氨基酸分析仪测定鱼粉中的氨基酸

河南农业2019年第3期（上）河南省土壤肥料站 主办随着我国农业的不断发展，化学肥料的大量施用，我国的土壤肥力，特别是有机质质量分数的下降趋势十分明显。

为解决化肥过量施用带来的各种问题，改善农业生态环境，促进农业生产的可持续发展，开发、使用新兴的水溶肥料是今后农业生产中的必然趋势。

氨基酸水溶肥料作为一种与立体高效栽培技术、高产优质栽培技术相配套的新型肥料，是未来肥料发展的重要方向之一。

采用S-433 D 氨基酸自动分析仪测定含氨基酸水溶肥料中氨基酸的含量，可对目前人们所关注的所有氨基酸进行定性定量检测。

目前，该方法已被《水溶肥料 游离氨基酸含量的测定》（NY/T 1975-2010）推荐使用，并列为仲裁法。

但是标准中没有规定氨基酸分析的型号和样品含量的检测范围，因此，本文采用此方法测定水溶肥料中游离氨基酸的含量，分别研究了进样浓度和进样体积对氨基酸分离度的影响，以确定适宜的进样浓度和体积，然后对氨基酸自动分析仪法进行验证。

一、材料与方法（一）试剂与仪器1.试剂。

0.06 mol/L 的盐酸溶 液；500 g/L 的氢氧化钠溶液；50 g/L 的磺基水杨酸溶液；10 g/L 的EDTA-Na 溶液；pH 值为2.2的柠檬酸钠缓冲液；氨基酸混合标准溶液2.5 ×109 nmol/mL。

2.仪器。

S-433 D 氨基酸分析仪；0.45μm 的微孔滤膜及过滤头、注射器等。

（二）测定方法1.样品的制备。

含氨基酸水溶肥料样品经多次缩分后，取出约100 g，将其研磨至全部通过0.50 mm 的孔径过筛，混合均匀，置于洁净、干燥的容器中。

2.测定方法。

称取试样2~10 g， 置于250 mL 的容量瓶中。

充分溶解后，加水至刻度，混匀，过滤后吸取上清液2 mL 于10 mL 的离心管中，准确加入2 mL 的磺基水样酸溶液，混匀，放置1 h。

准确加入1 mL 的S-433 D 氨基酸分析仪测定水溶肥料中氨基酸的含量河南省土壤肥料站 王敏EDTA-Na 溶液和1 mL 的盐酸溶液，混匀，用0.45μm 的微孔滤膜过滤。

氨基酸分析仪原理、分类及几种氨基酸分析仪的比较概述氨基酸分析仪是一种分析仪器，采用经典的阳离子交换色谱分离、茚三酮柱后衍生法，对蛋白质水解液及各种游离氨基酸的组分含量进行分析。

工作原理通常细分为两种系统：蛋白水解分析系统（钠盐系统）和游离氨基酸分析系统（锂盐系统），利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂进行梯度洗脱。

其中钠盐系统一次最多分析约25种氨基酸，速度较快，基线平直度好；锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸，速度较慢，基线一般不如钠盐系统好。

应用全自动氨基酸分析仪主要应用:各种物质中18种氨基酸的定性定量分析。

1.饲料上的应用：质量控制：各种饲料必需氨基酸的含量和它们之间的比例必须恰当，测定原料和产品中的氨基酸含量，以达到保证质量的目的。

真伪鉴别：鱼粉氨基酸组成特点是赖氨酸、蛋氨酸含量高，氨基酸分析结果很容易就可以区别它的真伪。

2.农业、食品、饮料及玉米、大豆、小麦等农作物的氨基酸含量进行检测；对果汁、饮料进行真伪的鉴别；检验测定茶氨酸来鉴别真伪茶叶；对酱油级别的认定。

分类氨基酸分析仪按其分离和检测方法的不同可分为两大类型。

第一类是基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生光度法测定的经典方法（IEC）。

此类方法于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。

第二类是所有基于反相色谱分离、柱前衍生、荧光或紫外检测的高效液相法（HPLC）以及阴离子交换分离直接安培法检测的离子色谱法（IC）。

选型指南1、原理。

基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱法（IEC）。

此类方法由Stein和Moore两人1958年发明，并于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。

2、重要指标。

满足分析需要的技术指标如分离度、重复性等要求，而其中的分离度又是更为重要的指标，因为，色谱理论一般以分离度达到1.2作为两峰基本分离的判定前提，只有峰分开了，才有意义去讨论定性和定量的重复性。

用氨基酸含量来衡量鱼粉优劣汇报人：日期:•鱼粉及氨基酸简介•氨基酸含量对鱼粉质量影响•检测方法与技术手段目录•实际应用案例分析•问题与挑战讨论•总结与展望01鱼粉及氨基酸简介鱼粉是一种以鱼类为原料，经过加工处理后制成的粉状物质，具有浓郁的鱼香味和丰富的营养成分。

根据原料鱼种类和加工工艺不同，鱼粉可分为多种类型，如红鱼粉、白鱼粉、全鱼粉、鱼骨粉等。

不同类型的鱼粉在营养成分和用途上有所差异。

鱼粉定义与分类鱼粉分类鱼粉定义氨基酸种类及功能人体无法自行合成，必须从食物中摄取的氨基酸，包括赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、色氨酸、苯丙氨酸和组氨酸等。

它们在人体新陈代谢和生长发育中发挥重要作用。

非必需氨基酸人体可自行合成或从其他氨基酸转化而来的氨基酸，如甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸等。

它们在人体内具有调节生理功能、参与代谢过程等重要作用。

原料鱼蛋白质鱼粉中含有丰富的优质蛋白质，这些蛋白质在加工过程中被分解为氨基酸，成为鱼粉中氨基酸的主要来源。

添加合成氨基酸为提高鱼粉的营养价值和应用效果，有时会向鱼粉中添加一些合成氨基酸，如赖氨酸、蛋氨酸等。

这些添加氨基酸可以增加鱼粉中必需氨基酸的含量和比例。

鱼粉中氨基酸来源02氨基酸含量对鱼粉质量影响必需氨基酸与非必需氨基酸比例必需氨基酸鱼粉中必需氨基酸的含量和比例是评估其质量的重要指标，如赖氨酸、蛋氨酸等。

非必需氨基酸虽然非必需氨基酸可由养殖动物自行合成，但鱼粉中适当的非必需氨基酸含量可以提高饲料的整体营养价值。

比例关系必需氨基酸与非必需氨基酸之间的比例应适宜，以满足养殖动物的生长需求。

指鱼粉中各种氨基酸之间的比例关系，反映其满足养殖动物需求的程度。

氨基酸平衡营养价值评估评估方法通过比较鱼粉中氨基酸组成与养殖动物需求的差异，可以评估鱼粉的营养价值。

常用的评估方法包括氨基酸分（AAS）、化学评分（CS）和生物利用率等。

030201氨基酸平衡与营养价值评估限制性氨基酸对养殖动物生长性能影响限制性氨基酸指鱼粉中含量相对较低、不能满足养殖动物需求的氨基酸。

氨基酸分析仪识别鱼粉中掺入蛋氨酸、赖氨酸原料一例作者：李裕，黄勇，欧阳龙，高华，等来源：《湖南饲料》 2016年第4期李裕黄勇欧阳龙高华周汝顺曹峰李艳平（1湖南省兽药饲料监察所长沙410006；2沅江市畜牧水产局沅江413100）摘要：分别用酸水解、酸提取两种方法对鱼粉样品进行处理，氨基酸分析仪上机测定。

分别测定鱼粉中各氨基酸含量和可能掺入的氨基酸原料含量。

发现一例掺有赖氨酸、蛋氨酸原料的假冒进口鱼粉。

关键词：鱼粉；氨基酸；掺假鱼粉是一种重要的饲料原料。

鱼粉的蛋白含量高，赖氨酸、蛋氨酸等必需氨基酸含量高，矿物质、维生素比较丰富，含有未知的促生长因子，能够增加饲料的适口性。

鱼粉的用量大、价格高，因此掺假现象屡见不鲜。

掺人物五花八门，多为价格比鱼粉低的增重物（石粉、虾蟹壳粉、食盐等）、非蛋白氮（尿素、脲醛树脂、三聚氰胺等）、植物性蛋白（豆粕、菜粕、玉米蛋白粉等）、动物性蛋白（羽毛粉、皮粉、肉骨粉等）。

暂无在鱼粉中掺入氨基酸原料进行制假的报道。

1 材料及方法1.1样品某饲料厂家送检鱼粉样品一份，约500克（包装、标签标示为某国进口鱼粉，蛋白65%）。

1.2仪器SKRAM 433D氨基酸自动分析仪。

仪器为离子色谱柱后衍生系统，570nm、440nm双通道检测器。

1.3处理方法1.3.1酸水解法称取样品约1OOmg，放置水解玻璃管中。

胖肚移液管加入含1%.苯酚的6mol/L盐酸溶液15.OOmL，封口后11O℃水解20小时。

滤纸过滤后，移取100μL水解液，真空干燥后，加入lOOOμL上机缓冲液重新溶解，过0.22 μm针头滤器，即得样品上机试液。

1.3.2酸提取法称取样品约350mg，放置1OOmL容量瓶中。

加入约60mLO.lmol/L盐酸溶液充分振摇，定容。

混匀后滤纸过滤，取1mL滤液过0.22 μm针头滤器，即得样品上机试液。

1.4上机测定将十七种氨基酸混合标准溶液(1OOnmol/mL)、以上两种处理方式的样品试液上机，外标法定量。

基于氨基酸分析仪对鱼粉品质鉴定研究摘要：文章以鱼粉为研究对象，采用盐酸氧化水解法处理鱼粉样品，通过日立L-8900氨基酸分析仪检测氨基酸含量，研究氨基酸分析仪的精确度和准确度及鱼粉中各种氨基酸的含量。

关键词：鱼粉；盐酸氧化水解；氨基酸分析仪；准确度；精确度；氨基酸含量；前言鱼粉是传统的水产饲料中主要蛋白源，其蛋白质含量高和所含必须氨基酸齐全，还富含必须脂肪酸、矿物质、维生素、可消化能等鱼类生长繁殖必须的成分，且适口性好，因而世界上不少地区的精养渔业都将鱼粉作为主要的蛋白源。

随着我国饲料工业的迅猛发展，鱼粉的需要量逐年增加，鱼粉的质量问题越来越引起饲料行业、养殖业的重视。

由于鱼粉的用量大，价格高，有些商家在鱼粉中掺杂使假、以次充好，使鱼粉质量参差不齐，给市场造成了一定的混乱。

这给鱼粉品质分析带来了一定的困难。

因此，有必要建立一个有效的手段对鱼粉中的氨基酸进行定量分析。

一、研究的内容本文旨在解决以上鱼粉掺假，难以检测的问题进行研究，探讨氨基酸分析仪在鱼粉品质鉴定中的应用。

鱼粉在国家标准GB/T19164-2003中赖氨酸及蛋氨酸的含量是评价鱼粉质量的一个重要指标。

本文采用过盐酸氧化水解法处理鱼粉样品，通过日立L一8900氨基酸分析仪检测鱼粉中氨基酸含量。

将检测结果整理统计分析后，发现低质、变质、掺杂、掺假的鱼粉会有一些氨基酸的含量出现异常。

通过氨基酸指标评价鱼粉的质量，从而可以判断鱼粉优劣，在鱼粉品质鉴定中具有重要意义。

二、材料与方法2.1 实验原理盐酸氧化水解法是将鱼粉中的氨基酸用盐酸氧化，然后进行酸解，再经离子交换色谱分离、测定。

（脯氨酸在570 nm 处有最大吸收峰，除脯氨酸外，其他各氨基酸均在440 nm有最大吸收峰）2.2 实验材料氨基酸混合标品：产品批号: 280-67161 和光纯药工业株式会社鱼粉样品：银宝生物科技有限公司原料部提供2.3 样品前处理1）样品称样量根据样品的蛋白含量来定；2）称样品于水解管中，用酒精喷灯将水解管离管口约5cm处拉细，加入5mL 6 mol/L盐酸，混匀，再加入5mL 6mol/L 盐酸，加入1滴正辛醇，用氮气排空气10-20s后，将水解管上端接入循环真空泵抽真空，下端置于超声波清洗机中超声，酒精喷灯上将水解管拉细处熔融密封；3）置于110℃干燥箱中水解24 h；4）将水解液冷却后，全部转入100mL容量瓶中，并用水稀释至刻度；5）准确移取上述稀释液1mL于10mL的烧杯中，50℃ 30min 氮气吹干；6）往吹干的烧杯中准确加入2mL 0.02mol/L盐酸水溶液，超声1min，用1mL 注射器吸入此溶液，再在注射器前加入滤头，弃去初滤液2滴，后将滤液注入进样品中，待上机检测。

饲料氨基酸检测标准饲料氨基酸检测主要依据GB/T 18246-2000 《饲料中氨基酸的测定》这一标准。

该标准规定了配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料、单一饲料、预混料等饲料中氨基酸总量或者游离氨基酸的检测评定方法。

在氨基酸检测方法方面，主要有酸水解法、碱水解法、酸提取法三种。

其中酸水解法又分为常规水解法和氧化水解法两种。

常规水解法适用于检测除含硫氨基酸（如胱氨酸、蛋氨酸等）以外的蛋白水解氨基酸，而氧化水解法则适用于检测除酪氨酸以外的蛋白水解氨基酸。

碱水解法只适用于检测色氨酸。

对于游离氨基酸、赖氨酸、蛋氨酸含量的检测，可以使用酸提取法。

随着技术的发展，反相液相色谱法逐渐成为氨基酸检测的常用手段。

这种方法具有操作简便、准确度高、重现性好等优点，可以同时测定多种氨基酸的含量。

在进行饲料氨基酸检测时，还需要注意以下几点：1.样品处理：样品的收集和制备过程要保证不破坏氨基酸的结构，避免污染和变质。

同时，样品制备后要进行及时检测，避免长时间保存导致氨基酸发生变化。

2.仪器设备：氨基酸检测需要使用专业的仪器设备，如氨基酸自动分析仪、液相色谱仪等。

这些设备需要定期进行校准和维护，确保检测结果的准确性。

3.实验条件：实验条件如温度、湿度、压力等要严格控制，避免影响检测结果。

同时，实验过程中要保证无菌操作，避免污染样品。

4.人员操作：操作人员的技能和经验对检测结果也有影响。

因此，操作人员需要经过专业培训，掌握正确的操作方法和注意事项。

5.数据处理：检测数据要进行正确处理和分析，包括数据的记录、统计、计算等。

数据处理要遵循科学方法和程序，确保结果的准确性和可重复性。

鱼粉中组胺的测定原理简介:鱼粉中组胺用三氯乙酸提取，之后调PH=9，将游离的组胺用正戊醇提取出，之后再用HCL反萃取，用偶氮试剂显色。

组胺+三氯乙酸盐（溶于水）--PH=9--组胺（溶于正戊醇）--HCl--正戊醇（组胺溶于稀HCl）1试剂与溶液1.1偶氮试剂的配制甲液：称取0.5g对硝基苯胺，加5ml盐酸（1+1）溶解，再加水释到200ml，置冰箱中（2~8度）保存。

乙液：亚硝酸钠溶液5g/l，临用现配甲液5ml、乙液40ml混合后立刻使用。

1.2三氯乙酸100 g/L1.3氢氧化钠250g/L1.4盐酸1mol/L1.5正戊醇分析纯1.6碳酸氢钠溶液50g/L1.7磷酸组胺（Sigma公司）步骤2.1样品处理称取1--3克鱼粉于具塞三角瓶内，加入25.0ml三氯乙酸（100g/L）每隔30分钟摇动一次，提取3小时，过滤，取滤液1.00ml或2.00ml于15ml试管内，加氢氧化钠（250g/L）5滴，振荡一下，再加5ml正戊醇振荡2分钟，静止分层（如出现乳化现象可滴加2--3滴无水乙醇），用移液枪小心吸取上清液（正戊醇层）于50ml分液漏斗内，下层沉淀再下层沉淀再分别用正戊醇5ml、3ml、3ml反萃取3次。

将正戊醇全部收集到50ml分液漏内,分别用盐酸（1mol/L）6ml、6ml、3ml反萃取3次,收集水相（下层）于20ml刻度试管内，用水定容至刻度（20.00ml），摇匀，吸取1.00ml（或2.00ml）盐酸提取液于10ml比色管中，加入碳酸氢钠溶液（50g/L）3.0ml摇匀，振荡下加入偶氮试剂3.0ml，用水定容到刻度，室温下显色10min，用1cm比色皿于480nm下测定吸光度。

2.2标准曲线称取磷酸组胺样品（Sigma公司）2.7671mg，置于100ml容量瓶内，用水溶解并定容到刻度，此液组胺含量为10ug/ml，分别取此标液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00ml于5支10ml比色管内，各加盐酸（1mol/L）1.0ml，加入碳酸氢钠溶液（50g/L）3.0ml摇匀，振荡下加入偶氮试剂3.0ml，振荡，用水定容到刻度，摇匀后放置10min（室温下），用1cm比色皿于480nm下测吸光值。