌水等。
(3)不同的菌落形态、大小不同，图示两个电视台调查的手机屏幕和马桶按钮都有多种形态的菌落，即存在多种微生物。
两电视台实验操作均正确且完全一致，但报道结果截然不同，可能是因为手机的取样和马桶的取样都不相同。
(4)根据提供的数据进行计算，某手机屏幕的细菌数＝(48＋50＋52)÷3×102÷0.1×10÷(5×5)＝2×104(个/平方厘米)。
[答案](1)氮源和无机盐(2)稀释涂布平板BCDE(3)形态、大小手机的取样和马桶的取样都不相同(4)2×104取培养基涂布0.1 mL无菌水进行培养2.如图是某细菌纯化培养过程中划线接种的培养结果。
回答下列问题。
(1)在________(填图中编号)区域出现了单个菌落，产生每个菌落的最初细菌数目是________个细菌。
据图分析，在培养基上划线接种时，划线的顺序依次是________(用编号表示)。
(2)下表是某微生物培养基成分。
②若要鉴别纤维素分解菌，可用________法，若要鉴别尿素分解菌，可在培养液中加入________。
[解析](1)从图中可知，②号区域出现了单个菌落；1个菌落最初是由1个细菌形成；根据线条数量可判断，划线的顺序依次是①→③→②。
(2)自生固氮菌是异养生物，能自身固氮而获得氮源，但自身无法获得碳源，因而培养基中应添加碳源去掉氮源。
鉴别纤维素分解菌可用刚果红染色法，要鉴别尿素分解菌，可在培养液中加入酚红指示剂。
[答案](1)② 1 ①→③→②(2)①碳源氮源②刚果红染色酚红指示剂3．(2016·四川高考)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程，图乙是脲酶基因转录的mRNA部分序列。
(1)图中选择培养基应以________为唯一氮源；鉴别培养基还需添加________作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成________色。
(2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。
该过程采取的接种方法是________，每克土壤样品中的细菌数量为________×108个；与血细胞计数板计数法相比，此计数方法测得的细菌数较________。
(3)现有一菌株的脲酶由于基因突变而失活，突变后基因转录的mRNA在图乙箭头所示位置增加了70个核苷酸，使图乙序列中出现终止密码(终止密码有UAG、UGA和UAA)。
突变基因转录的mRNA中，终止密码为________，突变基因表达的蛋白含________个氨基酸。
[解析](1)脲酶能够催化尿素水解释放出氨和二氧化碳，因此选择培养基中应以尿素为唯一氮源。
挑取单菌落接种到加有酚红指示剂的鉴别培养基中，培养一段时间后，菌落周围的氨增加，pH升高，酚红指示剂将变红。
(2)该过程采取的接种方法为稀释涂布平板法。
利用稀释涂布平板计数法对细菌进行计数时，应选择菌落数在30～300的平板，因此平板上长出的细菌菌落平均数为(156＋178＋191)÷3＝175个。
每克土壤样品中的细菌数为175÷0.1×105＝1.75×108。
血细胞计数板计数法能将死细胞计算在内，而稀释涂布平板计数法只能计数活细胞(只有活细胞才能在平板上生长)，故一般血细胞计数板计数法要比稀释涂布平板计数法的结果大。
(3)箭头处插入70个核苷酸，箭头后密码子的解读方式为*AG，UGA，GAA……对比3种终止密码可发现，此处的终止密码为UGA。
从起始密码到终止密码之前共有273＋72个碱基，因此突变基因表达的蛋白含115个氨基酸。
[答案](1)尿素酚红红(2)稀释涂布平板法1.75 少(3)UGA 1154．(2018·广西桂林第一次联合调研)有机磷农药是用于防治植物病虫害的含磷有机化合物，广泛应用于农业生产中，有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标，不少品种对人、畜的毒性很强，人误食后如不及时医治就会危及生命，某班同学欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的微生物。
请回答下列问题：【导学号：41780165】(1)为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，可在被有机磷农药污染的土壤中取样，并在含有碳源、氮源及________________等的选择培养基上添加____________________进行选择培养。
(2)将获得的3种待选微生物菌种甲、乙、丙分别接种在1 L含20 mg有机磷农药的相同培养液中培养(培养液中其他营养物质充裕、条件适宜)，观察实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为32小时、45小时、16小时，则应选择微生物________(填“甲”“乙”或“丙”)作为菌种进行后续培养，理由是__________________________________。
(3)制备固体培养基的基本步骤是计算→________→溶化→分装→加棉塞→包扎→________→倒平板。
(4)若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用____________直接计数，也可选用____________________________法统计活菌数目。
[解析](1)微生物生长所需要的营养一般包括水、无机盐、碳源和氮源。
因筛选能降解有机磷农药的微生物，故培养基中需添加适量的有机磷农药。
(2)从观察实验开始到微生物停止生长；丙所用时间最短，说明其对有机磷农药的降解能力较甲、乙强。
(3)制备固体培养的基本步骤是计算→称量→溶化→分装→加棉塞→包扎→高压蒸汽灭菌→倒平板。
(4)菌体数测定可通过显微镜利用血细胞计数板直接计数，也可以利用稀释涂布平板法统计活菌数量。
[答案](1)水和无机盐有机磷农药(2)丙微生物丙分解有机磷农药的能力比甲、乙强(3)称量高压蒸汽灭菌(4)血细胞计数板稀释涂布平板5．2016年7月郑州市卫生计生委发布的第3期卫生监测信息显示有15家美容美发场所的毛巾、理发(美容)用具大肠杆菌严重超标。
如图甲为大肠杆菌含量检测操作简图，图乙为伊红美蓝培养基配方。
图甲图乙回答下列相关问题：(1)图甲中滤膜的孔径应________(填“大于”或“小于”)大肠杆菌。
受此启发，对某些不耐高温的试剂可以怎样除菌？__________________。
(2)配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入________(一种营养成分)，以及________。
待各成分都溶化后和分装前，要进行的是________和灭菌，对培养基进行灭菌的常用器具是________________________。
倒平板时要待平板冷凝后，将平板倒置，其主要原因是______________________________。
伊红美蓝培养基上生长的大肠杆菌菌落呈现黑色，从功能上划分，该培养基属于________培养基。
(3)用平板划线法分离样液中的大肠杆菌，操作时，接种环通过灼烧灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线的目的是__________________________________________。
要检测样液中的大肠杆菌含量，取25 cm2毛巾样本，加5 mL蒸馏水，浸润半小时，然后在3个平板上用涂布法分别接入0.1 mL 样液；在37 ℃的培养箱中放置48小时，3个平板上的黑色菌落数分别为49、48和47。
据此可得出25 cm2毛巾样液中的活菌数为________。
[解析](1)图甲中滤膜的孔径应小于大肠杆菌，滤膜过滤才能获得大肠杆菌，对不耐高温的试剂除菌时无法用高压蒸汽灭菌法，可以用滤膜过滤达到除菌目的。
(2)配制图乙中的基础培养基时，除了水分、无机盐以外，还应加入氮源以及琼脂。
配制的培养基在溶化后和分装前需要先进行调pH和灭菌。
高压蒸汽灭菌法常用高压蒸汽灭菌锅对培养基等进行灭菌。
倒平板后将平板倒置的主要原因是防止培养皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染。
从功能上划分，伊红美蓝培养基属于鉴别培养基。
(3)接种环灼烧灭菌后，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。
在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌的菌落呈黑色，据题意可知，25 cm2毛巾样本中的活菌数为(49＋48＋47)÷3÷0.1×5＝2.4×103。
[答案](1)小于用滤膜过滤除菌(2)氮源琼脂调整pH 高压蒸汽灭菌锅防止培养血盖上的冷凝水落入培养基造成污染鉴别(3)将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 2.4×1036．(2018·河南郑州二测)某同学要分离土壤中能分解尿素的细菌，并统计每克土壤样品中活菌数目，培养基配方如下。
将各种物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL，再经高温灭菌，制成固体培养基备用。
能”)原因是__________。
(2)通常培养基用__________方法灭菌，培养皿用__________方法灭菌，待培养基冷却到__________℃(填“20”“30”“40”或“50”)左右时，在__________附近倒平板，等平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止______________________，以免造成污染。
(3)要统计每克土壤样品中活菌数目，宜采用__________法接种，根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积，统计平板上的__________就能大约推测出样品中活菌数。
